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CINCIA E TCNICAS DA ALIMENTAO HUMANA

Relatrios do Comit Cientfico


da Alimentao Humana
(Trigsima quarta srie)
COMISSO EUROPEIA
Comisso Europeia
C
I A t r
lencia Tcnicas
da Alimentao
Humana
Relatrios do Comit Cientfico
da Alimentao Humana
(Trigsima quarta srie)
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana sobre:
Aromatizantes do fumo
Requisitos essenciais para as formulaes para os lactentes e formulaes de continuidade
Pareceres do Comit Cientfico da Alimentao Humana sobre:
Celulose microcristalina
Monosorbitanoleato de polioxietileno (20) (polisorbato 80)
Dimetiltereftalato recuperado em frascos de PET
Trs quimosinas obtidas a partir de microrganismos modificados por engenharia gentica
Direco-Geral Indstria
1995
Publicado pela
COMISSO EUROPEIA
Direco-Geral Indstria
AVISO
Nem a Comisso Europeia nem qualquer outra pessoa agindo
por conta da Comisso responsvel por qualquer eventual utilizao das informaes
contidas no presente relatrio.
No final do volume encontra-se uma ficha bibliogrfica.
Luxemburgo: Servio das Publicaes Oficiais das Comunidades Europeias, 1995
ISBN 92-826-8953-0
CECA-CE-CEEA, Bruxelas Luxemburgo, 1995
Printed in Spain
INDICE
Relatrio sobre aromatizantes do fumo 1
1. Introduo 1
2 Consideraes gerais 1
3. Consideraes tecnolgicas 2
3.1 Fumagem com fumo obtido a partir de madeira pirolisada ou aparas de madeira hmi da 2
3.2 Aromatizantes do fumo 3
4 Consideraes toxicolgicas 4
4.1 Cont ami nant es 4
4.2 Fundament os da avaliao toxicolgica 5
Bibliografia 7
Relatrio sobre os requi si tos essenci ai s para as formul aes para os lactentes e formul aes de
c o nt i nui da de 9
1. Normas de referncia 9
2 Introduo 9
3 Requisitos essenciais das formulaes para lactentes 9
3.1 Protenas 9
3.2 Lpidos 11
3.3 Hidratos de carbono 14
3.4 Ferro 14
3.5 Elementos residuais 15
3.6 Vitaminas 16
4 Requisitos essenciais para as formulaes de continuidade 16
4.1 Lpidos 16
4.2 Outros critrios de composio 17
5. Utilizao das formulaes de continuidade 17
Bibliografia 18
Parecer sobre a cel ul ose microcristalina 23
1. Normas de referncia 23
2 Antecedentes e discusso 23
3. Concluso 24
Parecer sobre monosorbi tanol eato de pol i oxi et i l eno (20) (pol i sorbato 80) 25
1. Antecedentes e discusso .25
2 Concluso .25
Parecer sobre o di meti l tereftal ato recuperado a partir de garrafas de PET 27
1. Normas de referncia 27
2 Discusso 27
3 Concluso 27
Pareceres sobre trs qui mosi nas obti das a partir de mi crorgani smos modi fi cados por engenhari a
ge n t i c a 29
1. Ant ecedent es 29
2 Avaliaes toxicolgicas e concluses 30
2.1 Quimosina A produzida pela Escherichia coli K12 contendo o gene da proquimosina A
devitelo 30
2.2 Quimosina produzida por Kluyveromyces lactis contendo o gene da proquimosina
dovitelo 30
2.3 Quimosina produzida poe Aspergillus niger var Awamori, contendo o gene da proquimosina
B do vitelo 31
Bibliografa 32
Membros actuais do Comit Cientfico da Alimentao Humana
S. BARLOW
A CARERE
A FERRO-LUZZI (Vice-presidente)
M. GIBNEY
C. GOMEZ CANDELA
W. HAMMES
A KNAAP
P. JAMES
I. KNUDSEN (Vice-presidente)
A NOIRFALISE
M. NUEZ
G. PASCAL (Presidente)
J. REY
M. RIBEIRO
A SOMOGYI
A TRICHOPOULOU
R. WENNI G
Consultores emeriti
P. ELIAS
A LAFONTAINE
E POULSEN
R. TRUHAUT
Pela sua preciosa ajuda nos estudos seguidamente indicados, o Comit Cientfico da Alimentao
Humana deseja agradecer:
1. Parecer sobre a celulose microcristalina
W. GRUNOW
K. NETTER
2. Parecer sobre monosorbitanoleato de polioxietileno (20) (polisorbato 80)
W. GRUNOW
3. Relatrio sobre aromatizantes do fumo
W. GRUNOW
J. GRY
4. Relatrio sobre os requisitos essenciais para as formulaes para os lactentes e
formulaes de cont i nui dade
M. GIOVANNINI
A JACKSON
H.K.A. VISSER
B. KOLETZKO
J. SENTERRE
R E L A T R I O S O B R E A R O M A T I Z A N T E S D O F U M O
ADOP T ADO A 25 DE J UNHO DE 1993
1. Introduo
A Directiva "bsica" sobre Aromatizantes da CEE (1) inclui uma categoria de substncias intitulada
"Aromatizantes do Fumo". Esta directiva estipula, igualmente, que devero ser adoptadas futuras
disposies adequadas, por forma confirmar a segurana dos aromatizantes utilizados ou previstos
para uso nos produtos alimentares, com o objectivo de proporcionar aroma e/ ou paladar.
No parecer preliminar do Comit Cientfico da Alimentao Humana, emitido no seu 73 encontro, em
18 de Maio de 1990, foi referido que:
"O Comit constatou (de igual modo) a inexistncia de um inventrio sobre os aromatizantes do
fumo.
O Comit concluiu que dever ser realizada uma avaliao sobre a segurana dos aromatizantes e
que, para tal fim, ser necessrio realizar um inventrio dos aromatizantes actualmente
utilizados, bem como compilar informaes sobre o seu uso".
Conforme referido nas suas DIRECTIVAS PARA A AVALIAO DOS AROMATIZANTES
DESTINADOS A USO NOS PRODUTOS ALIMENTARES: 1. SUBSTNCIAS AROMATIZANTES
QUIMICAMENTE DEFINIDAS (2), adoptadas no 81 Encontro Plenrio a 9-10 de Dezembro de 1991, o
Comit sublinha que, para que o uso de um aditivo num produto alimentar seja aceite, este dever ser
submetido a uma avaliao toxicolgica adequada. Nesse contexto, o Comit pretende esclarecer,
entre outros, os problemas relativos avaliao dos aromatizantes includos no gr upo dos
aromatizantes do fumo. Uma vez que a Directiva no refere o processo de fumagem, neste relatrio s
sero tratados os aspectos tcnicos gerais deste processo.
Na elaborao do presente documento, o Comit fundamentou-se exaustivamente na documentao do
Conselho da Europa (3,4) e na avaliao de alguns aromatizantes do fumo realizada pela JECFA (5).
2. Consideraes gerais
A fumagem , junto com a secagem e a salga dos alimentos, provavelmente um dos processos mais
antigos para preservar e aromatizar os alimentos. provavelmente utilizada desde que o homem
conhece o fogo, h cerca de 90 000 anos ou mais. O objectivo primrio inicial de preservao dos
alimentos obtido por desidratao e reduo do nmero de bactrias superficiais atravs da aco de
certos componentes do fumo, aumentando assim as suas qualidades de conservao. Os objectivos
secundrios de provocar alteraes estruturais e sensoriais desejveis, tais como a cor e o aroma do
fumo, no produto final, servem para tornar os alimentos fumados atraentes para o consumidor.
Actualmente, a fumagem utilizada principalmente para fins organolpticos.
No processo tradicional de fumagem, utilizam-se geralmente madeiras densas, com a adio de ervas
aromticas, especiarias e ramos de algumas plantas. Os alimentos so seguidamente expostos, directa
ou indirectamente ao fumo assim obtido.
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25 DE JUNHO DE 1993 AROMATIZANTES DO FUMO
O aroma do fumo pode ser igualmente aplicado nos alimentos atravs do uso de aromatizantes do
fumo, com propriedades organolpticas aceitveis e processados por forma a eliminar componentes
indesejveis tais como os HAP (Hidrocarbonetos Aromticos Policclicos). Estes aromatizantes do
fumo destinam-se ao uso directo no alimentos ou sobre estes, sendo consequentemente considerados como
aditivos alimentares.
3. Consideraes tecnolgicas
Embora no seja do mbito da Directiva, considera-se til incluir, nesta seco, uma breve discusso
sobre o processo de fumagem.
3.1 Fuma ge m com f umo obt i do a par t i r de madei r a pi r ol i sada ou aparas de madei r a
h mi d a
Na fumagem convencional directa dos alimentos, os componentes do fumo aderem superfcie dos
alimentos expostos, por meio de processos qumicos e fsicos, nomeadamente por condensao, adsoro
e adeso. Os componentes depositados do fumo penetram subsequentemente nos alimentos tratados, a
uma profundidade varivel, dependente da natureza dos alimentos. Como resultado, os alimentos
fumados ficam contaminados, embora em pequenas quantidades, com os componentes do fumo, tais como
os hidrocarbonetos aromticos policclicos (HAP), fenis e formaldedo, que podem ser prejudiciais
para a sade. Uma vez que a fumagem difcil de controlar e de padronizar, necessrio desenvolver
tcnicas de fumagem que optimizem os efeitos desejveis do fumo e evitem, na medida do possvel, os
seus efeitos adversos.
Nos processos de fumagem comercial utilizam-se vrios tipos de geradores de fumo, onde se processa
uma combust o controlada de madeira. A madeira pirolisada, produzi ndo vapores que, por
oxidao, formam fumos ou alternativamente, as aparas de madeira hmida so aquecidas por forma
a gerarem fumo directamente. As madeiras densas so geralmente utilizadas no processo de fumagem
tradicional, mas essencial utilizar exclusivamente tipos especficos e aceitveis de madeira
natural. O quadro que se segue, no pretendendo ser exaustivo, inclui alguns exemplos:
Lista de exemplos de madeira, casca e ramos no tratados para produo de fumo
Acer negundo L. Bordo
Betula pendula Roth. Btula branca
B. alba L. and B. verrucosa Ehrh.
Betula pubescens Ehrh. Btula europeia
Carpinus betulus L. Carpino
Carya ovata (Mill.) Koch Nogueira norte-americana
Castanea sativa Mill. Castanheiro
Eucalyptus sp. Eucalipto
Fagus grandifolia Ehrh. Fai a
Fagus silvtica L. Fai a
Fraxinus excelsior L. Freixo comum
Juglans regia L. Nogueira
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25 DE JUNHO DE 1993 AROMATIZANTES DO FUMO
Malus pumila Mill. Macieira
Prosopis juliflora DC. Madeira de Mesquite
Prunus avium L. Cerejeira
Quercus alba L. Carvalho branco
Quercus ilex L. Azinheira
Ouercus robur L. Carvalho vermelho comum
Rhamnus frngula L. Amieiro Buckthorn
Robinia pseudoacacia Alfarrobeira negra
Ulmus fulva Michx. Ulmeiro doce
Ulmus rubra Mhlenb. Ulmeiro
Podem ser igualmente adicionadas ervas e especiarias, bem como ramos de Zimbro e ramos, agulhas e
pinhas de Picea.
