Validacion Método Determinación de Hierro en Agua

VALIDACIN DEL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO (Fe) EN AGUAS

MANUEL FERNANDO CASTRO CORTINA

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE COLOMBIA
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA AMBIENTAL
BOGOT D.C.
2012

VALIDACIN DEL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO (Fe) EN AGUAS

MANUEL FERNANDO CASTRO CORTINA

TRABAJO DE GRADO PARA OPTAR AL TTULO DE
PROFESIONAL EN INGENIERA AMBIENTAL

DIRECTOR:
ARMANDO FONSECA CORREA

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE COLOMBIA
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA AMBIENTAL
BOGOT D.C.
2012
iii

CONTENIDO

RESUMEN .............................................................................................................. 7
ABSTRACT ............................................................................................................. 8
1. INTRODUCCIN .............................................................................................. 9
2. FORMULACIN DEL PROBLEMA ................................................................ 11
3. JUSTIFICACIN ............................................................................................. 13
4. OBJETIVOS .................................................................................................... 15
2.1 General ........................................................................................................ 15
2.2 Especficos ................................................................................................... 15
5. CONTENIDO TERICO ................................................................................. 16
5.1 Caractersticas del Hierro ............................................................................. 16
5.2 Usos y fuentes de exposicin al Hierro ........................................................ 17
5.3 El Hierro en el agua ..................................................................................... 18
5.4 Funciones fisiolgicas del Hierro.................................................................. 19
5.5 Toxicidad del Hierro y sus Compuestos ....................................................... 19
5.5.1 Intoxicacin aguda por Hierro ................................................................ 19
5.5.2 Intoxicacin crnica por Hierro .............................................................. 20
5.6 Legislacin nacional e internacional para el Hierro ...................................... 21
5.7 Mtodos espectroscpicos ........................................................................... 22
5.7.1 La Espectrofotometra ............................................................................ 22
5.7.2 Propiedades de la radiacin electromagntica ...................................... 24
5.8 Mtodos para la determinacin de hierro (Fe) ............................................. 27
5.8.1 Mtodo de absorcin atmica con llama ................................................ 27
5.8.2 Mtodo de absorcin atmica electrotrmica ........................................ 27
iv

5.8.3 Mtodo de plasma de acoplamiento inductivo (ICP) .............................. 28
5.8.4 Mtodo de la fenantrolina ...................................................................... 29
5.9 Validacin de tcnicas ................................................................................. 30
5.9.1 Estandarizacin y calibracin ................................................................ 31
5.9.2 Parmetros de rendimiento a considerar ............................................... 32
6. DESARROLLO METODOLGICO ................................................................. 33
6.1 Documentacin y montaje de la metodologa .............................................. 33
6.1.1 Seleccin del mtodo ............................................................................. 33
6.1.2 Funcionamiento del equipo de medicin ................................................ 34
6.1.3 Inventario de reactivos ........................................................................... 35
6.1.4 Inventario de vidriera y otros equipos ................................................... 35
6.1.5 Limpieza del material ............................................................................. 35
6.1.6 Formato para captura de datos .............................................................. 36
6.1.7 Rango de aplicacin del mtodo ............................................................ 36
6.2 Anlisis del Hierro ........................................................................................ 37
6.2.1 Solucin reserva de hierro (P
1
) .............................................................. 38
6.2.2 Solucin patrn de hierro P
2
.................................................................. 38
3
.................................................................. 39
6.2.4 Preparacin de reactivos ....................................................................... 40
6.2.5 Preparacin curva de absorbancia ........................................................ 40
6.2.6 Preparacin de la curva de calibracin .................................................. 41
6.3 Anlisis en muestras de agua natural .......................................................... 44
7. ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS ................................................ 47
7.1 Curva de calibracin el Hierro ...................................................................... 47
7.2 Anlisis estadstico ....................................................................................... 51
v

