Ao De La Inversin Para El Desarrollo

Rural Y La Seguridad Alimentaria

Determinacin de alfa-amilasa en la
Cebada





ESPECIALIDAD: Ingeniera Ambiental y Seguridad Industrial.


CURSO : Bioqumica


DOCENTE : Cesar Torres Daz


ALUMNAS :
Vega Pea, Eliabeth Caroline
Reyes Calle, Gabriel


CICLO : III




SULLANA 2013



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INDICE
Indice________________________________________________________1
Introduccion____________________________________________________2
Objetivos_______________________________________________________3
Las enzimas____________________________________________________4
Caractersticas de las enzimas______________________________________5
Estructura enzimtica_____________________________________________6
Factores que afectan la accin enzimtica____________________________7
Nomenclatura y clasificacin de las enzimas___________________________8
Cuadro de clasificacin de las enzimas_______________________________9
Importancia biomdica de las enzimas_______________________________10
Deficiencia por falta de enzimas____________________________________11
Amilasa_______________________________________________________12
Alfa-amilasa___________________________________________________13
Propiedades y usos de la cebada___________________________________14
Propiedades de la cebada________________________________________15
Propiedades medicinales_________________________________________16
Mtodos parar determinar el alfa amilasa____________________________17
Determinacin de alfa-amilasa en la cebada__________________________19
Conclusiones__________________________________________________23
Bibliografia____________________________________________________24




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INTRODUCCION
En la presente monografa explicaremos detalladamente el concepto de
enzimas, su clasificacin y como punto especifico la determinacin de alfa-
amilasa en la p Cebada. Adems las caractersticas de esta fruta en cuanto a
su valor nutricional, aplicacin medicinal e industrial.
Las enzimas son protenas complejas que producen un cambio qumico
especfico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a
descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda
usar. La coagulacin de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.
Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se
encuentran en cada rgano y clula del cuerpo, como en: La sangre, los
lquidos intestinales, la boca (saliva), el estmago (jugo gstrico)
Se inici con el estudio de los procesos de fermentacin y de putrefaccin y
Antoine-Laurent Lavoisier (1743- 1794) fue el primero en plantear sobre bases
cuantitativas el proceso de la fermentacin alcohlica al observar una relacin
entre cantidad de azcar presente y productos formados durante el proceso.
Sostuvo que la fermentacin poda ser considerada como una
reaccin qumica cualquiera. No obstante Pasteur demostr pronto que los
procesos de putrefaccin y fermentacin eran provocados por la presencia
de bacterias y levadura.
Si bien algunos qumicos consideraron esos procesos como metamorfosis de
sustancias que provocaban excitaciones en otras que estaban cerca de ellas,
esta cuestin fue, como ya se ha dicho, definitivamente resuelta por Buchner
hacia finales del siglo XIX; exprimiendo masas celulares de Saccharomyces
cerevisie obtuvo un liquido sin clulas, capaz de producir la mismas reacciones
qumicas que se obtenan utilizando la suspensin de clulas, es decir, la
transformacin del azcar en alcohol y anhdrido carbnico. Por tanto, de la
levadura se poda extraer una sustancia capaz de regular un proceso
qumico concreto.


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OBJETIVOS


Aprender las caractersticas de las enzimas

Conocer los Factores que afectan la accin de la enzima

Aprender sobre las Deficiencias por falta de enzimas

Conocer las propiedades y usos de la cebada

Determinar el alfa-amilasa en la cebada

Manejar el tema de la determinacin de alfa-amilasa en la cebada de
una manera rpida y sencilla







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LAS ENZIMAS

Las enzimas son catalizadores. La mayora son protenas. (Unos enzimas
ribonucleoprotein se han descubierto y, para algunos de ellos, la actividad
cataltica se encuentra en la parte de ARN en lugar de la parte de la protena.
Enlace a la discusin de estas ribozimas).Las enzimas se unen temporalmente
a uno o ms de los reactivos - el sustrato (s) - de la reaccin que catalizan. De
este modo, reducen la cantidad de energa de activacin necesaria y por lo
tanto acelerar la reaccin.
La enzima es antibacteriana porque degrada el polisacrido que se encuentra
en las paredes celulares de muchas bacterias. Esto se hace mediante la
catlisis de la insercin de una molcula de agua en la posicin indicada por la
flecha roja (un enlace glucosdico).
















