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FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGA

QUMICO FARMACUTICO BILOGO

BIOLOGA CELULAR LABORATORIO

PRACTICA # 1
MICROSCOPIA


INTEGRANTES
JAZMN LEYVA VILLAVICENCIO
ALMA PAMELA PALACIOS CASTILLO
GUADALUPE RUIZ HERNNDEZ
JESSICA LIMN CASTILLO
SANDRA BELN ZARATE SNCHEZ



UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR
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INTRODUCCIN
El microscopio es un instrumento ptico para observar de cerca objetos
extremadamente diminutos. (DRAE)
La invencin del microscopio fue uno de los grandes avances tecnolgicos de los
siglos XVI y XVII que abri las puertas hacia un mundo insospechado. (Flores,
2004).
Todo comenz con el desarrollo de los antejos para ayudar a la vista cansada, lo
cual sucedi en el 500 a. n. e. en China. Luego estos fueron remodelados en 1285
en Italia. Posteriormente, se mejoraron las lupas y se construy el microscopio, el
cual se utiliz con una clara intencin de explorar y estudiar lo relativamente
pequeo, estos artefactos podan hacer que las cosas se vieran 40 veces ms
tarde. (Curtis, 2000)
Entre 1590 y 1600, los hermanos holandeses Hans y Zacharias Janssen,
fabricantes de lentes, construyeron los primeros microscopios compuestos,
formados por dos lentes unidos mediante un tubo, las cuales permitan ver los
objetos varias veces ms grandes que su tamao original. Usaron sus respectivos
microscopios para observar insectos y plantas. (Biggs, 1999)
El holands Anton van Leeuwenhoek aprendi a montar las lentes en marcos
metlicos y por esta razn se considera el inventor del microscopio simple. Su
ventaja fue que este microscopio era pequeo y tena solo una lente, aunque esto
no le permita aumentar tanto la imagen como el microscopio compuesto, poda
llevarlo a todos lados y observar todo lo que quera en cada lugar que visitaba.
(Miller, 2010).
El microscopio ptico est constituido por tres sistemas: el mecnico, el de
iluminacin y el ptico:
El sistema mecnico consiste en un armazn que sostiene el sistema ptico
del aparato. El soporte debe ajustarse a la funcin de la parte ptica, para
mantener el ocular y el objetivo libres de distorsin o vibracin. El brazo
lleva las unidades pticas y los mecanismos para el enfoque. La platina, es
la pieza en la que se coloca la preparacin y de una pieza cilndrica o tubo,
en cuya parte superior esta el ocular. Para alejar y acercar el tubo a la
platina, se encuentra el tornillo micromtrico y micromtrico.
El sistema de iluminacin est formado por condensador, el diafragma y
lmpara. Todos estos nos ayudan para poder iluminar la preparacin.
El sistema ptico est constituido por el ocular y los objetivos. Estos
aumentan la imagen que el objetivo produce. (Villee, 2002)

OBJETIVO
Aprender a utilizar correctamente cada parte del microscopio ptico, y tener
conocimiento de sus funciones y aplicaciones en Biologa celular.
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METODOLOGA

Manejo del microscopio.
Se identificaron las partes del microscopio. Y se sealaron el funcionamiento de
cada una de ellas.
Medicin de microorganismos con el uso del micrmetro.
Se coloc una de las preparaciones fijas y se enfoc en el microscopio a 10X y
40X. Se realizaron las mediciones de cada uno de los microorganismos,
considerando que cada una de las lneas de la reglilla del micrmetro corresponde
a 0.01 mm. Se Esquematizaron y se anotaron cada una de las mediciones.
Conteo celular.
1. Se Agito suavemente el tubo con la muestra de sangre y centrifugo a 1200
rpm durante 10 minutos.
2. Despus de este tiempo, se formaron 3 capas:
*La primera corresponde al plasma.
*La segunda a las clulas blancas.
*La tercera a los eritrocitos.
3. Se decantaron las primeras 2 capas y la tercera, se re suspendi en PBS
0.1M (8.0 g de NaCl, 0.2g de KCl, 1.44 g de fosfato de sodio dibsico
anhidro, 0.24 g de fosfato de potasio monobsico, disolver en 800 mL y
ajustar a 1000 mL con agua destilada, ajustar pH a 7.4).
4. Se hizo una dilucin 1:10 (5 L de suspensin celular en 45 L de PBS).
5. Se re suspendi con una micropipeta y tomar los 50 L dejando caer 2
gotas en el tubo y la tercera en el hemocitmetro.
6. Se observ al microscopio y si la muestra se encontraba muy concentrada,
se realizaba una dilucin 1:50 (1 L de suspensin en 40 L de PBS).
7. Se realiz el conteo de clulas utilizando los cuadros de los extremos del
hemocitmetro, o bien, contar los 4 cuadros.
8. Calculamos el nmero de clulas totales por mL. Utilizando la siguiente
frmula:


