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Hospital 12 de Octubre

Anlisis bsico del


Anlisis bsico del
semen
semen
Rosa Pello Gutirrez
Elisa Ramrez Mendoza
Hospital 12 de Octubre
Que es Liq. Seminal ?
Que es Liq. Seminal ?
Espermatozoides Espermatozoides
Suspendidos en secreciones: Suspendidos en secreciones:
testculo testculo
y el epiddimo. y el epiddimo.
Se junta con secreciones: Se junta con secreciones:
Prstata, Prstata,
vesculas seminal vesculas seminal
y las glndulas bulbouretrales y las glndulas bulbouretrales
Dando lugar a un liquido viscoso Dando lugar a un liquido viscoso
denominado denominado eyaculado eyaculado
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Los parmetros analizados en el semen reflejan :
la funcin exocrina de las glndulas sexuales masculinas
y nos orientan sobre patologas del sistema genital.
Al sufrir una transformacin desde el momento de la eyacualcin,
para su estudio correcto:
Debemos tratar la muestra con unas condiciones adecuadas
y estandarizadas para evitar sesgos artificiales.
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Gran variabilidad biolgica:
2 muestras de semen que difieran
entre 1 y 3 semanas.
Si los resultados discrepan seria
necesario una 3 muestra.
Por ser un fluido biolgico (sangre, LCR), debe ser tratado con
precaucin en el laboratorio, para evitar posibles
contaminaciones (VIH, Hepatitis..)
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Obtencin de la muestra
Obtencin de la muestra
Por masturbacin el mismo da del examen Por masturbacin el mismo da del examen
Frasco de vidrio o de plstico atemperado 20 Frasco de vidrio o de plstico atemperado 20- - 40 C, de boca 40 C, de boca
amplia amplia
Slo una eyaculacin Slo una eyaculacin
Se recomienda: abstinencia de 3 Se recomienda: abstinencia de 3- -7 das. 7 das.
Maximizar la calidad de la muestra. Maximizar la calidad de la muestra.
Y reducir la variabilidad Y reducir la variabilidad
Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio. Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio.
Evitar choque trmico (20 Evitar choque trmico (20 - - 40 40 C C). ).
Entregarlo lo antes posible (1h). Entregarlo lo antes posible (1h).
Hacer hincapi: Hacer hincapi:
Evitar la perdida. Evitar la perdida.
Lavarse bien las manos y genitales antes. Lavarse bien las manos y genitales antes.
No utilizar preservativo ni el No utilizar preservativo ni el coitus coitus interruptus interruptus. .
Usar frascos estriles. Usar frascos estriles.
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Formulario para el paciente
Formulario para el paciente
Nombre. Nombre.
Periodo de abstinencia. Periodo de abstinencia.
Fecha y hora de recoleccin. Fecha y hora de recoleccin.
Si toma medicacin: Si toma medicacin:
Deber hacerse hincapi en que informen de si toman Deber hacerse hincapi en que informen de si toman
frmacos, enfermedades concomitantes (fiebre), ejercicio frmacos, enfermedades concomitantes (fiebre), ejercicio
fsico intenso y situaciones de estrs. fsico intenso y situaciones de estrs.
Si fuma, o si tiene hbitos txicos y tiempo de abstinencia. Si fuma, o si tiene hbitos txicos y tiempo de abstinencia.
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La OMS divide el estudio del
La OMS divide el estudio del
semen
semen

Examen bsico
Examen bsico
1.Examen macroscpico 1.Examen macroscpico: licuefaccin, aspecto, volumen, : licuefaccin, aspecto, volumen,
viscosidad, pH. viscosidad, pH.
Concentracin de esp. y otras clulas. Concentracin de esp. y otras clulas.
Motilidad Motilidad
Vitalidad. Vitalidad.
Morfologa espermtica. Morfologa espermtica.
Presencia de aglutinaciones. Presencia de aglutinaciones.
Deteccin de anticuerpos antiespermatozoide unidos a la Deteccin de anticuerpos antiespermatozoide unidos a la
superficie esp. superficie esp.

Opcional
Opcional

Avanzados
Avanzados
Estudio microscpico Estudio microscpico
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Opcional
Opcional
ndice de teratosrpermia. ndice de teratosrpermia.
Test hipoosmtico. Test hipoosmtico.
Cultivos seminales. Cultivos seminales.
Anlisis bioqumico de Lquido S Anlisis bioqumico de Lquido Seminal eminal. .
Anlisis automtico de la movilidad espermtica. Anlisis automtico de la movilidad espermtica.
Test del Hmster. Test del Hmster.