7.3 Sensibilidad .................................................................................................. 52
7.4 Precisin ...................................................................................................... 53
7.5 Exactitud y porcentaje de recuperacin ....................................................... 54
7.6 Linealidad ..................................................................................................... 54
7.7 Lmite de deteccin del mtodo ................................................................... 54
7.8 Muestra de agua natural .............................................................................. 54
8. CONCLUSIONES ........................................................................................... 57
9. RECOMENDACIONES ................................................................................... 58
10. BIBLIOGRAFA ............................................................................................... 59
ANEXOS ............................................................................................................... 63

ndice de figuras y diagramas

Figura 1. Esquema bsico de un espectrofotmetro. ....................................................... 23
Figura 2. Equipo de medicin.. ........................................................................................ 35
Figura 3. Diagrama de flujo para la preparacin de la solucin reserva de hierro P
1
........ 38
Figura 4. Diagrama de flujo para la preparacin de la solucin patrn de hierro P
2
......... 39
3
......... 39
Figura 6. Serie de diluciones preparadas.. ....................................................................... 42
Figura 7. Diagrama de flujo del proceso de preparacin de la curva de calibracin. ........ 43
Figura 8. Diagrama de flujo del proceso para determinacin de hierro total. .................... 45
Figura 9. Diagrama de flujo del proceso para determinacin de hierro ferroso................. 46

vi

ndice de tablas

Tabla 1. Serie de diluciones utilizadas con su concentracin terica de Fe. .................... 37
Tabla 2. Patrones preparados con sus respectivas series de diluciones y la concentracin
de hierro terica para cada una de ellas. ......................................................................... 42
Tabla 3. Ecuaciones de la recta obtenidas para los ensayos en el rango total. ................ 48
Tabla 4. Datos de la curva de calibracin para la determinacin de hierro ....................... 49
Tabla 5. Anlisis estadstico ............................................................................................. 52
Tabla 6. Anlisis de las pendientes para determinar la sensibilidad del mtodo. ............. 53
Tabla 7. Resultados del anlisis de hierro total y ferroso en la muestra de agua natural. 56

ndice de grficas

Grfica 1. Curva de absorbancia para determinar la longitud de onda de mxima
absorcin. ........................................................................................................................ 41
Grfica 2. Curva de calibracin para la determinacin de Fe. .......................................... 50

ndice de Anexos

Anexo 1. Mtodo de la Fenantrolina para la determinacin de Fe en aguas, Standard
Methods (1999).
Anexo 2. Protocolo de estandarizacin de mtodos analticos del IDEAM
Anexo 3. Inventario de reactivos
Anexo 4. Inventario de vidriera y equipos
Anexo 5. Formato captura de datos
Anexo 6. Grfica de ensayos No. 3 a 10
Anexo 7. Grafica de ensayos No. 11 a 17
Anexo 8. Datos de ensayos
Anexo 9. Ficha tcnica del espectrofotmetro
7

RESUMEN
Los anlisis fisicoqumicos constituyen una fuente primaria de obtencin de
informacin relevante sobre un determinado analito. Dichos anlisis se llevan a
cabo mediante la aplicacin de mtodos analticos experimentales, los cuales en,
primera instancia, deben ser sometidos a un proceso de validacin que garantice
la confiabilidad en los resultados obtenidos. En el presente trabajo se valida el
mtodo de la fenantrolina para la determinacin de hierro total y ferroso en
muestras de agua natural. Para tal fin se tuvo como referencia el principio y
procedimiento del mtodo definido por la APHA y la AWWA en el Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater y los lineamientos definidos
por el IDEAM en el Protocolo de Estandarizacin de Mtodos Analticos. En
primera instancia se determin la curva de calibracin o curva patrn para el
hierro, mediante 15 ensayos en los cuales se prepararon y analizaron diluciones
con diferentes concentraciones de hierro. La ecuacin obtenida fue: A = 0,1978C +
0,0011, y el lmite de deteccin del mtodo (LDM) se fij en 0,0032 mg/l. Una vez
obtenida la ecuacin se analiz una muestra de agua subterrnea proveniente de
un pozo profundo ubicado en el casco urbano del municipio de Orocu
(Casanare), obteniendo resultados tanto para hierro total como para hierro ferroso,
los cuales no excedieron el valor de referencia de 0,3 mg/l para agua potable,
definido en la Resolucin 2115 de 2007.

8

ABSTRACT
Physicochemical analyzes are a primary source for obtaining relevant information
about a given analyte. These analyzes are carried out by applying experimental
analytical methods, which in the first instance, should be subjected to a validation
process in order to ensure the reliability of the results. The present work validates
the phenanthroline method for the determination of total and ferrous iron in natural
water samples. For this purpose, it was taken as reference the principle and
procedure of the method defined by the APHA and AWWA in the Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater, and the guidelines defined
in the IDEAM Analytical Methods Standardization Protocol. First, the calibration
curve for iron was determined through 15 tests in which dilutions were prepared
and analyzed with different concentrations of iron, the equation obtained was: A =
0,1978 C + 0,0011, and the method detection limit (MDL) was set at 0,0032 mg/l.
Once the equation was obtained, a sample of natural water from a deep well
located in the urban area of Orocu (Casanare) analyzed. Results for both total
iron to ferrous iron were found, which did not exceed the reference value of 0,3
mg/l for drinking water, as defined in the 2115 Resolution from 2007.

9

1. INTRODUCCIN
El agua natural constituye un sistema complejo y heterogneo, formado por una
fase acuosa, una gaseosa y una o varia fases slidas, las cuales se encuentran
interactuando entre s mediante equilibrios qumicos regidos por leyes
termodinmicas, y en cuya composicin qumica intervienen, adems, otros
factores (geolgicos, hidrogeolgicos, geomorfolgicos, pedolgicos,
microbiolgicos, climticos y ambientales) (Stumm et al. 1970).
El agua natural en su conjunto constituye un recurso renovable que interviene en
el ciclo hidrolgico y cubre alrededor del 75% de nuestro planeta. Es una
sustancia imprescindible para la vida y se ha demostrado que su cantidad global
no vara, aunque s su cantidad local y su calidad.
El incesante aumento poblacional y el consecuente aumento de las actividades
industriales que producen los bienes y servicios demandados por dicha poblacin
para satisfacer sus necesidades, adems de la falta de conciencia, ha generado
una carga extrema sobre los recursos del planeta, que est superando
ampliamente su capacidad de autorregulacin. Uno de los recursos ms
impactados es el agua, pues esta sirve como receptora para todos los
contaminantes provenientes de las actividades humanas.
A raz de esta problemtica resulta indispensable establecer mtodos de anlisis
de agua para estudiar hasta el ms mnimo detalle, de modo tal que se permitan
descartar la presencia de organismos y elementos o sustancias que puedan
producir efectos fisiolgicos adversos en la salud humana. Para llevar a cabo
dichos anlisis, los mtodos deben ser validados experimentalmente garantizando
un buen grado de confianza, y as poder determinar si se est dando cumplimiento
a los criterios de referencia exigidos por la normatividad nacional e internacional.
Validar un mtodo analtico consiste en la realizacin de una serie de pruebas
debidamente documentadas bajo algunas condiciones especficas, que permitan
dar cumplimiento a ciertas especificaciones y/o criterios de calidad, demostrando
as que el mtodo es apropiado para los propsitos establecidos. En la validacin
10

se asegura la calidad y validez de los resultados, esto teniendo en cuenta el
analito, el equipo de medicin utilizado, y el principio del mtodo.
El presente trabajo busca realizar la validacin del mtodo analtico para la
determinacin de hierro total y ferroso en muestras de agua natural; por el Mtodo
Espectrofotomtrico de la Fenantrolina, mtodo establecido por la APHA et al. en
el libro Estndar Methods for the Examination of Water and Wastewater, numeral
3500-Fe D. Adicionalmente se adoptan los parmetros del Protocolo de
Estandarizacin de Mtodos Analticos del IDEAM, considerando los siguientes
parmetros de rendimiento: Sensibilidad, precisin, linealidad y lmite de deteccin
del mtodo (LDM).
Mediante la validacin de este mtodo se busca determinar el hierro total y ferroso
presente en una muestra de agua natural, tomada de un pozo profundo ubicado
en el casco urbano del Municipio de Orocu (Casanare). El montaje y validacin
del mtodo se realizaron en el laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad
Autnoma de Colombia, logrando as sentar un precedente de utilidad como
estudio base para otras investigaciones futuras en la materia.