# de clulas totales/mL=(# clulas contadas)(dilucin)(Volumen en mL)(10
4
)
(# de cuadros)



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DIAGRAMA DE FLUJO




Microscopia
Manejo
Medicin de
microorganismos
Identificacin
de partes
Funcionamiento
de las mismas
Conteo celular
Colocacin
preparaciones fijas
Se enfocan a
10X, 40X.
Mediciones de
microorganismos
Agitacin del tubo de sangre
y centrifugacin a 1200 en
10 min.
Formacin de tres capas:
Plasma, clulas blancas,
eritrocitos
Decantacin de las primeras
2 capas y la tercera,
suspensin de PBS 0.1 M
Dilucin 1:10
Utilizacin del hemocitmetro
Observacin al microscopio
Conteo clulas
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RESULTADOS
Primero realizamos la observacin de clulas en el microscopio ptico de algas,
un mosquito, crustceo y posteriormente de sangre para realizar el conteo de
clulas de esta sangre.











1.- Alga de agua dulce
Se observa sus clulas ovaladas y su radcula de cada muestra de alga de agua
dulce.






Ilustracin 2. Alga agua dulce a resolucin 10X Ilustracin 3. Alga agua dulce a resolucin 40X
Ilustracin 1. Microscopio ptico
Radcula
Clulas
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2.- Alga de agua salada
Se observa sus clulas ovaladas y su radcula (ilustracin 4), y en la ilustracin 5
su retcula.

Alga de agua salada








3.- Crustceo
Se observ a una resolucin de 10X , no se realiz la vista en resolucin de 40X
debido a que se vea borroso y era muy difcil de apreciar.






Ilustracin 4. Alga de agua salada a resolucin 10X
Ilustracin 5. Alga de agua salada a resolucin 40X
Ilustracin 6. Crustceo a resolucin 10X
Radcula
Clulas
7

4.- Mosquito
Se observ el mosquito a 2 diferentes resoluciones como es a 10X y 40X y cmo
podemos ver en resolucin 10X (ilustracin 7) se puede apreciar su fmur, su
abdomen, sus alas y su cabeza; en la resolucin 40X (ilustracin 8) solo
apreciamos una parte de su abdomen y su glndula.












Posteriormente realizamos la observacin de clulas en la sangre (1:100,
conteniendo 0.5 l de sangre y 199.5 l de PBS), utilizando la cmara de
neubauer para poder observarla detalladamente en sus 4 cuadrantes y poder
llegar al conteo de estas clulas de la sangre (eritrocitos) + PBS.








Ilustracin 7. Mosquito a resolucin 10X Ilustracin 8. Mosquito a resolucin 40X
Glndula
Fmur
Abdomen
Alas
Cabeza
Ilustracin 9. Cmara de neubauer
8












Conteo de clulas con la frmula:

# de clulas totales/mL= (# clulas contadas)(dilucin)(Volumen en mL)(10
4
)
(# de cuadrados)

# de clulas totales/mL= (46 clulas contadas) (1000)(.5 mL)(10
4
)
(16 cuadros)

# de clulas totales/mL= 625 celulas/mL

DISCUSIN
Se logr distinguir cada parte del microscopio y cada funcin de las mismas,
teniendo como base estos conocimientos logramos observar las diferentes
muestras como fueron el alga de agua dulce, el alga de agua salada, el crustceo
y el mosquito en sus diferentes resoluciones 10X, 40X y 100X pero en estas
muestras no necesitamos utilizar la resolucin 100X ya que en las resoluciones
10X y 40X se pudo observar bien las muestras sin necesidad de utilizar 100X y
aplicar el aceite de inmersin para poder observar la muestra. En la ilustracin 10
e ilustracin 11 se pudo observar la muestra de sangre en los cuadrantes de la
cmara de neubauer y se realiz el conteo de las clulas para obtener un nmero
total de clulas y fueron 625 clulas/mL.

Ilustracin 10. Observacin microscpica de cmara de
neubauer en sus 4 cuadrantes
Ilustracin 11. Un cuadrante de la cmara de neubauer
Eritrocitos
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CONCLUSIONES
El microscopio es vital en la aplicacin de la biologa celular, se pudo observar
varias muestras a diferentes objetivos dando as una amplia variedad de clulas y
conociendo cada caracterstica de cada muestra.
En base a sus caractersticas del microscopio, tiene para dar una mejor
observacin ptica y obtencin de imgenes aumentadas requeridas de sus
partculas diminutas que a simple vista resultan invisibles.

