Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Misses Campus Santo ngelo

Departamento de Cincias Exatas e da Terra

Curso de Qumica Industrial
Disciplina: Microbiologia e Controle de Qualidade




MTODO DE PREPARO DE MEIO DE CULTURA
RELATRIO I




Acadmicas: Daniele Perin
Ariane de Lara


Professora: Claudia


Santo ngelo, agosto de 2012.
Introduo

Meios de cultura consistem da associao qualitativa e quantitativa de
substncias que fornecem os nutrientes necessrios ao desenvolvimento (cultivo) de
microrganismos fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla diversidade
metablica dos microrganismos, existem vrios tipos de meios de cultura para
satisfazerem as variadas exigncias nutricionais. Alm dos nutrientes preciso fornecer
condies ambientais favorveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH,
presso osmtica, umidade, temperatura, atmosfera (aerbia, microaerbia ou
anaerbia), dentre outras.
Os meios de cultura (preparaes slidas, lquidas ou semi-slidas que contm
todos os nutrientes necessrios para o crescimento de microrganismos) so utilizados
com a finalidade de cultivar e manter microrganismos viveis no laboratrio, sob a forma
de culturas puras.
Os meios de cultura devem ter na sua composio, os nutrientes indispensveis
ao crescimento do organismo em questo, sob forma assimilvel e em concentrao no
inibitria do crescimento. Alm disso, aps a sua preparao, cada meio de cultura deve
ser submetido a esterilizao, por forma a eliminar qualquer organismo vivo
contaminante.
Por outro lado, para manter uma cultura pura, necessrio que o meio de cultura
que se pretende utilizar seja mantido desprovido de qualquer organismo vivo
contaminante. Para a preveno de contaminaes durante a manipulao de culturas
puras recorre-se a tcnicas de assepsia.
De um ponto de vista geral, os meios de cultura podem ser classificados tendo em
conta o seu estado fsico, a sua composio qumica e os objetivos funcionais a que se
destinam.
A especificidade dos meios de cultura muito importante, nomeadamente no
isolamento e identificao de certos microrganismos (por exemplo, no isolamento de
microrganismos do solo) ou em testes de sensibilidade a antibiticos ou na anlise
microbiolgica de guas, de alimentos, etc.

Estado fsico dos meios de cultura
Um meio de cultura lquido contem todos os nutrientes necessrios ao
crescimento do microrganismo, dissolvidos em gua. Uma vez preparado, este pode ser
inoculado com uma cultura pura do microrganismo que se pretende cultivar e ser
colocado a incubar em condies ptimas (temperatura e arejamento) para o
crescimento do microrganismo em causa.

Por forma a averiguar o grau de pureza do inculo preparado, recorre-se,
normalmente, transferncia de uma amostra do inculo para a superfcie de um meio
de cultura slido com a mesma composio, contido numa placa de Petri.
Os meios de cultura slidos so preparados a partir da adio, ao meio lquido
correspondente, de um agente solidificante (o Agar - com uma concentrao de cerca de
1,5 - 2% p/v), antes da esterilizao do meio.
Os meios de cultura podem ainda ter um estado fsico intermdio (semi-slido),
que obtido atravs da adio de uma quantidade reduzida de agente solidificante (0.3
a 0.5% de gar). A consistncia menos firme destes meios permite a mobilidade de
microrganismos que sejam mveis.

