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MUTAES

Fentipo:
Factores ambientais Genoma
Mutaes: so alteraes ou modificaes
sbitas em genes ou cromossomas,
podendo provocar uma variao
hereditriaou uma mudana no fentipo.
Podeproduzir umacaractersticafavorvel
num dado ambiente e desfavorvel
noutro.
Mutantes: Indivduos cujo patrimnio
genticosofreumutao.
Mutaes
Podemser:
gnicas quando alteram a estrutura
doDNA;
cromossmicas quando alteram a
estruturaouonmerodecromossomas.
Mutaes Gnicas
As mutaes gnicas so responsveis por
alterarem uma ou mais bases no DNA
(alteraesnosgenes) econsequentementenas
protenas, determinando, muitas vezes, a
formao de novas protenas ou alterando a
acodeenzimasimportantesnometabolismo.
Mutaes Gnicas
Podemocorrer:
nas clulas germinativas e assim so
transmitidashereditariamente;
nas clulas somticas podendo provocar a
formaodetumores.
Tipos de Mutaes Gnicas
Substituioocorreatrocadeumoumaisparesde
bases.
Chama-se transio substituio de uma purina
por outraoudeumapirimidinapor outra;
Chama-se transverso substituio de uma
purinapor umapirimidinaouvice-versa.
Purinas:GuaninaeAdenina
Pirimidinas:CitosinaeTimina
Inseroacontecequando umaoumaisbases
soadicionadasaoDNA, modificandoaordemde
leitura da molcula durante a replicao ou a
transcrio.
Deleoacontecequando umaou mais bases
so retiradas do DNA, modificando a ordemda
leitura, duranteareplicaoouatranscrio.
Efeitos das Mutaes
...sosempreimprevisveis...
Benficas(conduzemacaractersticasvantajosas);
Prejudiciais (alteramo funcionamento normal da clula
ouconduzemsuamorte)
Neutrasdevido:
redundnciadocdigogentico;
onovoa.a. formadotempropriedadesidnticassdo
a.a. substitudo;
asubstituioocorrenumazonadaprotenaqueno
determinanteparaasuafuno.
Mutaes Cromossmicas
Tambm chamadas de aberraes cromossmicas,
so alteraes na estrutura ou no nmero de
cromossomasnormal daespcie.
Podem ocorrer tanto nos autossomas como nos
cromossomassexuais.
Desencadeiam um conjunto de sintomas, causados
peladosagemanormal degenes(sndroma).
Podem provocar anomalias e mal formaes no
organismoouatainviabilidadedele.
Mutaes Cromossmicas Estruturais
Provocam alteraes na estrutura dos cromossomas,
podendo ocasionar a perda de genes, a leitura
duplicadaouerrosnaleituradeumoumaisgenes.
So determinadas principalmente pela ruptura da
estrutura linear dos cromossomas durante o crossing-
over, seguidadeumareparaodeficiente.
Podemacontecer por deleo, duplicao, inverso ou
translocaodepartesdecromossomas.
Deficinciaoudeleoquando ocorre
aperdadeumsegmentodocromossoma,
comconsequenteperdadegenes.
A B C D E
A B C
Duplicao quando ocorre a
presena de um segmento duplicado
do cromossoma, acarretando uma
duplaleituradegenes.
A B C D D E
A B C D E
Inverso quando ocorre a quebra de
um segmento do cromossoma que se
solda novamente molcula mas de
forma invertida, provocando erros na
leituradosgenes.
A B C D E A B C E D
Translocao quando ocorre a troca de segmentos
entrecromossomasnohomlogos, provocandoerrosna
leitura.
Simples: transfernciadeumaporo deumcromossoma, oumesmo
deumcromossomainteiro, paraoutronohomlogo;
Recproca: troca de segmentos entre cromossomas no homlogos.
Soasmaiscomuns.
A B C D E
M N O P Q
A B C P Q
M N O D E
Translocao recproca
Importante:
Natranslocaorecprocaenainversonoh
alteraodonmerodegenes. Todososgenes
esto presentes, modificando-se apenas a sua
posio relativa, o que trs dificuldades
acrescidas, desde logo, no emparelhamento
doscromossomasduranteameiose.
Mutaes Cromossmicas Numricas
Ocorrem devido a meioses anmalas (no-
disjuno de cromossomas homlogos na
diviso I ou no disjuno de cromatdeos na
divisoII).
