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CAPITULO I
PRINCIPIOS DEL METABOLISMO MICROBIANO
1.1. CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS GRUPOS
MICROBIANOS
Las bacterias se encuentran en casi todos los ambientes e intervienen en
varios procesos biolgicos. El crecimiento microbiano requiere la formacin de
estructuras complejas como protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos a
partir de elementos preformados en el medio de crecimiento o ser sintetizados por
la propia clula, a su vez, este crecimiento necesita de una fuente de energa para
ser llevado a efecto, todo este proceso se designa con el nombre de metabolismo,
que se define como todas las transformaciones qumicas que ocurren en una clula.
Todos los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los
mantienen vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y
consiste de un gran nmero de reacciones qumicas destinadas a transformar las
molculas nutritivas en elementos que posteriormente sern utilizados para la
sntesis de los componentes estructurales; como pueden ser las protenas. Otra
parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la energa que
est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que requiera de energa,
como puede ser el trabajo o el movimiento. Figura N 1.1.
Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo,
ya que en ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula
requiere. Esto se vio con claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en
un medio de cultivo que slo contena glucosa como nica fuente de energa. As
pues, se pens que la sntesis de todos los componentes celulares se llevaba a
cabo en el interior de las levaduras.
Hoy se conoce que las transformaciones que sufre la glucosa no ocurren en un solo
paso, sino que, por el contrario, se forman varios productos intermedios que en
muchas ocasiones no tienen una funcin especfica a no ser la de formar parte de
lo que se conoce como va metablica. La transformacin de los nutrientes en
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compuestos tiles para la subsistencia de un organismo se lleva a cabo por medio
de las reacciones qumicas que realizan unas protenas conocidas como enzimas.
El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que tiene
lugar en la clula, y tiene tres funciones especficas a saber:
- Obtener energa qumica del entorno, almacenarla, para utilizar luego en
diferentes funciones celulares,
- Convertir los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los
componentes macromoleculares de la clula bacteriana,
- Formar y degradar molculas necesarias para funciones celulares
especficas, como por ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes.
Figura N 1.1. Una Visin Simplificada del Metabolismo Celular.
Fuente: (M.T. Madigan, J.M. Martinko y J. Parker., 2002).
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La energa liberada en las reacciones catablicas se usa para fosforilar ADP,
generando ATP. La energa almacenada en el ATP se utiliza en la mayora de los
trabajos celulares. Por lo tanto, el ATP acopla los procesos productores de energa
de la clula a los consumidores de energa. Figura N 1.2.
Todos los procesos que ocurren en la clula o bacteria requieren de energa.
Esta energa est almacenada como molculas de ATP, que se forma a partir
de ADP y fosfato inorgnico.
Figura N 1.2. El anabolismo y el catabolismo.
Fuente: (Dreyfus Corts Georges, 1995)
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El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones catalizadas
enzimticamente, y se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso por el cual
la clula bacteriana sintetiza sus propios componentes se conoce como
anabolismo, y como resulta en la produccin de nuevo material celular, tambin se
denomina biosntesis.
La biosntesis es un proceso que requiere energa, por lo tanto las bacterias deben
ser capaces de obtenerla de su entorno para crecer y, eventualmente, multiplicarse.
El conjunto de reacciones degradativas de los nutrientes para obtener energa o
para convertirlos en unidades. Figura N 1.3.
Figura N 1.3. El catabolismo y anabolismo
Fuente: (T. Audesirk y G.Audesirk, 2003).
1.2. CLASIFICACIN NUTRICIONAL BSICA
Las bacterias son seres vivos y estn compuestas al igual que las clulas
eucariotas por protenas, polisacridos, lpidos, cidos nucleicos, entre otros. Estas
molculas a su vez forman parte de estructuras celulares ms complejas, como por
ejemplo la pared celular y la membrana citoplasmtica. Una caracterstica de los
seres vivos es la capacidad para sintetizar sus propios constituyentes a partir de
nutrientes que toman del medio externo.
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El crecimiento bacteriano se define como el aumento ordenado de todos los
constituyentes qumicos de la clula. Se trata de un proceso complejo, que supone
la replicacin de todas las estructuras y componentes celulares a partir de los
nutrientes exgenos.
El conocimiento de la fisiologa y del metabolismo bacteriano tiene algunas
aplicaciones prcticas:
- Permite conocer el modo de vida y el hbitat de diferentes especies
bacterianas. El ser humano actuando como hospedero por ejemplo,
ofrece una variedad de nichos ecolgicos que se diferencian entre s por
aspectos fsicos y qumicos (temperatura, concentracin de O
2
, pH,
presin osmtica, etc.) en los cuales pueden crecer y multiplicarse
distintas especies bacterianas, de acuerdo a sus requerimientos
nutricionales.
- Permite formular medios de cultivo para el aislamiento e identificacin de
los patgenos participantes.
- Desde el punto de vista teraputico nos permite conocer y entender el
modo de accin de algunos antimicrobianos que bloquean una va
metablica o la sntesis de alguna macromolcula esencial para la
bacteria.
