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FACULDADE SO LUCAS

DISCIPLINA: BIOQUMICA

Professor: Dr. Anselmo E. Ferrer Hernndez


TEMA: ENZIMOLOGA I

CARACTERSTICAS GERAIS DAS
ENZIMAS
SUMRIO:

-Enzimas: Definio
Desenvolvimento histrico.
Propriedade das enzimas. 1.Ao cataltica.., 2.Estreo-
especificidade
3. Ao reguladora,, 4. Reversibilidade
-Nomenclatura
Classificao das enzimas
-Complexo enzima-Substrato.
Co-Fatores enzimaticos . 1.Co-enzima, 2.Grupo prosttico.
3.Ativadores
BIBLIOGRAFIA BSICA
LEHNINGER, PRINCPIOS DE BIOQMICA
Cap. 8 ( Pg. 189-224)
Apostilha do professor> (Texto e Projeo)
OBJETIVOS:

-Que os alunos conheam:

-A estrutura e as propriedades qumicas das
enzimas, bem como sua ao cataltica.

-As principais teorias que explicam a unio das
enzimas com o substrato.

-As caractersticas mais gerais dos componentes do
complexo funcional enzimtico.
DESENVOLVIMENTO:

Enzimas. As mudanas qumicas que tm lugar na matria viva se
realizam quase em sua totalidade pela ao de catalisadores
biolgicos especficos denominados ENZIMAS.

Definio

A enzimas podem definir-se como catalisadores orgnicos
produzidos nos organismos vivos e capazes de funcionar fora da
clula ou organismo que os produz.

O conhecimento da existncia das enzimas surgiu como conseqncia
dos estudos realizados acerca do mecanismo qumico da digesto e a
fermentao.
Desenvolvimento histrico:

-No sculo XVII Vo Helmont sugeriu que a digesto consistia na
transformao qumica dos alimentos mediante a ao dos fermentos.

-Berzelius em 1836 designou esta ao dos fermentos com o termino
de catlise.

-As primeiras enzimas isoladas foram a DIASTASA, e a PEPSINA, por
Payan e Pearson , e por Schawnn e Evely, respectivamente, entre os
anos 1833-1936..

Vinte anos depois Convesant descobriu a TRIPSINA; estas enzimas
participam na transformao dos alimentos no processo da digesto.
-A finais do sculo XIX Pasteur afirma que a fermentao era
catalizada por enzimas e postulou que estas se encontram unidas
de modo inseparvel vida e a estrutura da clula.

No entanto, Bchner em 1892 extraiu as enzimas que catalisam a
transformao da glicose em lcool e dixido de carbono. , uma
das fermentaes mais caractersticas das clulas do fermento; isto
demonstrou que as enzimas podiam atuar independentemente da
estrutura da clula e com isso se sentaram as bases da enzimologia
moderna, cujo rpido desenvolvimento contribuiu a impulsionar
o avano da BIOQUMICA.

No entanto, no foi at muitos anos depois que se pde isolar o
primeiro enzima em forma cristalina( A UREASE, isolada por
Summer(1926)) e
em 1930 e 1936 Nortrop, isolou a PEPSINA, a TRIPSINA e a
QUIMOTRIPSINA em forma cristalina, o que permitiu
estabelecer a natureza e constituio qumica das enzimas.
Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.
Propriedade das Enzimas . Natureza qumica:

Demonstrou-se experimentalmente, que a maioria das enzimas
conhecidas so de natureza proteicas, e mais recentemente foram
reconhecidas as Ribozimas, que so RNAs que tem ao cataltica.

As enzimas que so protenas tem as mesmas propriedades que as
Protenas.

A anlise dos aminocidos que estruturam as molculas enzimticas
so similares s que esto presentes em outras protenas:

So alfa aminocidos e se pode afirmar que todas as enzimas so
protenas, mas no todas as protenas so enzimas.
ENZIMAS
ESTRUTURA



RNA
Estrutura
Enzimtica
Ribozimas
Se covalente
Apoenzima ou
Apoprotena
Grupo Prosttico
Holoenzima
Cofator
Coenzima
Protena
Pode ser:
on inorgnico
molcula orgnica
Apresentam alto grau de especificidade;
So produtos naturais biolgicos;
Reaes baratas e seguras;
So altamente eficientes, acelerando a velocidade
das reaes (10
8
a 10
11
+ rpida);
So econmicas, reduzindo a energia de ativao;
No so txicas;
Condies favorveis de pH, temperatura,
polaridade do solvente e fora inica.


ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS
Caracterstica Enzimas Catalisadores Qumicos
Especificidade ao substrato alta baixa
Natureza da estrutura complexa simples
Sensibilidade T e pH alta baixa
Condies de reao (T, P e pH) suaves drstica (geralmente)
Custo de obteno (isolamento e purificao) alto moderado
Natureza do processo batelada contnuo
Consumo de energia baixo alto
Formao de subprodutos baixa alta
Separao catalisador/ produtos difcil/cara simples
Atividade Cataltica (temperatura ambiente) alta baixa
Presena de cofatores sim no
Estabilidade do preparado baixa alta
Energia de Ativao baixa alta
Velocidade de reao alta baixa
Comparao das enzimas com catalisadores qumicos
As protenas que tm ao enzimtica possuem iguais propriedades
qumicas que o resto das protenas, mas, as que tm ao enzimtica
tm outras propriedades que as diferenciam do resto das protenas e
que est relacionado com seu modo de ao.

As enzimas apresentam uma estrutura NATIVA ou PRIMRIA
determinada pela seqncia dos aminocidos na Cadeia Poli-peptdica,
e onde a complexidade em que esta Cadeia se dispe no espao ( Alfa
Hlice ou de Folha Pregeada), considera-se um nvel de Estrutura
Secundrio, um tercirio e um nvel quaternrio.

Em todas as enzimas, a disposio espacial da Cadeia poli-peptdica
atinge como mnimo um nvel tercirio ou Estrutura Terciria e esta a
que lhe confere capacidade cataltica, j que este nvel de
complexidade determina a formao de lugares especficos de unio da
enzima com a molcula que vai ser transformada, que recebe o nome de
SUBSTRATO.
O lugar de unio da enzima com o substrato recebe o nome de
CENTRO OU SITIO ATIVO.











No caso das enzimas tambm se lhe aplica o termino
OLIGMERO, quelas que esto constitudas por mais de uma
cadeia de protena e PROTMEROS a cada una de suas
cadeias..
SITIO ATIVO DA ENZIMA
A PARTE COM SOMBRA O
SITIO ATIVO
A TRIADA CATALTICA:
SER 200, HIS 440 e GLU 327
PROPRIEDADES DAS ENZIMAS:

No estudo realizado em Qumica Orgnica, vocs estudaram as
propriedades gerais das protenas,e podem lembrar, que estas
substncias tm carter anftero, muitas delas precipitam frente a
determinados reagentes ou frente a diferentes fatores fsicos, etc.

No entanto, por possuir as enzimas atividade cataltica elas
apresentam propriedades particulares que as diferenciam das demais
protenas. Estas propriedades so:

AO CATALITICA
ESPECIFICIDAD (ESTEREOESPECIFICIDAD)
AO REGULADORA
REVERSIBILLIDADE
AO CATALTICA. ESTRUTURA DO CENTRO OU SITIO
ATIVO.

Todas as enzimas, alm de possuir estrutura primria, secundria ,
terciria e em alguns casos quaternria, possuem um lugar
especfico dentro da molcula denominado CENTRO ATIVO ,
SITIO ATIVO OU SITIO CATALTICO.

Este por suposto, est na Cadeia Poli-peptdica , e no mais do
que a parte da enzima que se combina com o substrato.