Avanzados
Avanzados
Test de funcin espermtica: Test de funcin espermtica:
Especies reactivas de oxgeno. Especies reactivas de oxgeno.
Test de la zona pelcida. Test de la zona pelcida.
Evaluacin de la reaccin acrosmica. Evaluacin de la reaccin acrosmica.
Anlisis automtico de la morfologa espermtica. Anlisis automtico de la morfologa espermtica.
Tcnicas de recuperacin de espermatozoides mviles Tcnicas de recuperacin de espermatozoides mviles: :
Swim Swim- -up. up.
Gradientes de densidad. Gradientes de densidad.
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1.Examen macroscpico
1.Examen macroscpico

Licuefaccin:
Licuefaccin:
Se licua a temperatura ambiente (15 Se licua a temperatura ambiente (15- -60 60 min min). ).
Al recibirla: incubar a 37C durante 20 Al recibirla: incubar a 37C durante 20- -25 min.(1h) 25 min.(1h)
Y Y agitar agitar (no (no vortex vortex) )
Determinamos si esta licuado. Determinamos si esta licuado.
Si sigue sin estar licuada: Si sigue sin estar licuada:
Observar: grumos, hebras, cogulos. Observar: grumos, hebras, cogulos.
Liquido anormal. Liquido anormal.
Sin importancia clnica, interfiere en el anlisis del semen. Sin importancia clnica, interfiere en el anlisis del semen.
Utilizar; digestin enzimtico, tampn fosfato 1:1, medio de Utilizar; digestin enzimtico, tampn fosfato 1:1, medio de
cultivo. cultivo.
Referir los resultados a volumen inicial. Referir los resultados a volumen inicial.
Y si es para TRA, medio estril, y no usar digestin enzimtico Y si es para TRA, medio estril, y no usar digestin enzimtico. .
37C
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1.Examen macroscpico
1.Examen macroscpico

Aspecto:
Aspecto:
Observaremos despus de la licuefaccin. Observaremos despus de la licuefaccin.
Color normal Color normal: nacarado o gris opalescente. : nacarado o gris opalescente.
Color rojizo o marrn (hemates). Color rojizo o marrn (hemates).
Color amarillento (ictericia, alta vitamina B2) o alta nivel de Color amarillento (ictericia, alta vitamina B2) o alta nivel de
flavoprotenas oxidadas de vesculas germinales (elevada flavoprotenas oxidadas de vesculas germinales (elevada
abstinencia abstinencia
).
).
37C
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1.Examen macroscpico
1.Examen macroscpico

Volumen:
Volumen:
Para medirlo: Para medirlo:
Tubo graduado de 15 Tubo graduado de 15 ml ml, cnico, tipo Falcon, con tapa , cnico, tipo Falcon, con tapa
hermtica, hermtica,
testado para txicos celulares. testado para txicos celulares.
Volumen referencia: > 2ml Volumen referencia: > 2ml
V < 2ml: hipospermia u oligospermia. V < 2ml: hipospermia u oligospermia.
Cuando existe orgasmo y no eyaculacin tras la masturbacin Cuando existe orgasmo y no eyaculacin tras la masturbacin
nos encontramos ante una aspermia (ausencia de eyaculado) nos encontramos ante una aspermia (ausencia de eyaculado)
Aspermia Aspermia sospecharemos de una sospecharemos de una eyaculacin retrgrada eyaculacin retrgrada
.
.
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Protocolo para el estudio de los espermatozoides
Protocolo para el estudio de los espermatozoides
de los pacientes con eyaculacion retrgrada
de los pacientes con eyaculacion retrgrada
La OMS no tiene recomendaciones. La OMS no tiene recomendaciones.
Noche anterior a la recogida de la muestra: ingerir una cucharad Noche anterior a la recogida de la muestra: ingerir una cucharada a
sopera de bicarbonato sdico sopera de bicarbonato sdico
Con ello alcalinizamos la orina Con ello alcalinizamos la orina
y evitamos al mximo el dao de los espermatozoides y evitamos al mximo el dao de los espermatozoides
Pues muchas veces estos son utilizados para TRA. Pues muchas veces estos son utilizados para TRA.
El da de la recogida: El da de la recogida:
Orina, mide osmolaridad y pH. Orina, mide osmolaridad y pH.
Seguidamente se toma 4 gramos o 2 cucharadas soperas de Seguidamente se toma 4 gramos o 2 cucharadas soperas de
bicarbonato sdico, y agua litro, 750 ml diabticos. bicarbonato sdico, y agua litro, 750 ml diabticos.
Se espera, recoge orina: osmolaridad de 350 Se espera, recoge orina: osmolaridad de 350- -400 400 miliosmol miliosmol/ /Kg Kg y y
pH 7.2 pH 7.2- -8 8. .
Entonces se Entonces se recoge orina postorgasmo recoge orina postorgasmo en frasco con medio de en frasco con medio de
cultivo. cultivo.
Hacemos alcuotas, centrifugo 600g, 8 minutos y procedimiento Hacemos alcuotas, centrifugo 600g, 8 minutos y procedimiento
habitual. habitual.
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1.Examen macroscpico
1.Examen macroscpico