Tipos de metabolismo microbiano
En el V Curso latinoamericano de Biotecnologa (1996), sealaron que el
crecimiento equilibrado de un microorganismo requiere de la integracin de un gran
nmero de rutas metablicas (alrededor de 2000 procesos bioqumicos diferentes),
interconectados, que participan en un correcto flujo de energa y carbn hacia la
formacin de ms materia celular, los cuales deben operar coordenadamente y
permitirle, al menor costo energtico una adaptacin a condiciones ambientales
cambiantes (tanto qumicas como fsicas). Indicaron que en general la regulacin y
fisiologa funciona a travs de controles ejercidos sobre las enzimas claves de vas
metablicas y sobre los genes que codifican para enzimas o protenas importantes
en el comportamiento microbiano.
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Los distintos tipos de metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres
criterios distintos:
I. Segn la fuente de carbono que utilizan
El carbono es el mayor constituyente de la clula bacteriana, por lo tanto no llama la
atencin que requiera ms carbono que cualquier otro nutriente.
Las bacterias se pueden dividir de acuerdo a la forma en la que el organismo
obtiene o utiliza el carbono para la construccin de la masa celular:
Auttrofo. crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias
inorgnicas sencillas. El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO
2
).
Hetertrofo. su fuente de carbono es orgnica. El carbono se
obtiene de compuestos orgnicos. En este ltimo grupo se encuentran todas
las bacterias de inters mdico.
Mixtrofo. son aquellas bacterias con metabolismo energtico
litotrofo (obtienen energa de compuestos inorgnicos), pero requieren
sustancias orgnicas como nutrientes para su metabolismo biosinttico. El
carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como fijando el dixido
de carbono.
II. Segn el punto de vista biosinttico
La forma en la que organismo obtiene los equivalentes reductores para la
conservacin de energa o en las reacciones biosintticas:
Litotrofo. son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas
sencillas Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos
inorgnicos. (SH
2
SO, NH
3
, NO
2
-
, Fe, etc.).
Organotrofo. requieren compuestos orgnicos. Los equivalentes
reductores se obtienen de compuestos orgnicos. (hidratos de carbono,
hidrocarburos, lpidos, protenas, alcoholes).
III. Segn la fuente de energa:
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Segn la forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer:
Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos
externos.
Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.
En la prctica, estos trminos se combinan casi libremente (Figura N 1.4, Figura
N 1.5 y Cuadro N 1.1).
Los ejemplos tpicos son como sigue:
Los quimiolitoauttrofos obtienen energa de la oxidacin de
compuestos inorgnicos y el carbono de la fijacin del dixido de carbono.
Ejemplos: bacterias nitrificantes, bacterias oxidantes del azufre, bacterias
oxidantes del hierro, bacterias oxidantes del hidrgeno.
Los fotolitoauttrofos obtienen energa de la luz y el carbono de la
fijacin del dixido de carbono, usando compuestos inorgnicos como
equivalentes reductores. Ejemplos: Cianobacterias (agua como equivalente
reductor), Chlorobiaceae, Chromaticaceae (sulfuro de hidrgeno),
Chloroflexus (hidrgeno).
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Los quimiolitohetertrofos obtienen energa de la oxidacin de
compuestos inorgnicos, pero no pueden fijar el dixido de carbono.
Ejemplos: algunos Nitrobacter spp., Wolinella (con hidrgeno como
equivalente reductor), algunas bacterias oxidantes del hidrgeno.
Los quimioorganohetertrofos obtienen energa, carbono y
equivalentes reductores para las reacciones biosintticas de compuestos
orgnicos. Ejemplos: la mayora de las bacterias, como Escherichia coli,
Bacillus spp., Actinobacteria. Las bacterias patgenas que viven a expensas
de la materia orgnica son quimioorgantrofas.
Los fotoorganotrofos obtienen energa de la luz y el carbono y los
equivalentes reductores para las reacciones biosintticas de compuestos
orgnicos. Algunas especies son terminantemente hetertrofas, pero
muchas otras pueden tambin fijar el dixido de carbono y son mixtrofas.
Ejemplos: Rhodobacter, Rhodopseudomonas, Rhodospirillum,
Rhodomicrobium, Rhodocyclus, Heliobacterium, Chloroflexus (alterna con
fotolitoautotrofa con hidrgeno).
Figura N 1.4. Transformaciones biolgicas de molculas carbonadas
Fuente: (Smith, C.A., y Wood, E.J., 1998).
31
Figura N 1.5. Clasificacin de nutricional de los organismos
Fuente: (Smith, C.A., y Wood, E.J., 1998).
Cuadro N 1.1. Clasificacin nutricional de los organismos.
Tipo Fuente de
energa
Fuente de
carbono
Ejemplos
Fotoautotrofas Luz CO
2
Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos
orgnicos
Algas y bacterias
fotosintticas
Quimioautotrofas o
Litotrofas
Qumica
Compuesto
inorgnicos: H
2
,
NH
3
, NO
2
, H
2
S,
CO
2
Pocas bacterias
Quimioheterotrofas o
Hetertrofas
Qumica Compuesto
orgnicos: glucosa
La mayora de
bacterias
Fuente: (Smith, C.A., y Wood, E.J., 1998).
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1.3. SUMINISTRO ENERGTICO
Las clulas bacterianas, poseen una gran variedad de sustancias como fuente de
energa, ilimitada
I. Las bacterias necesitan de un aporte energtico para desarrollarse.
II. El xito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad
metablica.
III. Todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa
podemos encontrarlos en las bacterias.