Para minimizar a presena de HAP, em particular, nos alimentos fumados pelo processo tradicional,
possvel evitar o contacto directo dos alimentos com o fumo, pela utilizao de processos de fumagem
indirecta. Entre outras medidas destinadas a reduzir a transferncia de componentes txicos do fumo
para os alimentos fumados utilizam-se a interposio de sistemas de arrefecimento, filtros de
lavagem e a separao espacial da fonte de fumo. Qualquer destas modificaes pode, contudo, afectar
negativamente os resultados organolpticos. A produo de HAP pode ser reduzida mant endo as
temperaturas de produo dos fumos abaixo dos 400C, filtrando as partculas, colocando os produtos
em invlucros impermeveis aos HAP e reduzindo a durao da fumagem nos casos em que a proporo
rea/ peso alta. Contudo, o tempo de fumagem depende principalmente do produto a tratar e do sabor
que se pretende obter. A introduo de aromatizantes do fumo permite actualmente reduzir a
contaminao com compostos prejudiciais e permite controlar com preciso a intensidade do sabor do
produto final.
3.2 Aromati zantes do fumo
Os aromatizantes do fumo podem ser divididos nos seguintes trs tipos: condensados do fumo, aromas
do fumo, obtidos por mistura de substncias aromatizantes quimicamente definidas, e preparados de
aromatizantes do fumo. Estes ltimos so baseados em condensados do fumo ou em aromas do fumo
preparados por mistura de substncias aromatizantes quimicamente definidas, com a adio de outras
substncias.
Os condensados do fumo so tradicionalmente obtidos atravs de trs formas de fixao do fumo:
Em primeiro lugar, o fumo fixado na gua ou, se possvel, em outros lquidos, nomeadamente misturas
de l cool / gua ou leo. Regra geral, estes condensados so processados adicionalmente, e.g.
fraccionados por extraoStr*?. Os condensados aquosos do fumo, aos quais se retirou a fase orgnica,
tipo alcatro, contendo HAP, so os produtos mais importantes em termos comerciais.
Em segundo lugar, possvel condensar o fumo por forma a obter condensados do fumo completo. Estes
so obtidos sob a forma de produtos dos cidos pirolgneos, por destilao anidra de certas madeiras
densas, a 200-900C, sob vcuo completo ou parcial, ou por destilao sob vapor a 100-400C, com ou
sem pirlise. Estes condensados do fumo completo podero ser processados adicionalmente, por
exemplo por diluio na gua para separao da fase alcatro combinada com ajustamento do teor
fenlico ou por destilao fraccionada da fraco do alcatro e recombinao do cido purificado, das
fraces fenlica e neutra em vrias propores definidas. Estes tipos de produtos revestem-se,
contudo, de um interesse comercial reduzido.
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Em terceiro lugar, o fumo condensado em slidos, por exemplo, acucar, sal, maltodextrinas, carne ou
"bacon", que podem ser subsequentemente extrados com alguns solventes.
Os condensados do fumo so misturas complexas de composio varivel e contm diferentes
quantidades de um espectro de compostos, nomeadamente cidos carboxlicos, cetonas, derivados da
frfura, lactonas e fenis (7,8). Os constituintes de ocorrncia provvel mais prejudiciais so os HAP; a
quantidade total de HAP potencialmente nefastos, excluindo o benzo(a)pireno, 5 a 10 vezes superior
quantidade de benzo(a)pireno obtida (6).
Os condensados do fumo preparados a partir do fumo retido em lquidos, geralmente a gua, so
separados da fase de alcatro. Geralmente, a fase aquosa em seguida purificada por filtrao em
carvo e concentrada por destilao. Estes produtos no tm um uso generalizado, pelo que se revestem
de uma importncia comercial reduzida.
O fumo condensado nos slidos, por exemplo, no acar, sal, carne ou "bacon", pode ser utilizado sob
esta forma ou submetido a extraco com lcool, metanol ou com outros solventes, seguida de
purificao por filtragem em carvo e de concentrao por destilao. Estes produtos no tm um uso
generalizado, pelo que se revestem de uma importncia comercial reduzida.
Os preparados finais de aroma do fumo so geralmente formulados por adsoro do condensado num
portador, tanto por pulverizao a seco, como por incorporao em solventes e emulses. Estes
preparados so aplicados superfcie dos produtos alimentares ou misturados com estes, no sendo
geralmente incorporados em preparados para salga. Os preparados aromatizantes do fumo podem ser
incorporados nos alimentos, regra geral, a concentraes entre 0,1% e 1%.
4. Consideraes toxicolgicas
Tal como foi anteriormente referido, difcil padronizar e controlar o processo de fumagem. Uma vez
que a Directiva no cobre este assunto, no foram desenvolvidas quaisquer consideraes toxicolgicas
especficas para a avaliao da segurana do processo de fumagem.
4.1 Contami nantes
essencial que as madeiras tratadas com tinta ou impregnadas com alcatro ou com conservantes da
madeira, incluindo pesticidas tais como arsnicos e clorofenis no sejam utilizadas como matria
prima para a produo do fumo. permitido adicionar, contudo, ervas, especiarias e ramos de
determinadas plantas para obteno de propriedades aromatizantes especiais.
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Alm disso, uma vez que os aromatizantes do fumo se destinam a ser aplicados directamente nos
alimentos, devero satisfazer os seguintes limites mximos para os contaminantes :
Benzo(a)pireno 10 g/ kg de condensado (isento de solvente/gua) produzindo menos de 0,03
g/ kg de produto alimentar final consumido
Benzo(a)antraceno 20 Hg/kg de condensado (isento de solvente/gua) produzindo menos de 0,06
g/ kg de produto alimentar final consumido
As 3 mg/kg, Hg 1 mg/kg, Cd 1 mg/kg, Pb 10 mg/kg de condensado do fumo.
4.2 Fundamentos da avaliao toxicolgica
Os aromatizantes do fumo devem ser avaliados de modo idntico ao de outros aditivos alimentares.
Os preparados aromatizantes do fumo, baseados em misturas de substncias quimicamente definidas,
no requerem qualquer avaliao adicional da segurana, desde que os componentes individuais
tenham sido previamente avaliados e aceites como substncias aromatizantes para produt os
alimentares. Contudo, qualquer componente que no tenha sido avaliado anteriormente, requer a
determinao normal da sua segurana para a sade, como substncia aromatizante, antes da sua
utilizao (consultar Directivas para a avaliao da segurana das substncias aromatizantes (2)).
Em virtude das amplas diferenas fsicas e qumicas nos preparados utilizados para proporcionar um
sabor a fumo aos alimentos, no possvel desenvolver uma abordagem comum para a avaliao da
segurana dos aromatizantes do fumo. A enorme variedade existente de preparados aromatizantes do
fumo individualizados obtida a partir de um nmero limitado de condensados do fumo
comercialmente disponveis, principalmente do tipo aquoso.
O CCPA considerou, tal como a JECFA (5), no ser possvel atribuir uma DDA a um grupo to complexo
de substncias, pelo que se torna necessrio escolher outras formas de estabelecer a sua segurana. S
alguns condensados aquosos bem especificados e um extracto de alcatro de um condensado do fumo,
preparados a partir de um tipo de madeira especfico, foram testados em estudos toxicolgicos padro
tendo sido avaliados pela JECFA como temporariamente aceitveis para uso como aromatizantes em
produtos alimentares tradicionalmente tratados por fumagem.
Na opinio do CCPA, a avaliao toxicolgica dever, deste modo, concentrar-se sobre a segurana
dos condensados do fumo em cada caso especfico.
Os limites mximos para o 3,4-benzopireno, iguais a 0,03 Hg/kg de produto alimentar e 0,03 ug/ kg
de bebida, so estabelecidos pela Directiva do Conselho 88/388/CEE (1).
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25 DE JUNHO DE 1993 AROMATIZANTES DO FUMO
As informaes tecnolgicas que se seguem constituem um pr-requisito para a avaliao da segurana
dos aromatizantes do fumo:
informaes sobre o mtodo de produo do condensado do fumo, processamento adicional e passos
finais na produo do preparado aromatizante;
composio qualitativa e quantitativa aproximada do condensado do fumo, bem como a
concentrao utilizada e dados semelhantes sobre o preparado final do aromatizante do fumo;
informaes sobre os nveis de utilizao e sobre os tipos de alimentos para os quais o
aromatizante do fumo se destina;
O conjunto principal dos dados toxicolgicos relativos ao condensado do fumo ou ao preparado
aromatizante do fumo especfico obtido, deve incluir:
um teste de mutagenicidade in vitro num sistema procaritico;
um teste de mutao gentica in vitro em clulas de mamfero em cultura;
um teste de leses cromossmicas in vitro em clulas de mamfero em cultura;
um estudo de 90 dias com administrao na alimentao de animais laboratoriais.
Podero ser necessrios dados toxicolgicos adicionais para avaliao da segurana dos
aromatizardes do fumo. Nestes casos poder utilizar-se uma abordagem escalonada, dependente, entre
outros factores, da absoro potencial e dos resultados obtidos no conjunto principal dos dados
toxicolgicos.
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25 DE JUNHO DE 1993 AROMATIZANTES DO FUMO
Bibliografia
1. Directiva de 22 de Junho de 1988 sobre a aproximao das leis dos Estados Membros, relativas ao
uso de aromatizantes em produtos alimentares e em matrias primas para a sua produo
(88/388/CEE, OJ L184 de 15/07/1988).
2. Directivas para a avaliao dos aromatizantes para uso nos produtos alimentares. Substncias
aromatizantes quimicamente definidas. Parecer do Comit Cientfico da Alimentao Humana
(9-10 de Dezembro de 1991) - 29" srie.
3. Council of Europe guidelines concerning the transmission of flavour of smoke to food. (Council of
Europe Press -1992).
4. Health aspect of using smoke flavours as food ingredients (Council of Europe Press -1992).
5. Evaluation of certain food additives and contaminants. Thirtyfirst meeting of the Joint
FAO/ WHO Expert Committee on Food Additives. WHO Food Additives series, no. 221988
(Distributed by Cambridge University Press).
6. Phenole im Rucherrauch - Nachweis und Identifizierung by Reiner Wittkowski. Deutsche
Forschungsgemeinschaft - Wissenschaftliche Arbeitspapiere, 1985.
7. The flavour chemistry of wood smoke by Joseph A. Maga, Department of Food Science and Human
Nutrition, Colorado State University. Food Reviews International, 3 (1&2), 139-183 (1987).
8. Analysis of Liquid Smoke and Smoked Meat Volatiles by Headspace Gas Chromatography by R.
Wittkowski, W. Baltes, W. G. Jennings - Food Chemistry 37 (1990) 135-144.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
RELATRIO SOBRE OS REQUISITOS ESSENCIAIS
PARA AS FORMULAES PARA OS LACTANTES E FORMULAES DE CONTINUIDADE
OPINIO EXPRESSA A 17 DE SETEMBRO DE 1993
1. Normas de referncia
Rever algumas caractersticas essenciais das formulaes para os lactentes e formulaes de
continuidade.
2. Introduo
Em 1983, o Comit ratificou um Parecer sobre as caractersticas mnimas necessrias s formulaes
para os lactentes e aos leites de continuidade produzidos a partir das protenas do leite da vaca (1).
Num segundo Parecer, publicado em 1988, especificaram-se as caractersticas requeridas para as
formulaes baseadas na soja (2), mas o primeiro relatrio tem sido, at data, submetido apenas a
alteraes ad hoc relativas aos nveis mnimos de vitamina D nestes produtos e lista de nutrientes
que podem ser adicionados a estes (3,4).
Os Anexos a estes trs primeiros pareceres anteriormente referidos constituem o cerne da Directiva da
Comisso 91/321/CEE, de 14 de Maio de 1991, sobre formulaes para lactentes e formulaes de
continuidade.
O Comit deve certificar-se de que a legislao Comunitria vigente actualizada sempre que
necessrio. O Comit recebeu recentemente um pedido para reviso e, em conformidade, foi solicitada
ao Comit a reviso das decises da Directiva 91/321/CEE, passveis de afectar a sade pblica, uma
vez que o primeiro relatrio foi adoptado h quase 10 anos. A reviso ser aplicvel apenas aos
campos relativamente aos quais se dispe de novas informaes passveis de alterar o parecer anterior
do Comit.
3. Requisitos essenciais das formulaes para lactentes
3.1 Protenas
As necessidades de protenas para o crescimento tem sido relacionada directamente com a composio,
em azoto, do leite humano (1,2). O teor de protenas calculado em cerca de 1,2 g de protenas/100 ml
(determinado como 6,38). Contudo, o teor real de protenas deve ser aproximadamente igual a 0,9
g/100 ml, embora as protenas disponveis sejam apenas de 0,7 g/100 ml, quando se tem em conta a
di sponi bi l i dade limitada de IgA, lactoferrina e lisosimas, que so estveis a pH baixo e
relativamente resistentes digesto (5).
Desde 1983, tem sido sugerida, numa srie de estudos, a possibilidade de existirem efeitos adversos
associados ingesto de nveis elevados de protenas e de que, quando se reduz a absoro de protenas
da formulao para um nvel mais semelhante ao do leite humano, os lactentes apresentam uma
ptima taxa de crescimento. Adicionalmente, os lactentes com 4 a 6 meses de idade alimentados com
um nvel de protenas inferior ao da frmula convencional (entre 2 g/100 ml e 1,3-1,8 g/100 ml)
apresentam taxas de crescimento satisfatrias (6). Por outro lado, numa srie completa de estudos
publicados aps a preparao da Directiva do Comit, no foi possvel confirmar, nos recm-nascidos
de termo, que os produtos com alterao do rcio casena/protenas do soro do leite fossem superiores
aos produtos obtidos a partir do leite de vaca no modificado (7-15).
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17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTINUIDADE
Torna-se assim questionvel a manuteno de diferentes critrios para a composio essencial destes
dois tipos de formulaes.
A qualidade de uma protena determinada pelo padro de aminocidos dessa protena em relao
ao padro de aminocidos requeridos pelas necessidades metablicas orgnicas. Classicamente, a
qualidade das protenas tem sido caracterizada em termos de requisitos de aminocidos essenciais,
embora existam provas crescentes de que, especialmente na infncia, deve ser dada igual ateno
satisfao das necessidades metablicas em aminocidos eventualmente essenciais (16-18). Alm
disso, tanto o leite humano como o leite bovino contm casena e protenas do soro lcteo, embora em
diferentes propores, e o constituinte proteico de cada classe principal de protenas diferente. As
protenas do soro lcteo do leite bovino diferem das do leite humano em especial em termos de funo e
composio. Alm disso, o leite humano contm pequenas quantidades de outras protenas (enzimas,
moduladores do crescimento, hormonas), que podem revestir-se de significado funcional considervel
(19-22).
No passado, utilizaram-se como referncias o crescimento e equilbrio do azoto dos lactentes
alimentados com leite materno, bem como a composio do leite humano. Mais recentemente, procedeu-
se avaliao da resposta metablica, utilizando ndices ou marcadores bioqumicos quantitativos e
qualitativos: mediram-se, por exemplo, as concentraes plasmticas de aminocidos e ureia em jejum,
ou a resposta ps-prandial das concentraes de protenas plasmticas com tempos de "turnover" e
funes variveis, nomeadament e albumina, pr-albumina, protena de ligao ao retinol,
fibronectina, etc.
Os nveis da uremia durante os primeiros seis meses de vida dos lactentes alimentados com leite
materno (2-3 mmol/1) so inferiores aos observados em lactentes alimentados com a formulao
convencional (4-6 mmol/1) e a excreo de ureia nos lactentes alimentados com leite humano (81
mg/ kg/ di a) inferior observada com a formulao convencional (140 mg/ kg/ di a). Quando o contedo
em protenas da formulao sofre uma reduo (1,8 g/100 kcal), a concentrao de ureia no plasma
reduz-se para nveis semelhantes aos observados nos lactentes alimentados com leite materno. A
compreenso da cintica do metabolismo da ureia no lactente deve incluir uma avaliao da taxa
qual o azoto da ureia retido pela microflora do clon para interaco metablica adicional (18). A
possibilidade de que o azoto ureico retido possa contribuir significativamente para a disponibilidade
de aminocidos no essenciais (e mesmo, essenciais), no dever ser, neste momento, excluda (16,18).
A concentrao plasmtica de um aminocido individual resulta de uma srie de factores que no
apresentam, necessariamente, uma variao conjunta e que incluem a absoro de protenas, a sua
qualidade, o padro de sntese e degradao das protenas endgenas e a necessidade de vias
metablicas especficas diferentes da sntese proteica. Na formulao convencional, em jejum, os perfis
dos aminocidos variam grandemente dos observados no leite humano, variando igualmente com as
propores relativas de soro do leite/casena (casena : concentraes mais elevadas de tirosina,
fenilalanina, metionina; soro do leite : concentraes mais elevadas de treonina) (5, 7, 8, 14, 23). Em
qualquer dos casos, tanto a formulao casena-dominante como o soro lcteo-dominante possuem um
padro de aminocidos diferente do leite humano, independentemente do nvel de absoro de
protena (9, 10, 12, 24).
As diferenas ps-prandiais observadas nos aminocidos plasmticos so ainda mais acentuadas que
no jejum, embora a diferena seja menos evidente nos recm-nascidos de termo que nos prematuros (23).
Enquanto que no adulto, o fgado exerce um efeito modul ador significativo sobre o padro de
aminocidos medi dos na circulao perifrica em funo da absoro diettica, este efeito de
modulao no ocorre, em grande escala, no lactente.
10 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTI NUI DADE
Esta situao leva a que as grandes variaes do padro de aminocidos das protenas ingeridas sejam
transferidas quase directamente para a circulao perifrica. Observam-se assim grandes variaes
das concentraes, em circulao, da maioria dos aminocidos essenciais, sugerindo que a carga
metablica excessiva para o doente e que a absoro diettica de aminocidos essenciais ultrapassa
a capacidade conjunta das necessidades dos lactentes relativamente sntese proteica tecidular e a
capacidade catablica (25). Por ltimo, quando comparadas com as concentraes de protenas
plasmticas observadas no leite humano, as formulaes com baixo teor proteico possuem concentraes
semelhantes de albumina e pr-albumina, no sendo diferentes das formulaes com concentraes
proteicas mais elevadas.
Nestas condies, o Comit considerou que no h provas que justifiquem a existncia de valores
mnimos diferentes para os teores proteicos das formulaes que variam na proporo entre as
protenas do soro lcteo bovino e da casena. Nas formulaes produzidas a partir do leite bovino,
considera-se seguro um nvel mnimo de protenas igual a 1,8 g/100 kcal. Para um valor energtico
idntico, as formulaes devem conter uma quantidade disponvel de cada aminocido essencial e
semi-essencial, pelo menos igual ao existente na protena de referncia (leite humano, conforme
definio no Anexo V da Directiva) sendo permitida a adio conjunta de metionina e cistina.
3.2 Lpidos
O Comit tinha proposto anteriormente que os nveis mnimos e mximos de lpidos nas formulaes
para lactentes deveriam situar-se entre 3,3 e 6,5 g/ 100 kcal. Estes limites so actualmente
considerados demasiado amplos: os lpidos constituem a fonte principal de energia do leite materno
(entre 40% e 55%) e se os nveis de lpidos das formulaes sofrerem uma reduo considervel (3,3
g/100 kcal perfaz apenas 30% do teor energtico) esta situao dever ser compensada por um aumento
do teor de prot e nas e/ ou hidratos de carbono, o que conduzir necessariamente a uma
hiperosmolaridade no produt o alimentar e a um aumento da carga osmtica renal, que poder
ultrapassar a capacidade metablica do lactente. Alm disso, durante os primeiros seis meses de vida,
os lpidos proporcionam cerca de 90% da energia utilizada para o crescimento, sabendo-se que a sntese
de lpidos a partir dos hidratos de carbono um processo desvantajoso em termos energticos. A sntese
de lpidos a partir de hidratos de carbono consome cerca de 25% da energia que proporciona, enquanto
que o processo de deposio de lpidos a partir de gorduras presentes nos alimentos consome apenas
cerca de 1% da energia fornecida. A sntese endgena de lpidos produz apenas cidos gordos no
essenciais, que podem afectar desfavoravelmente o rcio entre cidos saturados e insaturados nos
tecidos (26). Consequentemente, o Comit concluiu que o teor de lpidos das formulaes para lactentes
dever perfazer pelo menos 40% do teor energtico, o que equivale a 1,05 g/100 kJ (4,4 g/100 kcal).