Viscosidad
Viscosidad
Diferenciarlo licuefaccin Diferenciarlo licuefaccin
Cogeremos una pipeta Cogeremos una pipeta Pasteur Pasteur con semen y dejaremos con semen y dejaremos
caer su contenido caer su contenido
Valor de referencia Valor de referencia: : gotas gotas, ,
o se forme un o se forme un filamento < 2cm filamento < 2cm. .
Si fuera mayor, anotaremos viscosidad anormal. Si fuera mayor, anotaremos viscosidad anormal.
Y lo trataremos: aadiendo medio tampn Y lo trataremos: aadiendo medio tampn
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1.Examen macroscpico
1.Examen macroscpico

pH
pH
Utilizando tiras reactivas de rango 6.4 Utilizando tiras reactivas de rango 6.4- -8.0 8.0
1 gota de semen en la tira y 30 seg. 1 gota de semen en la tira y 30 seg.
Comparamos color con la escala de colores Comparamos color con la escala de colores
Valor de referencia: pH > 7.2 Valor de referencia: pH > 7.2
pH: c pH: c
infeccin infeccin
pH <7.2 + + azoospermia azoospermia, ,
sugiere obstruccin de conductos sugiere obstruccin de conductos
eyaculadores o agenesia bilateral eyaculadores o agenesia bilateral
de deferentes de deferentes
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2.Motilidad espermtica
2.Motilidad espermtica
Tipos de motilidad: Tipos de motilidad:
Tipo a Tipo a: movilidad rpida y progresiva, > 25 : movilidad rpida y progresiva, > 25 micrometros micrometros/ /seg seg a a
37C, 5 veces la cabeza en 1 segundo. 37C, 5 veces la cabeza en 1 segundo.
Tipo b Tipo b: movilidad progresiva lenta o perezosa : movilidad progresiva lenta o perezosa
Tipo c Tipo c: movilidad no progresiva, < 5 : movilidad no progresiva, < 5 micrometros micrometros/ /seg seg, 1 vez la , 1 vez la
cabeza por segundo cabeza por segundo
Tipo d Tipo d: inmvil : inmvil
Valor de referencia Valor de referencia (60 minutos):
> 50% de los espermatozoides con movimiento tipo a + b. > 50% de los espermatozoides con movimiento tipo a + b.
>25 % con movilidad tipo a. >25 % con movilidad tipo a.
< 50% Astenozoospermia < 50% Astenozoospermia
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2.Motilidad espermtica
2.Motilidad espermtica
10 10 microlitros microlitros
Porta atemperado 37C Porta atemperado 37C
Se deja estabilizar unos 60 seg. Se deja estabilizar unos 60 seg.
Observamos a 100 aumentos Observamos a 100 aumentos
muestra homognea. muestra homognea.
A continuacin pasamos a 400 X con contraste de fase. A continuacin pasamos a 400 X con contraste de fase.
Contamos, 1 los mviles tipo a y b, Contamos, 1 los mviles tipo a y b,
y a continuacin los c y d. y a continuacin los c y d.
Se contaran 200 esp. en un porta, con contador de laboratorio. Se contaran 200 esp. en un porta, con contador de laboratorio.
Repetimos con otro porta Repetimos con otro porta. .
Tipo a: 3%
Tipo b: 32%
Tipo c: 5%
Tipo d: 60%
Tipo a: 20%
Tipo b: 40%
Tipo c: 5%
Tipo d: 35%
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2.Motilidad espermtica
2.Motilidad espermtica
Valoraremos si la diferencia entre los contajes esta dentro Valoraremos si la diferencia entre los contajes esta dentro
del 95% de i.c. de error debido al azar. del 95% de i.c. de error debido al azar.
Tipo a: 3 y 20%
Tipo b: 32 y 40%
Tipo c: 5 y 5%
Tipo d: 60 y 35% Tipo d: 60 y 35%
D:25%
M: 47.5%
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2.Motilidad espermtica
2.Motilidad espermtica
En el momento de la valoracin, pueden surgir inconvenientes: En el momento de la valoracin, pueden surgir inconvenientes:
Las colas sueltas no se cuentan. Las colas sueltas no se cuentan.
Puede a ver aglutinaciones. Puede a ver aglutinaciones.
La muestra este muy concentrada. La muestra este muy concentrada.
En muestras muy viscosas pueden producirse falsas En muestras muy viscosas pueden producirse falsas
astenozoospermias astenozoospermias
De todos modos, lo conveniente es q los miembros del equipo que De todos modos, lo conveniente es q los miembros del equipo que
se van a dedicar al contaje, se entrenen a travs de videos para se van a dedicar al contaje, se entrenen a travs de videos para
poder realizar un control de calidad. poder realizar un control de calidad.
Mtodo alternativo: Mtodo alternativo:
ASAC, CASA: incluye el anlisis de espermatozoides asistido por ASAC, CASA: incluye el anlisis de espermatozoides asistido por
computadora computadora
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3.Vitalidad espermtica
3.Vitalidad espermtica
Nos permite evaluar los espermatozoides vivos. Nos permite evaluar los espermatozoides vivos.
Segn la OMS se estudiara cuando la < 50% movilidad
Se hace de manera indirecta, estudiando el estado de la Se hace de manera indirecta, estudiando el estado de la mmb mmb. .
Los Los vivos vivos tiene la tiene la mmb mmb plasmtica plasmtica intacta intacta
y y los los muertos daada muertos daada. .
Tincin Tincin supravitales supravitales, , eosina eosina negrosina. negrosina.
y los basados en la capacidad y los basados en la capacidad
osmorreguladora osmorreguladorade la membrana: de la membrana:
Solucin Solucin hipoosmtica hipoosmtica, 37 , 37C C, 5min. , 5min.
Valor de referencia > 60% hinchados Valor de referencia > 60% hinchados
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4.Aglutinaciones y agregaciones
4.Aglutinaciones y agregaciones