En los seres vivos, la utilizacin de la energa potencial contenida en los nutrientes
se produce por reacciones de oxido-reduccin. (Figura N 1.6).
Figura N 1.6. Oxidacin biolgica
Fuente: (A. Londoo C., 2002).
Qumicamente la oxidacin est definida por la prdida de electrones (e-) y la
reduccin por la ganancia de los mismos. En bioqumica, las reacciones de oxido-
33
reduccin frecuentemente incluyen no slo la transferencia de electrones sino de
tomos enteros de hidrgeno, por lo que se conocen tambin con el nombre de
reacciones de deshidrogenacin. En reacciones de este tipo hay sustancias que
ceden e- (dadoras) y otras que los aceptan (aceptoras). Figura N 1.7.
En las bacterias de inters mdico los sistemas de oxido-reduccin que transforman
la energa qumica de los nutrientes en una forma biolgicamente til, incluyen la
fermentacin y la respiracin.
En la fermentacin tanto la molcula dadora como la aceptora de electrones, son
compuestos orgnicos, mientras que en la respiracin hay un aceptor final exgeno,
que cuando es el oxgeno hablamos de respiracin aerobia, y cuando es un
compuesto inorgnico hablamos de respiracin anaerobia.
Todas las formas de vida estn basadas en prcticamente las mismas reacciones
bioqumicas.
Cada uno de los compuestos que se generan en este conjunto de reacciones se le
denominan compuestos endgenos o metabolitos y al conjunto de todas las
reacciones que suceden en una clula se le denomina metabolismo.
Las bacterias y los animales superiores usan:
Bsicamente las mismas reacciones para producir la energa que
necesitan para sostener los procesos vitales,
Los mismos tipos de compuestos y mecanismos para construir sus
macromolculas y
Los mismos conjuntos de reacciones para sintetizar los compuestos
que intervienen en las diferentes reacciones bioqumicas.
Se puede generalizar diciendo que todas las clulas tienen bsicamente el
mismo metabolismo, aunque obviamente hay diferencias entre ellas.
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Figura N 1.7. Visin General del Metabolismo. Se muestran las rutas
metablicas centrales y algunos de los intermediarios claves.
Fuente: (C.K. Mathews, K.E. Van Holde y K.B. Ahern, 2002).
Algunas clulas tienen mayor capacidad bioqumica que otras:
Hay bacterias que sintetizan todos sus metabolitos a partir de
compuestos inorgnicos y se les denomina auttrofos. Las clulas vegetales
tambin pueden vivir a base de solo precursores inorgnicos.
35
Hay microorganismos que necesitan que en el medio de cultivo
existan fuentes de carbono orgnico (azcares) y se les denomina
hetertrofos,
Otros microorganismos necesitan que se les suministren adems
otros compuestos orgnicos que ellos no tienen la capacidad de sintetizar (a
estos compuestos se les denomina factores de crecimiento)
Las clulas de los animales necesitan un gran nmero de
compuestos preformados los cuales deben estar en la dieta (se le
denominan vitaminas, aminocidos esenciales o cidos grasos esenciales).
En el proceso de diferenciacin celular, durante la formacin de un nuevo
organismo, las distintas clulas que constituyen el embrin se especializan y
slo expresan parte de la informacin gentica que contienen pasando a
formar los distintos tejidos y rganos.
El conjunto de reacciones que suceden en forma secuencial y que dan lugar
a un compuesto o a una funcin integran un camino metablico y se le da un
nombre especfico.
Por ejemplo,
1) la gliclisis, es el camino metablico por medio del cual se oxidan los
azcares produciendo piruvato y equivalentes reducidos NADH (Figura N
1.8);
2) la transformacin de la acetil-coenzima A, proveniente de la
descarboxilacin del piruvato o de la beta-oxidacin de los cidos grasos, en
anhdrido carbnico y equivalentes reducidos se le denomina ciclo de Krebs;
3) la transferencia de electrones de los equivalentes reducidos hasta el
oxgeno molecular, acoplado con la sntesis de ATP, se le llama cadena de
transporte de electrones o fosforilacin oxidativa.
Este ltimo proceso est formado por un conjunto de enzimas complejas
que catalizan varias reacciones de xido-reduccin, donde el oxgeno es el
aceptor final de electrones.
36
Figura N 1.8. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (Ganong, W. F.,1996).
1.4. REGULACIN METABLICA
Cada reaccin metablica est regulada no slo con respecto a otras reacciones
sino tambin con respecto a la concentracin de nutrientes en el medio. La
regulacin se realiza a diferentes niveles:
- Regulacin de la actividad enzimtica a travs de: enzimas alostricas,
inhibicin por retroalimentacin, activacin alostrica, y cooperatividad.
- Regulacin de la sntesis de enzimas por: induccin enzimtica y
represin por productos finales.
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Figura N 1.8. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (Ganong, W. F.,1996).
1.4. REGULACIN METABLICA
Cada reaccin metablica est regulada no slo con respecto a otras reacciones
sino tambin con respecto a la concentracin de nutrientes en el medio. La
regulacin se realiza a diferentes niveles:
- Regulacin de la actividad enzimtica a travs de: enzimas alostricas,
inhibicin por retroalimentacin, activacin alostrica, y cooperatividad.
- Regulacin de la sntesis de enzimas por: induccin enzimtica y
represin por productos finales.
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Figura N 1.8. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (Ganong, W. F.,1996).