Deve ser mantida a proibio do uso de leo de semente de ssamo e de leo de semente de algodo nas
formulaes para lactentes e nas formulaes de continuidade. O leo de semente de ssamo pode
induzir alergias a alguns agentes no-saponificveis (27) e o leo de semente de algodo pode conter
cidos gordos ciclopentnicos, que podem exercer efeitos negativos sobre a desnaturao dos cidos
gordos (28).
As experincias animais no perodo peri-natal revelam a presena de uma srie de efeitos indesej%eis
dos cidos gordos na forma trans, incluindo alteraes da converso dos cidos gordos essenciais em
metabolitos polinsaturados de cadeia longa e reduo do crescimento pr- e ps-natal.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTINUIDADE
Nos recm-nascidos humanos prematuros, observaram-se correlaes inversas entre a exposio aos
cidos gordos trans e o peso corporal, bem como converso dos cidos gordos essenciais (29), o que indica
uma ocorrncia potencial, no homem, de efeitos secundrios graves e semelhantes aos que se registam
nos animais. O Comit considerou, consequentemente, que o teor das formulaes em cidos gordos frans
deve ser o mais reduzido possvel.
O Comit decidiu assim, instaurar um nvel mximo para os cidos gordos trans e com isomeria de
posio, como substituio da proibio geral dos lpidos contendo mais de 8% de cidos gordos trans,
actualmente constante da directiva. Para alm das gorduras parcialmente hidrogenadas, a principal
fonte de cidos gordos (rans nas formulaes para lactentes a gordura do leite de vaca, que pode
apresentar cerca de 2% a 5% de cidos gordos frans. A gordura do leite de vaca s utilizada nas
misturas gordas das formulaes europeias e, uma vez que no ultrapassa 80% da gordura total,
possvel estabelecer um limite mximo para o teor de cidos gordos trans igual a 4% da gordura total,
sem limitar o uso actual de gordura do leite de vaca nas formulaes. Este ltimo valor igualmente
semelhante ao teor mdio de cidos gordos frans no leite humano na Europa (30).
Embora a composio do leite humano seja varivel, o contedo tpico do leite humano das mulheres
que consomem dietas caracteristicamente europeias igual a 4,4-7,1% e 6,3-8,2% do total de cidos
gordos, respectivamente para o cido lurico e para o cido mirstico. Observam-se valores
claramente mais elevados no leite de mulheres que consomem dietas com teor baixo de gorduras e muito
alto de hidratos de carbono, sendo os valores mais elevados obtidos nas populaes pobres das regies
rurais africanas (31, 32). provvel que os nveis de cidos lurico e mirstico no leite humano fossem
ainda mais elevados se as mulheres lactantes consumissem dietas mais radicais. Os nveis elevados
de cidos lurico e mirstico nas formulaes para lactentes so considerados indesejveis devido aos
seus efeitos hipercolesterolmicos acentuados, superiores aos de todos os outros cidos gordos saturados
(33, 34). Estes efeitos secundrios so considerados indesejveis mesmo na primeira infncia. Os dados
disponveis no excluem os efeitos nefastos dos cidos lurico e mirstico sobre o metabolismo das
lipoprotenas nos lactentes alimentados com formulaes. Uma vez que foram documentados, noutros
estudos, efeitos hipercolesterolmicos acentuados destes cidos, considera-se apropriada uma
abordagem cautelosa, evitando-se a utilizao de formulaes com um teor elevado de cidos lurico e
mirstico. O Comit considerou assim no existirem razes suficientes para alterar a sua posio sobre
este assunto. Os nveis mximos dos teores de cido lurico e mirstico nas formulaes para os
lactentes deve ser mantido, para cada, a 15% do teor total de lpidos.
Os efeitos secundrios da absoro diettica do cido ercico tm sido documentados em numerosos
estudos. A absoro diettica elevada do cido ercico induz lipidose do miocrdio e necrose, para
alm de anomalias estruturais e funcionais das mitocndrias no rato e macaco. O cido ercico
diettico acumula-se, em grandes quantidades, no corao do rato, o que constitui um sinal do seu lento
catabolismo. Nas mitocndrias do miocrdio, o cido ercico reduz a -oxidao, o consumo de oxignio
e a produo de ATP. A absoro diettica elevada de cido ercico est associada a redues da taxa
de ganhos ponderais nos pintos e ratos, bem como a uma reduo da utilizao de energia no homem e a
um aumento da mortalidade nos ratos jovens expostos ao frio (35-37). Os recm-nascidos, com o seu
metabolismo imaturo, so frequentemente mais susceptveis aos efeitos secundrios negativos das
substncias que os organismos totalmente formados, sendo provavelmente este o caso da toxicidade do
cido ercico.
12 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTINUIDADE
Os estudos realizados em modelos animais sugerem que a gravidade da lipidose do miocrdio
induzida pelo cido ercico mais grave nos leites recm-nascidos que nos leites desmamados,
embora a nveis inferiores a 0,8% dos cidos gordos totais, no se tenham detectado quaisquer efeitos
adversos nos leites recm-nascidos (38). Um aspecto relevante para a alimentao do lactente, reside
na observao de que o cido ercico, tal como o cido nervnico, inibe o alongamento dos cidos gordos
nos fibroblastos humanos (39). O teor elevado de cido ercico nas formulaes para lactentes poderia
assim afectar a sua capacidade de sintetizar quantidades adequadas dos cidos gordos polinsaturados
de cadeia longa, fisiologicamente relevantes, a partir dos cidos gordos dietticos essenciais. Na
ausncia de dados vlidos sobre os nveis seguros de absoro do cido ercico nos lactentes, o Comit
considerou prudente que, no presente, os teores nas formulaes para lactentes no ultrapassem 1% dos
cidos gordos totais. O Comit pretende examinar esta situao mais aprofundadamente.
O leite humano na Europa contm nveis mdios de cido linoleico entre 6,9% e 16,4% dos cidos
gordos, com uma mediana de 11% (32). Foram referidos valores muito inferiores e muito superiores em
mulheres alimentadas com vrias dietas. No existem provas seguras que documentem os efeitos
nefastos sobre os lactentes alimentados com formulaes contendo um nvel de at 1900 mg de cido
linoleico/100 kcal, embora no tenham sido igualmente publicados quaisquer estudos que investiguem,
de forma adequada, a possibilidade de efeitos secundrios potenciais, tais como aumento da formao
de perxidos e imunossupresso em lactentes alimentados com formulaes contendo teores muito
elevados de cido linoleico. Foram referidos, no recm-nascido, efeitos secundrios por absoro
parentrica de quantidades elevadas de cido linoleico, que incluram depresso dos metabolitos dos
cidos linoleico e alfa-linolnico biologicamente activos no plasma e tecidos, alterao do
metabolismo da prostaglandina e aumento da peroxidao (40,41). No h, alm disso, sinal de
qualquer benefcio por absoro entrica de cido linoleico em doses superiores a 1200 mg/ 100 kcal.
Consequentemente, o Comit decidiu que o presente limite superior para o teor de cido linoleico nas
formulaes para lactentes (285 mg/100 kJ) dever ser mantido.
opinio geral da comunidade cientfica que os cidos gordos n-6 e n-3 so nutrientes essenciais que
devem ser fornecidos ao lactente para um crescimento e desenvolvimento adequados. Os lactentes
requerem grandes quantidades de cidos gordos n-6 e n-3 polinsaturados, para deposio nos tecidos em
crescimento, em particular no crebro e retina, havendo indcios de que uma carncia de cidos gordos
n-3 durante a fase inicial do crescimento afecta negativamente a funo dos tecidos nervosos (42). Em
conformidade com o relatrio sobre as Absores de Referncia da Populao Comunitria (43), o teor
mnimo de cido alfa-linolnico nas formulaes para os lactentes deve ser estabelecido a 0,5% da
energia (50 mg/100 kcal). Adicionalmente, dever ser estabelecido um limite de 5-15 para o rcio
cido linoleico/alfa-linolnico, uma vez que ambos os cidos gordos entram em competio para a
mesma via metablica e a ocorrncia de rcios extremos pode interferir com a sntese dos seus
metabolitos de cadeia longa (26).
Os cidos gordos essenciais dos lpidos estruturais dos tecidos nervosos e outros, so, principalmente,
cidos gordos polinsaturados de cadeia longa (LCP - "Long chain polyunsaturated"), com 20 e 22
tomos de carbono, tais como os cidos araquidnico (20:4 n-6) e docosahexenico (22:6 n-3). Os
lactentes com pesos reduzidos nascena no conseguem, aparentemente, sintetizar quantidades
suficientes de LCP a partir dos precursores linoleicos (18:2 n-6) e alfa-linolnicos (18:3 n-3) dietticos,
requerendo, consequentemente, um reforo diettico de LCP para que o desenvolvimento funcional seja
ideal (26).
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17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTINUIDADE
Desconhece-se ainda se os recm-nascidos de termo saudveis podero beneficiar igualmente do
reforo diettico de LCP pr-formado. O Comit no obsta, contudo, possibilidade da sua adio s
formulaes para lactentes, desde que o teor resultante em LCP n-3 e n-6 seja semelhante ao existente
no leite materno na Europa (32). Consequentemente, quando o LCP pr-formado adicionado, o teer de
LCP n-6 no dever exceder 2% e o de LCP n-3 no deve exceder 1% do teor de cidos gordos totais;
alm disso, o teor de cido eicosapentenico (20:5 n-3) no dever exceder o teor de cido
docosahexenico.
3.3 Hi dr at os de car bono
Est j devidamente estabelecido que os lactentes que sofrem de leses da mucosa instestinal absorvem
a sucrose melhor que a lactose (44, 45) apesar da actividade da sacarase se encontrar reduzida nestas
circunstncias (46). Embora a actividade da lactase seja o factor limitativo para a lactose, a sacarase
no constitui factor limitativo para a absoro de sucrose; esta absoro limitada pela transferncia
de glucose e frutose resultante da sua hidrlise (47). O Comit considerou, contudo, que a Directiva
91/321/CEE se refere apenas a formulaes destinadas a crianas saudveis na Comunidade e que,
consequentemente, no tiveram de considerar as situaes patolgicas. Dada a inexistncia de dados
adicionais que justifiquem a alterao da Directiva, o Comit decidiu manter as decises relativas ao
teor de hidratos de carbono nas formulaes para lactentes.
