Induccin de organognesis directa a partir de explantes de violeta (Saintpaulia ionantha) in

vitro.
Pazmio Andrs
, 1
, Armijos Gerardo
2
.
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales, Ingeniera en Biotecnologa, Departamento Ciencias de la vida, Escuela Politcnica Del
Ejrcito, Ecuador.13 de julio 2012. Email: and666_23@hotmail.com
1
, gerarexapunk@live.com
2

Resumen:
Saintpaulia ionantha es una planta considerada como extica y por tanto un alto valor
ornamental. Es una especie que se caracteriza por su facilidad para formar yemas o meristemos
radicales de cualquier parte de la planta. En este trabajo se aisl un 3 explantes de hoja y 3 del
peciolo, los cuales fueron sometidos a soluciones de desinfeccin de cloro al 1%, detergente al 1%,
seguido de 3 lavados continuos con agua estril. Para el medio de cultivo se us el medio MS
enriquecido con 0.8mg/L de tiamina, 0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de azcar y 7.5g/L de
agar. El pH se ajust entre 5.7 y 5.8.la siembra se realiz en la cmara de flujo, en condiciones
estriles. La incubacin se realiz a temperatura ambiente por una semana. Posterior al tiempo
requerido se observ contaminacin por bacterias y hongos en todo el medio. Este crecimiento
masivo tanto de hongos y bacterias sugiere una inadecuada prctica y desinfeccin por parte del
estudiante.
Palabras clave: organognesis, violeta, Saintpaulia ionantha
Introduccin:
Saintpaulia ionantha es una planta herbcea,
que presenta hojas en forma de rosetas,
carnosas. Presenta caractersticas especiales
como: la habilidad de florecer bajo luz
artificial y propagacin vegetativa durante
todo el ao. Adems es una planta
exuberante y extica por lo cual presenta un
gran valor ornamental (Kanchanapoom &
Sunpui, 2002; Edirights, 2009).
Su multiplicacin comercial es un factor para
ser tomada en el cultivo in vitro. El cultivo de
esta planta se la puede hacer por cortes
pequeos de hojas, presentando facilidad
para realizar organognesis directa
(Kanchanapoom & Sunpui, 2002; Dolce et al,
2004).
La organognesis directa es la formacin de
yemas o de meristemos radicales a partir de
explantes. De tal manera es altamente
deseable en la micropropagacin y de
conservacin de germoplasma para producir
un alto nmero de plantas en relacin a un
corto periodo de tiempo (Kanchanapoom &
Sunpui, 2002).
El cultivo in vitro de S. ionantha se realizado
de hojas, flores, anteras, subepidermis y
protoplastos con alto rendimiento, asi mismo
se ha extendido la variabilidad gentica.
Para conseguir esta organognesis estudios
han demostrado que concentraciones de
citoquininas, KIN, AIA y ANA han sido
efectivas en un 75% de otras especies de
plantas. En cuanto al medio se usan
frecuentemente los medios de Muranshige-
Skoog, White, Heller por citar algunos
(Kanchanapoom & Sunpui, 2002).
El trabajo se basa en la obtencin de yemas
o meristemos mediante organognesis
directa de S. ionantha en medio de MS
enriquecido con 0.8mg/L de tiamina,
0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de
azcar y 7.5g/L de agar.
Materiales y mtodos:
Preparacin del medio
El medio cultivo fue de Murashige y Skoog o
enriquecido con 0.8mg/L de tiamina,
0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de
azcar y 7.5g/L de agar. El pH se ajust entre
5.7-5.8
Desinfeccin
El material vegetal S. ionantha para la
obtencin del explante se utiliz las hojas y
el peciolo, las cuales se someti a diferentes
etapas de desinfeccin; que consisti en una
inmersin en una solucin de detergente al
1% por 30 segundos en agitacin constante.
El material vegetal se enjuago 3 veces con
agua estril. Seguido se coloc en NaClO al
0.5% (v/v) con 2-3 gotas/100ml de tween 20
por 15 min con agitacin constante. Dentro
de la cmara de flujo se realiz cinco
enjuagues con agua estril manteniendo la
muestra sumergida en el ltimo enjuague.
Siembra de S. ionantha
La siembra se realiz en un medio ambiente
totalmente estril y desinfectado. Para la
obtencin de los explantes de S. ionantha se
cort en dos secciones; hoja y peciolo.
De la hoja se elimin: los bordes de la hoja
daados por el NaClO y la nervadura
principal. La lamina foliar obtenida se
secciono en tres partes (basal, media y distal)
de los cuales se obtuvo 3 segmentos de ~0.5
cm por lado, que se colocaron en los frascos
con el medio, separados entre s.
El peciolo separado se cort y elimin la
base daada por el NaClO. A continuacin se
separ tres discos de ~2 mm de espesor y se
coloc en los frascos con el medio.
Finalmente se separ tres segmentos de ~1
cm de longitud, que se colocaron en los
frascos con el medio, separados entre s y en
posicin horizontal.
Los frascos con los explantes se incubaron
en la cmara de crecimiento a 25C.
Resultados y discusin:
Violeta africana (Saintpaulia ionantha) es
una planta que posee una gran cantidad de
vellosidades en sus hojas, por lo que puede
impedir la correcta desinfeccin de la
muestra debido a que esta es una barrera
fsica que no permite el acoplamiento de las
sustancias empleadas para este proceso (The
American Phytopathological Society, 2000).
Por ello se recomienda colocar una cantidad
representativa de tween por ser un agente
tesoactivo para solucionar este problema
(Roca, 1993).
Sin embargo aunque se agreg tween y se
pas por un proceso de desinfeccin, se
obtuvo contaminacin tanto para las
muestras de pecolo (3,4) como para las de
hoja (1,3), (Figura 1.), razn por la cual no se
pudo seguir con el experimento de induccin
a organognesis a partir de los explantes
mencionados pese a que Roca (1993),
menciona que la propagacin de la violeta
africana a partir de explantes de peciolo o
base foliar es fcil y reproducible.



Figura 1. Muestras contaminadas de violeta
africana (S. ionantha) en los medios de
cultivo.

Se observ tambin oscurecimiento de los
explantes que se atribuye a una reaccin de
oxidacin; lo que sucede en el
establecimiento in vitro de tejidos vegetales
de algunas especies de plantas. El cual se
caracteriza por oscurecimientos letales en los
explantes y en el medio de cultivo. Esto
constituye uno de los problemas ms serios y
frecuentes, desde el inicio y durante el
mantenimiento de un tejido cultivado in
vitro, (George, 1996).
Segn Yadav et al (1990), el problema de
oxidacin se puede disminuir reduciendo la
duracin del proceso de escisin y de
esterilizacin del explante o con la
sustitucin del agente desinfectante. En
algunas especies, este agente es el
responsable de acentuar el problema del
oscurecimiento.
Conclusiones:
- El uso de tween permite reducir las
barreras fsicas, tricomas, de violetas
africanas.
- El manejo y comportamiento del
operador frente al explante es de
suma importancia para reducir o
evitar la contaminacin del explante.
- Los daos provocados en los
explantes, como oxidacin o
necrosamiento son producto de un
tratamiento agresivo o mala
manipulacin en los tiempos de
desinfeccin.


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