11

2. FORMULACIN DEL PROBLEMA
Los vertimientos lquidos producto de las actividades humanas constituyen uno de
los contaminantes ms significativos para el ambiente a nivel global, y
dependiendo del tipo de actividad de la que provengan, pueden conllevar a
impactos de gran magnitud, perjudicando cuerpos de agua superficiales y
subterrneos, suelos y por consiguiente toda la vida que se abastece, habita, o
simplemente interacta de alguna manera con estos elementos del medio.
Algunos de los principales contaminantes encontrados en los cuerpos de agua,
provenientes principalmente de vertimientos lquidos de la industria son los
metales pesados, siendo los ms relevantes el Cromo (Cr), el Cadmio (Cd) y el
Mercurio (Hg). Otro importante metal pesado es el Hierro (Fe), el cual se puede
encontrar de forma natural en los acuferos.
Si bien el hierro en las cantidades que suele encontrarse de forma natural no
representa un riesgo para la salud del hombre, concentraciones por encima de 0,3
mg/l pueden afectar la calidad del agua y convertirse en un problema
principalmente de infraestructura para las redes de los acueductos, generando
rechazo por parte de los usuarios y consecuentes prdidas por mantenimientos y
dems acciones correctivas que sean necesarias.
Aunque es evidente la creciente preocupacin y el consecuente seguimiento y
monitoreo de la calidad del agua en gran parte del pas por parte de las
autoridades ambientales, estas entidades an tienen un alcance limitado, y
algunas poblaciones de territorios apartados que no cuentan con recursos
tecnolgicos y cientficos propios, sumado a la falta de conocimientos sobre los
riesgos potenciales por parte de la poblacin, an son vulnerables.
A raz de esto, se validar un mtodo espectrofotomtrico para la determinacin
de hierro en muestras de agua natural, que ofrezca un buen grado de confianza
para la determinacin de los criterios establecidos, es decir, que tenga un alto
grado de sensibilidad y garantice precisin, exactitud y un bajo nivel de
incertidumbre en los resultados obtenidos, de modo tal que se pueda consolidar
un buen aporte para el creciente y sobre todo necesario inters de la poblacin en
12

el continuo monitoreo y control de potenciales contaminantes en el agua, teniendo
como referencia los criterios establecidos por la normatividad nacional.

13

3. JUSTIFICACIN
La proteccin y el uso eficiente del agua es fundamental para el desarrollo
sustentable de las naciones y estados que conforman muestro planeta, pues es un
recurso natural indispensable dentro de los procesos biolgicos que se presentan
diariamente; por ende, debido a las actividades necesarias para el mantenimiento
y desarrollo de la economa moderna, es requerido un control adecuado frente al
aprovechamiento de este recurso, pues dichas actividades suelen alterar las
caractersticas naturales del agua, las cuales al ser modificadas pueden conllevar
a impactos ambientales negativos de grandes proporciones, perjudicando no solo
el equilibrio de los ecosistemas en donde este recurso haya sido perturbado, si no
la disponibilidad del mismo a nivel global.
Para llevar a cabo un control eficiente, son requeridas las habilidades que a travs
de los aos ha desarrollado la ciencia, tales como las tcnicas de anlisis de
aguas, pues estos estudios permiten identificar y cuantificar con precisin el grado
de afectacin que puede tener el recurso hdrico cuando ha sido alterado, tal
impacto se puede calcular haciendo un anlisis comparativo con los criterios
establecidos dentro de la normatividad, los cuales han sido establecidos con base
en estudios cientficos especializados, realizados por entidades y/o autoridades
ambientales tanto nacionales como internacionales.
Son diversas las actividades antrpicas que pueden perturbar el recurso hdrico,
pues esto no es asunto exclusivo de la industria. Dentro de la gran variedad de
sustancias que se pueden encontrar en estado natural, o que bien, son generadas
por actividades humanas est el Hierro (Fe), un metal pesado cuya presencia en
el agua en determinadas proporciones, puede causar algunas complicaciones
debido a sus caractersticas y a su fcil insercin dentro de los ecosistemas.
Es un deber para con la comunidad realizar anlisis peridicos para determinar la
concentracin de sustancias de inters potencialmente nocivas y los posibles
impactos negativos a los que puedan conllevar, de modo tal que se puedan tomar
las acciones correctivas pertinentes de manera oportuna.
14

Esto argumenta la importancia de la validacin de un mtodo analtico, que brinde
resultados confiables a la hora de determinar la concentracin de Hierro (Fe),
presente en muestras de agua natural provenientes de un pozo profundo ubicado
en el casco urbano del Municipio de Orocu (Casanare), el cual sirve como fuente
directa de abastecimiento de agua para consumo a numerosas familias. Para tal
fin, se debe disponer de un mtodo confiable, que permita determinar con eficacia
los criterios de anlisis establecidos, y adicionalmente, que sea de fcil
implementacin haciendo uso de los equipos y materiales disponibles en el
laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad Autnoma de Colombia.

15

4. OBJETIVOS

2.1 General
Validar el mtodo espectrofotomtrico para la determinacin de Hierro total
y ferroso en muestras de agua natural.

2.2 Especficos
Seleccionar el mtodo espectrofotomtrico a utilizar para la determinacin
de Hierro en muestras de agua.

Realizar el montaje experimental del mtodo espectrofotomtrico en el
laboratorio de Qumica de la Universidad Autnoma de Colombia.

Elaborar la curva de calibracin de referencia para la determinacin
posterior de concentraciones de hierro (Fe) en muestras aguas.

Llevar a cabo la recoleccin y anlisis de una muestra de agua natural.

Determinar si la concentracin de hierro en el agua analizada cumple con el
parmetro de referencia para agua potable definido en la normatividad
Colombiana.

16

5. CONTENIDO TERICO
5.1 Caractersticas del Hierro
El hierro es un elemento perteneciente al grupo de los metales de transicin con
smbolo Fe; tiene un nmero atmico de 26 y pesa 55,847 g/mol. Se conocen 4
istopos estables del hierro Fe
54
, Fe
56
, Fe
57
, y Fe
58
. Posee una densidad media de
7,86 g/ml, con puntos de fusin y ebullicin respectivos de 1808 K (1535C) y
3023 K (2750C); es buen conductor tanto de la electricidad como del calor. Se
obtiene principalmente de 4 minerales Hematites (Fe
2
O
3
), Limonita (2Fe
2
O
3
.3H
2
O),
Magnetita (Fe
3
O
4
) y Siderita (FeCO
3
). El hierro se usa para fabricar aceros de muy
diversos tipos, y en menor medida fundiciones.
El hierro como elemento tiene dos estados de oxidacin +2 y +3, dando lugar a
FeO y Fe
2
O
3
, estos xidos le dan un color marrn pardo al hierro y pierde muchas
de las propiedades iniciales que tena el hierro, por este motivo el hierro no se
utiliza en estado puro sino aleado o recubierto con otros elementos que lo
protegen de la corrosin/oxidacin.
El hierro es un material activo, se combina con halgenos, azufre, fsforo,
carbono y silicio. Adems desplaza al hidrgeno de la mayora de los cidos
dbiles. El xido debilita al hierro con una capa de color marrn la cual no protege
al hierro de seguir oxidndose como en el caso de otros metales, ya que la lmina
de este xido se desprende con facilidad.
El hierro es un material con buenas propiedades mecnicas las cuales pueden
mejorarse alendose con carbono para formar aceros o fundiciones, y con otro
tipo de elementos para formar aceros aleados. Estas propiedades varan mucho
en funcin de los aleantes al hierro, la temperatura, los tratamientos trmicos.
Las propiedades mecnicas ms importantes de un material como el hierro son
tenacidad, maleabilidad, ductilidad, dureza, deformacin plstica, resiliencia,
resistencia a la abrasin. (Borja, 2012)
17