El rasgo particular de las enzimas es que pueden catalizar
procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la
propia vida, sin el empleo de sustancias lesivas para
los tejidos. La vida es, en sntesis, una cadena de procesos
enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos
los materiales mas simples, como el agua (H2O) y el
anhdrido carbnico (CO2), presentes en los vegetales para la
formacin



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I.- CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS

Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la
velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por
los organismos vivos.

Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las
complejas y variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales.

Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente
especficos que:
Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras
distintas son las que van a sufrir los cambios.
Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda
seguir una sustancia, cual de ellos en especial, ser el utilizado.













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II.- La estructura enzimtica

Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las
enzimas esta vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar
del origen de la vida se ha citado el xito de los experimentos realizados en el
laboratorio para la produccin de aminocidos; estos aminocidos son los que
precisamente constituyen la base del edificio proteico. Tambin en el
laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a partir de aminocidos.
La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen
una amplia gama enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a
travs de reacciones qumicas complejas y encadenadas transforman
compuestos inorgnicos, como el agua, y el anhdrido carbnico, en sustancias
complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento fundamental de los
animales.
En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones que
determinan importantes fenmenos de oxido reduccin, durante los cuales se
forman notables cantidades de ATP, que es un compuesto altamente
energtico del que depende la mayor parte de metabolismo, y coma, por
tanto el trabajo de las clulas; en las mitocondrias se produce el metabolismo
enzimtico de los cidos grasos, los cuales son en parte elaborados tambin
en el citoplasma.
En los ribosomas tiene lugar concretamente todas las sntesis de las sustancias
proteicas, mientras que en los lisosomas se producen enzimas hidrolticos
cuya misin escindir, con la intervencin del agua, molculas grandes en otras
menores, que pueden a su vez ser utilizadas por las clulas; en cambio, las
enzimas glucolticos estn difundidos en el citoplasma.



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III.- FACTORES QUE AFECTAN LA ACCIN DE LA ENZIMA:


La actividad de las enzimas se ve fuertemente afectado por los cambios en el
pH y la temperatura. Cada enzima funciona mejor a un cierto pH (grfico de la
izquierda) y la temperatura (grfico de la derecha), la disminucin de su
actividad a valores por encima y por debajo de ese punto. Esto no es
sorprendente teniendo en cuenta la importancia de la estructura terciaria (es
decir, la forma) en funcin de la enzima y fuerzas no covalentes, por ejemplo,
las interacciones inicas y enlaces de hidrgeno, en la determinacin de esa
forma.












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IV.- NOMENCLATURA Y CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

Las enzimas se clasifican en seis grupos principales, correspondientes por sus
trminos a las raciones que cada enzima ejerce sobre el sustrato. Estos grupos
se subdividen en otro, segn el tipo de sustrato y los tomos concretos que son
sensibles a sus acciones.

Oxido-reductasas: Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y
las reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los
procesos de respiracin y fermentacin.
Las Transferasas: Estas enzimas catalizan la transferencia de una
parte de la molcula (dadora) a otra (aceptora).
Las Hidrolasas: Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las
grandes molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las
grasas y las protenas.
Las isomerasas: Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es
decir, de idntica formula emprica pero con distinto desarrollo.
Las Liasas: Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces
entre tomos de carbono, o bien entre carbono y oxigeno, carbono y
nitrgeno, y carbono y azufre.
Las Ligasas: Es un grupo de enzimas que permite la unin de dos
molculas, lo cual sucede simultneamente a la degradacin del ATP,
que, en rigor, libera la energa necesaria para llevar a cabo la unin de
las primeras.







