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SEMENTES RECALCITRANTES SEMENTES RECALCITRANTES

Julio Marcos Filho Julio Marcos Filho
Tecnologia de Sementes Tecnologia de Sementes
Depto. Produo Vegetal Depto. Produo Vegetal
USP/ESALQ USP/ESALQ
INTRODUO INTRODUO
Longevidade Longevidade: :
Perodo Perodo em em que que a a semente semente permanece permanece viva, viva, quando quando
conservada conservada sob sob as as condies condies ambientais ambientais mais mais
favorveis favorveis para para aa espcie espcie ee cultivar cultivar ( (Barton, Barton, 1961 1961))
Evoluo do conhecimento Evoluo do conhecimento tolerncia dessecao tolerncia dessecao
sementes ortodoxas sementes ortodoxas X sementes X sementes recalcitrantes recalcitrantes
Recalcitrncia Recalcitrncia: sementes sementes incapazes incapazes de de sobreviver sobreviver
ao ao armazenamento armazenamento em em ambientes ambientes relativamente relativamente
secos secos (Roberts (Roberts,, 1973 1973))
Recalcitrncia Recalcitrncia: sementes sementes no no sofrem sofrem secagem secagem
drstica drstica durante durante aa maturao maturao e e so so sensveis sensveis aa
injrias injrias durante durante a a dessecao dessecao (Roberts, (Roberts, 1973 1973))
-- Incapazes Incapazes de de sobreviver sobreviver ao ao armazenamento armazenamento
em emambientes ambientes relativamente relativamente secos secos
-- Tolerncia Tolerncia aa baixas baixas temperaturas temperaturas
Recalcitrante Recalcitrante = = obstinado, obstinado, difcil difcil de de controlar, controlar, que que
no no obedece obedece aa regras regras normais, normais, obstinadamente obstinadamente
desobediente desobediente
Alternativas Alternativas: sensvel dessecao, homohidratado, : sensvel dessecao, homohidratado,
homoaquoso homoaquoso
CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES
RECALCITRANTES RECALCITRANTES
-- HABITAT: HABITAT: plantas ocorrem em plantas ocorrem em habitats habitatsque permitem o que permitem o
rpido estabelecimento das plantas. rpido estabelecimento das plantas.
Caracterstica muito comum em espcies arbreas Caracterstica muito comum em espcies arbreas
-- TEOR TEOR DE DE GUA GUA:: geralmente geralmente >> 50 50%%;; gg %%;;
Liberadas Liberadas em em estado estado hidratado, hidratado, com com intervalos intervalos regulares, regulares,
em em ambientes ambientes midos midos ee com com temperaturas temperaturas relativamente relativamente
elevadas elevadas;; germinao germinao relativamente relativamente rpida rpida..
-- EXEMPLOS EXEMPLOS: : cacau, cacau, ing, ing, seringueira, seringueira, coco, coco, carvalho, carvalho,
guaran, guaran, manga, manga, nspera, nspera, dend, dend, Araucaria Araucaria,, ip ip,,
abacate, abacate, macadmia, macadmia, pitanga, pitanga, jaboticaba jaboticaba
CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES
RECALCITRANTES RECALCITRANTES
-- MORFOLOGIA MORFOLOGIA DAS DAS SEMENTES SEMENTES: :
sementes gradas, com embries pequenos; sementes gradas, com embries pequenos;
secagem menos drstica durante a maturao; secagem menos drstica durante a maturao;
ausncia de repouso ps ausncia de repouso ps- -maturidade, sob condies naturais. maturidade, sob condies naturais.
Perdem gua mais lentamente que as ortodoxas: Perdem gua mais lentamente que as ortodoxas:
> > variao entre indivduos variao entre indivduos
Ampla proporo entre os volumes do tecido de Ampla proporo entre os volumes do tecido de