3.4 Ferro
Os limites mximos aceitveis para o ferro nas formulaes para lactentes na Europa (0,36 mg/100 kJ,
ou seja, 1,5 mg/ 100 kcal) so inferiores aos utilizados na Amrica do Norte. A forte argumentao nos
Estados Unidos, no sentido de enriquecer as formulaes infantis com concentraes de ferro mais
elevadas procurar evitar a carncia de ferro nas populaes de alto risco. Foi referido que, devido
participao dos Estados Unidos no "Special Supplemental Food Program for Women, Infants and
Children (WIC)" (Programa Especial de Suplementos Alimentares para Mulheres, Lactentes e
Crianas), a incidncia da carncia de ferro nestas populaes de alto risco registou uma reduo
considervel (48). Os lactentes alimentados com formulaes em que a concentrao de ferro
aproximadamente igual a 12 mg/ 100 kcal s raramente apresentam anemia por carncia de ferro
durante o primeiro ano de vida (49).
Embora a anemia por carncia de ferro durante o primeiro ano de vida ocorra nos pases europeus, a sua
prevalncia no constitui um problema grave em termos de sade pblica. Na maior parte dos pases
europeus, as crianas comeam a ingerir alimentos adicionais de boa qualidade (carne, cereais,
vegetais e fruta), aos 3-5 meses de idade (50) e o uso de leites de continuidade com um teor mais
elevado em ferro (at 2 mg/ 100 kcal) no escalo etrio de 6-12 meses tem sido adopt ado
generalizadamente. No existem estudos prolongados de comparao dos efeitos, sobre o perfil do
ferro, das formulaes para lactentes enriquecidas com diferentes teores de ferro. Os lactentes
alimentados com formulaes de leite com 6 mg de ferro por litro (0,9 mg/100 kcal) at aos 9 meses, com
adio de frutos e vegetais a partir dos 3 meses e cereais (com 40 mg de ferro/kg) e carne a partir dos 5
ou 6 meses, apresentaram parmetros hematolgicos satisfatrios aos 9 meses (51).
Existem duas desvantagens potenciais para o excesso de ferro nas formulaes para os lactentes: a
possvel interaco do ferro com a absoro de elementos residuais e o possvel aumento da
predisposio s infeces. Efectivamente, h provas de interaco entre o ferro e o mangans (52) e
entre o ferro e o cobre (53).
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17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
FORMULAES DE CONTINUIDADE
Nos vrios estudos realizados sobre a interaco entre o ferro e o zinco obtiveram-se resultados
contraditrios (54-56). Por outro lado, tem sido referido que os lactentes alimentados com formulaes
enriquecidas em ferro (5 mg/ l ) apresentam contagens elevadas de E. coli e contagens baixas de
bifidobactrias na flora fecal. Os lactentes alimentados com formulaes no enriquecidas
apresentavam uma flora intestinal mais semelhante flora do leite materno (57). No estudo do efeito
dos suplementos de ferro sobre as formulaes para lactentes base de soro lcteo e casena observou-se
que tanto o tipo de protena como o teor em ferro exerciam um efeito sobre a flora fecal (58). No foram
demonstradas provas convincentes de efeitos do enriquecimento com ferro sobre a prevalncia de
infeces. Seria necessrio uma populao de estudo muito grande para demonstrar um efeito deste
tipo num estudo comparativo.
Tendo em vista a possvel interaco entre a absoro de ferro e a absoro de alguns elementos
residuais, os possveis efeitos do excesso de ferro sobre a prevalncia de infeces e uma vez que no
existem provas de que um teor de ferro dentro dos limites actualmente autorizados provoque um
agravamento do perfil de ferro, o Comit decidiu no existirem razes para alterar os limites
actualmente aceites para o ferro nas formulaes para lactentes comercializadas na Europa.
3.5 Elementos residuais
O selnio (Se) um elemento do ponto activo da glutationa peroxidase (GSH.Px), uma enzima que
cataliza a reduo dos hidroxiperxidos resultantes do metabolismo oxidativo dos fosfolpidos
polinsaturados das membranas e dos xenobiticos (59). A enzima deiodinase I, responsvel pela
produo de triiodotironina , tambm, uma selenoenzima e as deiodinases I e II apresentam resposta
absoro de selnio (60). No homem, para alm da cardiomiopatia de Keshan e da condrodistrofia
de Kaschin-Beck descrita em reas endemicamente carentes de Se, na China, s foram observados
sinais claros de carncia de selnio na subnutrio proteico-energtica, nutrio parentrica total
prolongada (TPN) e em certas deficincias genticas do metabolismo (61).
A absoro de selnio dos lactentes amamentados pela me e dos lactentes alimentados com
formulaes produzidas a partir do leite de vaca ou de protenas de soja, com um teor de selnio
superior a 10-15 g/ l , certamente suficiente para satisfazer as suas necessidades (61). Em vrios
pases europeus, o teor de selnio das formulaes para lactentes , apesar de tudo, inferior a 10 g/ l ,
ou mesmo to baixo como 3-5 g/ l , o que implica que a "absoro de referncia mnima", igual a 4 - 6
g/ di a (62), no satisfeita (63). Consequentemente, nos casos em que o teor de selnio , naturalmente,
inferior a 0,25 g/100 kJ (1 g/100 kcal), o selnio poder ser adicionado s formulaes para
lactentes. As leveduras enriquecidas com selenato de sdio e selenite, selenometionina ou selnio
podero, desde que a concentrao de selenometionina destas leveduras esteja devi dament e
padronizada, ser utilizadas para este efeito. Por forma a manter uma margem de segurana suficiente,
o teor mximo de selnio, quando adicionado, no deve exceder 0,7 Mg/100 kJ (3 g/100 kcal).
O crmio (Cr), na sua forma catinica trivalente, um elemento biologicamente activo essencial para
os animais e para o homem (64). Pensava-se, at h pouco tempo, que o leite humano continha entre 40
e 80 g de crmio por litro, sendo geralmente aceite que o leite de vaca apresentava um teor de crmio
inferior ao do leite humano. Quando se eliminaram os problemas tcnicos relativos medio e
contaminao das amostras, verificou-se que a concentrao real de crmio no leite humano era, em
mdia, igual a 0,3-0,4 g/ l (65, 66).
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 15
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Consequentemente, calcula-se que a absoro mdia de crmio pelos lactentes amamentados no
ultrapasse 0,3 g/ di a (0,05 g/ kg). Uma vez que se obtiveram concentraes constantemente elevadas
de crmio nos tecidos humanos durante as primeiras semanas de vida, altamente improvvel que o
crmio contido no leite materno desempenhe qualquer papel significativo na nutrio dos lactentes.
Efectivamente, no se detectaram quaisquer sinais de carncia de crmio em crianas na primeira
infncia, xceptuando as perturbaes da tolerncia glucose, que respondem favoravelmente
administ: o de suplementos de crmio, nalguns casos de subnutrio proteico-energtica (67). Embora
no existam dados recentes sobre o teor de crmio das formulaes para lactentes, no h nada que
sugira que a suplementao destas formulaes com crmio seja necessria ou desejvel.
O molibdnio (Mo) um dos elementos integrantes de vrias enzimas, incluindo a sulfito-oxidase, que
cataliza as reaces de oxidao-reduo (68). Calculou-se que a absoro adequada e segura dever
ser de 0,5-1,5 g/ kg/ di a nos lactentes, crianas e adolescentes (62). O leite materno contm 1-2 g/ I
aps 1 ms de lactao (69), enquanto que o teor de molibdnio do leite de vaca igual a 30-70 g/ l
(70). No foi, at data, descrita qualquer anomalia clnica ou bioqumica no lactente ou na criana,
atribuvel a uma carncia de molibdnio. S as deficincias hereditrias na sulfito-oxidase permitem
confirmar o papel essencial do molibdnio no desenvolvimento do feto e da criana (68). O Comit no
encontra assim justificao para suplementar, com molibdnio, as formulaes para lactentes ou as
formulaes de continuidade.
3.6 Vi t ami nas
Os dados mais recentes relativos s necessidades vitamnicas das crianas na primeira infncia no
justificam qualquer alterao da Directiva 91/321 /CEE, relativamente aos critrios essenciais de
composio das formulaes para os lactentes. Deve ser, contudo, referido que houve um erro no
relatrio do Comit adoptado em 1983: os valores indicados para a nicotinamide (60 g/100 kJ ou 250
g/100 kcal) so os valores mnimos expressos em termos de nicotinamida e no de equivalentes de
niacina (NE). Estes valores devero ser, consequentemente, substitudos por 0,2 mg-NE/100 kJ e 0,8 mg-
NE/100 kcal.
4. Requi si t os essenci ai s para as formulaes de cont i nui dade
4.1 Lpidos
As disposies relativas ao teor mnimo e mximo de lpidos nas formulaes de continuidade
mantm-se inalteradas: o valor mnimo de 3,3 g/100 kcal considerado aceitvel no contexto de uma
dieta j variada, apesar da ESPGAN ter expressado recentemente uma preferncia por 4 g/100 kcal em
vez do valor, previamente aceite, de 3 g/100 kcal (71).
A proibio do uso de leo de semente de ssamo e de leo de semente de algodo mantm-se (cf 13).
Sugere-se que seja utilizado, para o teor de cidos gordos trans, o mesmo limite superior proposto para
as formulaes para lactentes (cf 14). Os teores mximos de cido lurico e cido mirstico nas
formulaes de continuidade deve manter-se a 15%, para cada, do teor total de lpidos (cf 15). Alm
disso, o teor de cido ercico nas formulaes de continuidade, no dever exceder 1% dos cidos gordos
totais (cf 16). No h qualquer alterao relativamente s especificaes dos cidos gordos
polinsaturados.
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4.2 Outros critrios de composio
As disposies relativas ao valor energtico, teores de protenas, hidratos de carbono, minerais e
vitaminas, indicadas no Anexo 11 da Directiva 91/321/CEE mantm-se inalterados. O Comit mostrou
preocupao relativa possibilidade de a proviso existente para utilizao de 20% dos hidratos de
carbono totais sob a forma de sucrose nas formulaes de continuidade para os lactentes pode contribuir
para as cries dentais nos lactentes e crianas na primeira infncia. Consequentemente, o Comit
prope o estudo desta situao no futuro.