1.4. REGULACIN METABLICA
Cada reaccin metablica est regulada no slo con respecto a otras reacciones
sino tambin con respecto a la concentracin de nutrientes en el medio. La
regulacin se realiza a diferentes niveles:
- Regulacin de la actividad enzimtica a travs de: enzimas alostricas,
inhibicin por retroalimentacin, activacin alostrica, y cooperatividad.
- Regulacin de la sntesis de enzimas por: induccin enzimtica y
represin por productos finales.
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1.4.1. Mecanismos de Regulacin enzimtica
En la clula operan dos mecanismos deferentes de regulacin: la regulacin de la
sntesis enzimtica y la regulacin de la actividad enzimtica. En ambos casos,
actan de mediadores componentes de bajo peso molecular, los cuales o bien son
formados en la clula como metabolitos intermediarios, o bien entran en ella
procedentes del medio. En ambos mecanismos reguladores actan protenas
alostericas.
Las protenas alostericas son aquellas cuyas propiedades cambian si se les unen
molculas especficas denominadas efectores. Existen dos clases de protenas
alostericas: las enzimas alostericas cuya actividad se incrementa o se inhibe
cuando se combinan con sus efectores, y las protenas alostericas reguladoras que
modulan la actividad de enzimas especficas.
a. Regulacin de la actividad enzimtica
Las protenas alostericas estudiadas con mayor detalle han sido las enzimas
alostericas, cuyo ejemplo lo constituye la aspartato transcarbamilasas (ATCasa),
que cataliza la primera reaccin de la biosntesis de las pirimidinas y cuya actividad
es inhibida por un producto final, la citidina trifosfato (CTP). concentraciones
elevadas de CTP inhiben el funcionamiento de la ATCasa y, en consecuencia, la
formacin de ms CTP hasta que su concentracin disminuye a un nivel optimo. el
ATP, un segundo efector de la ATCasa, activa la enzima, sirviendo para coordinar
la sntesis de nucletidos de purina y pirimidina. las enzimas alostericas son
siempre protenas de peso molecular relativamente elevado, compuestas por
mltiples subunidades. por regla general estas subunidades son idnticas
poseyendo cada una un lugar cataltico y otro alostrico. no obstante, la ATCasa se
compone de dos clases diferentes de subunidades, una con funcin cataltica y otra
con funciones reguladoras.
En las bacterias anaerobias facultativas la fermentacin (como nica va de
generacin de energa) es bloqueada en presencia de oxgeno, asegurando que el
suministro de energa se produzca por la respiracin, que consume menos glucosa
y acumula menos lactato. En este fenmeno, conocido como efecto Pasteur, la
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enzima fosfofructoquinasa es activada o inhibida segn la relacin ATP/ADP,
regulando as el consumo de glucosa.
Este es un ejemplo de regulacin de la actividad enzimtica por una enzima
alostrica. El ejemplo clsico de regulacin a nivel de la sntesis de enzimas lo
constituye el opern lactosa. Hay 3 enzimas que participan en la utilizacin de la
lactosa (-galactosidasa, galactsido permeasa y galactsido transacetilasa) que
tienen un promotor nico.
En ausencia de lactosa, la transcripcin para estas enzimas est bloqueada por
accin de un represor que se une al promotor inhibiendo la accin de la ARN
polimerasa. Cuando se agrega lactosa al medio, sta se une al represor,
bloqueando de este modo su unin al promotor, permitiendo as la accin de la
ARN polimerasa y la sntesis de las tres enzimas.
B. Regulacin de la sntesis enzimtica
La inhibicin por el producto final mediada por enzimas alostericas es en gran
medida suficiente para asegurar que todas las rutas catablicas y biosinteticas
operen en equilibrio. Sin embargo, cuando no es necesario el producto de una ruta
metablica, las enzimas que catalizan las reacciones de las mismas resultan
innecesarias.
Muchas bacterias son capaces de utilizar un amplio espectro de compuestos
orgnicos diferentes como fuentes de carbono y energa, pero en un momento
dado, puede que solo uno de estos compuestos est presente en el medio. Aunque
la informacin gentica necesaria para sintetizar las enzimas importantes se
encuentra siempre presente, su expresin fenotpica est determinada por el medio,
y una enzima determinada se sintetiza en respuesta a la presencia de su sustrato.
1.4.2. Crecimiento bacteriano
Puede ser definido como el aumento ordenado de todos los constituyentes
qumicos de la clula. Las bacterias como grupo son extremadamente verstiles y
tienen una capacidad enorme para utilizar una amplia gama de nutrientes que va
desde compuestos inorgnicos simples a compuestos orgnicos ms complejos.
Los nutrientes se pueden dividir en dos clases: esenciales, sin los cuales la clula
no puede crecer, y no esenciales que se utilizan cuando estn presentes pero no
39
son indispensables. Algunos nutrientes son utilizados slo como precursores de
macromolculas celulares y otros slo como fuente de energa sin ser incorporados
directamente al material celular, mientras que otros cumplen las dos funciones a la
vez. Tambin se pueden clasificar como macro y micronutrientes segn la
cantidad requerida.
MACRONUTRIENTES
La glucosa, por ejemplo, es utilizada como fuente de carbono y fuente de energa.
Tambin existen bacterias que pueden usar una variedad de otras sustancias
orgnicas como fuente parcial o exclusiva de carbono.