Aglutinacin
Aglutinacin: visualizacin de espermatozoides mviles unidos por las : visualizacin de espermatozoides mviles unidos por las
cabezas, colas, cabeza cabezas, colas, cabeza- -cola. cola.

Agregacin
Agregacin
:
: unin de esp. a espermatozoides inmviles, generalmente unin de esp. a espermatozoides inmviles, generalmente
muertos, a otras cl, a restos, fibras mucosas. muertos, a otras cl, a restos, fibras mucosas.
Se valora a la vez que la movilidad Se valora a la vez que la movilidad
Se anota en el seminogramas con una escala semicuantitativa: Se anota en el seminogramas con una escala semicuantitativa:
No aglutinacin ( No aglutinacin (- -), pequeas aglutinaciones pueden ser normales (< 10%) ), pequeas aglutinaciones pueden ser normales (< 10%)
Totalidad (+++) Totalidad (+++)
La presencia de aglutinaciones: La presencia de aglutinaciones:
sugiere presencia de anticuerpos, sugiere presencia de anticuerpos,
causa inmunolgica de infertilidad, causa inmunolgica de infertilidad,
infeccin, infeccin,
aparece con + frecuencia en eyaculados aparece con + frecuencia en eyaculados
hiperconcentrados hiperconcentrados. .
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5.Morfologa espermtica
5.Morfologa espermtica
Tcnica de tincin recomienda: Tcnica de tincin recomienda: Papanicolau Papanicolau, , Shorr Shorr, , Diff Diff- -Quick Quick. .
Cabeza: azul Cabeza: azul
Pieza intermedia: rojiza Pieza intermedia: rojiza
Cola: azul o rojiza Cola: azul o rojiza
Deben de evaluarse 200 espermatozoides. Deben de evaluarse 200 espermatozoides.
2 extensiones. 2 extensiones.
Observar con objetivo de inmersin. Observar con objetivo de inmersin.
Slo se cuentan los espermatozoides completos. Slo se cuentan los espermatozoides completos.
y valorar la diferencia de los porcentajes y este debe de estar y valorar la diferencia de los porcentajes y este debe de estar
dentro del 95% de i.c. de error debido a azar. dentro del 95% de i.c. de error debido a azar.
Criterios de la OMS 1999
Criterios de la OMS 1999
> 15% para FIV > 15% para FIV % de normalidad % de normalidad
Se consideran anormales Se consideran anormales Valores limitantes Valores limitantes
< 1/2 cabeza < 1/2 cabeza Restos citoplasmticos Restos citoplasmticos
en la pieza intermedia en la pieza intermedia
Recto, uniforme, + delgada P intermedia. Recto, uniforme, + delgada P intermedia.
Desenrollado. 45 micras Desenrollado. 45 micras
Flagelo Flagelo
Delgada unida Delgada unida
axialmente a la cabeza axialmente a la cabeza
Forma Forma
< 1 micra < 1 micra
Anchura Anchura
1.5 * L cabeza 1.5 * L cabeza
Longitud Longitud Pieza intermedia Pieza intermedia
2.5 2.5- -3.5 micras 3.5 micras
Anchura Anchura
4 4- -5micras 5micras
Longitud Longitud
Bien definido, ocup Bien definido, ocup
40 40- -70% de la cabeza 70% de la cabeza
Acrosoma Acrosoma
Ovalada Ovalada
Forma Forma Cabeza Cabeza
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Morfologa anmala.
Morfologa anmala.
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6.Concentracin espermtica