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GRUPO ACCIN EJEMPLOS
1. Oxido-reductasas Catalizan reacciones de
oxidorreduccin. Tras la accin
catlica quedan modificados en su
grado de oxidacin por lo que debe
ser transformado antes de volver a
actuar de nuevo.
Deshidrogenasas
Aminooxidasa
Deaminasas
Catalasas

2. Transferasas Transfieren grupos activos (obtenidos
de la ruptura de ciertas molculas) a
otras sustancias receptoras. Suelen
actuar en procesos de
interconversiones de azucares, de
aminocidos, etc.
Transaldolasas
Transcetolasas
Transaminasas
3. Hidrolasas Verifican reacciones de hidrlisis con
la consiguiente obtencin de
monmeros a partir de polmeros.
Suele ser de tipo digestivo, por lo que
normalmente actan en primer lugar
Glucosidasas
Lipasas
Peptidasas
Esterasas
Fosfatasas
4. Isomerasas Actan sobre determinadas molculas
obteniendo de ellas sus ismeros de
funcin o de posicin. Suelen actuar
en procesos de interconversion
Isomerasas de azcar
Epimerasas
Mutasas
5. Liasas Realizan la degradacin o sntesis
(entonces se llaman sintetasas) de los
enlaces denominados fuertes sin ir
acoplados a sustancias de
alto valor energtico.
Aldolasas
Decarboxilasas
6. Ligasas Realizan la degradacin o sntesis de
los enlaces fuertes mediante el
acoplamiento a sustancias ricas en
energa como los nucleosidos del ATP
Carboxilasas
Peptidosintetasas



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V.- IMPORTANCIA BIOMDICA DE LAS ENZIMAS


Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Igual que la biocatlisis
que regula la velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiolgicos, las
enzimas llevan a cabo funciones relacionadas con salud y la enfermedad. En
tanto que, en la salud todos los procesos fisiolgicos ocurren de una manera
ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados patolgicos, esta
ltima puede ser perturbada de manera profunda.
Por ejemplo, el dao tisular grave que caracteriza a la cirrosis heptica pueden
deteriorar de manera notable la propiedad de las clulas para producir enzimas
que catalizan procesos metablicos claves como la sntesis de urea. La
incapacidad celular para convertir el amoniaco txico a urea no txica es
seguida por intoxicacin con amoniaco y por ultimo coma heptico. Un conjunto
de enfermedades genticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo
mortales, proporciona otros ejemplos dramticos de las drsticas
consecuencias fisiolgicas que pueden seguir al deterioro de la actividad
enzimtica, inclusive de una sola enzima.
Despus del dao tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio o pulmonar,
trituracin de un miembro) o siguiendo a multiplicacin celular descontrolada
(por ejemplo, carcionoma prosttico), las enzimas propias de tejidos
especficos pasan a la sangre. Por lo tanto, la determinacin de estas enzimas
intracelulares en el suero sanguneo proporciona a los mdicos informacin
valiosa para el diagnostico y el pronostico.





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VI.- DEFICIENCIA POR FALTA DE ENZIMAS


La ausencia de enzimas es responsable de muchas enfermedades. En los
seres humanos, una enfermedad trgica llamada fenilcetonuria (PKU), que
causa retraso mental grave e incluso la muerte en los nios, es el resultado de
la ausencia de un tipo de enzima. La enfermedad de Tay-Sachs es un
resultado igualmente trgica de una deficiencia enzimtica. Provoca retraso
mental, parlisis, y muchas veces la muerte en la niez temprana si no se trata.

Nuestra capacidad de alterar las enzimas mediante la inhibicin de sus
capacidades funcionales ha dado lugar a cientos de medicamentos que salvan
vidas. Un ejemplo es la penicilina, un antibitico bien conocido que puede curar
la sfilis, la neumona, y otras enfermedades. La penicilina acta de unin a los
sitios activos de las enzimas que causa la enfermedad de las bacterias, en
ltima instancia, destruir la capacidad de las bacterias para sobrevivir y
reproducirse.


















