Laboratorio de Inmunologa General

Semestre 2015-1
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EJERCICIO EXPERIMENTAL No I.
Identificacin de las clulas del sistema inmunitario en sangre total
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OBJETIVO
Identificar los diferentes componentes celulares de la respuesta inmune en sangre perifrica
humana a travs de sus caractersticas morfolgicas y de afinidad por colorantes.

CMO?
A travs de una tincin basada en la tincin de Romanowsky modificada por Wright que se
describe a continuacin:


MATERIALES
Microscopio ptico
Portaobjetos
Lanceta estril
Cronmetro
Torundas
Aceite de inmersin
Colorantes de DADE Diff-Quik .
Solucin fijadora: 1.8 g/L Triarilmetano en alcohol metlico
Solucin I: 1 g/L Xanteno
Solucin II: 1.25 g/L Thiazine (Mezcla de 0.625 g/L de azur A y 0.625 g/L de azul
de metileno)

TCNICA
1. Limpiar el dedo pulgar (de la mano que menos ocupe la persona voluntaria) con agua y
con jabn. Desinfectarlo posteriormente con alcohol.
2. Con la lanceta estril realizar una puncin en la parte apical del dedo de forma paralela a la
huella digital del dedo pulgar.
3. Depositar una gota de sangre de (aproximadamente 40 l) en un extremo de un
portaobjetos.
4. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del
portaobjetos de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre (monocapa). El
porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca por encima de ella para no daar
las clulas. Dejar secar a temperatura ambiente.


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5. Colocar el frotis de sangre sobre la bandeja de tincin.
6. Cubrir con 500 L de Diff-Quik Fixative (solucin fijadora) dejar actuar durante 1 minuto.
7. Escurrir la solucin e inmediatamente colocar 500 L de Diff-Quik Solucin I (Colorante
8. cido) y dejar actuar 30 segundos. . Escurrir la solucin e inmediatamente colocar 500 L
de Diff-Quik Solucin II (Colorante Bsico) y dejar actuar 60 segundos.
9. Lavar con agua.
10. Dejar secar aireando el portaobjetos
11. Observar al microscopio ptico con el objetivo de 40X y posteriormente a 100X utilizando
aceite de inmersin o aceite de blsamo de Canad.

OBSERVACIN MICROSCPICA

Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates o eritrocitos, no
tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes.
Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de
morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos:
1 Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que
ocupa casi todo el glbulo.
2 Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande,
redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis.
3 Polimorfonucleares: ncleo fragmentad. Pueden ser eosinfilos, con abundantes
granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos.

Con una adecuada tincin se conseguir los siguientes aspectos morfolgicos de las clulas:
1 Forma y dimisiones de la clula
2 Aspecto de la cromatina.
3 Citoplasma
4 Granulaciones


























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ANEXO 2


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Anexo 1


HEMATOPOYESIS