Prctico Citologa Patologa I

El diagnstico citolgico es un mtodo ampliamente utilizado en la prctica

de animales pequeos. La gran difusin de su utilizacin se debe a su practicidad
ya que las muestras pueden tomarse en forma sencilla y rpida no siendo
necesaria la preparacin del paciente ni tampoco la utilizacin de anestesia. Por
otro lado, la tcnica para la toma de muestra no implica riesgos para el paciente.
Por ltimo, la citologa es una tcnica econmica ya que los insumos utilizados
para su realizacin son fcilmente hallados en el mercado y no son costosos.
Utilizando esta tcnica diagnstica es posible realizar una orientacin en el
diagnstico y establecer as en forma rpida una planificacin teraputica.
Toma de muestra
Todo diagnostico comienza con una buena toma de muestra si la muestra
no es adecuada no se puede realizar el examen microscpico. Por lo tanto es
necesario asegurarse de:
. Tomar una muestra representativa de la lesin.
. Asegurarse de identificar claramente la muestra y acondicionarla para el
envo al laboratorio.
. Llenar el protocolo con los datos completos del animal y el sitio donde fue
obtenida la muestra.
Existen diferentes formas de tomar las muestras para evaluacin citolgica. A
continuacin se describen las ms utilizadas.
1. Biopsia por aspiracin con aguja delgada ( BAAD)

Es la tcnica ms utilizada para la obtencin de muestras para evaluacin
citolgica. Esta tcnica es muy sencilla, no requiere instrumental ni preparacin
previa del paciente. Mediante esta tcnica se pueden tomar muestras de tumores
subcutneos, tumores de mama, realizar punciones de masas alojadas en
cavidades guindose por una radiografa, ecografa o bien por palpacin. Con esta
tcnica tambin pueden realizarse biopsias de rganos internos como rin,
pulmn, hgado, bazo.
Para realizar la puncin se emplea una jeringa de 5cc nueva y una aguja tipo 23G.
El material obtenido se coloca sobre un portaobjetos y se realiza un extendido de
manera tal que formar una monocapa celular en el frotis. Se seca al aire y no se
emplean fijadores qumicos

Figura 1: a) Se introduce la aguja. b) Se realiza presin negativa con el mbolo
de la jeringa. c) Se deja suavemente, que el mbolo regrese a su lugar. Luego se
reorienta la aguja y se vuelve a repetir la aspiracin varias veces. La muestra
obtenida queda dentro de la aguja. Se desacopla la aguja de la jeringa y se carga
la jeringa de aire. Se vuelven a acoplar y se descarga la muestra sobre un porta
objetos limpio y desengrasado.
Figura 2: Una vez que se descarga la muestra en el portaobjetos, se toma otro
portaobjetos y se realiza un extendido usando la tcnica de los extendidos de
frotis sanguneos. EI objetivo es lograr que las clulas se dispongan en una
monocapa. Se deja secar al aire sin agregar fijadores qumicos.