Entre las bacterias ms verstiles se encuentra las del gnero Pseudomonas,
muchas de las cuales pueden utilizar ms de 100 compuestos orgnicos. Despus
del carbono el elemento ms abundante en la clula es el nitrgeno, representa
entre el 12 y el 15% del peso seco, y es el constituyente principal de protenas y
cidos nucleicos.
La mayora de las bacterias son capaces de utilizar el amonio como fuente de
nitrgeno, mientras que otras pueden usar los nitratos.
La reduccin de nitratos, se puede lograr por 2 mecanismos diferentes:
1. Reduccin asimiladora: En la cual es reducido por la va del nitrito, y
2. Reduccin desasimiladora: Donde el nitrato sirve como aceptor final de
electrones.
La primera est bastante extendida entre las bacterias mientras que la segunda
slo es comn en bacterias anaerobias y anaerobias facultativas. El fsforo es
utilizado para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos. La mayora de las
bacterias lo usan en forma inorgnica como PO
4
=
.
Los fosfatos orgnicos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, pero para
ser utilizados deben ser atacados primero por fosfatasas, enzimas que clivan estos
compuestos liberando fsforo inorgnico.
40
Aunque requeridos en cantidades muy pequeas los micronutrientes son
importantes para la nutricin. Entre estos destacamos, cobalto, cobre y manganeso.
1.4.3. Factores de crecimiento
Son sustancias que deben ser aportadas preformadas, ya que la bacteria que las
requiere no las puede sintetizar a partir de los nutrientes ms simples, por falla o
ausencia de una va metablica.
Estas sustancias incluyen vitaminas del complejo B, aminocidos, purinas y
pirimidinas. Las bacterias que no requieren factores de crecimiento de denominan
prototrficas y las que los requieren, auxotrficas para ese factor.
I. Oxgeno: Las exigencias de oxgeno de una bacteria en particular reflejan en
parte el tipo de metabolismo productor de energa. De acuerdo a su relacin con el
oxgeno tenemos:
- Anaerobios obligados: Hay de 2 tipos, estrictos y aerotolerantes, los
primeros crecen en ausencia de O
2
y este es sumamente txico, incluso
letal cuando la exposicin es breve. Los segundos tambin crecen slo
en ausencia de O
2
pero toleran ms que los anteriores su presencia;
- Anaerobios facultativos: Son capaces de crecer en presencia o
ausencia de oxgeno.
- Aerobios obligados: Requieren oxgeno para su desarrollo.
- Microaerfilos: Crecen mejor con tensiones de oxgeno bajas (3%-5%),
las concentraciones elevadas (21%) tienen un efecto inhibidor para
estas bacterias.
En los aerobios, anaerobios facultativos y anaerobios aerotolerantes la enzima
superoxidodismutasa impide la acumulacin del radical superxido; esta enzima
est ausente en los anaerobios estrictos. El perxido de hidrgeno formado por la
accin de la superoxidodismutasa es destruido con rapidez por la enzima catalasa
o por peroxidasas, como vimos ms arriba.
II. Dixido de carbono: Algunas bacterias como Neisseria y Brucella tienen varias
enzimas con baja afinidad por el CO
2
y requieren una concentracin ms elevada
41
(10%) de la que habitualmente est presente en la atmsfera (0.03%). Estos
requerimientos atmosfricos deben ser tenidos en cuenta cuando se realice el
cultivo de estas bacterias.
1.4.4. Requerimientos fsicos.
POTENCIAL DE OXIDOREDUCCION: El potencial de xido-reduccin de un medio
de cultivo es un factor crtico para determinar si se producir o no el desarrollo de
un inculo sembrado en dicho medio. Para la mayor parte de los medios de cultivo
en contacto con el aire, el potencial de xido-reduccin es de +0,2 a +0,4V a Ph 7.
Los anaerobios obligados son incapaces de crecer a menos que el potencial sea
tan bajo como -0,2 V como mnimo. Para establecer estas condiciones en un medio
de cultivo se puede eliminar el oxgeno, recurriendo a sistemas de cultivo anaerobio
o agregando al propio medio compuestos que contengan sulfidrilo como por
ejemplo el tioglicolato de sodio.
TEMPERATURA: Para cada bacteria existe una temperatura ptima de desarrollo y
un rango en el cual este puede ocurrir. Las bacterias se dividen en tres grupos de
acuerdo al rango de temperatura en el que pueden desarrollarse:
- Psicrfilas: -5 a 30 C, ptimo:15C
- Mesfilas: 10 a 45C, ptimo: 30C
- Termfilas: 25 a 80C, ptimo: 55C.
CONCENTRACION DE HIDROGENO (pH): Tambin aqu existe un valor de pH
ptimo dentro de un rango ms amplio en el cual el crecimiento puede ocurrir. Para
la mayor parte de las bacterias de inters mdico, el pH ptimo es de 7,2 a 7,6. Sin
embargo hay patgenos humanos como M. tuberculosus que resisten valores muy
bajos de pH.
CONDICIONES OSMOTICAS: La concentracin de solutos con actividad osmtica
dentro de la clula bacteriana es superior a la concentracin exterior. Con
excepcin de los Micoplasmas y las formas lister (L), que no tienen pared celular, la
mayor parte de las bacterias tienen una tolerancia osmtica importante lo que les
permite soportar grandes cambios de la osmolaridad.
