TPN6

Acondicionamiento de material

INTRODUCCIN
En el trabajo del laboratorio de Microbiologa tienen importantsima aplicacin los procedimientos, tcnicas
y productos que suprimen o disminuyen la vitalidad de los microorganismos patgenos.
No existe un procedimiento de esterilizacin y desinfeccin aplicable a todos los casos.
El mtodo de esterilizacin ser seleccionado teniendo en cuenta la naturaleza fsica del objeto y la
naturaleza biolgica del contaminante. Como rara vez se conoce la poblacin de microorganismos sobre un
objeto que debe ser tratado, se debe presuponer que se encuentran presentes las formas microbianas ms
resistentes: las endosporas. Actualmente existen valores tabulados de tiempo de exposicin, temperatura y
concentracin de principios activos para los mtodos de esterilizacin ms usados que nos permiten elegir
el ms adecuado para cada caso. En la eleccin debe tenerse en cuenta tambin el uso posterior que le ser
dado (o no) al objeto a esterilizar.
Para asegurar el xito de un proceso esterilizante es necesario considerar las siguientes pautas:
1. Esterilizacin previa: Ser necesaria cuando el material y/ o equipos hayan sido utilizados con material
infeccioso o presunto infeccioso, por ejemplo placas de Petri inoculadas, tubos conteniendo cultivos de
microorganismos, etc. Sern esterilizados en autoclave a 1 atm de presin durante 15 30 minutos.
Para las pipetas, micropipetas y tubos de ensayo puede emplearse este mtodo o sumergirlas
inmediatamente despus de ser utilizadas en solucin desinfectante de formol al 10 % durante una hora.
2. Limpieza previa: Se realizar para eliminar las partes gruesas de suciedad o residuos no infecciosos
(grasitud, resto de pegamento, cinta adhesiva, carbono, tinta de rotulado, etc.). Se emplear el raspado con
esptulas, cepillo, esponjas metlicas, paos, etc. Se enjuagar repetidas veces bajo el chorro de agua
corriente a presin (conectando a la canilla un tapn perforado o tapando parcialmente con un dedo). Se
aconseja un ltimo enjuague con agua destilada. Se dejar secar en canasto o rejilla de alambre boca abajo
a temperatura ambiente o estufa a 60 80 C. El material de vidrio que luego de este tratamiento an
quedase manchado ser sumergido en una solucin sulfocrmica durante 24 horas. Posterior a ello se sigue
el procedimiento de enjuague sealado anteriormente La eficiencia del lavado se puede evaluar,
observando si el agua escurre en forma continua por su superficie interior, sin dejar gotas aisladas que
sealen un proceso de limpieza deficiente y hacer pruebas con azul de bromotimol para determinar trazas
del detergente.
Tener en cuenta que en general:
Cuando se trata de material contaminado, se deber esterilizar en autoclave a 121C, 1 atmsfera de
presin, durante 20 a 30minutos antes de someterlo al proceso de lavado. Para llevar a cabo el proceso de
lavado, se recomienda el empleo de detergentes biodegrables, neutros, que no dejen residuos, de
manera de no interferir con los resultados de los ensayos analticos. Se prepara una solucin a la
concentracin indicada para remojar el material por el tiempo necesario, siguiendo las instrucciones del
fabricante, posterior a ello se enjuaga con abundante agua potable hasta eliminar todo resto de jabn,
luego se enjuaga 2 3 veces con agua destilada, se deja secar en la estufa (de secado de material) a 60-80
C por el tiempo necesario y finalmente se procede a su acondicionamiento de acuerdo al mtodo de
esterilizacin a utilizar. Si se requiere limpiar material de vidrio que tiene manchas de grasa de difcil
remocin, se recomienda sumergirlo en una solucin de dicromato de sodio o potasio en cido sulfrico
concentrado (mezcla sulfocrmica) durante 24 horas,
Una vez que el material est limpio y seco debe ser esterilizado, para ello previamente deber
acondicionarse de manera que se pueda mantener estril hasta el momento de su uso.
El material que sirve de envoltura final, papel, debe tener las caractersticas siguientes:
Ser adecuado para el proceso de esterilizacin. Por ejemplo si va a ser utilizado para envolver un material
que va a ser esterilizado por calor hmedo, debe permitir la circulacin del vapor y a la vez deber ser
resistente a la humedad y la presin.
Ser resistente a pinchazos y abrasiones.
Permitir envolver el material completamente.
Permitir la identificacin del material estril.
Permitir retirar el material estril con facilidad.
Estar libre de colorantes y sustancias txicas
Ser econmico.
Entre los materiales que ms se emplean para envolver el material antes de su esterilizacin, se
encuentran:
Para la esterilizacin por calor hmedo: papel Craft o papel crep.
Para la esterilizacin por calor seco: papel Craft o papel de aluminio.