2. Hisopados
Los hisopados estn indicados para tomar muestras de lesiones ulceradas
y fstulas; tambin son muy utilizados para tomar muestras de epitelios de los
tractos digestivo, reproductor o de conducto auditivo. Los hisopados vaginales son
el mtodo de eleccin para la determinacin del celo en las hembras.
En este caso resulta conveniente tomar dos muestras. Una con hisopo con
estril que se coloca en medio de transporte hasta obtener los resultados de la
evaluacin citolgica. La otra muestra se toma con hisopo estril y se la extiende
sobre un portaobjetos haciendo girar suavemente el hisopo sobre el porta de
manera tal de no daar las clulas. Si el resultado de la citologa muestra
inflamacin sptica o mictica se puede realizar el aislamiento e identificacin del
agente en la muestra que qued de reserva en el medio de transporte.
3. Improntas
Se pueden realizar improntas de rganos o de tumores luego de una
extirpacin quirrgica. Es conveniente, antes de realizar la impronta, secar el
exceso de lquido con un papel absorbente de la superficie de la masa a
muestrear. Las improntas son muy importantes para la evaluacin de los ganglios
linfticos. Si se extrae un ganglio linftico, antes de colocarlo en formol para la
evaluacin histopatolgica. Es conveniente realizar una impronta y se remiten
ambas muestras (impronta y ganglio en formol) al laboratorio. En el caso de otros
rganos o masas tambin es conveniente remitir la muestra para histopatologa
junto con su impronta a los fines de que el patlogo pueda realizar un
acercamiento diagnstico rpido.
4. Colectas
Se pueden tomar muestras de colectas en cavidades. Esas son muy tiles y
en muchos casos se puede realizar el diagnstico con slo una muestra de lquido.
Se realiza una evaluacin fsico qumica del lquido y una evaluacin citolgica
del sedimento.
Para la puncin de cavidades es conveniente utilizar un abocath para no
ocasionar laceraciones en los rganos internos de las cavidades. Las muestras de
colectas deben tomarse con jeringa estril. Es conveniente tomar dos muestras,
una reservarla para cultivo y a la otra se le debe agregar 1 gota de EDTA por cada
9 cc de lquido y se la remite para evaluacin citolgica.
Puncin de trax se realiza e n el sptimo espacio intercostal a 1/3 hacia dorsal
de la unin costocondral.
Puncin de abdomen: Se realiza la puncin en lateral a la altura del ombligo.
Puncin de la cavidad articular: El lquido sinovial es abundante en las
alteraciones de -las articulaciones. La puncin est indicada para evaluar
reacciones inflamatorias spticas y aspticas.
Buena calidad de la preparacin.
Slo es posible realizar una adecuada interpretacin citolgica en una
muestra si esta cumple con dos requisitos.
1. La preparacin a evaluar debe contener una adecuada cantidad de clulas, la
mayora de las clulas deben estar intactas y buen distribuidas formando una
monocapa.
2. Los colorantes utilizados para teir la muestra deben ser de buena calidad. Es
recomendable gastar un poco ms en colorantes de marcas reconocidas.
Si estas pautas no se cumplen, la toma de la muestra y la coloracin deben
ser repetidas ya que intentar realizar un diagnstico en un frotis de mala calidad,
es frustrante y puede llevar a errores de interpretacin o brindar informacin
insuficiente.
EVALUACIN MICROSCPICA
Examen en 10X:
La evaluacin inicial se realiza con bajo aumento (objetivo de 10X). La
observacin con este aumento se realiza recorriendo TODO el frotis para :
Seleccionar reas que luego se observarn con mayor aumento.
Evaluar la distribucin celular y el tipo de clulas presentes.

Es muy importante recorrer toda la preparacin porque de otro modo, se
corre el riesgo realizar una evaluacin incompleta. Con este aumento se puede
identificar la presencia de estructuras micticas y clulas neoplsicas.
En este punto se realiza la clasificacin inicial de la muestra verificando si la
muestra corresponde a una lesin de tipo inflamatorio o de tipo tumoral. Siguiendo
el algoritmo que se muestra en la figura 3.

Si en la muestra hay slo clulas inflamatorias o bien no hay clulas la clasificacin
resulta ms fcil seguir con la evaluacin. Lo mismo ocurre cuando se encuentran slo
clulas tisulares. Pero en algunos casos la poblacin celular es mixta y est compuesta por
infiltrado inflamatorio y otras clulas, esto ocurre porque las lesiones neoplsicas atraen
gran cantidad de clulas inflamatorias especialmente cuando existe necrosis en la masa
tumoral.


2. PATRONES CITOLGICOS DE INFLAMACIN.
Las clulas inflamatorias que se pueden hallar en una preparacin son:
neutrfilos, macrfagos, linfocitos, clulas plasmticas, eosinfilos y en forma ocasional
pueden encontrarse clulas gigantes multinucleadas.
En cualquier proceso inflamatorio, los neutrfilos son las clulas ms abundantes
Si la muestra es compatible con una lesin de tipo inflamatoria, el prximo paso es
determinar las proporciones relativas de los distintos tipos de clulares, esto se hace para
establecer el tipo de inflamacin y la duracin del proceso.
1. Inflamacin aguda neutroflica
Las preparaciones en las cuales se observa que la mayora de las clulas son
neutrfilos, indican una inflamacin supurativa. La causa ms comn de este tipo de lesin
es la infeccin bacteriana, pero puede haber otras causas. El paso siguiente es establecer si
el proceso inflamatorio supurativo es o no bacteriano.
La clave para diferenciar entre inflamacin supurativa sptica de no sptica es
reconocer neutrfilos con cambios degenerativos, que indican sepsis, de neutrfilos sin
cambios degenerativos que indican inflamacin no sptica.
Los cambios degenerativos son inducidos por las bacterias y por las sustancias
citotxicas producidos por los mismos neutrfilos. Los cambios degenerativos consisten
en: Ncleos ms claros y tumefactos y citoplasma vacuolizado. Hay evidencias directas e
indirectas de sepsis:
* Indirectas: cambios degenerativos en los neutrfilos.
* Directas: Visualizar bacterias intracelulares.
Cuando se ven neutrfilos con degeneracin se debe sospechar de la presencia de
bacterias y el paso siguiente es buscarlas con el objetivo de 100x se observa
cuidadosamente dentro del citoplasma de los neutrfilos para hallarlas. Las bacterias
extracelulares pueden ser contaminantes. Con los colorantes hematolgicos todas las
bacterias se tien de color azul. Una excepcin son las especies de Micobacterium.

Figura 4 Clulas inflamatorias con predominio de neutrfilos ( 10X)

Figura 5. Imagen con objetivo de 100X de la figura 4. Se observa la presencia de
bacterias intracitoplasmticas.
2. Inflamacin eosinoflica
Cuando un frotis tiene una elevada ms del 20% de eosinfilos, est
indicando que la muestra es compatible con una inflamacin eosinoflica. La
interpretacin vara segn el tipo de muestra, pero este tipo de infiltrado es
indicativo de procesos inmunoalrgicos o parasitarios. Este tipo de infiltrado se
aprecia tambin en los granulomas eosinofilicos, reacciones a cuerpo extrao e
infecciones micticas. Tambin es posible hallarlos junto a mastocitos en muestras
provenientes de mastocitomas.
3. Infeccin granulomatosa
En este tipo de infiltrado, se observan tanto neutrfilos como fagocitos
mononucleares, aproximadamente el 25 % de las clulas son fagocitos
mononucleares. Este tipo de preparado indica una respuesta crnica que puede
ser ocasinada por distintas causas.
Los mononucleares son clulas grandes que pueden confundirse con
clulas neoplsicas. Se observan tambin fibroblastos reactivos pero estn
presentes en poca cantidad. Este tipo de respuesta celular es ocasionada en
general por hongos, micobacterias y cuerpos extraos. Los neutrfilos en este tipo
de infiltrado, no muestran cambios degenerativos.
Si se observan clulas gigantes multinucleadas, el siguiente paso es buscar
estructuras micticas y cuerpos extraos. Los hongos muchas veces no se tien
bien y se visualizan como fantasmas o finas columnas que no se tien.

Figura 6. Inflamacin granulomatosa .25X
4. Inflamacin linfoctica/ plasmoctica
Este es un patrn inflamatorio poco comn. Cuando un frotis que proviene
de tejido no linftico, contiene gran cantidad de linfocitos y clulas plasmticas est
indicando este tipo de inflamacin.
Ejemplos de este tipo especial de inflamacin son: gingivitis y estomatitis
felina, colangitis y gastroenteritis canina. El patrn citolgico en algunos casos es
difcil de distinguir del linfosarcoma, pero este ltimo se caracteriza por la
presencia de linfocitos inmaduros y ausencia de clulas plasmticas. Los cuerpos
extraos y los tractos fistulosos en ocasiones estn asociados a infiltrado de
clulas plamticas.