6.Concentracin espermtica
Valor de referencia: > 20 millones /ml. Valor de referencia: > 20 millones /ml.
Para medir la concentracin espermtica la OMS recomienda: Para medir la concentracin espermtica la OMS recomienda:
2450 2450 50 50 1:50 1:50 >200 >200
950 950 50 50 1:20 1:20 40 40- -200 200
450 450 50 50 1:10 1:10 15 15- -40 40
400 400 100 100 1:5 1:5 <15 <15
Diluyente Diluyente
microL microL
Semen, Semen,
microL microL
Dilucin Dilucin Contaje Contaje
400x 400x
Si hay menos de 2 *campo, centrifugo 3000g, 15 minutos. Si hay menos de 2 *campo, centrifugo 3000g, 15 minutos.
y anotaremos < 2 y anotaremos < 2 millones*campo millones*campo, y si son mviles, o no. , y si son mviles, o no.
Diluyente es una solucin fijadora: solucin salina + formalina
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6.Concentracin espermtica
6.Concentracin espermtica
Hemocitmetro: cmara de NEUBAUER Improved. Hemocitmetro: cmara de NEUBAUER Improved.
Makler Makler, , Microcell Microcell. .
M de contraste de fases (200 a 400x) M de contraste de fases (200 a 400x)
Solo espermatozoides completos. Solo espermatozoides completos.
Se debe de realizar por duplicado Se debe de realizar por duplicado
< 10 esp * cuadro grande: contamos 25 cuadros
10-40 esp: contamos 10 cuadros
> 40 esp: 5 cuadros
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Factores de conversin
N de cuadrados grandes contados
0.4 0.4 0.8 0.8 2 2 1:50 1:50
1 1 2 2 5 5 1:20 1:20
2 2 4 4 10 10 1:10 1:10
4 4 8 8 20 20 1:5 1:5
5 5 10 10 25 25 Dilucin Dilucin
Si contamos: Si contamos:
230 espermatozoides 230 espermatozoides
Dilucin 1:20 Dilucin 1:20
Hemos contado 10 cuadros Hemos contado 10 cuadros
Para determinar la concentracin en millones / Para determinar la concentracin en millones /ml ml. .
230/2= 115 millones/ 230/2= 115 millones/ml ml. .
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7.
7.
Cel
Cel
redondas
redondas
Cl epiteliales, las de la espermatognesis y leucocitos. Cl epiteliales, las de la espermatognesis y leucocitos.
Valor normal < 5 millones/ Valor normal < 5 millones/ml ml
La concentracin de estas clulas se puede medir directamente a La concentracin de estas clulas se puede medir directamente a
partir de la siguiente frmula partir de la siguiente frmula
C = (N x S)/100 C = (N x S)/100
N = 10 clulas inmaduras 100 espermatozoides contados N = 10 clulas inmaduras 100 espermatozoides contados
S = 20 millones de espermatozoides/ S = 20 millones de espermatozoides/ml ml
C = (10 x 20) /100 =2 millones de clulas/ C = (10 x 20) /100 =2 millones de clulas/ml ml
Hospital 12 de Octubre
leucos leucos, son indicativos de infeccin (cultivo), y mala calidad , son indicativos de infeccin (cultivo), y mala calidad
espermtica. espermtica.
No debera exceder 1 milln/ No debera exceder 1 milln/ ml ml. .
Las tcnicas para la deteccin esta basada en la presencia: Las tcnicas para la deteccin esta basada en la presencia:
de la peroxidasa intracelular de la peroxidasa intracelular
de antgenos especficos de leucocitos de antgenos especficos de leucocitos