5. Utilizao das formulaes de continuidade
No seu relatrio de 27 de Abril de 1983, o Comit considerou que as formulaes de continuidade podem
ser utilizadas por lactentes com idade superior a 4 meses e por crianas na primeira idade. Esta
posio concordante com as recomendaes da ESPGAN e est includa no Codex Alimentarius
Standard relevante (CODEX STAN 156-1987). Contudo, a Directiva 91/321/CEE restringe o termo
"produtos alimentares de continuidade" para "produtos alimentares destinados a usos nutricionais
especficos para crianas com idade superior a quatro meses". Existe assim um vcuo legal para os
requisitos essenciais das formulaes destinadas especificamente s crianas na primeira idade
(idade compreendida entre 1 e 3 anos), que comeam a ser comercializadas em alguns Estados Membros.
O uso de formulaes de continuidade com composies inadequadas para este grupo etrio
preocupante. As formulaes destinadas s crianas com 1-3 anos de idade devem ter uma composio
idntica s das formulaes de continuidade destinadas s crianas na primeira idade.
Relatrios do Comit Cientifico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 17
17 DE SETEMBRO DE 1993 REQUISITOS ESSENCIAIS PARA AS FORMULAES PARA OS LACTENTES E
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22 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
PARECER SOBRE A CELULOSE MICROCRISTALINA
ADOPTADO A 17 DE SETEMBRO DE 1993
1. Normas de referncia
O Comit foi abordado no sentido de estudar a segurana da utilizao de celulose microcristalina,
relativamente ao seu tamanho de partcula, em especial no que se refere utilizao nos produtos
alimentares para desmame e para lactentes.
2. Antecedentes e discusso
A celulose microcristalina foi estudada anteriormente pelo Comit Cientfico para os Produtos
Alimentares, na sua Quinta (1978), Stima (1978) e Vigsima-quarta (EUR 13140, 1991) Sries de
Relatrios. Na Quinta Srie de Relatrios, esta substncia foi estudada no contexto do uso nos
utenslios utilizados na fabricao do po e pastelaria e, na Stima Srie, num contexto mais amplo,
para uso nos alimentos em geral. Em qualquer dos casos, o Comit aprovou a DDA "no especificada"
estabelecida pelo Comit Conjunto da FAO/OMS Para os Aditivos para Produtos Alimentares
(JECFA). No caso da Stima Srie de Relatrios, contudo, o Comit Cientfico para Produtos
Alimentares referiu o desejo de ser informado sobre qualquer outro trabalho adicional elucidativo
sobre o problema da adsoro e indicou a inteno de re-avaliar as provas cientficas em funo do
aparecimento de quaisquer outros novos dados. Na sua Vigsima Quarta Srie de Relatrios, o Comit
avaliou a celulose microcristalina no contexto do seu uso nos produtos alimentares para desmame,
tendo aprovado o seu uso, associado a outros agentes espessantes, a nveis de at l g/ 100 g em todos os
produtos alimentares para desmame e a nveis de at 2 g/100 g em produtos alimentares baseados em
cereais isentos de glten.
A celulose microcristalina preparada por despolimerizao parcial da alfa-celulose, com um cido
mineral. Este processo separa as partes hidroflicas e amorfas da molcula original de celulose a
partir da matria prima original, formando um material de natureza cristalina. O artigo
comercializado seguidamente modo por forma a obter-se um produto com um tamanho de partcula
apropriado para o uso previsto, neste caso, como aditivo alimentar. Existe a possibilidade de que
partculas intactas de celulose microcristalina possam ser adsorvidas atravessando a parede do tracto
gastrintestinal, com consequncias incertas para a sade dos consumidores; esta possibilidade poder
ser aumentada quando se utilizam partculas de pequenas dimenses. Foi pedido ao Comit que
estudasse esta questo, especialmente em relao aos produtos alimentares para desmame e para
lactentes, uma vez que se sabe que a permeabilidade do tracto gastrintestinal se apresenta aumentada
nos recm-nascidos e crianas na primeira infncia. Os estudos toxicolgicos disponveis sobre a
celulose microcristalina foram efectuados exclusivamente com materiais cujos tamanhos de partcula
variavam entre 5 - 150 . Os desenvolvimentos das tecnologias de moagem e a necessidade de
tamanhos menores de partcula, que melhoraram a suspenso e as propriedades organolpticas,
conduziram disponibilidade de materiais com tamanhos de partcula que atingem 0,15 \.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 23
17 DE SETEMBRO DE 1993 CELULOSE MICROCRISTALINA
3. Concluso
Tendo em conta a permeabilidade intestinal aumentada dos lactentes, crianas e adultos com funo
gastrintestinal comprometida, o Comit emitiu o seguinte parecer:
o uso de celulose microcristalina no deve, independentemente do tamanho das suas partculas, ser
permitido em alimentos isentos de glten especialmente preparados para lactentes e crianas na
primeira idade. Ao chegar a esta concluso, o Comit reconhece e confirma que tal representa
retirar a autorizao anteriormente dada a este uso, na sua Vigsima Quarta Srie de Relatrios
(EUR 13140, 1991);
na ausncia de dados sobre a toxicidade, relevantes para a celulose microcristalina com um
tamanho de partcula inferior a 5 , o Comit no pode emitir qualquer parecer sobre a segurana
no uso deste material;
por forma a assegurar que s permitida, no uso alimentar, a celulose microcristalina para a qual
existem dados adequados sobre a toxicidade, a especificao regulamentar deve incluir um limite
de 5 para o tamanho mnimo da partcula;
caso seja requerida aprovao para quaisquer usos alimentares da celulose microcristalina com um
tamanho de partcula inferior a 5 , devero ser fornecidas informaes sobre o tamanho mnimo
de partcula necessrio para o fim tecnolgico previsto; os alimentos nos quais tal material ser
utilizado; os nveis de uso; e os dados sobre toxicidade para confirmao da segurana no uso do
material com o tamanho de partcula em questo;
o Comit continua a estar preocupado com o uso da celulose microcristalina com tamanhos de
partcula superiores a 5 nos alimentos para lactentes em geral, bem como nos alimentos para
indivduos que, independentemente da idade, apresentam um aumento da permeabilidade
gastrintestinal, pelo que dever continuar a estudar este assunto e as suas implicaes a nvel
nutricional.
24 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
PARECER SOBRE MONOSORBITANOLEATO DE POLIOXIETILENO (20) (POLISORBATO 80)
EXPRESSO EM 17 DE SETEMBRO DE 1993
1. Antecedentes e discusso
O Comit foi abordado no sentido de rever a aceitabilidade do monosorbitanoleato de polioxietileno
(20) (polisorbato 80), uma vez que num recente estudo da NTP tinha sido levantada a possibilidade de
que a substncia era carcinognica em ratos F344/N. O polisorbato 80 foi previamente avaliado pela
JECFA e pelo CCPA. Em 1983 o CCPA atribuiu a esta substncia, em conjunto com os mono steres do
sorbitano polioxietileno dos cidos luricos e palmticos e o mono e tri-ster do cido esterico, uma
DDA conjunta de 10 mg/ kg de peso corporal.
Ao rever os dados do estudo NTP, o Comit notou que o efeito (um aumento da incidncia de leses
neoplsicas e no-neoplsicas da medula supra-renal, bao e sistema hematopoitico) ocorreu nos
ratos macho tratados com doses elevadas, mas no nos ratos fmea, nem nos machos e fmeas do
ratinho B6C3Fj. Nos testes de Ames realizados em quatro estirpes de S. typhimurium, com e sem
activao metablica, obtiveram-se resultados negativos. Tinha j sido demonstrado , em diversos
estudos de mutagenicidade realizados por outros autores (mutaes dos genes nas clulas bacterianas,
aberraes dos cromossomas (CA) e trocas de cromatdeos irmos (SCE) em culturas de clulas de
mamferos, CA e microncleos nas clulas de medula ssea do roedor in vivo) que o polisorbato 80 no
genotxico.
2. Concluso
Os dados disponveis so considerados adequados para confirmar a ausncia de genotoxicidade. Os
dados sobre a carcinogenicidade so equvocos, observando-se efeitos unicamente nos ratos macho
tratados com as doses elevadas. As leses do tipo das observadas na medula supra-renal, os
feocromocitomas, foram tambm anteriormente associados com aditivos alimentares mal
metabolisados, administrados a animais em doses elevadas, tendo sido considerados irrelevantes
para o homem. Neste caso, os efeitos foram observados com doses de tal modo elevadas que existe uma
margem de segurana adequada entre o nvel desprovido de efeito e a DDA actual. Na opinio do
Comit, no h justificao para requerer estudos adicionais, nem para alterar o actual perfil
aceitvel do polisorbato 80.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 25
P A R E C E R S O B R E O D I ME T I L T E R E F T A L A T O R E C U P E R A D O A P A R T I R D E G A R R A F A S D E PET
EXPRESSO A 17 DE SETEMBRO DE 1993
1. Normas de referencia
Emitir um parecer sobre o uso do dimetiltereftalato (DMT) obtido por despolimerizao de garrafas
de PET actualmente utilizadas para bebidas.
2. Discusso
Os dados apresentados referem-se essencialmente reciclagem do dimetiltereftalato purificado
(DMT) a partir de desperdcios de polietileno tereftalato (PET) obtidos exclusivamente a partir de
garrafas de PET utilizadas para bebidas.
A reciclagem do DMT, descrita pela Coca Cola International, envolve a despolimerizao trmica de
desperdcios de PET, fragmentados, por gliclise com etilenoglicol. O produto intermdio resultante, o
mono (hidroxietil) tereftalato convertido no bis (hidroxietil) tereftalato e, seguidamente em DMT,
por permuta de steres em presena do metanol e de um catalizador. Este DMT em seguida purificado
atravs de diversos passos que incluem lavagem, recristalizao e destilao sob vcuo e o material
puro misturado numa proporo de 1 + 3 com DMT produzido atravs de outro processo industrial a
partir do p-xileno. A mistura , em seguida, novamente polimerizada em presena do etilenoglicol, em
resina PET, a partir da qual se produzem novas garrafas de PET, por extruso e estiramento.
Os dados fornecidos incluem provas cromatogrficas da pureza do DMT e provas analticas da
inexistncia de qualquer efeito proveniente dos 4 contaminantes qumicos. No foram realizados
quaisquer testes demonstrativos da ausncia de contaminantes microbianos ou de metabolitos
microbianos.
Do ponto de vista toxicolgico, o monmero inicial do DMT encontra-se na lista 2 do CCPA
(Substncias em relao s quais este Comit determinou uma DDT ou uma DDT temporria), com uma
DDT de 1 mg/ kg de peso corporal, baseada em estudos orais de 90 dias, no ratinho e rato, bem como nos
estudos prologados, no ratinho e rato, que no indicam a existncia de qualquer potencial tumorignico.
3. Concluso
O Comit considera no ser necessrio qualquer requisito especial referente ao DMT reciclado a partir
de garrafas de PET j utilizadas para bebidas. O Comit lembra que os critrios para aprovao de
materiais plsticos esto j estabelecidos por Directivas da CE e, no caso especfico da reciclagem de
monmeros por despolimerizao dos artigos finais de plstico em uso, nas Directivas das Listas
Positivas para Plsticos da Comunidade (Guia Prtico NI, CS/PM/2024, pgina 20, pargrafo 6).
Com base nos dados apresentados o monmero satisfaz os critrios acima indicados. No h, assim,
qualquer razo que impea a utilizao deste DMT reciclado a partir de garrafas de PET actualmente
utilizadas para bebidas. Deve ser sublinhado que a responsabilidade final da aderncia dos
materiais de plstico s Directivas da CE, incluindo a ausncia de contaminantes, continua a ser do
fabricante.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 27
PARECERES SOBRE TRS QUIMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS
MODIFICADOS POR ENGENHARIA GENTICA
ADOPTADO A 25 DE JUNHO E A 10 DE DEZEMBRO DE 1993
1. Antecedentes
A quimosina (quimase, renase ou renia) o principal agente coagulante do leite contido no coalho, que
preparado comercialmente por extraco aquosa do quarto estmago de vitelos no desmamados,
submetido a secagem. O coalho possui uma longa histria de uso seguro no fabrico de queijo. O extracto
aquoso contm um precursor da quimosina, a proquimosina, que subsequentemente convertida na
quimosina, enzimaticamente activa. O coalho de vitelo contm diferentes formas de quimosina,
nomeadament e A e , nas concentraes de aproximadamente 22% e aproximadamente 55%,
respectivamente (obtidas a partir da proquimosina A e ), quimosina C2, que um produto de
degradao da quimosina A e quimosina C, que considerada uma terceira variedade gentica. O
coalho bovino contm, alm disso, pepsina (aproximadamente 15%).
Em termos bioqumicos, a quimosina uma protena constituda por uma cadeia polipeptdica nica de
323 aminocios com ligaes dissulfureto intramoleculares. A quimosina A e demonstraram diferir
entre si apenas por um aminocido na cadeia polipeptdica. A quimosina A apresenta um resduo de
cido asprtico na posio 286, enquanto que a quimosina apresenta um resduo de glicina na mesma
posio.
O Comit foi informado de que, devido a uma reduo da quantidade de vitelos sacrificados e a um
aumento da produo de queijo, se verifica um dfice no coalho necessrio produo do queijo. Para
compensar este dfice, existe disposio coalho de queijo microbiano, produzido como enzimas
extracelulares de fungos e, para alargar ainda mais a escolha, desenvolveram-se coalhos de vitelo
por recombinao gentica. A tecnologia de DNA recombinante tornou possvel obter quimosina de
vitelo como produto de fermentao de estirpes de bactrias, leveduras ou fungos filamentosos, aps
transformao com um vector que inclui uma sequncia de DNA de vitelo codificadora do precursor de
quimosina.
Aps isolamento e purificao do mRNA da pr-proquimosina obtido a partir do quarto estmago do
vitelo, o mRNA purificado serve como modelo para a sntese de uma cadeia de DNA complementar
(cDNA) utilizando a enzima transcriptase reversa. Este cDNA subsequentemente convertido em
DNA de cadeia dupla, atravs da aco de DNA polimerase. O DNA de cadeia dupla seguidamente
ligado a um vector de expresso, que pode ser um plasmdeo ou um vrus, e o material de DNA
recombinante assim obtido introduzido nas clulas do hospedeiro que serve como fonte orgnica para
produo das enzimas, utilizando tcnicas de transformao padronizadas.
Foi pedido ao Comit que avaliasse as quimosinas obtidas a partir de trs microrganismos diferentes
modificados por tcnicas de DNA recombinante:
1. Quimosina A produzida por Escherichia coli, contendo o gene da proquimosina A bovina.
2. Quimosina produzida por Kluyveromyces lactis, contendo o gene da proquimosina bovina.
3. Quimosina produzida por Aspergillus niger var. Awamori, contendo o gene da proquimosina B
bovina
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 29
25 DE JUNHO E 10 DE DEZEMBRO TRS QUTMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
DE 1993 POR ENGENHARIA GENTICA
2. Avaliaes toxicolgicas e concluses
In its 27th series of reports (EUR 14181, 1992) the Committee set out the factors which it considered
must be taken into account in the evaluation of enzyme preparations, including those obtained from
genetically modified organisms. In evaluating the three chymosin products mentioned above, the
Committee has applied the principles enunciated in its 27th series of reports. In accordance with
these principles, the Committee draws particular attention to the fact that the evaluations which
follow are confined to the products described in the dossiers submitted and cannot be considered to
cover preparations of the same enzyme prepared from other sources or by other processes.
2.1 Qui mosi na A produzida pela Escherichia coli K12 contendo o gene da proquimosina
A de vi tel o
O produto avaliado pelo Comit deriva de uma estirpe de Escherichia coli K12 GE81 geneticamente
modificada. O Comit recebeu informaes sobre a identidade da estirpe original e sobre a construo
do plasmdeo e mtodo utilizado para introduo do gene da proquimosina A de vitelo. Foram
igualmente fornecidas informaes demonstrativas de que o microrganismo modificado
geneticamente estvel. O plasmdeo intacto no detectvel no produto final e o tratamento de cido
necessrio ao processo de purificao assegura que todos os fragmentos de DNA residual contm menos
de 200 pares de bases.
Os dados disponveis sobre a toxicidade incluem os resultados obtidos num estudo oral por sonda
gstrica, realizado no rato e com a durao de 1 ms, um estudo, no rato, de 90 dias de administrao
nos alimentos e testes da mutagenicidade relativos a diferentes parmetros de avaliao final da
genotoxicidade. Adicionalmente, num estudo realizado no co e nos testes da citotoxicidade in vitro
no foram demonstrados sinais de produo de quaisquer toxinas "shiga-like" que possam ter sido
potenciadas pela modificao do genoma da E. coli'. Embora os resultados de um estudo sobre a
anafilaxia cutnea passiva no cobaio tenham sido pouco claros, em dois outros estudos adicionais
obtiveram-se provas adequadas de que o potencial alergnico irrelevante.
O Comit concorda que o uso do produto aceitvel para uso na produo de queijo.
2.2 Qui mosi na produzida por Kluyveromyces lactis contendo o gene da proqui mosi na
do vitelo
O produto avaliado pelo Comit obtido a partir de uma estirpe geneticamente modificada de
Kluyveromyces lactis (Dombrowski) van der Walt SL56. O Comit recebeu informaes sobre a estirpe
original, sobre a construo do plasmdeo e sobre o mtodo utilizado para introduzir o gene de
proquimosina de vitelo. Foram igualmente proporcionadas provas indicadoras da estabilidade
gentica do microrganismo produtor em mais de 60 geraes. O uso de um tratamento cido para
activao extracelular da enzima torna improvvel a permanncia de fragmentos de DNA com
elevado peso molecular, no tendo sido detectado qualquer DNA derivado dos plasmdeos no produto
final.
Os dados disponveis sobre toxicidade incluem os resultados de um teste sobre citotoxicidade,
realizado in vitro, de estudos da toxicidade aguda e de estudos de 28 e 90 dias no rato, de um estudo de
90 dias em que os ratos foram alimentados com queijo preparado com o produto, de um teste de
anafilaxia cutnea passiva no cobaio e de testes da mutagenicidade celular no mamfero e nas
bactrias.
30 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
25 DE JUNHO Y 10 DE DEZEMBRO TRS QUIMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
1993 POR ENGENHARIA GENTICA
No estudo de 90 dias realizado no rato, observou-se um aumento ligeiro mas significativo nos pesos
relativos do fgado dos animais, embora este efeito no ocorresse no estudo de 28 dias, em que se
estudou com particular ateno, a funo heptica e a histopatologia. Foi observado um ligeiro
aumento no nmero de revertentes, com as doses mais elevadas, nalgumas estirpes de Salmonella
testadas nos testes de mutagenicidade bacteriana. No se observou qualquer actividade mutagnica
em vrios ensaios realizados nas clulas dos mamferos, tanto in vitro, como in vivo. Tendo em conta o
potencial para genotoxicidade observado na totalidade dos dados sobre mutagenicidade, o Comit
concluiu que as referncias positivas no eram relevantes para a segurana do produto.
O Comit concorda que o uso do produto aceitvel para uso na produo de queijo.
2.3 Qui mosi na produzida poe Aspergillus niger var Awamori, contendo o gene da
proqui mosi na B do vi tel o
O produto avaliado pelo Comit obtido a partir de uma estirpe, modificada geneticamente, de
Aspergillus niger var. Awamori GClHFl-3, dgr246. O Comit recebeu informaes sobre a identidade
da estirpe original de A. niger, a identidade do hospedeiro bacteriano intermedirio que foi o
recipiente primrio do gene de proquimosina B de vitelo e a construo do plasmdeo que serviu como
meio de transferncia do gene de vitelo para o seu hospedeiro final. Foram igualmente fornecidos
dados demonstrativos de que a integrao do plasmdeo no hospedeiro final estvel e de que no se
detectam no produto final, quaisquer resduos de DNA ou RNA provenientes do plasmdeo.
Os dados disponveis sobre toxicidade incluem os resultados dos estudos de irritao drmica e ocular
no coelho, um estudo de administrao nos alimentos, com a durao de 50 dias no rato, um teste de
sensibilizao no cobaio e testes de mutagenicidade relativos a vrios parmetros de avaliao final
sobre a genotoxicidade. O produto foi, alm disso, submetido a testes de citotoxicidade utilizando
linfoblastos humanos, tendo-se administrado os recombinantes vivos e os microrganismos hospedeiros
ao ratinho, atravs de sonda gstrica, sem que se observasse qualquer toxicidade.
O Comit concorda que o uso do produto aceitvel para uso na produo de queijo.
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 31
25 DE JUNHO E 10 DE DEZEMBRO TRS QUTMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
DE 1993 POR ENGENHARIA GENTICA
Bi bl i ogr af i a
Qui mosi na A de E. coli K12
Bachmann, B.J. (1972)
Pedigrees of some mutant strains of Escherichia coli K-12. Bacteriological Reviews 36, 525-557.
Bolivar, F. Et al. (1977)
Construction and characterization of new cloning vehicles. II. A multipurpose cloning system. Gene 2,
95-113.
Buehler E.V. (1989)
Hill Top Biolabs Project No. 89-3729-21 submitted by Pfizer
Passive Cutaneous Anaphlaxis Study in Guinea Pigs of: CHYMOSIN SOLUTION for Pfizer Inc.