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AMILASA

La amilasa es una enzima que descompone el almidn abajo en azcar . La
amilasa est presente en humanos la saliva , donde comienza el proceso
qumico de la digestin . Los alimentos que contienen mucho almidn pero
poco de azcar, tales como el arroz y la patata , un sabor ligeramente dulce a
medida que se mastican ya que la amilasa convierte parte de su almidn en el
azcar en la boca. El pncreas tambin hace amilasa (alfa amilasa) para
hidrolizar almidn de la dieta en disacridos y trisacridos que se convierten
por otras enzimas de la glucosa para suministrar energa al cuerpo. Las plantas
y algunas bacterias tambin producen amilasa. Como diastasa , amilasa fue la
primera enzima para ser descubierto y aislado (por Anselme Payen en
1833). Amilasa especfica de protenas se designan con diferentes letras
griegas. Todas las amilasas son glucsido hidrolasas y actan en -1, 4 -
enlaces glicosdicos .

USOS:
Amilasas encuentran uso en panificacin y para descomponer los azcares
complejos, como el almidn (que se encuentra en la harina), en azcares
simples. Levadura entonces se alimenta de estos azcares simples y los
convierte en los productos de desecho del alcohol y CO
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. Esto imparte sabor y
hace que el pan suba. Mientras amilasas se encuentran naturalmente en las
clulas de levadura, se necesita tiempo para que la levadura para producir
suficiente cantidad de estas enzimas para descomponer grandes cantidades de
almidn en el pan. Esta es la razn para masas fermentadas larga tales como
masa agria. Tcnicas de panificacin modernos han incluido amilasas (a
menudo en forma de cebada malteada ) en mejoradores de pan , lo que hace el
proceso ms rpido y ms prctico para el uso comercial.



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ALFA-AMILASA ()
Alfa amilasa es una enzima que ayuda en la descomposicin del almidn a
maltosa. A hidroliza lpha-amilasa enlaces entre glucosa se repite. Los
hidratos de carbono y azcares son las principales molculas de
almacenamiento de energa utilizadas por los organismos vivos. Las plantas
almacenan la energa del sol en azcares mediante la fotosntesis .
El nombre oficial de Alfa amilasa es 1,4-aD-glucano glucanohidrolasa; EC
3.2.1.1. Los nombres oficiales de los enzimas son mantenidos por
una comisin de nomenclatura de las enzimas .
Alfa amilasa se descompone el almidn mediante hidrlisis para liberar
maltosa. El almidn es una molcula compleja hecho sobre todo en las plantas
y bacterias. Se compone de dos tipos de polisacrido amilosa y amilopectina.






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PROPIEDADES Y USOS DE LA CEBADA

La cebada es un cereal altamente recomendable, dada sus excelentes
propiedades teraputicas y nutricionales, sobretodo en primavera-verano ya
que nutre, relaja y refresca el hgado y la vescula biliar. Se ha de incluir la lista
de cereales de uso regular aunque a menudo es "la gran omitida". Con esto
quiero decir que se suele ensalzar los beneficios del arroz, por ser el cereal
ms equilibrado, del mijo por su gran aporte energtico o de la quinoa (aunque
no sea un cereal) por su ligereza y digestibilidad, pero se suele a menudo
olvidar la cebada. Vamos a ver que la cebada nada tiene que envidiar a las
caractersticas citadas.

I.- CARACTERSTICAS NUTRICIONALES
La cebada es muy buena fuente de inositol, sustancia considerada durante
mucho tiempo como vitamina del grupo B. El inositol evita la rigidez de los
capilares, es tnico cardaco, regula el colesterol, evita la acumulacin de grasa
en el hgado, protege el sistema nervioso y combate ansiedad y depresin. La
cebada tambin posee vitaminas del grupo B, cido flico, colina y vitamina K.

