TINCIN GRAM

1. OJETIVOS DE LA PRCTICA DE LABORATORIO

Conocer la utilidad la tincin gram para realizar un diagnostico microbiano.
Conocer el fundamento de la coloracin gram.
Tener un concepto claro sobre el proceso de coloracin gram.
Saber observar las muestras en el microscopio y tener una conclusin certera.

2. MARCO TEORICO

2.1 LA TINCIN DE GRAM, o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial
empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en
muestras clnicas. Considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que
se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se
visualizan de color rosa o rojo o grosella.
2.1.1 GRAM POSITIVA
En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias
que se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de aqu el nombre
de "Gram-positivas" o tambin "gram positivas". Esta caracterstica Qumica
est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja
un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales grupos
de bacterias, y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre de
Posibacteria. Las restantes son las bacterias Gram negativas.
2.1.2 GRAM NEGATIVA
Se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO se tien
de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram, y lo hacen de un color rosado
tenue: de ah el nombre de "Gram-negativas" o tambin "gram negativas". Esta
caracterstica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular,
por lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los
principales grupos de bacterias y cuando se tratan como taxn se utiliza
tambin el nombre de Negibacteria. Las restantes son las bacterias Gram
positivas.
2.2 COLORACIONES
Aumentan el contraste de las bacterias al entrar en contacto con colorantes y en
el cual se puede observar las estructuras, citoplasma microbiano e inferir el tipo de
bacteria que tiene la muestra.


2.2 1 El cristal violeta (colorante catinico)
Penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram
negativas) a travs de la pared bacteriana.
2.2.2 El lugol
Es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de
potasio), el cual est presente para solubilizar el yodo, y acta de
mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la
pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo
insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
2.2.3 Alcohol-acetona
Sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran,
mientras que los Gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una
coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como
la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas
Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen
azules.
2.2.4 La safranina
Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las
bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se
vern azul-violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la
tincin de

Fig. Los cuatro colorantes a utilizar

3 PROCEDIMIENTO PRCTICO
Paso 1 Autoclavar los materiales a utilizar.
























Paso 2 Sacar la muestra del vial y depositarlo.
La muestra es: Esputo del alumno que esta guardado en el vial










Fig. 1 Llevando al fuego la Aza
de Cole, para su desinfeccin.
Fig.2 Llevando al fuego la lmina
de vidrio para colocar la muestra
Fig.3 Colocacin de la muestra
sobre la lmina de vidrio


Paso 3 Realizar el proceso de coloracin de la muestra.

- Suministrar el colorante bsico CRISTAL DE VIOLETA















- Suministrar el mordiente LUGOL























Fig.4 La muestra con el cristal violeta,
dejar con ello un tiempo aprox. De 1
min.
Fig.5 La muestra del lugol, dejar con
ello un tiempo aprox. (30 seg -1 min)

- Suministrar el decolorante Alcohol-acetona
















- Suministrar el colorante de contraste La safranina














Dato: No olvidar que en cada momento de echar el nuevo qumico lavar la
muestra con agua destilada.






Fig.6 La muestra con el alcohol, dejar con
ello un tiempo aprox. (30 seg)
Fig.7 La muestra con la safranina dejar con
ello un tiempo aprox. (1 min)

- Paso 4 Llevar al microscopio para su observacin.
10x Se vean las clulas epiteliales
40x Se observan clulas epiteliales y algunas bacterias
100x (usar el aceite de inmersin)


Fig. 8 Grafica de lo visto en el microscopio


Fig 9 Se observa Streptococcus pneumoniae.
Staphylococcus aureus, Enterobacteriasfoto
referencial a lo visto en el microscopio.
4 LAS DIFERENTES FORMACIONES QUE TOMAN LA BACTERIAS.