I.

INTRODUCCIN:
Las enzima son protenas que que funcionan como catalizadores biolgicos. Cada clula y cada
tejido tiene su actividad propia, los que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en
la base d la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar
determinados procesos sintticos y analticos. Los propios genes son reguladores de la produccin
de los enzimas; por lo tanto, genes y enzimas pueden considerarse como las unidades
fundamentales de la vida.
Por otro lado los enzimas se clasifican de acuerdo a su complejidad las cuales estn formadas por
una o ms cadenas poli peptdicas o conjugadas que tiene un grupo no proteico enlazada en la
cadena poli peptdica estando formada por la apoenzima que es la parte poli peptdica de la
enzima y el factor que es la parte no proteica y la unin de estos dos ltimos forman la Holo
enzima.
Las enzimas poseen varias caractersticas en este aspecto tiene una gran influencia los factores
externos que permiten que se den. L as enzimas se inactivan por el calor esto sucede ya que por
ser protena pueden desnaturalizarse completamente si se someten a temperaturas altas, otras
de las caractersticas esque las enzimas funcionan ms eficientemente, a ciertas temperaturas
optimas, es decir a ciertas temperatura las enzimas realizan una actividad catalizadora de tal
manera que permiten la continuidad de la reaccin catalizada a la mayor velocidad. A
temperatura por enzima o por debajo de la temperatura ptima para la actividad de la enzima
esta disminuye o se detiene. De esta manera la enzima trabaja con mayor eficiencia con una
temperatura de 37c.
Cada enzima funciona d una manera ms efectiva a cierta temperatura y pH como consecuencia,
su actividad disminuye cuando alcanza valores por encima o por debajo d los dichos puntos. Los
enlace de hidrogeno son fcilmente destruidos por el aumento de la temperatura lo cual, a su
vez, pueden perjudicar la estructura terciaria de la enzima que son de gran importancia para la
unin con el sustrato. Los cambios de pH alteran el estado de ionizacin de los aminocidos con
carga elctrica.

II. OBJETIVOS:
El objetivo de este experimento es estudiar alguno de los factores que inciden en
la velocidad de la reaccin enzimtica, utilizando como ejemplo la amilasa salival,
controlando la actividad enzimtica por medio del sustrato no transformado o por
los productos de la reaccin formados (azcar reductor).



III. MATERIALES Y METODO :


PARTE 1. PREPARACIN DE INCUBADOS:CN
1. Aadimos al primer tubo de ensayo 1ml de sol de amilasa salival ms 5ml de Buffer
fosfato (pH 6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada luego lo llevamos a Bao
mara por 30 minutos.
2. Aadimos al segundo tubo de ensayo 1ml de amilasa salival ms 5ml de Buffer fosfato (PH
6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara por 5
minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30 minutos.
3. Aadimos al tercer tubo de ensayo 1ml de amilasa salival ms 5ml de Buffer fosfato (PH
9,0) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. . Luego lo llevamos a Bao mara por
5 minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30 minutos.
4. Aadimos al cuarto tubo de ensayo 1ml de amilasa salival ms 5ml de Buffer fosfato (PH
4,6) ms 1,4ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. . Luego lo llevamos a Bao mara por 5
minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30 minutos.
5. Aadimos al quinto tubo de ensayo 1ml de amilasa salival ms 5ml de Buffer fosfato
(PH 6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara
por 5 minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30
minutos.
6. Aadimos al sexto tubo de ensayo 1,5 ml de amilasa salival ms 5ml de Buffer fosfato (PH
6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara por 5
minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30 minutos.
7. Aadimos al stimo tubo de ensayo 1ml de amilasa salival mas 5ml de Buffer fosfato
(PH 6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara
por 5 minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30
minutos.
8. Aadimos al octavo tubo de ensayo 1ml de amilasa salival mas 5ml de Buffer fosfato
(PH 6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara
por 5 minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30
minutos.
9. Aadimos noveno tubo de ensayo 1ml de amilasa salival mas 5ml de Buffer fosfato
(PH 6,8) ms 1,4 ml de NaCl ms 2ml de agua destilada. Luego lo llevamos a Bao mara
por 5 minutos luego aadimos 5ml de almidn luego lo llevamos a Bao mara por 30
minutos.



PARTE II
1. Al primer tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N ms
0,5 ml de yodada
2. En el segundo tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N
ms 0,5 ml de yodada
3. En tercer tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N ms
0,5 ml de yodada
4. En el cuarto tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N
ms 0,5 ml de yodada
5. En el quinto tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N
ms 0,5 ml de yodada
6. En el sexto tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N ms
0,5 ml de yodada
7. En stimo tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N ms
0,5 ml de yodada
8. En el octavo tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N
ms 0,5 ml de yodada
9. En el noveno tubo de ensayo aadimos 0,5ml de de incubados mas 0,5 ml de HCl 0,05N
ms 0,5 ml de yodada.













PARTE III
1. Al primer tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
2. Al segundo tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
3. Al tercer tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
4. Al cuarto tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
5. Al quinto tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
6. Al sexto tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B mas
0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua destilada.
7. Al stimo tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A mas 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
8. Al octavo tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A ms 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.
9. Al noveno tubo de ensayo aadimos 0,5 ml de sol. Fehling A ms 0,5ml de sol. Felhling B
mas 0,5ml de incubado enfriamos en chorro de agua luego aadimos 5ml de agua
destilada.