El hierro es el metal ms abundante en los suelos, constituyendo alrededor del 5
% de la corteza terrestre, slo superado por el O
2
, Si y Al (Conor, 1980; Lou,
1988).
5.2 Usos y fuentes de exposicin al Hierro
Son diversas y numerosas las aplicaciones industriales y tecnolgicas del hierro y
sus compuestos. Interviene principalmente en la obtencin del acero, adems,
est relacionado con la fabricacin de equipos diversos para fines especficos, lo
cual puede constituir, en ocasiones, fuentes potenciales de contaminacin.
Ciertas sales como el acetato, el cloruro, nitrato, etc., son utilizadas como
mordientes en la tintura y grabado textil; el cloruro es empleado en el fotograbado
y el cromato frrico y el ferrocianuro se utilizan como pigmentos. Asimismo, el
hidrxido frrico juega un papel importante en algunos sistemas de purificacin de
aguas; el xido se emplea como pigmento, en el abrillantado y pulido del vidrio y
metales preciosos, en imanes y en cintas magnticas y esmaltes, etc. (Conor,
1980).
En el proceso Haber-Bosch se utilizan catalizadores de hierro para producir
amonaco y tambin se utilizan en el proceso de Fischer-Tropsch para convertir el
monxido de carbono en los hidrocarburos utilizados para combustibles y
lubricantes.
El acero inoxidable es un tipo muy comn de acero. El acero se obtiene mediante
la combinacin de hierro con otros metales. El acero inoxidable se utiliza en
algunas partes de los edificios, en ollas y sartenes, cubiertos y material quirrgico.
Tambin se utiliza para fabricar aviones y automviles. El acero inoxidable es
tambin 100% reciclable.
El cloruro de hierro es un compuesto muy importante. Se utiliza para el tratamiento
de aguas residuales, como un colorante para telas, como colorante para pintura,
como aditivo en la alimentacin animal y tambin para la fabricacin de placas de
circuitos impresos.
18

Como se puede apreciar, el hierro es un elemento ampliamente distribuido, de ah
que casi todos los productos alimenticios contengan hierro en proporciones. La
principal fuente de hierro para el hombre la constituyen los alimentos de origen
animal, seguidos por los cereales (especialmente cuando estn enriquecidos) y
por las verduras, frutas y derivados, que si bien aisladamente no contienen altas
cantidades de hierro, en conjunto representan una fuente diettica importante. En
una dieta variada, del 30 al 35 % del hierro total ingerido proviene de productos
animales, entre el 20 y el 30% de productos que contienen hierro adicionado y el
resto, de los grupos de las verduras, frutas, tubrculos y races (Conor, 1980;
Hercberg y Galn 1988; US Department of Health and Human Services, 1988;
National Research Council, 1991).
5.3 El Hierro en el agua
La presencia de hierro es un problema muy comn que afecta la calidad del agua,
especialmente en aguas de pozos profundos. El agua que contiene pequeas
cantidades de hierro, puede parecer clara al momento de la extraccin, pero podr
rpidamente tornarse roja luego de exponerla al aire. Este proceso es denominado
oxidacin, y envuelve la conversin de hierro disuelto (ferroso), que es altamente
soluble, en hierro precipitado (frrico), que es muy insoluble (Ruz, 2003). El hierro
se encuentra de manera natural en acuferos superficiales en concentraciones de
hasta 1 mg/L, pero los niveles de aguas subterrneas pueden ser superiores por
disolucin de rocas ferrosas. Las aguas subterrneas que tienen hierro son
normalmente de color naranja. El hierro en el agua provoca tincin de la ropa
lavada y la porcelana, y adems tienen un sabor desagradable. El hierro existe en
suelo y minerales principalmente como xido frrico insoluble y sulfuro de hierro,
FeS2 (pirita). En algunas reas presenta tambin como carbonato ferroso, siderita,
la cual es muy poco soluble.
Bajo condiciones reductoras, el Hierro existe en estado ferroso. En la ausencia de
iones que formen complejos, el Hierro frrico no es muy soluble a menos que el
pH sea muy bajo. En exposicin al aire o al adicionar oxidantes, el Hierro ferroso
19