En materia de minerales, la cebada es buena fuente de potasio, magnesio y
fsforo, pero su mayor virtud es la riqueza en oligoelementos: hierro, azufre,
cobre, cinc, manganeso, cromo, selenio, yodo y molibdeno. Esto la convierte en
alimento ideal para estados carenciales y para el proceso de crecimiento.






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La cebada es el cereal mejor dotado de fibra (17%) y sobre todo en materia de
fibra soluble (beta glucanos). Esta fibra retarda el ndice de absorcin de la
glucosa y reduce la absorcin de colesterol. Adems la cebada posee otras
sustancias benficas, como los lignanos, antioxidantes y protectoras del
cncer.

II.- PROPIEDADES DE LA CEBADA
Gran cantidad de propiedades tiene la cebada: es emoliente, reconstituyente,
digestiva, diurtica, desintoxicante, tnica, ligeramente vasoconstrictora,
antiinflamatoria, laxante, alcalinizante, antisptica, mineralizante y galactagoga
(incrementa la produccin lctea). Es un cereal muy digerible si est bien
cocinado. Estimula el sistema neurovegetativo, siendo aconsejado como tnico
nervioso y cardiaco. til tanto para el trabajo fsico, como para la tarea
intelectual.











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III.- PROPIEDADES MEDICINALES

Tambin se utiliza la semilla como medicinal.

Adems de nutritiva sus
principales propiedades son: antiespasmdica, algo astringente,
digestiva, antifebril.


Se utiliza para tratamiento de tos irritativa, digestiones pesadas,
deficiencias en la secrecin de jugos digestivos, irritaciones digestivas,
enfermedades febriles. Combate el estreimiento en general por su
contenido en fibra, especialmente si se utiliza el grano entero.

La horchata de cebada, que no es otra cosa que el agua que queda de
la coccin de la cebada, y que contiene almidn, resulta til en el
tratamiento de hidratacin de personas con vmitos y diarreas.

Su uso es indicado para las personas que sufren de retencin de
lquidos, ya que la cebada, al mismo tiempo que es refrescante hace
orinar.

Uso externo: Se utiliza la harina de cebada para mezclarla con otras
hierbas para la preparacin del cataplasma para aliviar la hinchazn
causada por golpes.




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MTODOS PARAR DETERMINAR EL ALFA AMILASA

La necesidad de determinar la actividad de enzimas amilolticas en productos
como harina, malta y otros, ha hecho desarrollar varios mtodos analticos que
miden, ya sea cambios fsicos o transformaciones qumicas, producidos por las
enzimas sobre substratos seleccionados. Entre estos mtodos se cuenta el de
Lintner, el de la maltosa y el SKB (Sandstedt, Kneen, Blish) (64).

Mtodo de Lintner: Mide principalmente la actividad de la beta-amilasa
de malta o de jarabes y se basa en producir maltosa por un infuso de
malta, haciendo actuar una solucin de enzima en solucin tampn, bajo
condiciones estndares de tiempo y temperatura. Los grados de Lintner
se calculan a partir del poder reductor o contenido de maltosa del
almidn convertido, determinado ya sea por el ferricianuro o por la
solucin de Fehling (41). Los grados de Lintner, multiplicados por el
factor 4, dan el equivalente en maltosa.














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Mtodo de la Maltosa: Se basa en suspender 10 g de harina en 46 ml
de solucin tampn de pH 4,5-4,8 e incubar por 1 hora a 30C. Esto
permite que la enzima presente en la harina acte sobre el almidn y lo
convierte en maltosa, la que se determina por el mtodo del ferricianuro.
El valor de maltosa se define como los mg de maltosa producidos por 10
g de harina bajo las condiciones ya sealadas.
La maltosa puede tambin determinarse por el mtodo de Munson y
Walker, usando la reaccin de Fehling I, 11, o bien por titulacin
yodomtrica de Cu no, reducido a (41).