Aplicao dos Meios de Cultura
De acordo com a finalidade bacteriolgica ou micolgica os meios especiais
podem ser classificados em:
Meios de pr-enriquecimento - so aqueles que permitem a dessensibilizao de
microrganismos injuriados, para amostras que sofreram algum tipo de tratamento
(trmico ou qumico). Ex. gua peptonada, caldo lactosado (isolamento de salmonelas
de leite em p).
Meios de Enriquecimento - quando proporcionam nutrientes adequados ao
crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou de
crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tm
a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas
existem alguns que tambm podem inibir o crescimento de outros. Ex. Caldo
Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos), Caldo Tioglicolato
para Clostridium perfringens.
Diferenciais - quando contm substncias que permitem estabelecer diferenas
entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de
Metileno (diferencial para coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de
enterobactrias, gar sangue, agar Baird-Parker para isolamento e diferenciao de
cocos Gram positivos (slidos).
Seletivos - os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de
determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo:
meios com telurito de potssio (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae), gar
Salmonella-Shigella (SS) e gar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante
para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sdio, meio
Baird-Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibiticos para
isolamento de diversos microrganismos (TSC, SFP, , meio de Blaser, meio de Skirrow,
etc.). A maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos)
dos microrganismos.
Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades metablicas
permitindo caracterizao e identificao perfunctria ou presuntiva de muitos
microrganismos (gar trplice acar e ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uria, etc.);
Identificao - prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao
de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao (meios
Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semi-slido, caldo triptofano,
meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.;
Dosagem - empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e
aminocidos;
Contagem - empregados para a determinao quantitativa da populao
microbiana (Agar de Contagem em Placas, TSC, Agar Batata Dextrose, gar Baird-
Parker, etc.);
Estocagem ou manuteno - utilizados para conservao de microrganismos no
laboratrio, i.e. garantem a viabilidade de microrganismos (gar Sabouraud, Meios com
leite, gar suco de tomate, gar sangue, gar Simples, meio semi-slido, etc.).

Descrio da atividade
Materiais utilizados:
- gar MacConkey - Isolamento e diferenciao de Enterobactrias
Composio: Peptona de gelatina (17g), peptona de casena (1,5g), Peptona de carne
(1,5g), lactose (10,0g), Sais biliares (1,5g), Cloreto de sdio (5,0g), vermelho neutro
(0,03g), Cristal violeta (0,001g) e Agar (13,5g)

- Erlenmeyer 250 mL
- Esptula de metal
- Papel alumnio
- Balana analtica
- gua destilada
- Placas de Petri
- Bico de bunsen
- Bucha de gaze

Preparo do meio de cultura
Selecionou-se um meio de cultura para cada grupo - gar MacConkey
Pesou-se 5g de Agar MacConkey sobre um papel alumnio em uma balana
analtica
Aps transferiu-se para um erlenmeyer de 250 mL
Adicionou-se 100 mL de gua destilada
Dissolveu-se no microondas a 100C por alguns minutos at que se observou a
diluio total dos grumos
Aps seria preciso esterilizar na autoclave, a 121C (1 atm), durante 15 minutos;
(Em nossa aula prtica no foi possvel esperar que a esterilizao ocorresse,
pelo curto espao de tempo)
Aps esterilizao, deixou-se esfriar o meio at cerca de 50-55C, em condies
de assepsia (junto chama do bico de Bunsen) em uma capela de fluxo laminar,
esta operao necessria para no placar com o meio muito quente, pois
condensa muito na placa.
Para placar o meio foi utilizado cerca de 15 ml em cada uma das placas de Petri
previamente esterilizadas.
importante o cuidado para no agitar bruscamente o meio de cultura no
erlenmeyer para no formar bolhas de ar.
Caso os meios preparados no sejam imediatamente utilizados, guardar sob
refrigerao (4C).


Concluso

Pode-se concluir que os cuidados de esterilizao e preparao so essenciais para a
preparao do meio de cultura de qualidade. imprescindvel seguir todas as
recomendaes contidas no rtulo do reagente, pois estas informaes variam de
acordo com o tipo de meio de cultura utilizado.
Tambm foi verificada a necessidade de desenvolver a habilidade para manusear os
objetos para evitar alguma condio desfavorvel que possa comprometer o trabalho.
Concluiu-se que o meio de cultura que contenha maior concentrao de Agar na
composio, ficar mais rapidamente solidificado (em forma gelatinosa), e que tambm
existem meios de culturas lquidos (com baixa concentrao de Agar).