UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

ESCULA DE QUIMICA DE ALIMENTOS

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

AISLAMIENTO, SELECCIN, PRODUCCION DE BIOMASA Y

PRESERVACIN DE CEPAS QUERATINOLITICAS DE BACILLUS SPP.
PARA LA DEGRADACIN DE PLUMAS DE POLLO

INTEGRANTES:
- BUSTIILLOS MA. BELN
- ESPINOSA CAROLINA
- FEIJO TATIANA
- PORRAS DIEGO

NOVENO SEMESTRE ALIMENTOS

2009 - 2010

INDICE

1. TEMA...............................................................................................................................................3
AISLAMIENTO, SELECCIN, PRODUCCION DE BIOMASA Y PRESERVACIN DE
CEPAS QUERATINOLITICAS DE BACILLUS SPP. PARA LA DEGRADACION DE
PLUMAS DE POLLO....................................................................................................................3
2. PROBLEMA....................................................................................................................................3
3. ANTECEDENTES...........................................................................................................................3
4. JUSTIFICACION.............................................................................................................................3
5. OBJETIVOS.....................................................................................................................................3
6. HIPOTESIS......................................................................................................................................3
7. MARCO TEORICO.........................................................................................................................4
7.1 Plumas de Pollo..........................................................................................................................4
7.1.1 Caractersticas......................................................................................................................4
7.1.2 Usos.....................................................................................................................................4
7.2 Microorganismos........................................................................................................................4
7.2.1 Caractersticas:....................................................................................................................4
8. MARCO METODOLOGICO..........................................................................................................4
8. 2.1 Seleccin del Medio de Cultivo..................................................................................5
8.2.2 Aislamiento y Enriquecimiento de Cepas Degradadoras de Plumas ..........................5
8.2.3 Seleccin de Cepas Queratinoliticas de Bacillus spp..................................................5
8.2.4 Produccin de Biomasa................................................................................................5
9. FACTIBILIDAD..............................................................................................................................6
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS...........................................................................................6

1. TEMA
AISLAMIENTO, SELECCIN, PRODUCCION DE BIOMASA Y PRESERVACIN DE
CEPAS
QUERATINOLITICAS DE BACILLUS SPP. PARA LA DEGRADACION DE
PLUMAS
DE POLLO
2. PROBLEMA

En la mayora de las plantas avcolas los subproductos del procesamiento no son debidamente
aprovechados, constituyendo un alto porcentaje de desechos, lo que produce daos al medio
ambiente por el aumento de la carga microbiana presente en los suelos, siendo una fuente potencial
de enfermedades.
3. ANTECEDENTES
Generalmente las plumas son destinadas a la elaboracin de harinas que son utilizadas como suplemento
alimenticio para aves y otras especies. Este producto es obtenido por una combinacin de los tratamientos
trmicos (coccin a altas presiones) con los qumicos (cidos o alcalinos), procesos que no fragmentan los
enlaces disulfuro en la queratina convirtindola en una protena resiste, que dificulta la degradacin
enzimtica por parte de las aves y disminuye el valor proteico a un 45%.
4. JUSTIFICACION
Aproximadamente, el total de plumas procesadas en el mundo es de 50,000 Ton/ao. Actualmente, muchas
de estas plumas han sido abandonadas como inservibles. Sin embargo, estas pueden ser recuperadas y
procesadas por medio de un tratamiento cuidadoso. La produccin nacional de aves es de 19,595.058, de los
cuales se obtiene un rendimiento en el procesamiento de pollo de aproximadamente 75 %, lo que indica que
el 25% restante corresponde a desperdicios del procesamiento, en donde las plumas constituyen la mayor
parte.
Una de las alternativas propuestas para el aprovechamiento de la plumas de pollo, es mediante tratamientos
fermentativos con microorganismos queratinolticos (Bacillus spp.) capaces de degradarlas, mejorando as su
digestibilidad y calidad nutricional en un 67% debido a su enriquecimiento con protena microbiana.
5. OBJETIVOS
5.1 OBJETIVO GENERAL
Aislar, seleccionar, producir biomasa y preservar cepas queratinoliticas de Bacillus spp. para la
degradacin de plumas de aves de corral.
5.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Obtener muestras de plumas blancas de pollo y muestras de suelo de los galpones avcolas.
Seleccionar el medio de cultivo ms adecuado para el crecimiento ptimo de los microorganismos
degradadores de queratina a partir de plumas de pollo.
Aislar las cepa queratinolitica de Bacillus spp. utilizando el medio de cultivo adecuado.
Seleccionar la cepa con mayor capacidad de degradacin queratinolitica.
Realizar pruebas bioqumicas para conformacin de Bacillus spp.
Realizar la medicin del crecimiento celular o biomasa, y determinar los parmetros cinticos.
Realizar las grficas de ln de biomasa (ln X), biomasa (X), velocidad especfica () y velocidad
instantnea (rx), para la cepa seleccionada (bacillus spp) en el medio seleccionado.
Preservar las cepas puras mediante la tcnica de crioconservacin.
6. HIPOTESIS
6.1 HIPOTESIS NULA
A pesar de que las plumas de pollo son fuente de carbono, energa y nitrgeno propias de la flora
queratinolitica, no se espera aislar, seleccionar, producir biomasa y preservar cepas de Bacillus spp.
6.2 HIPOTESIS ALTERNATIVA