Mtodo de Sandstedt, Kneen y Blish (64): Mide la dextrinizacin de un
preparado de alfa-amilasa en trminos de tiempo de digestin, requerido
para producir un cambio de color que refleja la completa dextrinizacin
del almidn. La modificacin al mtodo original consiste en medir la
dextrinizacin en presencia de exceso de beta-amilasa para eliminar los
efectos variables de beta-amilasa presente en el extracto de malta:
Los resultados se expresan en unidades arbitrarias SKB y representa el
nmero de g de almidn soluble que bajo la accin de exceso de beta-
amilasa son dextrinizados por 1 g de malta en 1 hora a 30C. El punto
final se compara con una solucin de yodo-dextrina de color rojo pardo.



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DETERMINACIN DE ALFA-AMILASA EN LA CEBADA

Objetivos:

1- Presenciar la accin de la alfa - amilasa en las semillas de cebada a travs
de un marcador molecular.

2- Estudiar y comparar la accin alfa - amilasa en semillas y extracto.


Materiales y mtodos:

2 placas petri(con gel almidn 1% y agar 1%)
2 micropipetas( 20-50uL y 1000uL)
Bistur
2 tubos falcon
Lugol 10%
Semillas previamente tratadas
Lugol 10%
Buffer

Procedimiento:

1.- En un comienzo se prepar la solucin correcta de lugol (estaba al 40% y se
necesitaba solucin al 1%). Luego se cortaron 6 semillas ya congeladas y
tratadas por la mitad rpidamente para que no ganen calor. Se procedi a
introducir cuidadosamente por el lado cortado en una de las placas con gel.

2.-Se dej reposar por 35 minutos y se procedi incorporar la solucin de lugol
10%. Esta parte se realiz rpidamente y se lavo inmediatamente con agua.







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3.- Las semillas ya tratadas previamente y homogeneizadas en buffer
son centrifugadas a 8.000 rpm en una centrfuga refrigerada por 20 minutos. Se
extrae el sobrenadante y se calienta a bao Mara a 70C por 15 minutos.
Luego se enfra en hielo. Una vez precipitadas las protenas se centrifuga a
8.000 rpm por 5 minutos el sobrenadante.
4.- Se elimina el precipitado de la solucin resultante y el sobrenadante se
adiciona a las placas petri con gel en los pequeos orificios previamente
hechos al gel.

5.-Por ltimo se procedi a realizar los mismos pasos que en 1, es decir, una
vez transcurrido el tiempo, se introduce rpidamente el lugol al gel y se lava
inmediatamente con agua.

Resultados:


a) Placa con gel (almidn 1% y agar 1%) y expresin de alfa-amilasa unida a
semillas.

Se observa claramente definida, al ser incolora, la pate del gel donde se
encontraban las semillas, en comparacin al total del gel que qued color azul
por accin del lugol.


b) Placa con gel (almidn 1% y agar 1%) y expresin de alfa-amilasa extrada
en solucin

Se denota la misma diferencia de colores que en a) pero con una pequea
circunferencia azul en el lugar donde estaban los orificios que contenan la alfa
-amilasa.









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Discusin:

Como se introdujo, la alfa-amilasa es una enzima que hidroliza polisacridos,
como el almidn, degradndolos en monosacridos como la glucosa. En el
proceso de germinacin de las semillas aumenta el desarrollo de esta enzima
por ende su actividad se ve reflejada en la alta tasa de desaparicin del
almidn.