reserva / eixo embrionrio reserva / eixo embrionrio
Em vrias espcies, sementes protegidas por mucilagem, no Em vrias espcies, sementes protegidas por mucilagem, no
interior do fruto. interior do fruto.
p p p p , ,
CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES
RECALCITRANTES RECALCITRANTES
-- DESENVOLVIMENTO DESENVOLVIMENTO E E MATURAO MATURAO
Etapas: Etapas: diviso celular, expanso celular, diviso celular, expanso celular,
acmulo matria seca dessecao acmulo matria seca dessecao acmulo matria seca, dessecao acmulo matria seca, dessecao
Dessecao etapa marcante no desenvolvimento Dessecao etapa marcante no desenvolvimento
das das ortodoxas. ortodoxas. EE nas recalcitrantes? nas recalcitrantes?
2
o
r
t
o
d
o
x
a
s
matria verde
histodiferenciao deposio de reservas secagem
r
e
c
a
l
c
i
t
r
a
n
t
e
s
tempo
teor de gua
matria verde
Relaes Relaes entre entre massa massa mida, mida, massa massa seca seca ee grau grau de de umidade umidade de de sementes sementes durante durante o o desenvolvimento desenvolvimento de de
sementes sementes ortodoxas ortodoxas ee recalcitrantes recalcitrantes (Adaptado (Adaptado de de Berjak Berjak e e Pammenter, Pammenter, 2000 2000))..
CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES CARACTERSTICAS GERAIS DE SEMENTES
RECALCITRANTES RECALCITRANTES
Longevidade da espcie geralmente depende mais Longevidade da espcie geralmente depende mais
do hbito de crescimento da planta matriz do hbito de crescimento da planta matriz
AA ibilid d ibilid d d d l i l i i bilid d i bilid d
-- CATEGORIAS DE SEMENTES RECALCITRANTES CATEGORIAS DE SEMENTES RECALCITRANTES
AA sensibilidade sensibilidade dessecao dessecao se se relaciona relaciona inabilidade inabilidade
de de preservar preservar a a estruturao estruturao do do sistemas sistemas de de membranas, membranas,
quando quando oo teor teor de de gua gua das das sementes sementes atinge atinge valores valores
inferiores inferiores a a determinados determinados limites limites
Tipos de Recalcitrncia Tipos de Recalcitrncia
Mnima Mnima Moderada Moderada Alta Alta
Maior tolerncia perda Maior tolerncia perda
de gua de gua
Tolerncia moderada Tolerncia moderada
desidratao desidratao
Pouco tolerante Pouco tolerante
dessecao dessecao
Germinao lenta, em Germinao lenta, em
ausncia de quantidade ausncia de quantidade
adicional de gua adicional de gua
Velocidade mdia de Velocidade mdia de
germinao em germinao em
ausncia de gua ausncia de gua
adicional adicional
Germinao rpida em Germinao rpida em
ausncia de gua ausncia de gua
adicional adicional
Caractersticas de sementes de acordo com o grau de recalcitrncia Caractersticas de sementes de acordo com o grau de recalcitrncia
(Farrant et al., 1988). (Farrant et al., 1988).
Maior tolerncia a baixas Maior tolerncia a baixas
temperaturas temperaturas
Maioria das espcies Maioria das espcies
sensvel a baixas sensvel a baixas
temperaturas temperaturas
Sensvel a baixas Sensvel a baixas
temperaturas temperaturas
Distribuio Distribuio
subtropical/temperada subtropical/temperada
Exemplos: Exemplos: Quercus Quercus, ,
Araucaria Araucaria
Distribuio tropical Distribuio tropical
Exemplos: Exemplos: Theobroma Theobroma, ,
Hevea Hevea
Florestas tropicais e Florestas tropicais e
terras midas terras midas
Exemplo: Exemplo: Avicennia Avicennia
marina marina
80
100
Germinao de sementes de Inga veracom diferentes graus de umidade
o

(
%
)
Marcio Faria
0
20
40
60
58 50 44 40 28
G
e
r
m
i
n
a

o
Grau de umidade (%)
Seca Seca:: qualquer qualquer nvel nvel de de disponibilidade disponibilidade de de gua gua
suficientemente suficientemente baixo baixo para para afetar afetar negativamente negativamente o o
desempenho desempenho de de plantas plantas
Tolerncia Tolerncia seca seca:: capacidade capacidade de de enfrentar enfrentar disponibilidade disponibilidade
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
Tolerncia Tolerncia seca seca:: capacidade capacidade de de enfrentar enfrentar disponibilidade disponibilidade
sub sub--tima tima de de gua, gua, mas mas no no to to baixa baixa a a ponto ponto de de
caracterizar caracterizar secagem secagem completa completa at at atingir atingir oo ponto ponto de de
equilbrio equilbrio com com aa umidade umidade relativa relativa do do ar ar
Mecanismos de tolerncia a seca: manter teores mnimos Mecanismos de tolerncia a seca: manter teores mnimos
de gua nas clulas (Ex.: estmatos) de gua nas clulas (Ex.: estmatos)
Definio Definio::
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
Capacidade de sobrevivncia sob ausncia quase que Capacidade de sobrevivncia sob ausncia quase que
completa de completa de gua gua
(*) (*)
e recuperao aps hidratao e recuperao aps hidratao
(*) Conveno (*) Conveno: 50% : 50% U.R. U.R. ar, a 25 ar, a 25
oo
C C - - 30 30
oo
CC
Pode Pode ser ser considerada considerada como como equivalente equivalente ao ao menor menor teor teor de de
gua gua at at oo qual qual oo tecido tecido pode pode ser ser desidratado desidratado sem sem
causar causar a a perda perda da da viabilidade viabilidade
( ) ( ) %% ,,
3
H H variao variao no no grau grau de de tolerncia tolerncia dessecao, dessecao, desde desde as as
tipicamente tipicamente ortodoxas ortodoxas at at as as acentuadamente acentuadamente
recalcitrantes recalcitrantes.. Esse Esse grau grau de de tolerncia tolerncia representa representa aa
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
gg pp
diferena diferena mais mais evidente evidente entre entre esses esses tipos tipos de de sementes sementes
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
SENSIBILIDADE CRESCENTE SENSIBILIDADE CRESCENTE DESSECAO DESSECAO
RECALCITRANTE RECALCITRANTE ORTODOXA ORTODOXA
mnima mnima mxima mxima
A gradao sugerida para a classificao da tolerncia das sementes
dessecao tem origem na extrema tolerncia das ortodoxas at a
extrema sensibilidade dessecao das mais profundas (Berjak e
Pammenter, 2000)
SEMENTES ORTODOXAS SEMENTES ORTODOXAS
Podem sofrer secagem at atingir baixo grau de umidade, Podem sofrer secagem at atingir baixo grau de umidade,
sem a ocorrncia de danos ao metabolismo. sem a ocorrncia de danos ao metabolismo.
Potencial de armazenamento tem relao inversa com o Potencial de armazenamento tem relao inversa com o
grau de umidade das sementes e com a temperatura grau de umidade das sementes e com a temperatura
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
grau de umidade das sementes e com a temperatura, grau de umidade das sementes e com a temperatura,
dentro de limites dentro de limites
RECALCITRANTES RECALCITRANTES:: exibem exibem variao variao relativamente relativamente
ampla ampla quanto quanto ao ao teor teor de de gua gua na na poca poca de de
disperso, disperso, tolerncia tolerncia desidratao, desidratao, resposta resposta
velocidade velocidade de de secagem, secagem, longevidade longevidade ee sensibilidade sensibilidade
queda queda de de temperatura temperatura
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
Recalcitrantes Recalcitrantes predomina gua dos tipos 3 ou 4; predomina gua dos tipos 3 ou 4;
talvez por isso, tm menor tolerncia ao resfriamento talvez por isso, tm menor tolerncia ao resfriamento
Geralmente, a tolerncia perdida quando removida Geralmente, a tolerncia perdida quando removida
a gua congelvel, fazendo com que os mecanismos a gua congelvel, fazendo com que os mecanismos
de reparo se tornem inoperantes de reparo se tornem inoperantes
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
Sementes secas Sementes secas: : G.U. G.U. < 10% (Walters, 2000) < 10% (Walters, 2000)
Para outros, Para outros,
E.H. E.H. com 75% com 75% U.R. U.R. ar, com 50% U.R, com 15 % ar, com 50% U.R, com 15 % U.R. U.R., ... , ...
LIMITES DE TOLERNCIA DESSECAO ( LIMITES DE TOLERNCIA DESSECAO (Roberts, 1999 Roberts, 1999): ):
Ortodoxas Ortodoxas equilbrio com 10% U.R. equilbrio com 10% U.R.
Intermedirias Intermedirias equilbrio com 40 a 50 equilbrio com 40 a 50% U.R. % U.R.
Recalcitrantes Recalcitrantes equilbrio com 90% equilbrio com 90% U.R. ( U.R. (--1,5 a 1,5 a - -2 MPa) 2 MPa)
SEMENTES INTERMEDIRIAS SEMENTES INTERMEDIRIAS
Classificao considerando apenas as ortodoxas e as Classificao considerando apenas as ortodoxas e as
recalcitrantes no se revelou completamente satisfatria recalcitrantes no se revelou completamente satisfatria
(Ellis (Ellis et et al., 1990) al., 1990)
Caf Caf conservao sob ampla variao do grau de conservao sob ampla variao do grau de p g p g
umidade, suportando nvel de desidratao mais umidade, suportando nvel de desidratao mais
intenso que as recalcitrantes tpicas, mas menos intenso que as recalcitrantes tpicas, mas menos
tolerante que as ortodoxas. tolerante que as ortodoxas.
Menor tolerncia dessecao: recalcitrantes e Menor tolerncia dessecao: recalcitrantes e
intermedirias intermedirias
4
Grau de umidade crtico Grau de umidade crtico: limite at o qual os tecidos : limite at o qual os tecidos
podem ser desidratados sem a ocorrncia de danos podem ser desidratados sem a ocorrncia de danos
irreparveis. irreparveis.
TOLERNCIA DESSECAO TOLERNCIA DESSECAO
Grau de umidade crtico (?): Grau de umidade crtico (?): 25% 25% a 70%, a 70%, geralmente geralmente
Grau de umidade letal Grau de umidade letal: perda completa da viabilidade : perda completa da viabilidade
SO DOIS PARMETROS CONTESTADOS SO DOIS PARMETROS CONTESTADOS
porque sofrem a influncia de vrios fatores porque sofrem a influncia de vrios fatores
entre 20 e 35% ( entre 20 e 35% (equilbrio com 90% U.R do ar equilbrio com 90% U.R do ar) )
Organizao das membranas Organizao das membranas
Fases de diviso e expanso celular Fases de diviso e expanso celular INTOLERANTE INTOLERANTE
Presena e atuao dos sistemas antioxidantes Presena e atuao dos sistemas antioxidantes
MECANISMOS DE TOLERNCIA DESSECAO MECANISMOS DE TOLERNCIA DESSECAO