O Centro Ativo est formado por uma agrupao especial e
especfica de aminocidos, constituindo uma parte muito pequena
do enzima, e est determinado pela estrutura terciria ou
quaternria .
Os aminocidos que formam parte do Centro Ativo tm duas
funes fundamentais:

1- FIXAR O SUBSTRATO AO CENTRO ATIVO
2- TRANSFORMAR O SUBSTRATO EM PRODUTO.

Os aminocidos que fixam o substrato ao Centro Ativo recebem o
nome de AMINOCIDOS DE FIXAO O CONTATO.

Os que se ocupam de transformar ao substrato em produto,
recebem o nome de : AMINOCIDOS CATALTICOS.

Os aminocidos da Cadeia de protena que no participam na
estrutura do Centro Ativo, servem de suporte estrutura e
disposio espacial do Centro Ativo.

Os aminocidos que formam o Centro Ativo tm grupos funcionais
que facilitam tanto a fixao como a transformao do substrato
em produto; estes grupos so:

O NH2, presentes na Lisina, o COOH do cido Glutmico ou
Aspartico, o OH da Serina , o SH da Cisteina, etc.

Estes grupos podem atuar, em dependncia de suas
caractersticas estruturais como bases ou como cidos ou como
Agentes Nucleoflicos ( doadores de eltrons) ou como Agentes
electroflicos( aceptores de eltrons).
S t i o
at i v o
ALGUNS MODELOS PROCURAM EXPLICAR A ESPECIFICIDADE
SUBSTRATO / ENZIMA:
MODELO CHAVE/FECHADURA :

-Prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria
rgido como uma fechadura.
- No explica a reversibilidade das enzimas.
ENZIMAS
LIGAO ENZIMA -
SUBSTRATO


Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das
enzimas originou Chave-Fechadura , que
considera que a enzima possui sitio ativo complementar
ao substrato.

ENZIMAS
LIGAO ENZIMA -
SUBSTRATO



Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o
o substrato sofrem conformao para o encaixe. O
substrato distorcido para conformao exata do
estado de transio.

Modelo do Ajuste Induzido :

Prev um stio de ligao no totalmente pr-formado, nas sim
moldvel molcula do substrato; a enzima se ajustaria molcula do
substrato na sua presena.


EXEMPLO: ENZIMA HEXOQUINASE
Hexocinase de levedura na ausncia de Glicose

Hexocinase de levedura na presena de Glicose
Alm disso, a ligao do substrato na enzima causa mudanas estruturais
que a mantm mais estvel. Esse o caso da hexocinase, que sofre uma
grande mudana conformacional quando glicose se liga ao seu stio
ativo:
Mecanismo Geral de Catlise

As enzimas aceleram a velocidade de uma reao por diminuir a
ENERGIA LIVRE DE ATIVAO da mesma, sem alterar a
termodinmica da reao, ou seja:

A energia dos reagentes e produtos da reao enzimtica e de sua
equivalente no enzimtica so idnticas.

Para se superar a energia de ativao de uma reao, passa-se pela
formao de um estado intermedirio chamado "Estado de
Transio", sempre um composto instvel e de alta energia,
representado por "Ts", ligado com altssima afinidade ao stio
cataltico.
Nas reaes enzimticas, este composto de transio "Ts"
no pode ser isolado ou mesmo considerado um
intermedirio, uma vez que no liberado para o meio de
reao; sua formao ocorre NO STIO CATALTICO da
enzima!!

Como a afinidade do "Ts" ao stio cataltico muito maior
que a afinidade do substrato com o mesmo, a pequena
quantidade de molculas em "Ts" ser rapidamente
convertida em produto.

Assim, todo o fator que leva a um aumento do nmero de
molculas em "Ts" aumenta a velocidade da reao.
Especificidade Substrato \ Enzima

As enzimas so muito especficas para os seus substratos;

Esta especificidade pode ser relativa a apenas um substrato ou
a vrios substratos ao mesmo tempo.