OBJETIVO del trabajo prctico
Al finalizar el trabajo prctico, el estudiante estar en capacidad de:
Preparar adecuadamente el material de vidrio a utilizar en un laboratorio de microbiologa, previo al
proceso de esterilizacin.

FUNDAMENTO
Al acondicionar adecuadamente el material de vidrio, se puede mantener su esterilidad hasta el momento
de su uso.

PROCEDIMIENTO

Preparar el siguiente material de vidrio:
Tubos de ensayo
1. Colocar a cada tubo una tapa plstica o de metal o una torunda de algodn con la ayuda de una varilla de
madera o vidrio. Los principales pasos para la elaboracin de tapones de algodn se describen a
continuacin:
Se corta una tira de algodn, de largo adecuado a las necesidades
Con una pinza de diseccin se prensa uno de los extremos.
Se enrolla el algodn en la pinza, de una manera que quede firme el enrollado.
2. Colocar los tubos preparados en una cesta destinada para tal fin.
3. Cubrir la cesta con papel Craft o aluminio y sujetar el mismo con pabilo.

NOTA: cuando se utiliza algodn para cubrir tubos, se debe tomar la precaucin de que ste pueda ser
manipulado con facilidad, para ello no debe quedar ni muy apretado ni muy flojo y debe alcanzar
aproximadamente 3 cm dentro del material de vidrio.


Pipetas

1. Colocar una pequea torunda de algodn en el extremo superior de la pipeta con la ayuda de un
alambre.
2. Envolver completamente con papel Craft, segn las siguientes indicaciones:
Se corta una tira de papel de aproximadamente 5 cm de ancho y 30 cm de largo.
Se dobla el extremo inferior aproximadamente 2 cm.
Se coloca la pipeta con la punta a la mitad del doblez anterior y con un ngulo de aproximadamente 25 -
30 grados de inclinacin con respecto a la posicin del papel.
Se le hace un segundo doblez , tapando la punta de la pipeta con la porcin de papel que sobresale a la
punta de la pipeta.
Se le hace un tercer doblez a la punta de la pipeta que queda en el ngulo de inclinacin de manera que
cubra completamente la punta de la pipeta.
Se da vuelta a la pipeta procurando que el papel vaya envolvindola en forma de espiral.
Verificar que el enrollado no quede flojo; en caso de estarlo, reafirmar el papel con respecto a la forma
de la pipeta.
En la parte superior, doblar hacia abajo el papel sobresaliente.
Cubrir con cinta adhesiva dicho doblez.
3. Rotular, por la parte externa del papel, la capacidad de la pipeta. Por ejemplo: 5 mL,
1 mL, etc.

Placa de Petri

Se corta papel dextrasa, de tamao adecuado se coloca la caja en el centro del papel.
Los bordes de los costados se unen al centro cubriendo la caja que se envuelven.
En la parte superior se unen los bordes de ambos lados y esta unin se dobla a la mitad.
Se hace un segundo doblez, quedando recargado ste sobre las cajas.
Al papel se le presiona a los costados quedando al relieve el volumen de las cajas envueltas
en el papel.
Se doblan las puntas del papel de cada una de las esquinas al centro.
Se le da vuelta al material, quedando el doblez hacia abajo.
Las puntas salientes del papel en los lados de las cajas se doblan hacia arriba y al centro de las cajas y se
les asegura con cinta adhesiva.

NOTA: Las pipetas, as como las placas de Petri, se pueden envolver individualmente de la manera indicada,
o se pueden colocar en grupos, en recipientes metlicos especialmente diseados para tal fin, denominados
pipeteros y plaqueros respectivamente.

Una vez preparado todo el material de vidrio: Esterilizar .