MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE

VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 1
MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACIN DEL QUITOSANO MEDIANTE LA
TCNICA DE VALORACIN CONDUCTIMTRICA
Alfredo Flrez Ariza, Dicson Vilela Vilela
RESUMEN
En el presente trabajo se presenta el procedimiento a seguir para obtener el grado de
desacetilacin (DD) del quitosano utilizando la tcnica de titulacin conductimtrica.
ABSTRACT
Is the procedure to follow to obtain the degree of deacetylation (DD) of chitosan using
conductometric titration technique in the present work.
1. INTRODUCTION
La quitina y quitosana se refieren a una
cadena de biopolmero con residuos de D-
glucosamina y N-acetil-D-glucosamina unidos
por enlaces B(14). De lo anterior queda
implcito que el peso molecular no es la nica
propiedad qumico-fsica que determina las
caractersticas de estas macromolculas.
Es decir, el grado de acetilacin -o
desacetilacin- es, tambin, un parmetro
muy importante a tener en cuenta al
momento de caracterizar estos biopolmeros.
En trminos generales, la solubilidad del
quitosano en soluciones cidas diluidas es el
criterio comnmente ms aceptado para
diferenciarla de una muestra de quitina.
En apartados anteriores, se han revisado los
principales mtodos analticos que han sido
desarrollados para determinar el contenido
de grupos N-acetilo en muestras de quitina y
quitosano. Para propsitos de anlisis de
rutina, el mtodo de la UV-primera derivada
brinda resultados muy buenos para muestras
solubles, mientras que la espectroscopia IR
contina siendo la opcin ms simple y
rpida cuando se trata de muestras de
quitina o quitosano en estado slido.
La resonancia magntica nuclear, por su
parte, adems de ser el mtodo ms preciso,
ofrece la ventaja adicional de brindar
informacin valiosa acerca de la secuencia de
ambos residuos glucopiransicos a lo largo
de la cadena polimrica. Ello es de suma
utilidad cuando, por ejemplo, se requiere
conocer el mecanismo de la de
polimerizacin qumica o enzimtica [1,2].
Puesto que el quitosano se obtiene mediante
una desacetilacin extensiva de la quitina
bajo condiciones heterogneas u
homogneas, hasta hace poco era aceptado
que, a lo largo de la cadena polimrica,
ambas unidades estructurales seguan un
ordenamiento en bloques o aleatorio segn
las condiciones experimentales empleadas
para la hidrlisis [3,4]. Sin embargo, estudios
recientes llevados a cabo en el Laboratorio
Noruego de Biopolmeros y por Sashiwa y
col. han demostrado que muestras de
quitosana desacetiladas heterognea u
homogneamente presentan una
distribucin aleatoria bernulliana de los
residuos acetilados o desacetilados [5,6,7].


MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE
VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 2
Por medio de una precipitacin fraccionada
de muestras de quitosana preparadas por va
heterognea, Ottoy y col. encontraron una
distribucin bimodal de la composicin, es
decir, una fraccin soluble en cido y otra
insoluble. La cantidad de la fraccin soluble
se increment con el tiempo de
desacetilacin, mientras que el grado de
acetilacin del material soluble disminua,
pero el de la fraccin insoluble permaneca
elevado y casi el mismo [8].
Estos resultados fueron ulteriormente
confirmados por experimentos conducidos
por Roberts [9]. Estos experimentos
consistieron de dos muestras con grado de
acetilacin similar (0,25 y 0,27) preparadas
mediante desacetilacin heterognea y por
una re-acetilacin homognea. Estas
muestras fueron, tambin, sometidas a un
fraccionamiento por precipitacin en funcin
del pH. Los resultados obtenidos por este
autor muestran que todas las fracciones de
la muestra preparada por la va homognea
tenan el mismo nivel de acetilacin, que era
similar al valor de acetilacin de la muestra
completa. En contraste, las fracciones de la
muestra desacetilada heterogneamente
mostraron una variacin significativa en el
valor de N-acetilacin. Por lo tanto, esos
resultados sugieren la existencia de una
polidispersin respecto del grado de
acetilacin entre las diferentes cadenas de
una muestra de quitina o quitosano. Una
conclusin importante que emerge de estos
resultados es el carcter promedio que
posee el valor del grado de acetilacin
medido para una muestra preparada
heterogneamente.
2. MATERIALES Y REACTIVOS
Para la Determinacin del grado de
Desacetilacin por Conductimetra, se
utilzarn un Conductmetro, Orin Modelo
142, una balanza analtica y material de
vidrio prex. Se deben utilizar tambin lso
siguientes reactivos: Quitosano en polvo,
adquirido de Sigma- Aldrich Chemistry, Inc,
USA; como Chitosan from crab shells > 75%
deacetilated. hidrxido de sodio en perlas,
adquirido en J.T. Baker, USA, cido
Clorhdrico concentrado cloruro de potasio
(P.A.), y cloruro de sodio.
3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
3.1 Determinacin de la constante de celda
Para esto se pesa 0,7419g de KCl y se
disuelve en 100mL de agua destilada en un
vaso de 150mL. Luego se sumerge la celda
conductimtrica, luego llevamos a una
temperatura de 18C.
Luego Se grada la constante de celda para
que la conductancia de esta solucin sea de
0,01117 S/cm, anotndose su valor.
3.2 Titulacin conductimtrica del quitosano
Se pesa 200mg de quitosano y se le adiciona
5mL de HCl 1.0 M, disolver la muestra
completamente. Seguidamente se le agrega
450mL de NaCl 0.001 M, y se lleva a agitacin
para lograr una solucin uniforme. Esta
solucin se titula conductimtricamente con
60mL de NaOH 0.1M estandarizado,
descargando 0.5mL de NaOH 0.1M, y
anotando las lecturas del conductmetro.
El grado de desacetilacin del quitosano est
relacionado directamente el porcentaje de
los grupos NH
2
, utilizaremos la siguiente
ecuacin:



MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE
VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 3
#Eq-g(R-NH
2
+
) = #Eq-g (NaOH)
Con lo cual:
%NH
2 =
[]



donde %NH
2
= DD.