Provocam alteraes no nmero tpico de
cromossomasdaespcie(caritipo).
Podemproduzir anomaliasgraveseatamorte
doorganismo.
Tipos de Mutaes Cromossmicas Numricas
Actividade 15 pg. 105
Mutaes Cromossmicas Numricas
Nas alteraes cromossmicas numricas usa-se
o sufixo Somia paraindicar aalterao numrica
dorespectivocromossoma.
Nulissomia(2n-2) perdadeumpar decromossomas
homlogos. Nohomemletal.
Monossomia (2n-1) ausncia de um dos
cromossomashomlogosnumdadopar.
Polissemias quando se verifica um aumento do
nmero de cromossomas. Exemplo: Trissomia (2n+1)
em que se verifica a presena de mais um
cromossomanumdadopar.
Sndroma de Down
Trissomiadocromossoma21(Mongolismo semelhanasfaciais
comoshabitantesdaMonglia);
Inicialmenteestudadapor LangdonDown, em1866;
Muito frequente na espcie humana (com diminuio da
esperanade vidaedaestatura; bocapequenapor vezes semi-
aberta, devido dificuldade de acomodar a lngua; deficincia
mental
1
; formadosolhos caracterstica; pescoo curto egrosso;
genitliapouco desenvolvidamaior susceptibilidade ainfeces
respiratrias; por vezes presena de malformaes cardacas e
problemascardiovasculares).
1
ResultantedacpiaextradogeneGart aumentodonvel depurinasnosangue.
225 genes
Sndroma de Down
Caritipo45A+XX=47ou45A+XY=47;
Causada pela no disjuno do cromossoma 21 de um
dos progenitores (normal) e mais raramente, pode
acontecer por translocao entreo cromossoma21eo
14.
Mulheres com o sndroma: podem ter descendentes
normaisoutambmcomadoena.
Homenscomosndroma: estreis.
Sndroma de Down
Ocorrempela no-disjuno dos cromossomas
sexuaistantonohomemcomonamulher.
Duasmaisconhecidas:
- SndromadeTurner (X0);
- SndromadeKlinefelter (XXY).
Alteraes nos cromossomas sexuais
Sndroma de Turner
Monossomiado cromossomaX, caritipo 44A+
X0=45.
Sexo feminino com ovrios atrofiados,
deficincia hormonal, esterilidade, ausncia de
menstruao, mamas pequenas, vulva infantil,
pescoo alado (com pregas), deficincia
cardaca, raramentedeficinciamental.
Caritipo masculino 45,Y anomalia letal
Sndroma de Turner
Sndroma de Klinefelter
Trissomia do cromossoma X, caritipo 44A
+XXY=47.
Sexo masculino com testculos e pnis
pequenos, reduzida pilosidade pbica,
esterilidade, mamas desenvolvidas
(ginecomastia), estatura elevada,
deficinciamental.
Caritipo feminino 47,XXX anomalia insignificante
Sndrome de Klinefelter
SNDROMA DE
TURNER
(ESTRIL)
2n: 45,X0
2n: 46,XX
SNDROMA DE
KLINEFELTER
(ESTRIL)
2n: 47,XXY
2n: 46,XY
Poliploidia
Mecanismoquepodelevar especiaorpida.
Indivduo poliplide: apresenta umnmero mltiplo
exactodogenomacaractersticodaespcie.
Podem designar-se por triplides (3n), tetraplides
(4n), pentaplides (5n), etc., conforme tenhamtrs,
quatro, cincooumaisgenomas.
Como surgem os indivduos poliplides?
Actividade 16 pg. 108
Podem originar-se principalmente de duas
maneiras:
por diviso mittica incompleta, havendo
duplicaodonmerodecromossomasdentro
da prpria espcie ou pela unio de dois
gmetasnoreduzidos(autopoliploidia)
por hibridizao interespecfica, seguida de
divisomitticaincompleta(alopoliploidia)
Autopoliploidia
Alopoliploidia
De onde veio o trigo do po?
Exerccio 17 pg. 110
As mutaes e o desenvolvimento biotecnolgico
MutagneseMutao
A maior parte das vezes, as clulas podem reparar os
danoscausadospelasmutaes:
- capacidade descriminatria da DNA polimerase em
relao ao emparelhamento das bases durante a
replicao podeeliminar basesmal emparelhadas;
- capacidade que outras enzimas tm para fazer a
remoodebasesoudenucletidosestranhos.
