Chromatographie sur couche

mince (CCM)
 Chromatographie planaire.

Couche de
phase
stationnaire

Plaque rigide (en

verre, plastique ou
aluminium)

 φstationnaire : solide ou liquide

 φmobile : liquide
 Principe

• Migration de la φmobile à travers φstationnaire par capillarité

→ elle entraîne les molécules.

• V migration d’une molécule dépend :

- des forces la retenant à φstationnaire
- de sa solubilité dans φmobile
1.Mode opératoire.
• L’échantillon :

- Molécules dans un solvant.

- [composés] faibles (2 à 5 %).
- Solvant très peu polaire et très volatil
→ évite l’étalement des tâches lors du dépôt.

• Activation de la plaque :

110 °C pendant 30 min

→ séchage
Dépôt de l’échantillon :

Couche de
phase
stationnaire
Capillaire
contenant
l’échantillon

Ligne tracée au
crayon à 1 cm du
bord inférieur

Il faut faire plusieurs petits dépôts

entrecoupés de séchages
Migration :

(- De 1 cm)
• Repérage du front de solvant, séchage, exploitation
des résultats après révélation

Front de solvant

A
B
Révélation des
taches si
Rf = B/A
nécessaire.
C
Rf = C/A
Calculs des Rf.
Rf = distance de la tâche/ distance du front d
solvant
• Révélation des plaques.
- Vaporisation d’un réactif chimique
→ molécules transformées en substances colorées.
Exemple :
Ninhydrine pour acides aminés,
Vapeur d’iode.
Acide concentré suivi d’un chauffage
Solution oxydante.

- Observation sous UV si molécules fluorescentes.

- φstationnaire avec sels de zinc fluorescents.

→ Observation avec lampe à vapeur de mercure
=> molécules = tâches sombres sur fond brillant
2. Les phases.
 2.1 Stationnaire.

• Petits grains fixés à la plaque à l’aide d’un liant comme :

- Sulfate de calcium hydraté,
- Amidon
- Polymère organique.

• Epaisseur : dépend de l’application souhaitée.

• Choix de φstationnaire : dépend de la polarité des composés à

séparer.
 • Gel de silice : très polaire et hydrophile
→ séparation de substance acides ou neutres.

OH
O

HO O Si
Si O
Si O
O
OH Si
O Si O
O
Si O
HO
O

Principes physique responsable de la séparation

= adsorption.
 Greffage de groupements sur les fonctions silanols
→ grande variété de polarité

Si chaînes porteuses de fonctions polaires comme NH2 ou CN,

diminution de la polarité.
Si chaîne alkyls → phase apolaire CH3

NH2

H3C
H3C
H3C Si
H3C
H3C Si CH3
CH3 O Si O
H3C Si
Si NH2 O O
CH3 O Si O Si O

O O Si O
Si O O Si
OH
Si O Si O
O O
O O
OH Si Si CH3
O Si O Si
O HO
O H3C
Si CH3 O
HO Si
H3C
O

H3C
H2N

Le principe physique responsable de la séparation est

le partage.
• Alumine Al2O3 pour composés basiques.

• Kieselguhr : très polaire.

Séparation des sucres et des aa.
 2.2 Mobile.

• Solvant pur.

• Mélange de solvants totalement miscibles.

Proportions très précises => reproductibilité.

• Souvent de nature organique peu hydraté.

Sauf pour CCM en phase inverse où l’eau est très abondante.

• Doit solubiliser les composés à séparer

→ entraînement lors de sa migration sur la plaque.
• Polarité : dépend de celles des molécules à séparer
→ Affinité avec elles.

Classement de quelques solvants et familles de

molécules par polarité
Cyclohexane
Tétrachlorure de Alcanes
carbone Apolaire
Benzène Dérivés halogénés
Dichlorométhane
Chloroforme Cétones, aldéhydes, éthers et esters
Acétate d'éthyle Moyennement Amines
Acétone polaire Alcools
Ethanol Phénols
Eau Polaire Acides carboxyliques
Acide acétique
• Le mélange de solvant permet d’affiner la
polarité de la phase mobile et la faire
correspondre au plus près à celle des
composés à séparer.
Evolution des Rf suivant la phase stationnaire et
l’éluant utilisé
4. Applications.
 4.1 Préparative.

• Pour extraire des quantités importantes d’une molécule

contenue dans un mélange.

• Dépôt en ligne, sur une plaque épaisse (de 1 à 2,5 mm).

• Récupération : grattage ou découpage des bandes,

puis dissolution dans un solvant adapté.
 4.2 Mise en évidence de la
présence d’un composé.

Présence de
deux autres
composés
Présence du
composé B

Standar Mélange à
ds analyser
A B
 4.3 Suivi de réaction en chimie
organique.
Standard Les réactifs
correspond disparaissen
Réacti Impureté
ant au t
produit de fs
progressive
la réaction ment

Le Produit
produit de la
apparaît réaction

Analyse à t = En cours de En fin de

0 réaction réaction