CUESTIONARIO
1.- Mencione los diferentes tipos de microscopios, cul es su funcionamiento y las
diferencias entre cada uno de ellos.
Florescencia: se convierte en una herramienta de inestimable valor para la
investigacin cientfica, ya que permite alcanzar altos niveles de
sensibilidad y resolucin microscpica, permitiendo una apreciacin
diferente de la informacin que se puede obtener de los especmenes y que
generalmente pasa desapercibida. La fluorescencia es un fenmeno de
luminiscencia que fue observado inicialmente por Sir George Stokes en el
ao 1852.
ptico: El microscopio es un instrumento que nos permite observar objetos
que no vemos a simple vista porque son demasiado pequeos.
Invertido: La fuente de luz y el condensador estn sobre la plataforma
apuntando hacia abajo. Los objetivos y la torrecilla estn debajo de la
plataforma apuntando hacia arriba. Las nicas cosas que estn en
disposicin corriente son el tubo binocular o trinocular, as mismo la
muestra es colocada sobre la plataforma o platina mecnica.
Aunque un microscopio electrnico tiene gran significado en la
magnificacin y resolucin de la muestra, ste requiere que el espcimen
sea completamente preparado, conduciendo a que cualquier tipo de vida en
la muestra no sobreviva.
Contraste de fases: En microscopa, al crear interferencias en la luz
empleada para iluminar el espcimen se creaban condiciones que
producan un incremento del contraste. El principio es semejante al de
campo oscuro; se ilumina la muestra con un cono hueco de luz pero mucho
ms estrecho. Se emplea un filtro en forma de anillo que disminuye la
intensidad de la luz y al mismo tiempo provoca un retraso o desfase en la
longitud de onda de la luz. Este mtodo induce variaciones sutiles en el
ndice de refraccin de los especmenes translcidos permitiendo visualizar
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una riqueza de detalles muy finos en la estructura, los cuales pasaran
desapercibidos con una iluminacin de campo claro.
Estereoscopio: Este microscopio tiene la particularidad de ensear
imgenes estereoscpicas, es decir en tres dimensiones. Para lograr este
efecto, es necesario que ambos ojos observen la imagen desde ngulo
levemente diferentes. Para poder observar imgenes en tres dimensiones
es indispensable que el microscopio sea binocular.
Electrnico: es el mejor mtodo adaptado al estudio de la morfologa de las
superficies. A diferencia de un microscopio ptico que utiliza fotones del
espectro visible, la imagen entregada por el SEM se genera por la
interaccin de un haz de electrones que "barre" un rea determinada sobre
la superficie de la muestra.
2.- Enlista las aplicaciones del microscopio ptico
Ocular: es la lente a travs de la cual se observa.
Tubo: tiene al ocular en uno de sus extremos, y al objetivo en el otro;
permite la formacin de la imagen.
Revlver: semejante al tambor de un revlver, permite intercambiar los
objetivos
Objetivo: lente que enfoca al objeto. Los objetivos pueden ser de diferente
aumento (pequeo, mediano, grande...) Su nmero vara segn el
microscopio.
Platina: superficie en la que se apoya el preparado (que contiene el objeto
a observar).
Condensador: lente que concentra los rayos de luz que enva el espejo;
posee un diafragma que permite regular su abertura, y por lo tanto, la
cantidad de luz que ingresa.
Espejo: refleja la luz (natural o artificial) y la enva hacia el condensador.
Tiene dos caras, una plana (para reflejar la luz natural) y una cncava (para
cuando trabajamos con lamparita). Muchos microscopios actuales tienen
incorporada una lmpara, por lo que no poseen espejo.
Tornillo macromtrico: permite acercar y alejar tubo y platina, es decir,
acercar el objetivo al preparado o alejarlo, segn sea necesario.
Tornillo micromtrico: permite el ajuste fino de las lentes, lo que brinda
mayor nitidez a la imagen.
Brazo: sostiene el sistema ptico (tubo y lentes)
Base: permite apoyar el microscopio a la mesa de trabajo.



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3.- Qu es el hemocitmetro y cul es su importancia?

Un hemocitmetro es usado para determinar la concentracin de clulas en
suspensin. Estos aparatos fueron originalmente desarrollados para realizar
anlisis de sangre, son un tipo de cmara de conteo que determina el nmero de
clulas por unidad de volumen en suspensin. Esto puede ser usado para contar
casi cualquier tipo celular, incluyendo bacterias.
El hemocitmetro es usado en combinacin con un microscopio para contar el
nmero de clulas que aparecen en una grilla.

REFERENCIAS
Diccionario de la Real Academia de la Lengua Espaola, XXII edicin.
Flores, C., 2004, Biologa, 1 edicin, Mxico, Progreso.
Curtis, H., 2002, Biologa, 8 edicin, Buenos Aires, Editorial Mdica
Panamericana.
Biggs, A., 2000, Biologa: La dinmica de la vida, Mxico, Editorial Mc.
Graw Hill Interamericana.
Ville, C., 2002, Biologa, 15 edicin, Mxico, Editorial Mc. Graw Hill
Interamericana.
Miller, K., 2010, Biologa, E.U.A., Pearson.