V. RESULTADOS:





CONCENTRACION REACCION
TUBO TIEMPO DE SUSTRATO ENZIMATICA COLORACION
INCUBACION (ALMIDON) (PRODUCTO) SOL. IODO
5' NO NO MARRON CLARO
I 10' NO NO MARRON CLARO
15' NO NO MARRON CLARO
5' 1% - OSCURO
II 10' 1% + RAPIDO LIGERO ACLARAMIENTO
15' 1% + MARRON CLARO
5' 1% - OSCURO
III 10' 1% - OSCURO
15' 1% - OSCURO
5' 1% - OSCURO
IV 10' 1% - OSCURO
15' 1% - OSCURO
5' 1% - OSCURO
V 10' 1% - OSCURO
15' 1% + LENTO MARRON CLARO
5' 1% - OSCURO
VI 10' 1% + RAPIDO LIGERO ACLARAMIENTO
15' 1% + MARRON CLARO
5' 1% - OSCURO
10' 1% - OSCURO
VII 15' 1% + LENTO MARRON CARO
5' 1% - OSCURO
VIII 10' 1% - OSCURO
15' 1% - OSCURO
5' 1% - OSCURO
IX 10' 1% - OSCURO
15' 1% + LENTO LIGERO ACLARAMIENTO
CUESTIONARIO:
Qu es la amilasa salival?
la amilasa, denominada tambin sacarasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la
funcin de catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -Amilasa al digerir
el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce principalmente en
las glndulas salivales (sobre todo en las glndulas partidas) y en el pncreas.

Que es una enzima?
Las enzimas
1
son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones
qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace que una
reaccin qumica que es energticamente posible (ver Energa libre de Gibbs), pero que
transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a
mayor velocidad que sin la presencia de la enzima.
Que es el sitio cataltico?

El sitio o centro activo es la zona de la enzima en la que se realiza el sustrato para
ser catalizado.

Esquematice una reaccin enzimtica?
Son aquellos procesos biologicos en los que tienen lugar una enzima.
Enzima es un complejo proteico que precenta la propiedad catlizadora, es decir que aceleran o
aletardan procesos quimicos en cuanto le convenga a la celula. Si normalmente la degradacion de
una sustancia tarda diez dias en degradarse, con la accion de una enzima tardarauna hora. Esto
se debe a que cada reaccion quimica precenta una energia de activacion, esto es una barrera
energetica que tienen que vencer los reactivos para trasformarce en productos; la enzima, si es
catalitica positiva o aceleradora,disminuye esa barrera para que sea mas facil convertirse en
productos, y si es retrdadora o negativa, aumenta esa barrera.
Cabe destacar que la enzima no sufre transformacion durante la reaccion quimica, es decir, no se
altera quimicamente, y puede ser reutilizada para la siguiente reaccion.





Cules son las condiciones pticas para que actuara la amilasa salival?
Las condiciones optimas son 37 grados Celsius, un ph pequeamente acido ( ph de la saliva). este
es un factot muy importante dado que cuando la amilasa salival llega al estomaga se inactiva dado
el bajo ph del mismo, es por ello que el pancreas segrega la amilasa pancreatica que es acitva al ph
del estomago, y entonces continua la hidrolisis de almidon , glucogeno, etc.

Que productos se habran formado en los tubos, grafique su estructura qumica?



Esqumatice las reacciones qumicas que se producen con las solucines de fehling A y B?


sucede con el metabolismo de los carbohitratos si una persona tiene seguedad de
boca?
se altera el metabolismo de los carbohidratos producindose la diabetes. Son signos de
hiperglucemia la sed intensa, la sequedad de boca,









DISCUCIN:
Se han escrito lipasas que aun disponiendo de tapadera no muestran activacin inferencial. Por
esta razn y debido a la falta de una secuencia consenso que determina la existencia de tapadera,
no se puede descartar la presencia de esta estructura.
Futuros estudios cristalogrficos permitirn conocer la estructura real de esta protena y la
ubicacin de la molcula del sustrato en el bolsillo de unin, as como determinar la presencia de
tapaderas de la esteraza.







CONCLUSIN:

Gracias a esta prctica pudimos estudiar alguno de los factores que inciden en la velocidad de la
reaccin enzimtica, utilizando como ejemplo la amilasa salival, controlando la actividad
enzimtica por medio del sustrato no transformado o por los productos de la reaccin formados
(azcar reductor).








REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
activity of Ophiostoma piliferum (CartapipTM). Journal of Chemical
Technology and Biotechnology 74, 137-140.
Ghosh, D., Saxena, R. K., Gupta, R., Yadav, R. P. y Davidson, W. S. (1996)
Microbial lipases: production and applications. Science Progress 79, 119-
157.
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linoleate-bound Candida cylindracea cholesterol esterase. Structure 3, 279-
288.
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biotechnology 2nd ed (Fogarty, W. M. and Kelly, C. T. eds). Elsevier, London,
pp. 255-273.