Acmulo de molculas de substncias protetoras Acmulo de molculas de substncias protetoras
Protenas do tipo LEA ( Protenas do tipo LEA (deidrinas deidrinas), protenas de choque ), protenas de choque
trmico, trmico, oligossacardeos oligossacardeos ( (rafinose rafinose, , estaquiose estaquiose) )
Taxa de Taxa de secagem secagem
1,2
1,5
x
o

e
m
b
r
i
o
n

r
i
o

(
g
/
g
)
A
INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM
10 50 40 30 20
0,5
1,0
T
e
o
r

d
e

g
u
a

d
o

e
i
x
Perodo de secagem (horas)
secagem
rpida
2,0
2,5
x
o

e
m
b
r
i
o
n

r
i
o

(
g
/
g
)
1,5
intermediria
lenta
B
INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM
0,5
1,0
T
e
o
r

d
e

g
u
a

d
o

e
i
x
2 10 8 6 4
Perodo de secagem (dias)
INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM INFLUNCIA DA TAXA (VELOCIDADE) DE SECAGEM
Extenso dos danos depende de vrios fatores, Extenso dos danos depende de vrios fatores,
entre eles a temperatura e a velocidade de secagem entre eles a temperatura e a velocidade de secagem
Na Na secagem secagem lenta, lenta, as as sementes sementes permanecem permanecem
expostas expostas durante durante maior maior perodo perodo aa nveis nveis de de
hidratao hidratao favorveis favorveis ocorrncia ocorrncia de de reaes reaes
deletrias deletrias ( (gua gua congelvel congelvel) )..
60
80
100
i
n
a