Como segundo punto importante podemos nombrar la participacin del lugol en
el experimento, que es el de reconocimiento de hidratos de carbono
especficamente en forma de polisacrido, tiendo el lugar donde ste se
encuentre pasando de un color casi transparente a azul-violceo.
Estas aseveraciones explican lo ocurrido en las dos etapas del prctico, ya que
stas trataban de demostrar la existencia y eficacia de la -amilasa, solo que la
primera mostraba la alfa-amilasa en un estado in vivo y la otra extrada en
solucin, diferencindose estas solo en la velocidad de accin. Como en las
dos se utilizaron semillas en estado inicial de germinacin exitista una alta
actividad de la alfa-amilasa, hecho que es confirmado en la primera etapa ya
que la enzima, ya que la actividad de las proteasas por efecto de calor son
mnimas, aun en las semillas, degrado el almidn de las placas, donde fue
expuesta, en un periodo de 35 min.

Al depositar las semillas partidas a la mitad y la solucin contenedora de -
amilasa sobre los geles en las distintas placas ocurre la degradacin lenta e
inmediata respectivamente del almidn, hidrolizndose este en monosacridos,
luego para demostrar esta accin, se agrego lugol en toda la placa, tiendo
este la totalidad del gel a excepcin de los lugares donde actu la -amilasa
debido a que ya no exista almidn sino monosacridos como glucosa.

Dentro del mtodo en base al cual se realiz el practico se debi llevar la
solucin contenedora de la enzima a un bao mara que posea temperatura
constante de 70C ya que la alfa-amilasa se desnaturaliza a dicha temperatura
quedando a nuestra disposicin solo la -amilasa, la cual necesita
temperaturas mayores para desnaturalizarse. Tambin debemos acotar el uso
de las centrifugas dentro de congeladores ya que las proteasas (enzimas que
degradan protenas) son inactivas a temperaturas bajas.






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2do mtodo:
La -amilasa cataliza la hidrlisis del 2-cloro-4-nitrofenil-maltotrisido (CNP-G3)
a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP). La concentracin cataltica se determina a partir
de la velocidad de formacin del 2-cloro-4-nitrofenol, medido a 405 nm1,2,3.

COMPOSICIN
A. Reactivo: 5 x 20 mL. MES 50 mmol/L, cloruro de calcio 5 mmol/L, cloruro de
sodio 300
mmol/L, tiocianato de sodio 450 mmol/L, CNP-G3 2,25 mmol/L, pH 6,1.

CONSERVACIN
Conservar a 2-8C.
El Reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
siempre que se conserve bien cerrado y se evite la contaminacin durante su
uso.
Indicaciones de deterioro:
Reactivo: Presencia de partculas, turbidez, absorbancia del blanco superior
a 0,500 a 405nm (cubeta de 1 cm).

PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
El Reactivo est listo para su uso.









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CONCLUSIONES


Las Funciones de las enzimas, se entrelazan y se pliegan una o ms
cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos
para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde
se realiza la reaccin. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si
sus formas no encajan con exactitud. Este hecho asegura que la enzima
no participa en reacciones equivocadas.

Dentro de los Factores que incluyen las reacciones enzimticas
tenemos: Cambios en el pH, Cambios en la temperatura, Presencia de
cofactores, Las concentraciones del sustrato y de los productos finales,
Activacin, Costes, Disponibilidad

La cebada es un cereal altamente recomendable, dada sus excelentes
propiedades teraputicas y nutricionales,

La cebada es muy buena fuente de inositol, sustancia considerada
durante mucho tiempo como vitamina del grupo B, adems contiene
cido flico, colina y vitamina K.

La cebada estimula el sistema neurovegetativo, siendo aconsejado
como tnico nervioso y cardiaco. til tanto para el trabajo fsico, como
para la tarea intelectual.







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BIBLIOGRAFIA

http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/E/Enzymes.html

http://www.monografias.com/trabajos5/enzimo/enzimo.shtml

http://www.wisegeek.org/what-are-enzymes.htm

http://www.princeton.edu/~achaney/tmve/wiki100k/docs/Amylase.html

http://science.marshall.edu/murraye/alpha_amylase.htm

http://agnesmacrobiotica.blogspot.com/2012/03/propiedades-y-usos-de-
la-cebada.html

















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ANEXOS

Enzimas:



















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Cebada:









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Usos de la cebada: