PROGRAMA DE TRABAJOS PRCTICOS

TRABAJO PRCTICO N 1.
A. Trabajo de laboratorio: Mostracin de microfotografas electrnicas de virus.
Observacin microscpica de monocapas normales e infectadas con virus Herpes
simplex. En la medida de lo posible, los alumnos realizarn coloraciones de Giemsa
en monocapas previamente infectadas no infectadas con virus. !aracterizacin del
efecto citoptico viral.
B. Di!"i#$: !onceptos de bioseguridad profilaxis post"exposicin. M#todos de
diagnstico virolgico rpido$ inmunofluorescencia indirecta, E%&'(, aglutinacin,
)!*, determinacin de &gM especfica. !omparacin con los m#todos de
diagnstico clsicos. 'eroconversin. +oma de muestras, envo al laboratorio.
Proble%a &ara er di!"tido e$ el TP 1:
Proble%a 1.1.
,asado en$ M"rria et al. '1(()*. A Morbilli+ir" t,at !a"ed -atal dieae i$ ,ore
a$d ,"%a$. S!ie$!e ./0:(12(3
En la -ltima primavera, en una caba.a de una zona rural surge un brote epid#mico
caracterizado por una infeccin respiratoria aguda en caballos, /ue al cabo de 0 semanas
mata a 12 de los 01 caballos afectados. El centro nacional de sanidad animal no logra
identificar el agente causal de esta enfermedad. 'e lo consulta a 3d como m#dico
cuando dos criadores de dic4a caba.a se ven afectados, presentando s-bitamente un
cuadro de dificultad respiratoria progresiva, /ue se acompa.a de un sndrome gripal
elevada temperatura. +ras ser 4ospitalizados fallecen en la unidad de terapia intensiva.
%as autopsias revelan una severa neumona intersticial 5cuadro sugestivo de infecciones
virales del tracto respiratorio6. !omo una etiologa viral parece evidente el laboratorio
realiza sucesivas pruebas diagnsticas para todos los virus conocidos, siendo el
resultado negativo en todas las ocasiones. 'e especula /ue podra tratarse de un nuevo
virus emergente. (nte esto, responda las siguientes preguntas$
1. 7!mo determinara la causa infecciosa de esta enfermedad8
0. 'iendo /ue usualmente el primer paso para estudiar un virus es tener un sistema
donde replicarlo, 7/u# estrategias podran implementarse para lograr un sistema
/ue permita 4acer /ue el supuesto virus pueda multiplicarse8 7!ules son las
consideraciones /ue deberan tomarse respecto de las normas de bioseguridad
para el traba9o a desarrollar en el laboratorio8
:. 7!mo podra determinarse /ue en el sistema dise.ado en el punto anterior se
encuentra el agente en cuestin8
2. 'uponiendo /ue el virus en cuestin puede replicar, 7/u# caractersticas del
virus deberan determinarse para asignar en principio, su clasificacin a trav#s
de /u# procedimientos8.
Proble%a 1...
,asado en$ Rodr45"e6 Bo"la$7 E.7 Sabati$i7 D. '1(30* A8%%etri! b"ddi$5 o-
+ir"e i$ e&it,elial %o$ola8er: A %odel 8te% -or t"d8 o- e&it,elial &olarit8
Pro!. Natl. A!ad. S!i. 9SA 3): ):312):3)*.
)ara estudiar la brotacin de algunos virus envueltos, se infectaron cultivos de las lneas
celulares M;!<, M;,< !4E= con los virus >'> 5 de la estomatitis vesicular, no
4umano6, &> 5&nfluenza6 '> 5'endai, un )aramixovirus6, con una multiplicidad de
infeccin de 1 3=)? c#lula. ;oce 4oras despu#s los cultivos fueron fi9ados procesados
para microscopa electrnica de transmisin empleando cortes ultrafinos.
!aractersticas de las lneas celulares$
(" MDC;$ cultivo de c#lulas epiteliales de ri.n de perro 5polarizadas6.
," MDB;$ cultivo de c#lulas epiteliales de ri.n de vaca 5polarizadas6.
!" C,E<$ lnea celular de estirpe fibroblstica originada en embriones de pollo 5no
polarizadas6.
*esultados$ 'e es/uematiza lo observado luego de la infeccin$
En base a lo observado, responda a las siguientes preguntas$
1. 7El sitio por el /ue brota la progenie viral luego de replicarse en el interior de
una c#lula esta predeterminado8. =undam#ntelo por s o por no.
0. 7@u# caracterstica de la c#lula es fundamental para /ue 4aan ocurrido los
fenmenos observados8
:. 7'e anima a plantear una 4iptesis del mecanismo de este proceso8. 7@u#
implicancias en la patog#nesis viral podran ser consecutivas a este fenmeno
estos resultados8
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TRABAJO PRCTICO N.
(. Trabajo de laboratorio: Observacin de preparados con monocapas celulares
infectadas con deteccin de antgenos virales por inmunoperoxidasa. En lo posible,
los alumnos realizarn una t#cnica de deteccin de antgenos virales por
inmunoperoxidasa. Mostracin de microfotografas de inmunofluorescencia.
,. Di!"i#$: M#todos de diagnstico virolgico en infecciones respiratorias. *ese.a
de los virus ms frecuentemente involucrados. M#todos de diagnstico virolgico en
infecciones con puerta de entrada ent#rica. *ese.a de infecciones por virus
productores de diarreas, 4epatitis ( E enterovirus. +omas de muestras, envo al
laboratorio, m#todos de diagnstico e interpretacin de resultados.
Proble%a &ara er di!"tido e$ el TP .
Proble%a ..1.
3n ni.o de A meses de edad tiene fiebre, anorexia, irritabilidad dificultad respiratoria
con tos, ta/uipnea signos de obstruccin de la va a#rea inferior, compatible con un
cuadro de bron/uiolitis.
1. 7En /u# agentes etiolgicos pensara8
0. 7!ules son los mecanismos patogen#ticos de esta enfermedad8 7)uede
relacionarlos con los datos clnicos8
:. 7@u# muestra es la apropiada para obtener un diagnstico etiolgico de
certeza8.7!mo debe ser transportada la muestra8.7!mo la procesar el
laboratorio de >irologa o de Microbiologa8
2. 7!ree 3d /ue es importante la realizacin de un diagnstico virolgico de
certeza8. 7)or /u#8.
B. 7@u# valor diagnstico tiene, en este caso, la deteccin de anticuerpos
especficos en el suero8
Proble%a ....
En 1B1C, en Europa se registr una epidemia de &nfluenza. En 1D1A volvi a ser
detectada esta enfermedad en Espa.a, luego se disemin caus la muerte de 01
millones de personas. En 1D:: fue aislado el virus /ue la provocaba en 1DBC se
prepar la primera vacuna. ( pesar de ello la OM' 5Organizacin Mundial de la 'alud6
intensifica permanentemente la vigilancia en sus centros centinelas$ Estados 3nidos,
(ustralia, Eapn Gran ,reta.a, adems de otros grupos regionales.
El virus influenza del tipo ( se clasifica en distintos subtipos de acuerdo a sus
glicoprotenas de superficie, H( 5Hemaglutinina6 F( 5Feuraminidasa6, de las cuales
se conocen 1: D variantes respectivamente. ( su vez, estos subtipos agrupan distintas
cepas virales /ue son productos de cambios menores en estos antgenos de superficie.
!on la aparicin de cada nuevo subtipo la poblacin mundial se enfrent a una nueva
pandemia.
En el siguiente cuadro se especifican el a.o, el subtipo causal, la magnitud de cada
pandemia producida$
A>O ?IR9S SIT9ACION EPIDEMIO@OGICA
1D1A H1F1 )andemia de elevada magnitud
1DBG H0F0 )andemia de elevada magnitud
1DHA H:F0 )andemia de moderada magnitud
1DGG H1F1 )andemia de discreta magnitud 5I6
5I6 %a poblacin principalmente afectada fue la nacida luego del a.o 1DBG.
(ctualmente coexisten los virus H:F0 H1F1, a diferencia de lo /ue se 4aba
observado anteriormente, cuando la aparicin de un subtipo coincida con la
desaparicin del anterior.
1. 7!mo explicara de acuerdo al cuadro la distinta magnitud de las pandemias8
0. 7!mo explicara la distribucin poblacional de la pandemia de 1DGG8
:. 7Existe alguna asociacin entre las variaciones del virus &nfluenza 5maores
menores6 la magnitud epidemiolgica de la afectacin8
En el perodo transcurrido entre las pandemias se produ9eron tambi#n brotes de
&nfluenza de distinta magnitud, producidos por cepas resultantes de cambios en los
antgenos de superficie$
2. 7!ree /ue esto tiene alguna importancia en la salud p-blica8
B. 7En /ui#nes estara indicada la vacunacin contra &nfluenza cada cunto tiempo
deberan recibir la vacuna8
H. En 1DHH en 1DDG en Hong <ong se desat una epidemia de gripe. 7!ul pudo ser
el origen del virus8 7!mo explica 3d. la emergencia de este tipo de virus en (sia8
Proble%a ..A.
3n paciente de 12 a.os de edad presenta un cuadro clnico compatible con
meningitis. 'e realiza una puncin lumbar para obtener una muestra de l/uido
cefalorra/udeo. El mismo es incoloro. 'e obtienen los siguientes resultados de los
exmenes fsico/umico, citolgico microbilogico$
En la tincin de Gram no se observa la presencia de
bacterias.
%a glucorra/uia es similar a la glucemia 5normal6.
Ha una leve 4iperproteinorra/uia.
Ha pleocitosis, con franco predominio mononuclear.
'e sospec4a una meningitis de etiologa viral. En consecuencia$
1" 7!ules seran las muestras adicionales /ue deberan tomarse8. 7!mo deberan ser
tomadas enviadas a un laboratorio de virologa8.
0" En /u# virus o grupo de virus pensara como agentes etiolgicos8.
:" 7@u# m#todos de diagnstico rpido puede utilizar el laboratorio de virologa para
llegar a un diagnstico de certeza8.
Proble%a ..1.
3n ni.o de 0C meses de edad presenta desde 4ace 2A 4s vmitos fiebre. El es/uema
de vacunacin del c4ico es completo , como dato adicional, la madre refiere /ue
concurre a un 9ardn maternal 5guardera6, donde en los -ltimos das varios otros ni.os
tuvieron diarrea. +iene un 4ermano de 1 mes de vida, /ue se alimenta exclusivamente
con la lec4e materna. )reguntas$
16 !ules son los agentes etiolgicos a considerar en este caso8
06 @ue regin del tubo digestivo se compromete cul es la patogenia de la
enfermedad8
:6 Ha alguna forma de confirmar el diagnstico8
26 @u# riesgos corre el 4ermano del ni.o8 7Existe alg-n riesgo para el personal
profesional /ue lo asiste8
B6 7!mo es la prevencin de esta enfermedad8
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TRABAJO PRCTICO N A
A. Trabajo de laboratorio: M#todos de biologa molecular para el estudio de virus
5purificacin, )!*, digestiones enzimticas, fundamentos de secuenciacin6.
Mostracin de geles, columnas fotografas.

B. Di!"i#$: M#todos de diagnstico virolgico en infecciones con puerta de entrada
mucocutnea. *ese.a de infecciones por virus 4epatitis , ! por H&>,. +omas de
muestras, envo al laboratorio, m#todos de diagnstico e interpretacin de
resultados.
Proble%a &ara er di!"tido e$ el TPA
Proble%a A.1
3n paciente varn de :B a.os de edad, con antecedentes de adiccin a las drogas
intravenosas, consulta por ictericia alteracin del 4epatograma.
1. )lantee cul es su sospec4a clnica.
0. Enumere los posibles agentes etiolgicos.
:. 7@u# muestra tomara cmo la enviara al laboratorio para obtener un
diagnstico8
2. 7@u# estudios solicitara, /u# t#cnicas utilizar el laboratorio cmo se confirmara
un diagnstico de certeza8
B. 7!mo sera el patrn serolgico ante una infeccin por el virus de la 4epatitis ,8
Proble%a A..
3na mu9er H&> negativa /ueda embarazada de su pare9a /ue est infectada con H&>.
;urante el embarazo el post"parto se realizan estudios serolgicos /ue indican /ue la
mu9er no est infectada. %a madre realiza la lactancia durante tres meses en forma
normal.
(l cumplir los veinticuatro meses el beb# empieza a desme9orar se determina /ue
padece una infeccin pulmonar por Pneumocistis carinii. )osteriormente se lo
diagnostica como H&> positivo.
1. 7)or /u# va cree usted /ue el beb# ad/uiri la infeccin8. 7@u# otras vas de
transmisin vertical conoce8
0. 7!mo se lleg al diagnstico en el beb#8. 7!on /u# muestra8
:. 7)odra 4aberse evitado la infeccin8. 7@u# debi 4aber 4ec4o el m#dico8 7!mo
se realiza el diagnstico dentro de los 1A meses de edad8
2. 7!ul es la importancia de un diagnstico precoz de infeccin, tanto en la madre
como en el ni.o8
Proble%a A.A
3n paciente varn, de 01 a.os, consulta por un cuadro de malestar general, fiebre
odinofagia 5dolor al tragar6. En el examen fsico se encuentran poliadenopatas blandas
mviles dolorosas, algunas occipitales, 4epato"esplenomegalia faringitis no
exudativa. 'ospec4ando un cuadro de etiologa infecciosa se solicita al laboratorio
pruebas para b-s/ueda de agentes bacterianos asociados a faringitis con un 4isopado de
fauces, serologa para virus asociados a un cuadro de sndrome mononucleosiforme
5virus Epstein ,arr , en segundo t#rmino citomegalovirus6, serologa para H&>.
%os resultados son$
Hisopado de fauces$ flora 4abitual
%as pruebas para virus Epstein ,arr son negativasJ para citomegalovirus se
obtiene un resultado positivo para &gG especfica 5ttulo$ 0BH6 negativo para
&gM.
E%&'( para H&>$ reactivo d#bil 5apenas por encima del cut off6, aglutinacin de
partculas$ inespecficoJ Western blot$ &ndeterminado con presencia de
anticuerpos anti"p02 .
(nte estos resultados,
1. 7)uede obtener conclusiones diagnsticas8
0. 7@u# otros procedimientos diagnsticos podran usarse para esclarecer el estado de
infeccin respecto al H&>8
:. 7)or /u# debi realizarse el Western blot para H&>8 7@u# informacin obtiene de
esta determinacin8
2. @u# entiende por carga viral 8 !ul es el criterio /ue 3d. utiliza para solicitarla8
7!ules son las utilidades /ue son de importancia m#dica8
Proble%a A.1
3n paciente presenta un cuadro de ictericia, astenia malestar general /ue se autolimita
por lo cual no consulta al m#dico. (lgunos meses ms tarde luego de una donacin de
sangre se encuentra /ue es reactivo en una prueba de tamiza9e para H!>. !onsulta a un
m#dico /uien no indica conducta alguna, mientras se completan los estudios a /ue
supone /ue el paciente probablemente est# curado.
1. 7@u# investigan las pruebas de tamiza9e para H!>8 7Es de utilidad la deteccin
de &gM especfica8
0. 7!mo confirma el diagnstico serolgico8
:. 7@u# opina de la afirmacin de esa presunta curacin8
2. 7!mo evaluara la presencia de enfermedad activa en este paciente8
El paciente no 4a regresado a controlarse, pero H meses ms tarde consulta por/ue
nuevamente padece un cuadro similar.
B. 7!mo explica, desde el punto de vista de la patog#nesis viral, mediante los
distintos cursos probables de infeccin por este agente 5viremia en funcin del
tiempo6 la alternancia de perodos de /uiescencia clnica con otros sintomticos8
7@u# rol desempe.aran las cuasiespecies8
H. 7*ecomendara alg-n estudio adicional para conocer el pronstico de la
infeccin8
G. El paciente refiere estar en pare9a en forma estable lo consulta por medidas de
prevencin para su pare9a, 7/u# le recomienda8
KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK
TRABAJO PRCTICO N 1
Di!"i#$: M#todos de diagnstico virolgico en infecciones con puerta de entrada
mucocutnea$ Herpes simplex )apiloma. +omas de muestras, envo al laboratorio,
t#cnicas de diagnstico e interpretacin de los resultados.
Proble%a &ara er di!"tido e$ el TP 1
Proble%a 1.1.
En los siguientes resultados de pruebas serolgicas indi/ue el estado de infeccin , si
es posible, el pronstico del paciente$
a6 &gM (nti H(> L &gM (nti H,c (g " &gG (nti H,c (g L
b6 &gM (nti H(> " &gM (nti H,c (g " &gG (nti H,c (g L
c6 &gM (nti H(> " &gM (nti H,c (g " &gG (nti H,c (g L (g H,s "
(g H,e M (nti H,s (g L (nti H,e (g L
d6 &gM (nti >H( " &gM (nti H,c (g " &gG (nti H,c (g L (g H,s L
(g H,e L (nti H,s (g " (nti H,e (g M
e6 &gM (nti >H( " &gM (nti H,c (g L &gG (nti H,c (g " (g H,s L
(g H,e L (nti H,s (g " (nti H,e (g " (nti H!> L
f6 &gM (nti >H( " &gM (nti H,c (g " &gG (nti H,c (g " (ntiH,s L

5GB m3?ml6
g6 H,s(g L 5I6 H,e(g " anti"H,e " &gG anti"H,c$ L
;F( viral$ N1C
B
copias?ml
I 5en los -ltimos G meses6
Proble%a 1...
3na mu9er embarazada de tres meses estuvo en contacto con un paciente con rub#ola
4ace 0 das. Ella recuerda /ue durante su ni.ez un m#dico le 4aba diagnosticado
rub#ola tras un examen clnico. El m#dico pregunta si su sobrino presentaba erupciones
cutneas , de ser as, cunto tiempo 4aca /ue tena estas erupciones.
1. 7!mo obtendra el diagnstico de certeza de infeccin aguda por el virus rub#ola8
0. 7@u# medidas tomara en una mu9er embarazada al determinar /ue no es inmune a la
infeccin87%e dara la vacuna antirrub#ola87)or /u#8
:. 'eg-n el momento del embarazo en /ue se produce la primoinfeccin, 7cules son
las complicaciones /ue puede llegar a tener el feto8
2. 7@u# 4ara usted si la paciente presenta rub#ola8
Proble%a 1.A
En un examen ginecolgico de rutina se detecta una imagen colposcpica anormal en el
cuello uterino de una paciente de 0H a.os de edad. El gineclogo toma una muestra para
realizar un estudio citolgico , adems, una biopsia dirigida.
1. 7@u# virus pueden provocar lesiones en el cuello uterino8
0. El patlogo informa la presencia de coilocitos en la muestra citolgica. 7!on estos
resultados 3d. descartara un proceso maligno8
:. En la biopsia se observan coilocitos, papilomatosis, imgenes epiteliales Oen
empedradoP e infiltrado inflamatorio mononuclear. %a inmunomarcacin para H)>
es positiva. 7@u# pronstico le dira a la paciente /ue tiene su enfermedad8
2. 7Existen diferencias en el potencial oncog#nico del virus de acuerdo al genotipo
implicado8 7@u# otros factores contribuen a esta neoplasia8
B. Expli/ue brevemente la patog#nesis molecular del virus relacionada con la
transformacin celular.
Proble%a 1.1.
3na paciente de 00 a.os de edad presenta molestias prurito en la vagina. 'e observa
una ulceracin de base eritematosa en el c#rvix uterino el fondo de saco vaginal
posterior. )resenta, adems, adenopatas inguinales bilaterales leve disuria.
1. 7@u# agente etiolgico sospec4ara para esta localizacin para este tipo de lesin8
7!ul es su va de contagio8
0. 7@u# m#todos utilizara cules no utilizara para confirmar su presencia8
:. 7@u# papel 9uega la respuesta inmune celular la 4umoral en el desarrollo de esta
infeccin8
2. 'i la paciente estuviera embarazadaJ 7@u# riesgo 4abra para el feto8
Proble%a 1.).
3n paciente de AB a.os de edad presenta un dolor en el 4emittax derec4o /ue
comienza en la columna vertebral se irradia siguiendo el traecto del dermatoma.
En la piel de la zona dolorida 3d. (dvierte la presencia de mculas, ppulas
vesculas.
7!ul sera su diagnstico presuntivo8
Expli/ue /u# conducta asumira con fines diagnsticos 5toma de muestra,
determinaciones a solicitar6.
+eniendo en cuenta la patog#nesis viral, 7cmo explicara 3d. los intensos dolores /ue
refiere el paciente8
'i un ni.o de A meses de edad entrara en contacto con el paciente durante el perodo en
/ue este presenta vesculas en la piel,
1. 7/u# enfermedad podra contraer8.
0. 7cul sera la va de contagio8
:. 7/u# pronstico puede tener8
2. 7podra prevenirse esta enfermedad8.
KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK