MITOSIS

I. Objetivo:

Observar las clases de cromosomas y las fases de la mitosis en
raicillas de cebolla.

II. Fundamento terico:

El crecimiento y desarrollo de los organismos vivos depende del
crecimiento y multiplicacin de sus clulas (reproduccin celular).
Cuando una clula se divide la informacin gentica contenida en
su ADN debe duplicarse de manera precisa y luego las copias se
transmiten a cada clula, a este proceso se le conoce como ciclo
celular.

El ciclo celular se puede dividir en dos grandes periodos: interfase y
mitosis. La interface se encuentra subdividida en 3 etapas: Periodo
G1, Comienza la sntesis de ARN y protenas. Periodos S donde ocurre
la duplicacin del ADN, Periodo G2, fase postsinttica que va desde
que va desde el final de S hasta el compromiso de la mitosis.

La Mitosis es la divisin nuclear asociada con la divisin de las
clulas somticas. Cada mitosis nica esta asociada con una nica
divisin celular que produce dos clulas hijas genticamente y
cromosmicamente idnticas. Mitosis (M), es generalmente el
periodo mas corto del ciclo, que ocupa aproximadamente entre el 5
a 10% del tiempo total del ciclo. Para su estudio se ha dividido la
mitosis en cuatro etapas.

Profase: Se produce la condensacin de la cromatina, hacindose
visibles los cromosomas con una apariencia doble, cada
cromosoma esta compuesto de dos mitades longitudinales llamadas
cromatidas hermanas, que se juntan en la regin denominada
centrmero. El ncleo desaparece, la membrana nuclear se
desorganiza y el ncleo plasma y el citoplasma se une.


Metafase: El huso mittico se hace propiamente. Este consiste en
una serie de fibras micro tubulares paralelas. Los cromosomas se
mueven al plano ecuatorial de la clula y cada uno queda unido a
las fibras del huso por su centrmero.


Anafase: Comienza cuando las cromatidas hermanas se separan,
cada una movindose a los polos opuestos. La separacin comienza
por el centrmero, que tambin se divide cuando cada cromatida
se mueve.

Telofase: La membrana nuclear se vuelve a organizar alrededor de
cada ncleo hijo, los cromosomas se desarrollan y el nuclolo
reaparece y la membrana celular se estrangula en la parte media
del huso (citocinesis), originando dos clulas idnticas.


III. Material y mtodos:

Material biolgico:

bulbo de la cebolla con raicillas

Reactivos:

Acido actico al 50%
Orcena actica al 1%
Fijador alcohol acido
HCL 10%
Alcohol etlico solucin salina al 0,7%
Azul de lactofenol
Solucin de glucosa

Material de vidrio y otros :

Tubos de ensayo
Vasos de precipitado
Mondadientes
Gradillas
Papel filtro
Placas petri
Microscopios compuestos y estereoscopios
Laminilla
Lunas de vidrio
Pinzas
Bistur
Mechero de alcohol
Agujas

IV. Procedimiento:

- OBSERVACIN DE MITOSIS EN CLULAS VEGETALES (ALLIUM SEPA)

1. Obtener raicillas de cebolla de la siguiente manera: Las raicillas de
cebolla se obtienen colocando una semana antes de la prctica,
un bulbo de cebolla sin catfilas externas y quitndole todas las
raicillas secas, en la parte ecuatorial se introducen 3 o 4
mondadientes distribuidas equidistantemente para suspender el
bulbo en la boca de un vaso con agua corriente, permitiendo que el
liquido se ponga en contacto con el disco germinativo, para permitir
la emisin de nuevas races.











2. Con un bistur realizar un corte transversal de 2 a 3 raicillas entre los 2
o 3mm del extremo apical, obtenindose as una muestra por cada
raicilla.











3. Colocar las muestras obtenidas en una placa petri conteniendo el
fijador (acido actico al 50%) por un tiempo mnimo de 5 minutos (5
a 30 minutos).







4. Trasladar la muestra a una luna de reloj y agregarle orcena cida
actica en cantidad suficiente para cubrir la muestra.






5. Realizar el calentamiento utilizando mechero de alcohol hasta la
emisin de vapores, luego se deja enfriar por 5 minutos.










6. Repetir el calentamiento utilizando dos veces ms.

7. Colocar la muestra en el centro de lmina porta objetos, agregar
una gota de colorante. La orcena tie de manera permanente los
tejidos y la piel por lo que hay que tener cuidado en su manejo, y no
deben respirarse los vapores que se desprenden durante la tincin y
el calentamiento, para lo cual debe mantenerse la cabeza alejada
y el brazo extendido. Asimismo, debe ponerse varias capas de papel
de filtro al aplastar para evitar mancharse el dedo, ya que adems
de teir puede irritar levemente la piel al tener actico y clorhdrico.





8. Colocar una laminilla cubre objetos.

9. Con un lpiz de grafico golpee el cubre objetos en forma
concntrico de adelanto hacia fuera.

10. Con un papel filtro eliminar el exceso de colorante.

11. Cubrir la lamina preparada con papel filtro y presione fuerte con el
pulgar el cubre objeto.

12. Observar con objeto de mediano y mayor aumento.











13. Identificar las fases de la mitosis y graficarlos.

Profase:




Metafase











Anafase






Telofase








V. Cuestionario

1. Cul es la accin del acido actico sobre las clulas de las
races?

Reblandecer la lmina media de la pared de las clulas que
se encuentran en las races de la cebolla, es decir, ablanda
los tejidos de un cuerpo para poder as, ver con mayor
facilidad las diferentes fases de la mitosis.
2. Cul es la fase mittica mas frecuente?

La Profase, ya que si esta fase no existiera no se podra llegar
a las dems fases.


3. Qu sucede en la profase de la mitosis?

Se inicia la formacin del huso acromtico. Los cromosomas
se visualizan como largos filamentos dobles, que se van
acortando y engrosando. Cada uno est formado por un par
de cromtidas que permanecen unidas slo a nivel del
centrmero. En esta etapa los cromosomas pasan de la forma
laxa de trabajo (eucromatina) a la forma compacta de
transporte (paracromatina). La envoltura nuclear se fracciona
en una serie de cisternas que ya no se distinguen del RE, de
manera que se vuelve invisible con el microscopio ptico.
Tambin los nuclolos desaparecen, se dispersan en el
citoplasma en forma de ribosomas.