Por vezes o equilbrio entre a mutagnese e a reparao
rompe-se!!!
As mutaes, a tecnologia e a vida
AgentesMutagnicos:
Fsicos radiaes ionizantes (raios X,
radiaes alfa, beta e gama) e radiao
ultravioleta.
Qumicos alguns corantes e conservantes,
colchicina, alcatro, benzeno, benzopireno,
etc.
Os prs da biotecnologia e os contra?
Exerccio 18 pg. 112
Cancro| Tumor maligno| Neoplasiamaligna:
Doena que apresenta o crescimento de um tecido
neoformado.
Origemgentica(alteraesaonvel do DNA), hereditrios
(muitoraros) ouespordicos(cercade95%).
Normalmenteestassociadoa:
- alteraesdosmecanismosqueregulamadiviso celular
(alteraes devido a um aumento da estimulao da
diviso celular ou devido a deficincias nos mecanismos
queimpedemadivisocelular);
- alteraesdosmecanismosqueregulamaapoptose.
Umorganismomulticelular , emcadamomento, o
resultado de um equilbrio que se gera entre a
proliferao celular e amorte programada(apoptose).
Assim, em determinado momento, frequentemente
durante o desenvolvimento embrionrio, h clulas
destinadas a morrer, a fim de que outras possam
prosseguir a sua tarefa de constituio de tecidos e
rgos. Masasclulastambmpodemmorrer devido
aco de substncias txicas ou devido falta de
nutrientesessenciais(necrose)
Apoptose: conjuntodefenmenosprogramadosgeneticamentequelevam
mortedaclula.
Na apoptose, a clula encolhe, comeam a formar-se bolhas
e a cromatina compactada, formando massas
concentradas na parte interna do ncleo, que se parte,
levando formao dos corpos apoptticos.
Clulas anmalas (caso das clulas malignas)
ou
Clulas desnecessrias ao organismo
Mecanismos determinados geneticamente: Suicdio celular
Diariamente surgem, no nosso organismo, clulas neoplsicas que so
naturalmenteeliminadaspor apoptose.
Quando tal no acontece Cancro
Clulas geneticamente alteradas
Em alguns casos: invaso dos tecidos vizinhos atravs do sangue
ou linfa (metastizao)
Hdoistiposdegenesquepodemcausar cancroquandosofrem
mutaes, provocando ou permitindo o crescimento celular
descontrolado:
- osproto-oncogenesougenespromotoresdecrescimento, cuja
actividadenormal naclulaestrelacionadacomo crescimento
celular. Um proto-oncogene mutado oncogene pode
provocar um crescimento celular descontrolado, causando a
formaodeumcancro.
- os genes supressores de tumor (tumorais), regulam a
proliferao celular, contrabalanando o estmulo proliferativo
dos proto-oncogenes. Quando mutados, deixamde prevenir a
multiplicaodescontroladadasclulas.
As clulas do nosso corpo so, assim, reguladas deforma a que
haja um balano entre os genes que induzem o crescimento
celular eosgenesquebloqueiamtal crescimento.
Efeitos das Mutaes (concluso)
As mutaes so espontneas e podemser silenciosas, ou seja, no
alterar a protena ou sua aco. Podem ainda ser letais, quando
provocamamorte, ouaindaacarretar doenasouanomalias.
Mas
As mutaes tambm promovem a evoluo j que determinam
aumento na variabilidade gentica. H plantas utilizadas na nossa
sociedadeparavriosfinsoumesmoalgunsanimaisqueconsumimos
diariamentequepossuemumcaritipoalterado.
So situaes emque podemos afirmar que as mutaes trouxeram
vantagens no s em termos de rentabilidade mas tambm em
termosdesatisfaodemarcado.
Fundamentos de engenharia gentica
1950-1975 molculadeDNAintocvel
Apartir dadcadade70(sc. XX) revoluobiotecnolgica
Cincia Tecnologia
Importantes conhecimentos sobre a vida;
Manipulao da vida
Engenhariagentica:
permiteconhecer melhor algumasdasdoenashumanas;
ofereceprodutossedutoresindstria;
libertar a agricultura das suas dependncias emrelao aos adubos e aos
pesticidas.
ParaissoaEGprecisa:
tcnicasdeelevadapreciso;
anlisesereflexesdabiotica.