o

(
%
)
Secagem de Secagem de Ekebergia capensis Ekebergia capensis
20
40
rpida
intermediria
lenta
0,5 2,5 2,0 1,5 1,0
Teor de gua do eixo embrionrio (g/g)
G
e
r
m
i
5
Flash drying Flash drying ::
Permite apenas a secagem mais segura at graus Permite apenas a secagem mais segura at graus
de umidade mais baixos de umidade mais baixos
MECANISMOS DE TOLERNCIA DESSECAO MECANISMOS DE TOLERNCIA DESSECAO
Como as sementes recalcitrantes so relativamente Como as sementes recalcitrantes so relativamente
grandes, a secagem geralmente lenta. Por esse grandes, a secagem geralmente lenta. Por esse
motivo, tem sido realizada a secagem de embries motivo, tem sido realizada a secagem de embries
excisados. excisados.
1,1
2,1
1,2 1,3
2,3 2,2
Tolerncia de Tolerncia de
frutos frutos- -sementes sementes
de carvalho de carvalho
dessecao dessecao
3,2 3,3
Primeiro nmero: ndice de separao entre cotildones (CC); Segundo nmero: entre cotildones e pericarpo (CP);
1: sem separao (at 1,5%); 2: moderada (1,6 7,0%) ; 3: severa (> 7,0%). (Goodman et al., 2005)
ASSOCIAO COM MICRORGANISMOS ASSOCIAO COM MICRORGANISMOS
PROBLEMAS CAUSADOS POR FUNGOS PROBLEMAS CAUSADOS POR FUNGOS
-- Espcies envolvidas: Espcies envolvidas: Aspergillus Aspergillusand and Penicillium Penicillium -- Espcies envolvidas: Espcies envolvidas: Aspergillus Aspergillusand and Penicillium Penicillium
-- Variaes do teor de gua Variaes do teor de gua
ASSOCIAO COM MICRORGANISMOS ASSOCIAO COM MICRORGANISMOS
Teor de gua (%) Teor de gua (%) Germinao (%) Germinao (%)
00
() ()
15 15 30 30 45 45 60 60 00
() ()
15 15 30 30 45 45 60 60
57,3 57,3 58,5 58,5 61,4 61,4 60,6 60,6 60,4 60,4 99 99 67 67 00 11 00
51,4 51,4 52,1 52,1 53,8 53,8 53,7 53,7 53,8 53,8 100 100 97 97 71 71 69 69 43 43
45,9 45,9 46,5 46,5 46,5 46,5 46,8 46,8 47,5 47,5 95 95 92 92 56 56 23 23 77
Graus de umidade e germinao de sementes de Ingaurufuensis submetidas a secagem e armazenadas em
condies normais de ambiente por diferentes perodos (Bilia et al., 1999)
5,9 5,9 6,5 6,5 6,5 6,5 6,8 6,8 ,5 ,5 95 95 99 56 56 33
42,9 42,9 43,2 43,2 44,7 44,7 42,6 42,6 46,1 46,1 98 98 87 87 49 49 33 00
38,6 38,6 39,6 39,6 39,8 39,8 39,2 39,2 39,9 39,9 89 89 62 62 12 12 11 00
32,4 32,4 33,1 33,1 34,3 34,3 32,3 32,3 39,1 39,1 68 68 88 00 00 00
28,0 28,0 28,7 28,7 29,1 29,1 31,9 31,9 30,1 30,1 00 00 00 00 00
(() Perodo de armazenamento (dias) ) Perodo de armazenamento (dias)
2. 2. Desidratao parcial Desidratao parcial
Menor perodo de conservao que para ortodoxas Menor perodo de conservao que para ortodoxas
ARMAZENAMENTO ARMAZENAMENTO
1. Sementes midas ou embebidas ( 1. Sementes midas ou embebidas (grau de umidade grau de umidade
elevado, mas insuficiente para permitir a germinao elevado, mas insuficiente para permitir a germinao) )
Menor perodo de conservao que para ortodoxas Menor perodo de conservao que para ortodoxas
Teor de gua ainda relativamente elevado e uso de Teor de gua ainda relativamente elevado e uso de
embalagens resistentes a trocas de vapor dgua embalagens resistentes a trocas de vapor dgua
Exemplos de potencial de armazenamento: Exemplos de potencial de armazenamento:
coco ( coco (16 meses 16 meses), carvalho ( ), carvalho (20 meses 20 meses), ing ( ), ing (60 dias 60 dias), ),
seringueira ( seringueira (6 meses 6 meses), cacau ( ), cacau (8 a 10 semanas 8 a 10 semanas) )
Material / ambiente Material / ambiente
Perodo de armazenamento (dias) Perodo de armazenamento (dias)
00 30 30 60 60 90 90 120 120 135 135 150 150
Plstico Plstico // laboratrio laboratrio 52 52 56 56 77 77 63 63 62 62 64 64 23 23
Plstico Plstico // 10 10
oo
CC 52 52 22 22 36 36 18 18 15 15 08 08 12 12
Papel multifoliado/ Papel multifoliado/
Germinao Germinao ( (% %)) de de sementes sementes de de seringueira seringueira armazenadas armazenadas em em dois dois
tipos tipos de de embalagem, embalagem, em em laboratrio laboratrio ee em em cmara cmara fria fria a a 10 10
oo
CC
(Pereira, (Pereira, 1980 1980))..
Papel multifoliado/ Papel multifoliado/
laboratrio laboratrio
52 52 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00
Papel multifoliado/ 10 Papel multifoliado/ 10
oo
CC 52 52 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00
6
3. Uso de inibidores endgenos ( ABA ) 3. Uso de inibidores endgenos ( ABA )
4. Criopreservao (N lquido a 4. Criopreservao (N lquido a 196 196
oo
C) C)
ARMAZENAMENTO ARMAZENAMENTO
Considerar: Considerar:
tamanho das sementes, tolerncia da espcie tamanho das sementes, tolerncia da espcie
dessecao, tipo de tecido, rapidez da secagem dessecao, tipo de tecido, rapidez da secagem
estdio de desenvolvimento da semente estdio de desenvolvimento da semente