A especificidade pode considerar-se como a propriedade mais
destacada das enzimas e se manifesta na capacidade que tm
as enzimas para combinar-se em forma especifica com um
substrato determinado por apresentar afinidade entre os
grupos qumicos presentes no Centro Ativo e no Substrato.
A especificidade pode ser ABSOLUTA OU RELATIVA.

ABSOLUTA: Quando a enzima especifica para um tipo de ligao
correspondente a um substrato nico; inclusive a enzima no inter-
atua com outro substrato de estrutura muito similar ou relativa.

Exemplo: A enzima ASPARTASE que s transforma ao cido
Fumrico em Aspartico por adio de amnia ao dupla ligao e no
o faz em outros cidos no-saturados:

-OOC H COOH

C NH3 CH2

C Aspartase H-C - NH2 + H +

H COO - COOH

Fumarato cido Aspartico
A especificidade relativa se manifesta naquelas enzimas
capazes de transformar mais de um substrato, sendo
varivel a afinidade desta por cada substrato.

A especificidade relativa se apresenta em quatro
modalidades:

a)Completa de Grupo (Ex. Grupo ster)
b)Relativa de Grupo ( Ex. Ligao amida)
c)Genrica de Classe ( oxido-redua)
d)Estereo-especfica ( ismeros D e no L)
Pode dizer-se, por tanto que a especificidade enzimtica determina o
destino de um Metabolito e que numa clula existem numerosas
enzimas diferentes. Um exemplo ilustrativo do antes exposto, pode
ser representado no seguinte esquema:

GLICOSE + ATP 6-P- GLUCONOLACTONA


GLICOSE-6-P.



GLICOSE-1-P FRUTOSE-6-P.
AO REGULADORA

Regulao Enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando
assim como moduladoras do metabolismo celular.

Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros
processos metablicos pela clula.

Alm dos mecanismos j citados de modulao de atividade
enzimtica - por variao da concentraodo substrato, ou por
inibio enzimtica, por exemplo - existem 2 modelos de
regulao enzimtica mais conhecidos:
MODULAO ALOSTRICA:

Ocorre nas enzimas que possuem um STIO DE MODULAO, ou
ALOSTRICO, onde se liga de forma no-covalente um modulador
alostrico que pode ser positivo (ativa a enzima) ou negativo (inibe a
enzima).

A ligao do modulador induz a modificaes conformacionais na
estrutura espacial da enzima, modificando a afinidade desta para
com os seus substratos;

Um modelo muito comum de regulao alostrica a inibio por
"FEED-BACK", onde o prprio produto da reao atua como
modulador da enzima que a catalisa.
INIBIDOR ALOSTERICO
INIBIDOR ALOSTERICO
DEFORMAO DO
SITIO ATIVO
A REAO DISMINUIDA POR DEFORMAO DO SITIO ATIVO
MODULAO COVALENTE:

Ocorre quando h modificao covalente da molcula da
enzima, com converso entre formas ativa/inativa.

O processo ocorre principalmente por adio/remoo de
grupamentos fosfato de resduos especficos de serina.
REVERSIBILIDADE:

As enzimas podem reagir nas duas direes.

Elas podem reagir com um substrato e obter um produto e
logo podem reagir com o Produto pra obter novamente o
substrato de partida.

Exemplo: Na reao da Glicose 6-P para formar a Frutose 6-
P, a enzima Isomerase catalisa tanto a reao direta como a
reao inversa, de formao de Glicose 6-P a partir da
Frutose-6-P

E: ISOMERASE
Glicose-6-P Frutose -6-P


NOMENCLATURA DAS ENZIMAS

Existem 3 mtodos para nomenclatura enzimtica:

Nome Recomendado:
Mais curto e utilizado no dia a dia de quem trabalha com enzimas;
Utiliza o sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Exs: Urease,
Hexoquinase, Peptidase, etc

Nome Sistemtico:
Mais complexo, nos d informaes precisas sobre a funo
metablica da enzima. Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase

Nome Usual :
Consagrados pelo uso; Exs: Tripsina, Pepsina, Ptialina.
CLASSIFICAO DAS ENZIMAS:

As enzimas podem ser classificadas de acordo com vrios critrios.
O mais importante foi estabelecido pela Unio Internacional de
Bioqumica (IUB), e estabelece 6 classes:
1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de
Bioqumica (IUB) nomear e classificar as Enzimas

Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao
catalisada:
1 dgito - classe
2 dgito - subclasse
3 dgito - sub-subclasse
4 dgito - indica o substrato

- Oxidorredutases:
So enzimas que catalisam reaes de transferncia de eltrons, e de
Hidrognio, ou seja: reaes de oxi-reduo. So as Desidrogenases e
as Oxidases

- Transferases :
Enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupamentos
funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Como
exemplo temos as Quinases e as Transaminases

- Hidrolases :
Catalisam reaes de hidrlise de ligao covalente. Ex: As
peptidades, Lipases, etc
-Liases
Catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de
molculas de gua, amnia e gs carbnico. As Desidratases e as
Descarboxilases so bons exemplos

Isomerases
Catalisam reaes de inter-converso entre ismeros pticos ou
geomtricos. As Epimerases , Racemases, Isomerases, etc, so
exemplos.

Ligas
Catalisam reaes de formao e novas molculas a partir da
ligao entre duas j existentes, sempre s custas de energia (ATP).
So as Sintetases.
Classificao das enzimas segundo a Comisso de Enzimas.
1. Oxido-redutases (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons)
1.1.atuando em CH-OH
1.2.atuando em C=O
1.3.atuando em C=O-
1.4.atuando em CH-NH
2
1.5.atuando em CH-NH-
1.6.atuando em NADH, NADPH
2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas)
2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre
3.Hidrolases (reaes de hidrlise)
3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e
gs carbnico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-
5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros)

5.1.racemases
6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas pr-
existentes, sempre s custas de energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C
Subclasses
Exemplos de
Subclasses
Tipo de reao catalisada Classe
Hidratases Adicionam H
2
O ligas duplas Liases
Quinases Transferem fosforilas do ATP Transferase
Mutases Movem fosforilas dentro da
mesma molcula
Isomerase
Sintases Sntese independente de ATP Transferases
Sintetases Sntese dependente de ATP Ligases
ATP + D-Glicose
ADP + D-Glicose-6-fosfato
IUB - ATP:glicose fosfotransferase
E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase
7 - subclasse - Fosfotransferases
1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo hidroxila como receptor
1 - indica ser a D- glicose o receptor do grupo fosfato
Nome trivial: Hexoquinase
PARA SEU ESTUDO AS ENZIMAS SO CLASSIFICADAS EN
DOIS GRANDES GRUPOS.

ENZIMAS SIMPLES: APOENZIMAS

So formadas s por a cadeia poli-peptdica que atua na catlise
enzimtica sem necessidade de outros fatores.
Tais enzimas so chamadas de Apoenzimas

Exemplo: A enzima Urease que transforma a Ureia em Dixido de
Carbono e Amnia
E: UREASE
UREIA + H2 O CO2 + NH3
ENZIMAS COMPLEXAS: HOLOENZIMAS

As enzimas complexas precisam , alm da parte proteica da enzima
de outros fatores para poder realizar sua ao catalitica.
Tais enzimas so chamadas de Holoenzima.

HOLOENZIMAS= APOENZIMA + COFATORES

Exemplo: A enzima Hexoquinase que fosforila a Glicose e a
transforma em Glicose-6-P
ATP ADP

GLICOSE GLICOSE -6-P
( Mg 2+)
ENZIMAS COMPLEXAS
CO-FATORES ENZIMATICOS:

Cofatores so pequenas molculas orgnicas ou inorgnicas que
podem ser necessrias para a funo de uma enzima;
Estes cofatores podem o no estar ligados permanentemente
molcula da enzima mas, na ausncia deles, a enzima inativa;
Podem atuar segundo 3 modelos:

-Ligando-se enzima com afinidade semelhante do substrato

-Ligando-se covalentemente em local prximo ou no prprio stio
cataltico da apoenzima

- Atuando de maneira intermediria aos dois extremos acima citados.