ManipulaodoDNA
Extracodegenes;
Transplantao de genes de umas clulas para
outras;
Multiplicaodegenes;
Criaodeseresemtubodeensaio
Revoluobiotecnolgica:
descobertadeenzimasderestrio(endonucleases
de restrio) 1 ferramenta da engenharia
gentica. Estas enzimas possuema capacidade de
cortar oDNAemregiesespecficas.
Como funcionam as enzimas de restrio?
Exerccio 19 pg. 116
Enzimas de restrio
Clivagem do DNA
Fragmentos de DNA em dupla hlice com uma pequena
extenso em cada extremidade em cadeia simples -
extremidades extremidadescoesivas coesivas- capazesdeseassociar por ligaesde
hidrognio, comoutra cadeia simples emque a sequncia de
basessejacomplementar desta. Ouseja, asduasextremidades
coesivas a ligar tero de ser compatveis, o que se sucede se
os dois fragmentos ligar resultarem de uma reaco de
restriocomumamesmaenzima.
Em suma, as enzimas de restrio, viabilizam a
formaodemolculasdeDNArecombinantepor
permitirem criar fragmentos, com a informao
gentica de interesse, capazes de virem a ser
ligados por recurso a enzimas que catalisam a
formao da ligao covalente de dois
fragmentosdeDNA, asligases.
Vectores
Aps o isolamento de uma informao gentica, por
exemplo, um fragmento de DNA obtido pela clivagem
com enzimas de restrio, este fragmento dever ser
inserido numa outra molcula de DNA diferente, capaz
de amplificar aquela informao gentica emcentenas
decpias. Esteprocessodeamplificaoobtidoatravs
do uso de molculas de DNA que so os chamados
vectores de clonagemmolecular. Actualmente, os tipos
bsicos de vectores usados na metodologia do DNA
recombinante apresentamcaractersticas especiais que
os tornam excelentes veculos de clonagem em
diferentessituaes.
Plasmdeos
Os plasmdeoscirculares extracromossmicosde DNA,
foram os primeiros vectores a serem utilizados na clonagem
de genes. Para uma dada experincia selecciona-se um
plasmdeo com certas caractersticas especificas.
Funes
Transporta umou mais genes que lhes conferem
propriedades particulares, tais como a resistncia a
certosantibiticos.
Nota:
Geralmente os seus genes no so essenciais paraa
sobrevivnciadabactria, podendoser retirados.
Possuempelo menos umasequnciadeDNA que
podeactuar como origemdereplicao, sendo, por isso,
capazes de se multiplicar independentemente dos
cromossomasbacterianos. Osplasmdeosmaispequenos
aproveitamas enzimas de replicao de DNA da clula
hospedeira de modo a fazerem cpias de si prprios,
enquantoquealgunsdosmaiorestransportamgenesque
codificam enzimas especiais e especficas para a
replicao.
Alguns tipos: so tambmcapazes de sereplicareminserindo-
se no cromossoma bacteriano. Estes plasmdeos podem ser
mantidosdeummodoestvel nestaformaaolongodenumerosas
divises celulares, mas iro em algumas alturas existir como
elementosindependentes.
Em que consiste a tcnica do DNA recombinante?
Exerccio 20 pg. 119
Processo bsico da tcnica do rDNA
Clivagem do DNA do plasmdeo num ponto especfico atravs de
umaenzimaderestrio;
Clivagemdo DNA dador atravs da mesma enzima de restrio e
posterior isolamentodogenequesequer inserir noplasmdeo;
Contacto entre o gene a inserir e o plasmdeo e posterior fuso
atravsdasligasesdoDNA;
Formao do DNArecombinante(o plasmdeo passaater almdos
seusgenes, ogeneestranhoquelhefoi inserido);
Contacto entre o plasmdeo recombinante e as bactrias (clulas
hospedeiras);
O gene inserido passa a comandar a sntese de determinada
protenaapartir dorDNA.
Processo bsico da tcnica do rDNA
Aplicaes do rDNA
Esta tcnica, a partir da qual se podem obter um grande nmero de
cpias de umdeterminado gene e de o colocar a executar uma tarefa
desejadateminmerasaplicaes.
Hoje, j no so utilizadas como clulas hospedeiras apenas clulas
procariticas. Jse utilizamleveduras e at plantas e animaisSo hoje
comuns as plantas e os animais em cujo genoma foram introduzidos
genesquedeterminamcaractersticasvantajosas.