42
1.5. METABOLISMO HETERTROFO
El metabolismo en los seres vivos es muy flexible y se puede ajustar a la cantidad y
tipo de nutrientes disponibles en el medio que rodea a un microorganismo. Un
ejemplo lo podemos obtener de las levaduras, las cuales se adaptan a las
condiciones en que se les mantenga, pues poseen todo el conjunto de enzimas
necesario para sintetizar sus elementos bsicos como los aminocidos y todos los
dems componentes celulares, de tal manera que si crecen en un medio con
glucosa como nica fuente de energa, pueden sintetizar todas las molculas que
necesitan, aunque esto implica un gran gasto en energa. La levadura puede
evitarlo si le proporcionamos los aminocidos y nutrientes requeridos, ya que
economiza el aparato enzimtico responsable de la sntesis de todos los
compuestos que necesita para vivir.
Actualmente es posible tener en el laboratorio cultivos controlados de bacterias en
los cuales el investigador modifica a voluntad la composicin de los nutrientes. Esto
ha permitido conocer y entender cmo los microorganismos modifican su
metabolismo en funcin de la calidad nutritiva del medio en el cual se les hace
crecer. Si, por ejemplo, la concentracin de nutrientes ricos en nitrgeno baja, el
microorganismo iniciar inmediatamente la sntesis de las enzimas necesarias para
elaborar sus propios cidos nucleicos y aminocidos; todo est finalmente regulado
y enfocado hacia la mxima economa metablica y, en ltima instancia, al ahorro
de energa.
1.5.1. Caractersticas metablicas
El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos por los cuales un
microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que
necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de
estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en
base a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un
microorganismo constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico,
su responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos
industriales.
43
- Las bacterias tienden versatilidad a intercalar fcilmente los nutrientes y
productos metablicos terminales
- Esto les permite desarrollar procesos metablicos con gran rapidez
El metabolismo de la clula comprende dos grandes tipos de reacciones:
La mayora de los microorganismos son hetertrofos (o ms exactamente
quimiorganohetertrofos), con compuestos orgnicos como fuentes de carbono y de
energa (Figura N 1.9). Los microorganismos hetertrofos viven de los alimentos
que roban a anfitriones vivos (como comensales o parsitos) o de la materia
orgnica muerta de todo tipo (saprfagos).
Este metabolismo microbiano constituye el principal factor de descomposicin de
todos los organismos despus de muerte. Muchos microorganismos eucariontes
son hetertrofos por depredacin o parasitismo, caractersticas tambin
encontradas en algunas bacterias tales como Bdellovibrio (un parsito intracelular
de otras bacterias, causando la muerte de sus vctimas) y algunas Myxobacteria
tales como Myxococcus (depredadora de otras bacterias a las que mata y succiona
mediante la cooperacin de enjambres de numerosas clulas).
La mayora de las bacterias patgenas son parsitos hetertrofos de seres
humanos o de otras especies eucariontes. Los microorganismos hetertrofos son
extremadamente abundantes en naturaleza y responsables de la degradacin de
los polmeros orgnicos tales como celulosa, quitina o lignina que son generalmente
indigeribles para los animales ms grandes.
Esta degradacin, generalmente, requiere la colaboracin de varios organismos
distintos, cada uno de los cuales realiza uno de los pasos de la degradacin hasta
obtener dixido de carbono.
Hay muchas variaciones en este tema, pues diversos organismos pueden degradar
diversos polmeros y secretar diversos residuos. Algunos organismos pueden
incluso degradar los compuestos ms recalcitrantes tales como pesticidas y
petrleo, realizando su reciclado.
44
Figura N 1.9. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
44
Figura N 1.9. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
44
Figura N 1.9. Metabolismo Intermediario.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
45
Bioqumicamente, el metabolismo hetertrofo procarionte es mucho ms verstil
que el de los organismos eucariontes, aunque muchos procariontes comparten los
modelos metablicos ms bsicos con los eucariontes, por ejemplo, usando la
glicolisis (tambin llamada ruta EMP) para el metabolismo del azcar y el ciclo del
cido ctrico en la degradacin del acetato, produciendo energa bajo la forma de
ATP y reduciendo energa bajo la forma de NADH o quinona.
Estas rutas metablicas bsicas estn muy extendidas porque tambin estn
implicadas en la biosntesis de muchos componentes necesarios para el
crecimiento de la clula (a veces en la direccin contraria).
Sin embargo, muchas bacterias y archaea utilizan rutas metablicas alternativas
con la excepcin de la gliclisis y del ciclo del cido ctrico. Un ejemplo bien
estudiado es el metabolismo del azcar por la ruta del ceto-desoxi-fosfogluconato
(tambin llamada ruta ED) en Pseudomonas en vez de la ruta glicoltica. Por otra
parte, hay incluso una tercera ruta alternativa catablica del azcar usado por
algunas bacterias, la ruta de la pentosa fosfato.
Los elementos constitutivos o macromolculas tienen su gnesis en unos pocos
precursores denominados metabolitos focales: glucosa 6-fosfato, fosfoenolpiruvaro,
oxalacetato y l cetoglutarato, estos se interrelacionan y originan compuestos
intermediarios: fosfatos de azucares, piruvato, acetil CoA, aspartato, glutamato,
etc., y productos terminales como: aminocidos, bases pirimidinicas, polisacridos,
lpidos, entre otros. (Figura N 1.10).