4. CALCULOS
4.1. DATOS:
Despus de realizar la titulacin
conductimtrica con hidrxido de sodio, se
obtuvo la siguiente tabla:
Tabla N1
Conductividad (mS/cm) mL de NaOH
4.21 0
4.18 0.5
4.14 1
4.11 1.5
4.07 2
4.02 2.5
3.98 3
3.94 3.5
3.91 4
3.87 4.5
3.84 5
3.8 5.5
3.77 6
3.73 6.5
3.69 7
3.65 7.5
3.61 8
3.57 8.5
3.54 9
3.51 9.5
3.47 10
3.44 10.5
3.4 11
3.36 11.5
3.33 12
3.29 12.5
3.25 13
3.21 13.5
3.18 14
3.15 14.5
3.11 15
3.08 15.5
3.04 16
2.99 16.5
2.97 17
2.94 17.5
2.9 18
2.86 18.5
2.82 19
2.78 19.5
2.75 20
2.72 20.5
2.68 21
2.65 21.5
2.61 22
2.58 22.5
2.54 23
2.5 23.5
2.47 24
2.43 24.5
2.4 25
2.37 25.5
2.33 26
2.3 26.5
2.27 27
2.24 27.5
2.21 28
2.18 28.5
2.14 29
2.1 29.5
2.07 30
2.04 30.5
1.988 31
1.924 32


MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE
VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 4
1.796 33
1.739 34
1.675 35
1.614 36
1.55 37
1.5 38
1.469 39
1.465 40
1.471 41
1.474 42
1.482 43
1.486 44
1.491 45
1.496 46
1.502 47
1.513 48
1.566 49
1.595 49.5
1.614 50
1.635 50.5
1.659 51
1.682 51.5
1.701 52
1.718 52.5
1.737 53
1.755 53.5
1.774 54


4.2. CALCULOS:

Estandarizacin del NaOH:

Se obtuvo los siguientes datos:

V NaOH (mL) m KHP (g)
10.1 0.207
10 0.205

De la siguiente ecuacin reemplazando los
datos obtenidos :



Se obtiene:

N
1
:0.10036
N
2
: 0.10038

N
prom NaOH
: 0.10037 N





MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE
VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 5
Figura N1







Porcentaje de grupo amino:

De la siguiente ecuacin:

%NH
2 =
[]




donde %NH
2
= DD (Grado de Desacetilacin)

Dnde:

C
NaOH
: Normalidad del NaOH estandarizado
W
quitosano seco
: 0.200g
Y: Volumen de la interseccin de la recta B
y C.
X: Volumen de la interseccin de la recta A
y B.
16.1: constante que relaciona el peso
equivalente del quitosano

Reemplazando los datos obtenidos:

C
NaOH
: 0.0984 M
W
quitosano seco
: 0.200g
Y: 47.32 mL
X: 38.47 mL



%NH
2
= 71.5 %

5. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
[1] C. G. Allan, P. G. Jonson, Y . Z. Luy y K. V.
Sarkanen. Solubility and Reactivity of Marine
Polymers in Dimethylformamide of
Dinitrogen tetroxid e. Chem. Ind. 127
(1971).
y = -0.071x + 4.1856
R = 0.9993
y = 0.0057x + 1.2346
R = 0.981
y = 0.0405x - 0.4126
R = 0.9976
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
0 10 20 30 40 50 60
C
o
n
d
u
c
t
i
v
i
d
a
d
(
m
S
/
c
m
)

Volumen de NaOH(mL)
A:
B:



MEDIDA DEL GRADO DE DESACETILACION DEL QUITOSANO MEDIANTE LA TECNICA DE
VALORACION CONDUTIMETRICA
2014
U N I / F C / Q U I M I C A A N A L I T I C A I N S T R U M E N T A L I I

Pgina 6
[2] H. Nakahara, G. Bevelander y M. Kakei.
Electron Microscoytic and Amino Acid. 39,
205 (1982).
[3] G. L. Clark y A. F. Smith. J. Phss. Chem.
40,863 (1936).
[4] C. Jeuniaux. Arch. Int. Phssol, Biochem.
67, 516 (1959).
[5] L. Raymond, F.G. Morin v R.H.
Marchessault. Degree of Deacetylation of
Chitosan LJsing Conductimetric Titration and
Solid-State NMR, Carbohgdr. Res. 246, 331-
336 (193).
[6] M. Rinaudo, M. Milas y P. Le Dung.
Characterization of Chitosan. Influence of
Ionic Strength and Degree of Acetylation on
Chain Expansion .lnt. ]. Biol Macromol. 15,
28l-285 (1993).
[7] K Yamaguchi, S. Okada y L. Nur-E-
Borhan. Carotenoid Composition in the
Exoskeleton of Commercial Black Tiger
Prawn. Fsheries Science 60,213-215.
(1994).
[8] M. Yalpani. Chitin in Nature and
Technologg (R. A. A. Muzzarelli, C. Jeuniaux
and G. W. Gooday, Ed. Plenum, Nueva York,
1986) p.403.
[9] H. Struszczyk, J. AppI. Polsm. Sci. 33,
177 (1987).