clulas inmaduras
clulas inmaduras, desordenes de la espermatognesis: , desordenes de la espermatognesis:
Hipoespermatognesis Hipoespermatognesis, varicocele, alteracin de las clulas , varicocele, alteracin de las clulas
de de Sertoli Sertoli. .
Para diferenciarlas de los leucos tincin Para diferenciarlas de los leucos tincin Bryan Bryan- -Leishman Leishman, ,
diferente morfologa, y ausencia de peroxidasa. diferente morfologa, y ausencia de peroxidasa.
Asocia Asocia xito FIV. xito FIV.
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Resumiendo
Resumiendo
> 75% de formas no > 75% de formas no
teidas teidas
Vitalidad Vitalidad
Teratozoospermia Teratozoospermia < 15% anormales FIV < 15% anormales FIV
Morfologa Morfologa
Astenozoosspermia Astenozoosspermia > 50% tipo > 50% tipo a+b a+b
Movilidad Movilidad
> 40millones > 40millones esp esp
N N esp esp eyaculados eyaculados
> 20 millones > 20 millones esp esp/ /ml ml
Concentracin Concentracin esp esp
> 7.2 > 7.2
pH pH
Completa Completa
Licuefaccin Licuefaccin
< 2cm < 2cm
Viscosidad Viscosidad
Aspermia:ausencia Aspermia:ausencia de de
eyaculado eyaculado
Hipospermia <2ml Hipospermia <2ml
> 2ml > 2ml
Volumen Volumen
Anomala Anomala Normalidad Normalidad
Hospital 12 de Octubre
Estudio de post
Estudio de post
-
-
vasectomas
vasectomas
Solo determinaremos el Solo determinaremos el volumen volumen, , pH <7 pH <7, , recuento recuento. .
Segn la Sociedad Britnica de Segn la Sociedad Britnica de Androloga Androloga: :
Pasado 3 Pasado 3- -4 meses 4 meses
Y 24 eyaculaciones Y 24 eyaculaciones
La OMS requiere un examen exhaustivo de todo el sedimento La OMS requiere un examen exhaustivo de todo el sedimento
obtenido por centrifugacin durante 15 obtenido por centrifugacin durante 15 min min a 800g, para a 800g, para
clasificar a un paciente de clasificar a un paciente de azoosprmico azoosprmico. .
Debido a que la imprecisin de la cmara es alta. Debido a que la imprecisin de la cmara es alta.
No debe indicarse 0 espermatozoides No debe indicarse 0 espermatozoides
Mejor no se observan espermatozoides Mejor no se observan espermatozoides
Dilucin 1:1, Dilucin 1:1, Nebubauer Nebubauer Improved, afirmar 95% seguridad Improved, afirmar 95% seguridad
Que tiene < 30.000 espermatozoides / Que tiene < 30.000 espermatozoides / mL mL
Hospital 12 de Octubre
Tcnicas de recuperacin
Tcnicas de recuperacin
espermtica
espermtica
1.SWIM 1.SWIM- -UP UP
Tcnica de seleccin que se basa en la capacidad de los espermat Tcnica de seleccin que se basa en la capacidad de los espermatozoides ozoides
con movilidad progresiva para desplazarse en un medio de cultivo con movilidad progresiva para desplazarse en un medio de cultivo adecuado adecuado
Se recuperan menos pero ms mviles Se recuperan menos pero ms mviles
lavamos
Echamos medio
de cultivo 1:1
Centrifugacin
10 min, 500g
botn
Elimino
sobrenadante
Echamos medio
de cultivo
Lo dejamos a 37C
Desde 30- 90 min
Recupero el
sobrenadante
Se hace recuento
espermtico
REM
Hospital 12 de Octubre
Tcnicas de recuperacin
Tcnicas de recuperacin
espermtica
espermtica