Figura N 1.10. Familias biosinteticas de aminocidos
46
* Ln 8acLerlas, ** en Pongos
Fuente: (Pares I.F. y A. Jurez, 1997).
Esta diversidad y capacidad metablicas de los procariontes que les permite utilizar
una variedad enorme de compuestos orgnicos se debe a una historia y diversidad
evolutivas mucho ms profundas que las de los eucariontes. Es tambin
significativo que las mitocondrias se originaron en los eucariontes por
endosimbiosis de una bacteria relacionada con los parsitos intracelulares
Rickettsia, y tambin los simbiontes de las plantas Rhizobium o Agrobacterium.
Por lo tanto, no es sorprendente que todas las mitocondrias eucariotas compartan
caractersticas metablicas con estas Proteobacteria.
La mayora de los microorganismos respiran (usando una cadena de transporte de
electrones), aunque el oxgeno no es el nico receptor terminal de electrones que
puede usarse. El uso de receptores terminales de electrones distintos al oxgeno
tiene consecuencias biogeoqumicas importantes. (Cuadro N 1.2 y Figura N
1.11.).
47
Cuadro N 1.2. Patrones de reacciones de oxido reduccin suministradoras de
energa utilizadas por las bacterias.
Donador de
H
2
O
2
(Respiracin
anaerobia)
Aceptor de H
2
NO
3
=
, SO
4
=
,
fumarato
(Respiracin
anaerobia)
Compuestos
orgnicos
(Fermentacin)
Sustancias
inorgnicas
Sustancias
orgnicas
I. Respiracin
aerobia de
sustancias
inorgnicas
Ej.:
(Nitrosomonas)
NH
3
NO
2
=
O
2
H
2
O
II. Respiracin
aerobia de
sustancias
orgnicas.
Ej.: (muchos
organismos)
Glucosa CO
2
O
2
H
2
O
III. Respiracin
anaerobia
de
sustancias
inorgnicas.
Ej.:
(Thiobacillus
denitrificans)
S SO
4
=
NO
3
=
N
2
IV. Respiracin
anaerobia
de
sustancias
orgnicas.
Ej.
(Desulfovibrio)
cido lctico
CO
2
SO
4
=
H
2
S
(Ninguno)
V.Fermentacin de
sustancias
orgnicas
Ej.: (Streptococcus)
- 4
Glucosa 2-piruvato
+4H
2 cido lctico
FUENTE: (Brooks. G. F., J. S. Butel y S. A. Morse, 2005)
48
Figura N 1.11. Alternativas del metabolismo microbiano.
Fuente: (M.T. Madigan, J.M. Martinko y J. Parker., 2002).
1.5.2. Mecanismos de generacin de ATP
La conservacin intracelular de energa ocurre principalmente por medio de la
sntesis de ATP. Los mtodos usados por las bacterias para generar ATP son
principalmente:
Fosforilacin a nivel de sustrato
Fosforilacin oxidativa
Fotofosforilacin (durante la fotosntesis).
49
La fosforilacin a nivel de sustrato es un sistema usado por ciertas bacterias
quimiorganotrofas. el sustrato orgnico (donador de electrones) pasa por una ruta
catablica (p.ej., la ruta glucoltica), y uno de los intermediarios de esa ruta es
oxidado por un coenzima (p. ej., NAD
+
), de manera que se origina un intermediario
no fosforilado con una gran energa de hidrlisis. Dicho intermediario experimenta
enseguida una sustitucin con un fosfato, para dar la correspondiente forma acil-
fosfato (siendo este enlace de alta energa). Finalmente, este acil-fosfato dona su
fosfato de alta energa al ADP, que pasa a ATP. Ejemplo: gliceraldehido-3-p 1,3-
difosfoglicrico 3-fosfoglicrico.
La fosforilacin oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado
de la transferencia de electrones desde el NADH o del FADH
2
al O
2
a travs de
una serie de transportadores de electrones. (Figura N 1.12).
Figura N 1.12. Flujo de electrones durante la fosforilacion oxidativa
Fuente: (Stryer, 1995).
50
El flujo de electrones desde el NADH o el FADH
2
al O
2
a travs de complejos
proteicos localizados en la membrana interna mitocondrial, provoca el bombeo de
protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Se genera una fuerza
protomotriz que est formada por un gradiente de pH y por un potencial elctrico
transmembranal. Cuando los protones regresan a la matriz mitocondrial a travs de
un complejo enzimtico, se sintetiza ATP (fig. 1). De esta forma, la oxidacin y la
fosforilacin estn acopladas por un gradiente de protones a travs de la membrana
interna mitocondrial. (Figura N 1.13).
Figura N 1.13. Fosforilacin a nivel de sustrato y Fosforilacin
oxidativa.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
50
El flujo de electrones desde el NADH o el FADH
2
al O
2
a travs de complejos
proteicos localizados en la membrana interna mitocondrial, provoca el bombeo de
protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Se genera una fuerza
protomotriz que est formada por un gradiente de pH y por un potencial elctrico
transmembranal. Cuando los protones regresan a la matriz mitocondrial a travs de
un complejo enzimtico, se sintetiza ATP (fig. 1). De esta forma, la oxidacin y la
fosforilacin estn acopladas por un gradiente de protones a travs de la membrana
interna mitocondrial. (Figura N 1.13).