Organismos Geneticamente Modificados
DNA complementar
DNA original: exes (regies codificantes) +intres (regies no
codificantes);
Tcnica utilizada quando se pretende clonar genes semos seus
intres;
cDNA produzido a partir de uma molcula de RNAm maduro
(desprovidodeintres depoisdeprocessado);
Utiliza uma enzima capaz de sintetizar DNA a partir de RNAm
extrado transcriptasereversa.
Exemplo: produo de insulina
Ver fig. 53 pg. 121
Reaces de polimerizao em cadeia
A tcnica de PCR relativamente recente na histria da
biologia molecular, tendo sido desenvolvida nos anos 80 por
Kary Mullis. Esta tcnica to importante que em 1994
Mullis ganhou o prmio Nobel.
A ideia bsica da tcnica de PCR bastante simples. Trata-
se de uma metodologia in vitro que possibilita a reproduo
de milhares de cpias de um determinado fragmento de
DNA. Atravs desta tcnica, uma sequncia particular de
interesse pode ser amplificada, tornando-se maioritria na
amostra de DNA. Deste modo, dois pequenos fragmentos
de DNA, normalmente de 20 pares de bases (primers), so
sintetizados in vitro. Estes primers so complementares s
extremidades da regio de DNA que se pretende amplificar.
Reaces de polimerizao em cadeia
O mtodo PCR pode ter incio com uma
quantidade muito pequena de DNA original.
Durante o processo PCR, o fragmento de
DNA em questo misturado com
nucletidos e DNA polimerase (enzima que
tem a capacidade de unir os nucletidos
livres com os seus complementares na
cadeia molde de DNA).
Reaces de polimerizao em cadeia
Deseguida:
Desnaturao Desnaturao da dupla cadeia de DNA com elevadas
temperaturas separam-se as duas cadeias;
Hibridizao Hibridizao (annealing - emparelhamento) de pequenas
sequncias sintticas de nucletidos e sntese de cadeias
complementares, por aco de uma DNA polimerase
(extenso);
Repetio Repetio do do processo processo: por ciclos sucessivos de
aquecimento e arrefecimento obtm-se milhes ou bilies
de cpias do fragmento de DNA original.
Nota: como as enzimas sofrem desnaturao quando sujeitas a altas
temperaturas recorre-se frequentemente a DNA polimerases extradas
de bactrias que vivememmeios muito quentes.
Reaces de polimerizao em cadeia
Reaces de polimerizao em cadeia
Processodesenvolvidoem1983.
Serveparaamplificar umadeterminadaporodeDNA.
Neste processo utiliza-se uma poro de DNA, nucletidos livres (primers) e
DNApolimerase.
Por acodocalor separa-seaduplacadeiaemduascadeiassimples.
Deseguidaecomtemperaturasmaisbaixas, aDNApolimeraseentraemacoeadicionaos
nucletidos que vo formar duas cadeias complementares das iniciais, que se encontram
separadas.
Assim, de uma dupla cadeia obtm-se duas duplas cadeias que, com a
repetio do processo, vo originar 4, depois 8, 16, 32... a esta contnua
produo de duplas cadeias de DNA, exactamente iguais dupla cadeia
original, que se chama ampliao do DNA. Empoucos minutos consegue-se
umciclo completo, sendo possvel, emalgumashoras, aobteno demilhes
decpiasdofragmentoinicial.
Umadasdificuldadesencontradasnesteprocesso
o facto de se usaremaltas temperaturas o que
podedestruir aenzimaDNApolimerase.
Para combater este problema, recorre-se a DNA
polimerase extrada de bactrias que vivemem
meiosmuitoquentes.
A engenharia gentica a revolucionar a Sociedade
A engenharia gentica retira, analisa e reorganiza o
patrimnio gentico dos seres vivos.
Utiliza microrganismos com o patrimnio gentico alterado
no sentido de funcionarem como fbricas na produo de
substncias de interesse para o ser humano;
Substitui genes que provocam doenas hereditrias num
indivduo adulto (terapia gnica somtica) esta tcnica foi
utilizada em1999 emcrianas commenos de 1 ano;
Substitui genes em embries tcnica reprovada pelos
comits de biotica (considera-se prefervel a seleco de
embries isentos de determinados genes na reproduo
assistida);
Fabrica transgnicos com caractersticas desejadas que
invademos mercados.