2. Gradientes de densidad 2. Gradientes de densidad
Seleccin de los mejores que pueden vencer los gradientes y lleg Seleccin de los mejores que pueden vencer los gradientes y llegar al ar al
fondo del tubo. fondo del tubo.
Gradientes discontinuos, disminuyen a saltos. Gradientes discontinuos, disminuyen a saltos.
3 capas (45/ 70/ 90), 3 capas (45/ 70/ 90), 2 capas (45/ 90 2 capas (45/ 90) )
Volumen de la capa es variable: 0.3/ 0.5/ Volumen de la capa es variable: 0.3/ 0.5/ 1.0 1.0 mL mL. .
Centrifugamos 5 Centrifugamos 5 min min, 300 , 300- -600g, recogemos el botn del fondo. 600g, recogemos el botn del fondo.
Lavamos, centrifuga 5min, 300 Lavamos, centrifuga 5min, 300- -600g 600g
.
.
Hospital 12 de Octubre
8.Anticuerpos
8.Anticuerpos
antiespermatozoides
antiespermatozoides
(AAE)
(AAE)
Ensayo obligado en cualquier seminograma bsico
Presentes hasta en el 40% de los casos de infertilidad
inexplicada
Origen femenino o masculino
Barrera inmunolgica : produccin de Ac al entrar en
contacto con el sistema inmune
Causas masculinas:
trauma (vasectoma)
reacciones inflamatorias
criptorquidia...
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Efectos:
Aglutinacin
Efecto citotxico
Dificultad de paso a travs del moco cervical y la unin y
penetracin de la zona pelcida
Tipos:
Ig G: por trasudacin desde la sangre
Ig A: producidas por las clulas inmunolgicas afincadas en el
tracto genital
Pruebas para la deteccin de AAE adheridos a la
membrana espermtica:
IBT
MAR
IBT
MAR
-Identificar presencia de AAE
-Caracterizar los isotipos
-Cuantificar la respuesta inmune
Hospital 12 de Octubre
- Normalmente no existen IgA, si no existe Ig G: como screening
es suficiente la prueba de la IgG como screening.
Clculos y resultados:
Contar al menos 200 espermatozoides mviles
Resultado expresado en % de espermatozoides mviles que
llevan partculas unidas
Cuando > 50% se considera que existe factor inmunolgico
MAR:
Partculas de ltex
Empleo de semen
completo
IBT:
Matriz de poliacrilamida
Lavado previo del semen
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Parmetros bioqumicos:
Parmetros bioqumicos:
interpretacin prctica
interpretacin prctica
Semen
Semen: suspensin de clulas reproductivas en un
lquido complejo llamado plasma seminal
Los componentes del plasma
seminal se mezclan durante la
eyaculacin y son el resultado
de la secrecin de diferentes
glndulas exocrinas.
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Prstata
Prstata:
ubicacin: debajo de la vejiga urinaria
produce una secrecin opaca blanquecina
pH cido (pH: 6.2-6.8)
30% del volumen total
Secreciones:
c. ctrico
fosfatasa cida
Espermina
Albmina
Zn
Funcin:
Liquefaccin
Movilidad espermtica
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Vesculas seminales:
Vesculas seminales:
Situacin: detrs de la prstata
Secrecin opalescente viscosa ligeramente
amarillenta
60% del volumen total
pH alcalino
Secreciones:
Fructosa
PG
Lactoferrina
Bicarbonato
Fibringeno
Funcin:
Produccin de ATP
Motilidad y viabilidad
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Epid
Epid