3. DIAGNOSTICO CITOLOGICO DE NEOPLASIA.
La clave para el del diagnstico citolgico de neoplasia maligna es determinar que
la lesin no es inflamatoria y adems que las clulas tisulares presentes en la
muestra tienen caractersticas de anaplasia. El primer paso es determinar el tipo
celular presente en la muestra.
1. Determinacin del tipo celular.
La forma de las clulas y de los ncleos y la tendencia a formar grupos celulares
son los criterios usados para clasificar el tipo celular de una neoplasia.

Tumores de origen Epitelial
Las clulas epiteliales tienden a ser redondeadas, polidricas, grandes y el ncleo
tiende a ser redondeado. Las clulas epiteliales, usualmente se exfolian con facilidad y por
lo tanto se ve gran cantidad de clulas que tienden a desprenderse en grupos .Por su
morfologa las clulas pueden orientar para establecer su origen: escamosas, cuboidal,
columnar, pero estas caractersticas se pierden en los tumores poco diferenciados.
Tumores de origen Mesenquimtico
Las clulas mesenquimticas (Tejido Adiposo, seo, muscular, cartlago, conectivo)
tienden a ser pobremente exfoliativas y se presentan solitarias, sin agruparse o en algunos
casos, los grupos son pequeos.
Son clulas de forma alargada y el ncleo es oval y alargado. Para lograr
una mayor aproximacin al origen, en algunos casos, se puede observar que estn
asociadas a sustancias producidas por ellas mismas: sustancia condroide u osteoide. La
identificacin de pigmentos intracelulares, comnmente es especfico del diagnstico
de tumores melanocticos.
Tumores de clulas redondas
Son tumores muy exfoliativos que desprenden clulas pequeas y redondas de escaso
citoplasma que no se agrupan. No forman grupos en pelotas o mrulas como las
epiteliales. En este grupo se encuentran distintos tipos de clulas tumorales : Linfoma,
Histiocitoma, Tumor venreo transmisible, Tumor de clulas basales, Plasmocitomas.

Figura 7. Caractersticas de los tipos celulares.
CRITERIOS CITOLGICOS DE MALIGNIDAD
Una vez establecido el tipo celular (epitelial, redondas mesenquimtico). El paso siguiente
es establecer si el tumor es maligno o benigno. El hallazgo ms importante y que
caracteriza a la malignidad es el pleomorfismo. Es decir que en estas muestras se va a
encontrar una gran variabilidad:
Variabilidad en el tamao de las clulas, ncleos y nuclolos. Variabilidad en
la forma de las clulas, ncleos y nuclolos.
Cambios nucleares en las neoplasias malignas:
Disminucin de la relacin ncleo/citoplasma
Variacin en la forma y en el tamao nuclear
Multinucleacin
Presencia de ms de un nuclolo
Nuclolo prominente
Variacin en el tamao y la forma de los nuclolos;
Figuras mitticas aberrantes.
Cromatina irregular y gruesa.

Los cambios nucleares son de gran importancia en el diagnstico de una neoplasia
maligna. Los tumores malignos con elevado grado de anaplasia, muestran ms de uno de
estos cambios nucleares simultneamente. En general, al encontrar tres o cuatro de estos
cambios en una elevada proporcin de las clulas que se estn observando, se puede
realizar el diagnstico de neoplasia maligna.

Figura 8. Caractersticas de anaplasia. Sarcoma
Bibliografa
Cowell, R and Tyler, R. Diagnostic Cytology of the dog and cat. American
Veterinary Publications. 1993.
Morris J , Dobson J. Diagnstico y estadificacin tumoral en Oncologia en
pequeos animales.Editorial Intermdica. 2002.