Al ser las plumas de pollo una fuente de carbono, energa y nitrgeno propias de la flora queratinolitica,
se espera aislar, seleccionar, producir biomasa y preservar cepas de Bacillus spp con buenos
rendimientos.
7. MARCO TEORICO
7.1 Plumas de Pollo
7.1.1 Caractersticas
Las plumas son estructuras queratinosas de la piel de la aves. Son fundamentales en el vuelo aviar, pues forman la
superficie sustentadora del ala. El conjunto de todas las plumas de un ave recibe el nombre de plumaje, y forma
una capa densa, aislante, que protege al animal frente al agua y el fro.
COMPONENTES
Materia Seca
Protena Cruda
Grasa
Fibra Cruda
Cenizas
Calcio
Fsforo

%
88.5
54,5
26
1,0
4,5
1,0
0,7

7.1.2 Usos
Las plumas pueden ser procesadas y utilizadas en decoracin, acolchado y adornado, haciendo uso de sus
caractersticas de retencin de calor y peso ligero. Pueden se tratadas en las manufactureras de chaquetas, bolsas
de dormir, colchas, almohadas, colchones, etc. Adems se las emplea como harina de plumas (HP) que sustituye a
la harina de pescado en alimentos acucolas.
7.2 Microorganismos
7.2.1 Caractersticas:
Nivel de Bioseguridad
Taxonoma
Tipo de Cepa
Tipo de Enzima
Condiciones Aerbicas
Forma
Pared Celular
Movilidad
Esporulacin
Condiciones de Vida
Categora Nutricional
Fuente C, N y Energa

1
Bacterias / Firmicutes / Bacilos / Bacillales / Bacillaceae / Bacillus spp.
Degradador de Queratina
Queratinasa
Aerobio Estricto o Anaerobio Facultativo
Bastn
Tincin Gram (+)
Positiva - Flagelacin pertrica
Positiva
Temperatura: 4 55C
ptima: 26C
pH ptimo: 4,3 9,3
ptimo: 7-7,5
Quimioauttrofo
Queratina

7.2.2 Metabolismo de las Bacterias Queratinolticas:

El proceso de Degradacin de la Queratina se basa en el proceso de Sulfitlisis el cual provoca la ruptura del
enlace disulfuro presente en la cistena, dando lugar al cido cisteinsulfnico y a otro de cisteina. A pH cido
puede tener lugar la reformacin de un nuevo enlace disulfuro.

7.2.3 Pares Oxido Reduccin

Donador : NAD + / NADH E0 ( 0.32) 2 e

Aceptor : NO3 / NO2 E0 ( + 0.42 ) 2 e

8. MARCO METODOLOGICO
8.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS
8.1.1 Muestreo

El muestreo es no probabilstico intencionado; es decir que las plumas y suelo sern recogidos de distintas
avcolas. Los criterios para obtener la muestra son:
Las plumas seleccionadas debern tener caractersticas similares (blancas, tamao).
Lugares: Las muestras se tomaran de tres avcolas ubicadas en la Regin Sierra.
El suelo deber ser tomado de los mismos galpones de donde se tomaron las plumas.
8.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS

8. 2.1 Seleccin del Medio de Cultivo

El medio que se utilizara ser el Medio Basal (MBS) Salino descrito por Williams y Shih, el cual contiene por
litro de agua: 0,5 g NH4CI, 0,5 g NaCI, 0,3 g K2HP04, 0,4 g KH2P04, 0,1 g MgCI2.6H20, y 0,1 g de extracto de
levadura. A esta solucin salina se ajust el pH a 7,5 con KOH al 10%.
8.2.2 Aislamiento y Enriquecimiento de Cepas Degradadoras de Plumas
Se toman muestras de suelo de diferentes reas de los galpones de cra de pollos de engorde y se inoculan en tubos
de ensayo que contienen caldo nutritivo como medio de transporte. Despus de 24 horas de incubacin, se
someten a un proceso de pasteurizacin a 80C/15min a fin de seleccionar los microorganismos esporulados.
Alcuotas de estos medios se utilizan para inocular tubos contentivos de una pluma entera y el Medio Basal
(MBS) Salino. Estos tubos se incuban a 45C por 72 h.
Para el enriquecimiento de los microorganismos queratinolticos y los ensayos cinticos, se utiliza el MBS
descrito y la presentacin de las plumas vara dependiendo del tipo de ensayo a ser realizado (enteras o troceadas
con tijeras). Se utilizarn plumas enteras para visualizar el proceso de degradacin. Para ello, se introducen las
plumas en tubos que contienen 5 mL del medio ya descrito.
8.2.3 Seleccin de Cepas Queratinoliticas de Bacillus spp
Se realizan aislamientos en Agar Nutritivo y se seleccionan colonias morfolgicamente diferentes. Cada una de
ellas se inocular en tubos que contienen MBS fresco con plumas enteras e incubadas a 40C para evaluar su
capacidad queratinoltica. Observaciones peridicas del estado de las plumas permitirn conocer el grado de
desintegracin alcanzado y seleccionar la cepa que produce la mayor degradacin en el tiempo ms corto. Al
mismo tiempo, en estos ensayos se realizar un control, consistente en un tubo con MBS y pluma entera que no
ser inoculado.
8.2.4 Produccin de Biomasa
8.2.4.1 Propagacin y Cultivo de la cepa de Bacillus spp.
Inocular un medio precultivo en fiolas Erlenmeyer con 30ml de medio de plumas troceadas (5 g/L) e incubar a
40C/48h en el shaker orbital, con una velocidad de agitacin de 75 rpm.
Para los ensayos cinticos, los cultivos se realizaran durante 48h con una concentracin de plumas de 20g/L y una
agitacin de 75 rpm, que sern las condiciones ptimas para lograr una mejor homogeneidad y baja viscosidad del
medio.
8.2.4.2 Determinacin de la Medida de Biomasa Microbiana.
El contenido de un cultivo en Erlenmeyer con medio de plumas troceadas, se filtra a travs de un micropore y, con
la suspensin celular obtenida, se prepararan diluciones seriadas de 30 mL en tubos con agua destilada. Una
fraccin de 25 mL de cada una de estas diluciones se coloca en tubos (prepresados) y se centrifuga a 6000 rpm/20
min. El sobrenadante obtenido se descarta y el sedimento celular se resuspende con 25 mL de agua destilada
(repetir dos veces).
Finalmente, los tubos con el sedimento se colocan a 100C/12h y, transcurrido este tiempo, se dejan a temperatura
ambiente por 1h antes de ser pesados nuevamente. Con los 5 mL restantes del filtrado, se determina la absorbancia
a 600 nm. Estos valores se correlacionan con la diferencia de peso obtenido en cada caso para construir la curva
de calibracin.
Para la determinacin de la biomasa en los caldos de fermentacin, se sigue el procedimiento antes descrito y se
realiza diluciones de los filtrados de las muestras, para luego ser ledas a 600 nm contra un blanco de agua
destilada.
8.2.5 Preservacin de los Microorganismos
La conservacin de las cepas aisladas se realiz a 40C en estras (cuas) de medio slido compuesto por las sales
del MBS suplementado con 20 g/L de agar y 20 g/L de harina de plumas, previamente inoculadas e incubadas a
40C).

9. FACTIBILIDAD
Para la determinacin del Bacillus spp. se emplear el Medio Basal (MBS) Salino cuya elaboracin es posible
debido a que el laboratorio cuenta con todos sus componentes. Adems para la medicin de biomasa se emplearn
las tcnicas de peso seco y absorbancia para comprobacin y exactitud, ya que por utilizar la pluma entera en los
medios fermentativos, se afectan las estimaciones de la biomasa bacteriana.
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

http://www.sica.gov.ec/cadenas/maiz/docs/produc_avicolamod.html
http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus
http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/27333/2/articulo7.pdf
http://www.bioone.org/doi/abs/10.1642/0004-8038(2004)121%5B0656:BDOBAW%5D2.0.CO%3B2
http://es.wikipedia.org/wiki/Pluma
http://turnkey.taiwantrade.com.tw/showpage.asp?
subid=137&fdname=MISCELLANEOUS&pagename=Planta+procesadora+de+plumas+de+aves+de+co
rral
8. http://www.zoetecnocampo.com/foro/Forum35/HTML/000018.html
9. http://docs.google.com/gview?
a=v&q=cache:lY6o3A2EPGcJ:www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/27623/2/articulo10.pdf+producci
on+hidrolizado+fermentacion+plumas&hl=es&gl=es&sig=AFQjCNHE46ESqEyhhGsS5T4sYkHjI2FPw
10. http://www2.uah.es/mapa/seminarios/activos/Seminarios%20biologia/aa10.pdf