dimos
dimos:
Lleva espermatozoides de los testculos a los vasos
deferentes
Mide 3.8 cm de longitud
Dividido en:
Cabeza
Cuerpo
Cola
Secrecin:
Alfa glucosidasa
Carnitina
Funcin: Maduracin de los espermatozoides.
Trnsito: 10 14 das
Almacenamiento: 1 mes
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Cambios del espermatozoide en el epiddimo:
Cambios del espermatozoide en el epiddimo:
Disminucin de la gota citoplasmtica
en la pieza intermedia
Cambios elctricos en la superficie de
membrana
Aumento del contenido de AMPc
Modificacin de la forma del acrosoma
Adquisicin de protenas de superficie
Estabilizacin de la cromatina nuclear
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Glndula de
Glndula de
Littr
Littr
:
:
Localizacin: mucosa uretral posterior
Produccin de un lquido mucoso

Glndulas de
Glndulas de
Cowper
Cowper
:
:
Localizacin: debajo de la prstata
Secrecin alcalina
Secreciones:
Mucoproteinas
Galactosa
c. oxlico
Funciones:
Limpia la uretra
Lubrica la mucosa uretral
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Distribucin de los marcadores bioqumicos del plasma
seminal en eyaculacin fraccionada
-Primera fraccin:
-Prosttica
-Epiddimos
-Espermatozoides
-Segunda fraccin:
- Vesculas seminales
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A pesar de la gran cantidad de sustancias presentes,
ninguna aporta mayor informacin que el anlisis
directo del nmero y caractersticas funcionales del
espermatozoide
Algunos parmetros bioqumicos representativos de la
funcin de las principales glndulas son suficientes
para diagnosticar los principales sndromes asociados
a la infertilidad masculina
OMS: Zn, fructosa, - glucosidasa
Medicin del pH y del volumen seminal
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Funcin de las vesculas seminales:
-Fructosa
-Fructosa corregida
Funcin de la prstata:
-cido ctrico
-Zinc
-Fosfatasa cida
Funcin del epiddimo:
-Alfa glucosidasa
> 20 mU/eyaculado Epiddimo -glucosidasa
> 13 mol/eyaculado Vesculas seminales Fructosa
> 200 U/eyaculado Prstata Fosfatasa cida
> 52 mol/eyaculado Prstata Citrato
> 2.4 mol/eyaculado Prstata Zn
Valor de referencia Lugar de produccin Sustancia
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Marcadores bioqumicos de la
Marcadores bioqumicos de la
maduracin espermtica
maduracin espermtica
Maduracin: cambios bioqumicos producidos en la
espermiognesis y en la migracin de los tbulos
seminferos al epiddimo:
remodelado de la membrana: motilidad
desarrollo de la reaccin acrosmica
remodelado nuclear
cambios funcionales fuera del testculo: capacitacin
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Maduracin testicular:
ROS : produccin de radicales libres de oxgeno
Cociente de isoformas de CK :
Contenido de DHA : disminuye segn avanza la
maduracin
Capacitacin:
salida de colesterol de la membrana
entrada de Ca
adenil-ciclasa
AMPc
proteinkinasa A
fosforilacin de Tyr en protenas flagelares
CK-MM
CK-BB + CK-MM
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Hiperactivacin espermtica :
Test positivo si 30% espermatozoides:
- VCL > 150 m/sg y/o
- ALH 6 m
Fosforilacin de Tyr
Contenido G 6P
Contenido NADPH
Adenil ciclasa AMPc Fosforilacin Tyr
Cambios en el patrn
de motilidad:
VSL VCL y AHL
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Control de calidad en el estudio
Control de calidad en el estudio
espermtico
espermtico
Control de calidad: conjunto de procesos dirigidos a
asegurar la fiabilidad tcnica
Tipos de pruebas:
Diagnstica: concentracin, movilidad, morfologa
Teraputica: tcnicas de recuperacin para FIV
Control de calidad:
Analtico: detectar y minimizar los errores de medida
Biolgico: asegurar la viabilidad de los espermatozoides
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CC analtico interno:
- Distribucin aleatoria
de los espermatozoides
- Error de contaje:
Uso de n de espermatozoides
representativos
Cansancio del tcnico,
materiales en condiciones no idoneas...
- CC interno: minimizar al mximo la imprecisin
Imprecisin
Inexactitud
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1-5% de las muestras trabajadas CC interno:
- Nivel intra-individual: realizar todas las muestras por
duplicado. Si la diferencia es mayor que el error de contaje
establecido, rechazar la medicin.
- Nivel del observador: instruir al nuevo personal realizando
mediciones en paralelo hasta que no existan desviaciones
sistemticas
- Seguimiento continuo de los resultados mediante el
procesamiento de especmenes conocidos:
material de control
muestras de pacientes
vdeos
Diario: ensayo por duplicado
Semanal: anlisis por diferentes tcnicos
Cuatrimestral: CC externo y calibracin de pipetas
Anual: calibracin de cmaras de contaje
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1
er
contaje: 15
2 contaje: 30
total: 45
1
er
contaje: 20
2 contaje: 25
total: 45
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CC externo:
CC interno y externo complementarios
Analizar las muestras de CC externo como si
fueran muestras de rutina
Muestras que abarquen la totalidad del rango
clnico
- concentracin: 3-30 mill/mL
- movilidad: 10-40%
- morfologa: < 20% de formas normales
Muestras procedentes de varones seronegativos
para VIH y hepatitis
1999: primer programa de calidad externo
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CC biolgico:
Asegura la viabilidad de los espermatozoides que se
usarn en FIV
CCB interno: aseguran el adecuado funcionamiento
e inocuidad de los aparatos y materiales:
T: estufas, incubadores
[CO
2
]
Humedad
Toxicidad de medios de cultivo, pipetas: test de
supervivencia espermtica o test de los embriones de
ratn
CCB externo: evalan la capacidad del laboratorio
para detectar materiales y medios txicos para el
espermatozoide
Hospital 12 de Octubre
Muchas gracias por
Muchas gracias por
escucharnos.
escucharnos.