UNMSM

FM-EAPMH
BIOQUIMICA.
PRCTICA

HIDRLISIS DE LOS LPIDOS POR LA LIPASA PANCRETICA
INTRODUCCIN

Despus de su ingestin, los lpidos son digeridos por la lipasa,
enzima esterhidrolasa presente fundamentalmente en el jugo pancretico,
requiriendo de la colipasa para realizar la hidrlisis de las grasas. Adems
por su caracterstica apolar se requiere de un agente que reduzca la tensin
superficial, esta funcin la tienen las sales biliares que permiten la
formacin de micelas en un proceso de emulsin y saponificacin, de all el
rol de la bilis en la disgestin.

La lipasa pancrtica hidroliza los enlaces ester ya sea en posicin 1 o
3 del triacilglicerol (TAG) obtenindose como productos a cidos grasos
libres (AGL) o 2-monoacilglicero (2-MAG). Este ltimo puede ser hidrolizado
por medio de la transferencia del grupo acilo en posicin 2 hacia la posicin
1 o 3 por medio de la isomerasa lipasa y ser finalmente hidrolizado a
glicerol y AGL.

En la prctica observaremos la digestin de un aceite comestible
vegetal, para lo cual se emplear una solucin de pancreatina, la cual
contiene disuelta un extracto de jugo pancretico, en la cual se encuentra
las lipasas. As mismo se observar la accin de las sales biliares.

La medicin de la digestin se realizar por medio de una titulacin
cido base, midiendo la acidez libre generada durante la hidrlisis utilizando
una solucin de NaOH, y como indicador a la fenolftaleina, la cual vira a rojo
grosella por el exceso de NaOH en la titulacin.

Competencias:
Determina por titulacin la cantidad de mili-equivalentes de cidos
grasos generados por la hidrlisis.
Aprecia el efecto de las sales biliares en la digestin de los lpidos.
MATERIALES Y REACTIVOS
1. Aceite neutralizado.
2. NaOH 0,05 N.
3. Pipetas de 1, 2 y 5 mL.
4. Gradilla y tubos de ensayo 20x150 con tapones.
5. Bao Mara 37C
6. Soporte universal y bureta.
7. Solucin de sales biliares al 1g% en buffer fosfato.
8. Solucin buffer fosfato a pH 8 a 0,1 mol/L
9. Solucin alcohlica de fenoftaleina.


PROCEDIMIENTO I. HIDRLISIS ENZIMATICA

Realizar el siguiente protocolo de trabajo.

Tubos 1 B1 2 B2
Aceite neutralizado (ml)
Sol. Buffer fosfato (ml)
Sales biliares (ml)
Agua destilada (ml)
Sol. Pancreatina (ml)
1,0
--
2,0
2,0
5,0
--
--
2,0
3,0
5,0
1,0
2,0
--
2,0
5,0
--
2,0
--
3,0
5,0

Tapar, agitar los tubos y llevarlos al bao mara a 37C por 60 min.
Agitarlos durante la incubacin cada 10 min.

PROCEDIMIENTO II. TITULACIN.
1. Preparar la bureta, colocndola en el soporte universal y agregando
NaOH 0,05 N, de manera tal que la punta est llena y la bureta
enrazada a cero.
2. Retirar los tubos del bao de agua y agregar 2 a 3 gotas de
fenolftalena a cada tubo.
3. Titular cada uno de los tubos agitando constantemente, hasta obtener
de manera permanente por 10 segundos un color rosado plido o
tenue, inicie la titulacin con los blancos y luego los tubos de digestin.
4. Anote el gasto generado en cada tubo de ensayo.

RESULTADOS.
Reste los gastos de los blancos al gasto de los respectivos tubos de
digestin.
Encuentre los mili-equivalentes de cido en el medio, los cuales son
iguales a los mili-equivalentes de NaOH gastados.
Comparar los resultados entre los dos tubos.

CUESTIONARIO.

1. Al observar el aspecto de los tubos 1 y 2 antes de la titulacin, que
diferencias a encontrado y a que cree que se deba.
2. Por qu en el tubo 1 hubo mayor gasto de NaOH.
3. Cual es la razn de correr en el protocolo los tubos blancos.
4. Compare los gastos de las otras mesas y seale cuales pueden ser las
causas por las que los resultados no son semejantes.
5. Si se hubiera usado un NaOH de 0,1 mol/L, cuanto de este se hubiera
gastado en la titulacin de cada uno de los tubos de la prctica.
6. Y si el NaOH hubiera sido 0,002 N que volmenes se hubieran gastado.
7. Cuales son los cidos biliares y como es su conjugacin.
8. Revisar el artculo: Metabolismo posprandial enadultos mayores
normales de nivel del mar, Garmendia F. y col.
http://www.scielo.org.pe/pdf/afm/v64n2/a05v64n2.pdf, e indicar y
hacer un comentario de los resultados del metabolismo lipdico.

Mg. Miguel Sandoval Vegas.
Profesor Principal.
Facultad de Medicina - UNMSM