Coenzimas
So compostos orgnicos, quase sempre derivados de vitaminas, que
atuam em conjunto com as enzimas. Substratos e coenzimas ligam-se
fraca e temporariamente s enzimas

GRUPOS PROSTTICOS

Algumas enzimas contm uma parte no protica que pode operar
como aceptor de eltrons.

O grupo prosttico mais conhecido FAD (Flavina Adenina
Dinucleotdeo), que participa de reaes de oxi-reduo como NAD e
NADP (que so coenzimas solveis).


A diferena entre coenzimas, substratos e grupamentos prostticos
sutil e varia mais no grau que no tipo de relao com a enzima.

Os grupos prostticos esto firmemente presos ao centro ativo.
Enzimas deste tipo so, portanto, protenas conjugadas; o
fragmento no protico chamado de "grupamento
prosttico".

Co-enzimas podem difundir, pois no esto firmemente
presas enzima, como se d com os grupos prostticos.

O grupamento prosttico funciona como um aceptor de
eltrons (agente oxidante) "embutido" no prprio centro
ativo; necessariamente ter que passar os eltrons para um
outro aceptor.

ATIVADORES

Muitas vezes formam parte do Sitio Ativo da Enzima.
So nions ou ctions que participam no processo de
ativao do Sitio Ativo das enzimas.
Certos oligo-elementos so ativadores de enzimas, agindo
em seu stio ativo ou diretamente na estrutura da protena
enzimtica, modificando sua forma operacional ou
aumentando sua estabilidade. Exemplo.
Mg 2+, Mn 2+, Zn 2+, Co 2+, Cl- , PO4 3- , etc

Outros oligo-elementos incorporam-se estrutura das
vitaminas, como o caso do cobalto em relao vitamina
B12; outros agem como co-fatores enzimticos, participando
da sntese de molculas de hormnio, ou diretamente sobre
elas, ou ainda, possuem ao direta nos receptores
hormonais.

EXEMPLO DE CO-FATOR
DISCIPLINA: BIOQUMICA
TAREFA NO. 4 ENZIMAS
ENZIMOLOGIA I
1.QUAIS SO AS VANTAGENS DAS ENZIMAS EM RELAO AOS CATALISADORES NO-
BIOLGICOS ?
2.? QUAL A FUNO DE UMA ENZIMA , EM UMA REAO ?
3./ QUE O SITIO ATIVO DE UMA ENZIMA E COMO ELE FORMADO?
4.? QUAIS SO AS PROPRIEDADES DE UMA ENZIMA ?
5.? COMO SO CLASSIFICADAS AS ENZIMAS DE ACORDO COM O TIPO DE REAO QUE
ELAS CATALISAM?
6.? QUE O CONCEITO DE APOENZIMA E DE HOLOENZIMA ?
7.? QUE SO OS CO-FATORES ENZIMTICOS? PONHA EXEMPLOS.
8.CITE A IMPORTNCIA DAS ENZIMAS REGULADORAS NOS SISTEMAS ENZIMTICOS .
9.POR QUE AS ESTRUTURAS PRIMRIA , SECUNDRIA, TERCIRIA E QUATERNRIA
DAS ENZIMAS SO ESSENCIAIS PARA O EXERCCIO DAS ATIVIDADES CATALTICAS ?
10.O QUE ENERGIA DE ATIVAO DE UMA REAO ? DE QUE MANEIRA OS
CATALISADORES AUMENTAM A VELOCIDADE DA REAO ?
11.O TRADICIONAL MODELO CHAVE-FECHADURA APRESENTA UMA INCOERNCIA .
EXPLIQUE E CORRIJA-O.
12.? QUAIS MODELOS EXPLICAM A UNIO ENZIMA-SUBSTRATO ?