Figura N 1.13. Fosforilacin a nivel de sustrato y Fosforilacin
oxidativa.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
50
El flujo de electrones desde el NADH o el FADH
2
al O
2
a travs de complejos
proteicos localizados en la membrana interna mitocondrial, provoca el bombeo de
protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Se genera una fuerza
protomotriz que est formada por un gradiente de pH y por un potencial elctrico
transmembranal. Cuando los protones regresan a la matriz mitocondrial a travs de
un complejo enzimtico, se sintetiza ATP (fig. 1). De esta forma, la oxidacin y la
fosforilacin estn acopladas por un gradiente de protones a travs de la membrana
interna mitocondrial. (Figura N 1.13).
Figura N 1.13. Fosforilacin a nivel de sustrato y Fosforilacin
oxidativa.
Fuente: (J. Koolman y KH Rhm, 2004).
51
1.5.3. La fermentacin
La fosforilacion a nivel de sustrato es el nico modelo posible de formacin de ATP
como resultado de una fermentacin, la cual puede ser realizada por los siguientes
grupos de microorganismos:
1. Anaerobios estrictos.
2. Facultativos.
3. Anaerobios aerotolerantes.
En los dos primeros, la presencia de oxigeno modifica el metabolismo generador de
ATP; en el tercero esto no ocurre.
La fermentacin es un tipo especfico de metabolismo hetertrofo que utiliza
carbono orgnico en vez de oxgeno como receptor terminal de electrones. Esto
significa que estos organismos no utilizan una cadena de transporte de electrones
para oxidar NADH a NAD
+
y por lo tanto deben tener un mtodo alternativo para
usar esta energa reductora y mantener una fuente de NAD
+
para el funcionamiento
apropiado de las rutas metablicas normales, como por ejemplo, la gliclisis (Figura
N 1.14). Puesto que no requieren oxgeno, los organismos fermentantes son
anaerobios. Muchos organismos pueden utilizar fermentacin bajo ciertas
condiciones anaerobias y respiracin cuando el oxgeno est presente.
Figura N 1.14. Destinos metablicos del piruvato.
Fuente: (T. Audesirk y G.Audesirk, 2003).
52
Estos organismos son anaerobios facultativos. Para evitar la superproduccin de
NADH, los organismos fermentantes obligados generalmente no tienen un ciclo
completo del cido ctrico. En vez de usar ATPasas como en la respiracin, el ATP
en organismos fermentantes es producido por la fosforilacin a nivel de substrato
donde un grupo fosfato se transfiere de un compuesto orgnico de gran energa al
ADP para formar el ATP. (Figura N 1.15).
Figura N 1.15. Modelo propuesto para el estado energizado de la membrana
Fuente: (Pares I.F. y A. Jurez, 1997.
Como resultado de la necesidad de producir compuestos orgnicos con fosfato de
la alta energa (generalmente bajo la forma de CoA-steres) los organismos
fermentantes utilizan NADH y otros cofactores para producir una gran variedad de
subproductos metablicos reducidos, a menudo incluyendo hidrgeno. Estos
compuestos orgnicos reducidos son generalmente cidos orgnicos cortos y
alcoholes derivados del piruvato, el producto final de la gliclisis. Ejemplos incluyen
el etanol, acetato, lactato y el butirato (Figura N 1.16).
Los organismos fermentantes son muy importantes industrialmente y se utilizan
parar elaborar muchos tipos de productos alimenticios. Los productos finales
53
metablicos producidos por cada especie bacteriana especfica son los
responsables del gusto y caractersticas de cada alimento.
Figura N 1.16. Estrategias microbianas de descarboxilacin del piruvato.
1, piruvato descarboxilasa. Funcional en levaduras y algunas bacterias, como
Zymononas mobilis cuando fermentan la glucosa. 2, piruvato deshidrogenasa.
Caracterstico del desarrollo aerobio de, entre otras, las bacterias entricas. 3,
piruvato-formiato-liasa. Lo sintetizan las bacterias entricas en condiciones
anaerbicas. 4, piruvato-ferredoxina-oxidorreductasa. Caracterstico de los
clostridios. 5, parte del complejo de la -acetolactato sintasa de algunas bacterias
entricas (el -acetolactato se genera por condensacin del acetaldehdo activo con
piruvato). Un sistema equivalente es utilizado por las bacterias lcticas para
producir diacetilo (en este caso, el acetaldehdo activo condensa con acetil-CoA)
Fuente: (Pares I.F. y A. Jurez, 1997).
No todos los organismos fermentantes usan fosforilacin a nivel de substrato. En su
lugar, algunos organismos son capaces de acoplar directamente la oxidacin de
compuestos orgnicos de poca energa con la formacin de un gradiente
54
electroqumico para mover un protn (o sodio) y as realizar la sntesis de ATP.
Ejemplos de estas formas inusuales de fermentacin incluyen la fermentacin del
succinato por el Propionigenium modestum y la fermentacin del oxalato por
Oxalobacter formigenes. Estas reacciones son de rendimiento energtico
extremadamente bajo. Los seres humanos y otros animales tambin utilizan la
fermentacin para consumir el exceso de NADH produciendo lactato, aunque sta
no es la forma principal de metabolismo como en los microorganismos
fermentantes.