12 de mayo del 2014

NUMERACIN E IDENTIFICACIN DE
enterococcus
CURSO : MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS I



DOCENTE: Dra. Graciela Albino Cornejo



INTEGRANTES:
Callirgos Chabayan, Hernn
Enriquez Mendez, Kenny
Inoan Mechato, Angela
Jimnez Raymundo, Luis
Prada Chayan, Janet
Salvador Cerdn, Raquel


PRACTICA N 08
NUMERACIN E IDENTIFICACIN DE ENTEROCOCCUS

I. INTRODUCCIN
EL gnero bacteriano Enterococcus spp. forma parte de la flora microbiana normal del
intestino del hombre, de otros mamferos, aves, reptiles e insectos. Pueden
encontrarse tambin en el tracto genitourinario y en la saliva. Han sido identificados
como patgenos oportunistas para los humanos, pudiendo causar diferentes
enfermedades dentro de las que se encuentra las endocarditis, bacteremias
enterocccicas, infecciones del tracto urinario, neonatales, del sistema nervioso
centran (aunque son raras), intrabdominal y plvica. Las especies ms frecuentemente
aisladas en el hombre son E. faecalis y E. faecium.
Antiguamente los enterococos pertenecan, clsicamente, a los Streptococcus grupo D
de Lancefield. En el ao de 1970 fueron oficialmente clasificados por Kalina como un
gnero independiente. Enterococcus son clulas esfricas u ovoides, de tamao 0.6-2.0
x 0.6-2.5 m. Son cocos GRAM positivos, no formadores de endosporas. Se presentan
en forma de pares o de cadenas cortas. Son no mtiles, con excepcin de las especies
E. gallinarum y E. casseliflavus. Son anaerobios facultativos, quimiorganotrofos, con
metabolismo fermentativo pero no de gas. Presentan requerimientos nutricionales
complejos. Son catalasa negativos o, ms comnmente, dbilmente positivos. Crecen
usualmente en un caldo de cultivo a 10C y 45C, aunque el crecimiento ptimo es a
37C. pueden crecer a pH 9,6 con 6,5 % de NaCl y con 40% de bilis. Sobreviven despus
del calentamiento a 60C durante 30 min.
Enterococcus en aguas y alimentos:
Las aguas y los alimentos contaminados con microorganismos constituyen un vehculo
de transmisin de enfermedades infecciosas; por otra parte, el desarrollo microbiano
destruye grandes cantidades de alimentos, causando problemas econmicos y una
considerable prdida de importantes nutrientes.
El control de calidad sanitaria de los recursos del ambiente se lleca a cabo mediante la
enumeracin de bacterias o grupos de ellas indicadoras de contaminacin fecal. La
enumeracin de estas bacterias es utilizada para valorar la calidad sanitaria de
alimentos, sedimentos y aguas destinadas al consumo humano, la agricultura, la
industria y la recreacin. No existe un indicador universal, por lo que se debe
seleccionar el ms apropiado para la situacin especfica en estudio.
Enterococcus se encuentra dentro del grupo de microorganismos indicadores de la
inocuidad de los alimentos, pues por su amplia distribucin pueden encontrarse en
estos productos, especialmente en los de origen animal. Suelen considerarse buenos
indicadores porque mueren ms lentamente que los coliformes, debido a que son muy
resistentes a condiciones adversas como congelacin, desecacin y como resultado
sobreviven ms que stos.
La presencia de son E. faecalis y E. faecium es usada frecuentemente para indicar
contaminacin de origen fecal. E. faecalis ssp. faecalis es considerado como un indicador
de contaminacin fecal de fuentes humanas, mientras que E. faecium y otras especies
indican contaminacin de otras fuentes.
Los productos de consumo pueden contener Enterococcus procedentes de una
contaminacin fecal directa o indirecta. En los productos semiconservados, procesados
por calor pero no estriles, Enterococcus, junto con microorganismos esporulados, son
con frecuencia los nicos organismos sobrevivientes. Los productos mantenidos en el
rango de temperatura entre 10-45C pueden contener cifras muy elevadas de estos
microorganismos.
El anlisis de Enterococcus se realiza cuando se trata de aguas de bebida de calidad
dudosa como son las muestras de pozos, es decir, aguas subterrneas o para aguas de
recreacin.
Para su anlisis se emplea la tcnica de numeracin ms probable (NMP), usando el
medio EVA (etil violeta azida) o mtodos de siembra en placa, empleando el medio KF-
streptococcus. La azida sdica y el cristal violeta, se utilizan frecuentemente para el
cultivo de estos microorganismos.
Es de vital importancia que el agua para el uso recreativo tambin posea buena calidad.
Diversos estudios de aguas marinas y playas indican que las enfermedades de las
mucosas, de la piel y digestivas, asociadas con los baistas, estn directamente
relacionadas con la contaminacin fecal. Enterococcus es considerado el indicador
bacteriolgico ms eficiente para evaluar la calidad de agua de mar para use recreativo,
debido a que es altamente resistente a las condiciones salinas de este medio y adems
relacionado directamente con gastroenteritis, enfermedades respiratorias, conjuntivitis
y dermatitis, entre otras.
La Organizacin Mundial De La Salud defini los criterios de clasificacin de las playas
deacuerdo con los niveles de Enterococcus presentes en el agua. Estos son los
siguientes:
Enterococcus NMP/100mL Clasificacin de la playa
0 - 500 Apta para uso recreativo
>500 No apta para uso recreativo


II. OBJETIVOS:

Numerar y aislar bacterias del gnero Enterococcus.
Familiarizarse con la tcnica.

III. MATERIALES:
Material Biolgico: aguas de mar, leche deshidratada a granel

Material no biolgico::
Para aguas:

Medio de deteccin presuntiva: medio glucosa azida (Rothe).
Medio de deteccin confirmativa: medio Litsky (caldo glucosa azida
etil violeta)

Para alimentos:

Agar azida cristal violeta de Parcker con sangre
Agar enterococo (a base de Trifeniltetrazolium- TTC).

Pruebas bioqumicas: ph 9.6; NaCl 6.5%; telurito; catalasa,
supervivencia a 65C
Tubos de dilucin
Placas de Petri
Pipetas de 10 y 5 mL
Mechero Bunsen
Asas microbiolgicas
Frascos estriles
Agua destilada









IV. PROCEDIMIENTO:

Alimentos: Leche deshidratada

Pesar 3g y lo diluimos en 27 ml de agua destilada estril, dilucin 10
-1








Realizamos diluciones hasta 10
-3









Para la muestra de agua de mar tambin realizar diluciones hasta 10
-3













Sembrar cada dilucin de cada muestra (leche y agua) en una placas con
Agar selectivo para Enterococos (TTC) por siembra en profundidad.
Incubar a 35-37C por 24-48 horas
En el caso del agua se tiene que pasar y sembrar en caldo Litsky








Lectura: deben observarse colonias rojas, con centro rojo o colonias
blancas.
Luego realizar la identificacin de las colonias a travs de coloracin Gram y
otras como catalasa, crecimiento a 45 C, crecimiento en NaCl 6.5%,
crecimiento a pH 9.6 y otros de ser necesarios.