Dated 15.8.1989
Buehler E.V. (1990a)
Hill Top Biolabs Project No. 89-3910-21 submitted by Pfizer
Passive Cutaneous Anaphlaxis Study in Guinea Pigs of: CHYMOSIN SOLUTION LOT 17032-15-6,
MAXIREN 15 LOT 1159, AND LEBSTREMSEL for Pfizer Inc.
Dated 1.2.1990
Buehler E.V. (1990b)
Hill Top Biolabs Project No. 89-3920-21 submitted by Pfizer
Passive Cutaneous Anaphlaxis Study In Guinea Pigs of: CHYMOSIN SOLUTION LOT 17032-15-6,
MAXIREN 15 LOT 1159, AND LEBSTREMSEL for Pfizer Inc.
Dated 22.1.1990
King TO. (1990)
Department of Drug Safety Evaluation Pfizer Central Research Groton, Connecticut
Genetic Toxicology Report CP-72,962 (Chymosin) Milk-Clotting Agent
Protocol No. 89-605-03 Microbial Reverse Mutation Assay
Dated 6.7.1990
King TO. (1991)
Department of Drug Safety Evaluation Pfizer Central Research Groton, Connecticut
Genetic Toxicology Report Addendum I CP-72,962 (Chymosin) Milk-clotting Agent
Protocol Nos. 89-605-04 and 89-605-05
Mammalian Cell Gene Mutation Assays
In vitro Cytogenetic Assays
In vivo Cytogenetic Assay
Dated 24.1.1991
32 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
25 DE JUNHO Y 10 DE DEZEMBRO TRS QUIMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
1993 POR ENGENHARIA GENTICA
Pfizer (1990)
Unpublished report from Fraunhofer Institut fr Toxikologie und Aerosolforschung Hannover. 90-Day
Oral Toxicity Study of CP-72,962 in Rats (89/7). Final Report
Dated August 1990
Pfizer (1991)
Submission to Commission of the European Communities, prepared by Pfizer Central Research, 235
East 42nd Street, New York, NY 10017
Dated December 1991
Qui mosi na a partir de A. Ni ger var. A wamori
Berka et al (1990)
Molecular cloning and deletion of the gene encoding aspergillopepsin A from Aspergillus awamori.
Gene, 86 (1990), pp. 153-162.
David, R.M. (1989)
Microbiological Associate Inc. for Genencor Inc.
MBA Study G-7209.221 Acute oral toxicity study of Aspergillus niger var. awamori in mice.
Dated 6.6.1989
Hansen' s (1990)
Chymosin manufactured by recombinant DNA technology. Unpublished reports from Chr. Hansen's
laboratorium A/ S
Dated 21.6.1990 and supplemented 8.1.1993 and 22.6.1993
Hill Top (1988)
Biolabs Project No. 88-3198-21 Delayed Contact Hypersensitivity Study in Guinea Pigs of: Chymosin
for: Genencor, Inc.
Dated 13.10.1988
IRDC (1988a)
International Research and Development Corporation
13 Week dietary toxicity study in rats. Sponsor Genencor Incorporated.
Dated 5.12.1988
IRDC (1988b)
International Research and Development Corporation, Protease: Eye irritation study in rabbits (Low
Volume Procedure) Sponsor Genencor Inc.
Dated 25.10.1988
IRDC (1988c)
International Research and Development Corporation
Protease. Primary dermal irritation test in rabbits. Sponsor Genencor Inc.
Dated 25.10.1988
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 33
25 DE JUNHO E 10 DE DEZEMBRO TRS QUTMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
DE 1993 POR ENGENHARIA GENTICA
Lawlor, TE. (1989)
Hazelton Laboratories Inc.
Mutagenicity test on Chymosin Lot P88032FP in the Ames salmonella/microsome reverse mutation
assay. Final report. HLA Study No.: 10678-0-401. Submitted to Genencor Inc.
Dated 30.5.1989
Valentine, D.C. and Lawlor, T.E. (1989b)
Hazleton Laboratories Inc.
Mutagenicity test on Chymosin Lot P88040FP in the Ames Salmonella /microsome reverse mutation
assay. Final report. HLA Study No.: 10715-0-401. Submitted to Genencor Inc.
Dated 2.6.1989
Ward et al (1990)
Improved production of chymosin in Aspergillus by expression as a glucoamylase-chymosin fusion.
Bio/Technology, Vol. 8, No. 5 (May 1990), pp. 435-440.
Young, R.R. (1989a)
Hazleton Laboratories Inc.
Mutagenicity test on Chymosin Lot Number P88035FP in the mouse lymphoma forward mutation
assay. Final report. HLA Study No.: 10714-0-431. Submitted to Genencor Inc
Dated 5.6.1989
Young, R.R. (1989b)
Hazleton Laboratories Inc.
Mutagenicity test on Chymosin Lot Number P88040FP in the mouse lymphoma forward mutation
assay. Final report. HLA Study No.: 10715-0-431.
Submitted to Genencor Inc.
Dated 5.6.1989
Qui mosi na B de . Lactis
Anonymous (1988a)
Laboratory of Pharmacology and Toxicology, Hamburg, FRG
Prfung von Maxiren 15 TL, LOT No. 151/8/LRE im Zellkulturtest auf cytotoxische Eigenschaften.
Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated 22.11.1988
Anonymous (1988b)
Laboratory of Pharmacology and Toxicology, Hamburg, FRG
Prfung von Animal Rennet, LOT No. F H3 im Zellkulturtest auf cytotoxische Eigenschaften.
Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated November 1988
Berg, J.A. v.d. (1990)
Bio/technology 8, 135.
34 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
25 DE JUNHO Y 10 DE DEZEMBRO TRS QUIMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
1993 POR ENGENHARIA GENTICA
Eeken, C.J.v., (1986)
An Investigation in the rat of the acute oral toxicity of Chymosin.
Protocol number: 8605. Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated 31.10.1986
Eeken, C.J.v., (1988a)
81 Day toxicity study after oral administration of Chymosin to Wistar rats. Protocol Number: 8711.
Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated 16.5.1988
Eeken, C.J.v., (1988b)
91 Day feeding study in Wistar rats after addition of Chymosin prepared cheese to the feed. Protocol
number: 8706. Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated 4.5.1988
Hoorn, A.J.W. (1987)
Hazleton Biotechnologies laboratory Project ID:
HBC Study No.: E-9792-0-401. Mutagenicity test on chymosin in the Ames
Salmonella/microsome reverse mutation assay.
Unpublished report provided by Gist-Brocades.
Dated 18.12.1987
Lambalgen, R.v., (Undated a)
Allergenicity of chymosine tested by passive cutaneous anaphylaxis assay. Unpublished data
provided by Gist-Brocades.
Lambalgen, R.v., (Undated b)
Pathogenicity of Kluyveromyces lactis CHY-1
Unpublished data provided by Gist-Brocades.
Reijenders, J.B.J. (1990)
Draft Report of RCC N0TOX B.V. No. 038791
Comparative subacute 28-day oral toxicity with
a) Maxiren, active/RER 001-CHYMl LY01
b) Maxiren, inactive/RER 001-CHYM LYO CTI
c) Calfrennet, active/P.A. (J1+J2) LYO
d) Calfrennet, inactive/P.A. (J1+J2) CT LYO
(RCC NOTOX Substance 11169) by daily gavage in the rat.
Unpublished data provided by Gist-Brocades.
Dated 30.10.1990
Reiss, B. et al. (1984)
EMBO J. 3,3317
Chromosome aberrations test in cultured peripheral human lymphocytes, performed by RCC Notox.
Completion date: 27.10.1989
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie) 35
25 DE JUNHO E 10 DE DEZEMBRO TRS QUTMOSINAS OBTIDAS A PARTIR DE MICRORGANISMOS MODIFICADOS
DE 1993 POR ENGENHARIA GENTICA
In vitro mammahan cell gene mutation test with V79 Chinese hamster cells (with independent
repeat), performed by RCC Notox. Completion date: 28.11.1989
AMES Salmonella/microsome test (with independent repeat) in the strains TA 98 and 100 (+S9),
performed by RCC Notox. Completion date 10.12.1991
AMES Salmonella/microsome test in the strains TA 98 and 100 (+S9), performed by Institut Pasteur.
Completion date: 28.1.1992
a ) AMES Salmonolla/Microsome screening test on cymosin from K. lactis and
b) AMES Salmonella/Microsome screening test on kalfstremsel (calf rennet), performed by RCC
Notox. Completion date: 18.2.1992
Micronucleus test in bone marrow cells of the mouse (intravenous), performed by RCC Notox.
Completion date 16.3.1992
AMES Salmonella/Microsome treat and plate test (with independent repeat) in the strains TA 98 and
TA 100 (+S9), performed by RCC Notox. Completion date: 16.6.1992.
36 Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana (Trigsima quarta srie)
Comisso Europeia
Relatrios do Comit Cientfico da Alimentao Humana
(Trigsima quarta srie)
Luxemburgo: Servio das Publicaes Oficiais das Comunidades Europeias
1995 V, 36 p. 16,2 22,9 cm
Srie: Cincia e Tcnicas da Alimentao Humana
ISBN 92-826-8953-0
Preo no Luxemburgo (IVA excludo): ECU 7
O Comit Cientfico da Alimentao Humana foi institudo pela Deciso 74/234/CEE, de 16
Abril de 1974 (JO L 136 de 20.5.1974, p. 1), para aconselhar a Comisso sobre todos os
problemas relativos proteco da sade e da vida das pessoas no que diz respeito ao consumo
alimentar, nomeadamente sobre a composio dos alimentos, os tratamentos susceptveis de
modific-los, o emprego de aditivos alimentares e outros produtos de tratamento, bem como
a presena de contaminantes.
composto por personalidades cientficas independentes, altamente qualificadas nos domnios
da medicina, nutrio, toxicologia, biologia, qumica ou noutras disciplinas similares.
O secretariado do Comit est a cargo da Direco-Geral Indstria da Comisso. Directivas
recentes do Conselho obrigam a Comisso a consultar o Comit sobre as disposies dessas
directivas que possam ter repercusses na sade pblica.
O presente relatrio inclui relatrios sobre:
Aromatizantes do fumo
Requisitos essenciais para as formulaes para os lactentes e formulaes de continuidade
Celulose microcristalina
Monosorbitanoleato de polioxietileno (20) (polisorbato 80)
Dimetiltereftalato recuperado em frascos de PET
Trs quimosinas obtidas a partir de microrganismos modificados por engenharia gentica
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il (93) 48 34 92
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il (93) 302 64 62
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Fax(01)365 54 11
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