es oxidado al estado frrico y se puede hidrolizar para formar xido frrico
hidratado insoluble.
En muestras de agua el Hierro puede aparecer en soluciones verdaderas, en un
estado coloidal que puede ser peptizado por materia orgnica, en complejos de
Hierro orgnicos o inorgnicos, o en partculas suspendidas relativamente
gruesas. (APHA et al. 1992).
5.4 Funciones fisiolgicas del Hierro
De los 2,5 a 4 g de hierro total presente en el organismo, alrededor de 1,3 - 2,6 g
se encuentran formando parte de la hemoglobina; el resto est asociado a ciertos
sistemas enzimticos (relacionados principalmente con el metabolismo energtico
oxidativo), a la mioglobina y a protenas de transporte y almacenamiento. De ah
que las funciones fundamentales del metal sean:
Transportar oxgeno a travs de la sangre y en el propio tejido muscular
(hemoglobina y mioglobina).
Intervenir en procesos redox en las reacciones de transferencia de
electrones en la cadena respiratoria.
Junto con el cobre desempea un importante papel en la biosntesis de
determinados compuestos (colgeno y elastina) (O'Dell, 1981).
Dada la importancia vital que tiene el Hierro en el organismo, las deficiencias del
mismo pueden conllevar a alteraciones de diferentes niveles de complejidad en la
salud.
5.5 Toxicidad del Hierro y sus Compuestos
5.5.1 Intoxicacin aguda por Hierro
La intoxicacin aguda por hierro, aunque es bastante rara en adultos, es una de
las intoxicaciones ms frecuentes en nios de corta edad (Barman, 1997; Dallman,
1991). En Estados Unidos se registran unos 2.000 casos anuales de estas
intoxicaciones, siendo la causa ms frecuente la ingestin de medicamentos que
contienen hierro destinados a los adultos (National Research Council, 1991), as
20

como de exceso de suplementos de hierro (como sulfato ferroso), que
normalmente se presentan bajo formas atractivas a los nios (Barman, 1997). La
intoxicacin aguda se caracteriza por lesin de la mucosa intestinal que da lugar a
la aparicin de diarreas sanguinolentas, nuseas, vmitos, acidosis, somnolencia,
shock y colapso cardiovascular. Estos signos pueden manifestarse 45 de 30
minutos a varias horas despus de la ingestin. Aunque puede existir un aparente
pero transitorio periodo de recuperacin, la muerte puede sobrevenir dentro de las
seis horas siguientes. La dosis letal de sulfato ferroso en nios de dos aos de
edad oscila alrededor de los 2-4 g, sin embargo, la ingestin de 1 g de sulfato
ferroso puede dar lugar a la aparicin de los sntomas anteriormente descritos.
Para los adultos esta cifra vara entre los 200 y 250 mg/Kg de peso corporal
(National Research Council, 1991; Barman, 1997; Dallman, 1991).
5.5.2 Intoxicacin crnica por Hierro
La acumulacin de hierro en exceso, aunque mucho menos frecuente que la
deficiencia del metal, puede ocasionar efectos adversos derivados de las lesiones
producidas en hgado, corazn y pncreas principalmente. Existen dos tipos de
intoxicacin crnica por hierro: la hemocromatosis gentica o idioptica
caracterizada por una absorcin de hierro en el tracto gastrointestinal
extraordinariamente activada, y la hemocromatosis adquirida que suele ser
consecuencia del padecimiento de determinadas enfermedades que requieren
transfusiones frecuentes o de la existencia de aportes de hierro anormalmente
altos (Linder, 1988; Conor, 1980; National Research Council, 1991; Dallman,
1991).
La hemocromatosis gentica es una alteracin homocigtica que da lugar a un
defecto congnito del metabolismo del hierro (no totalmente aclarado) y que
aumenta la absorcin del metal a partir del tracto gastrointestinal. La acumulacin
de hierro en los diferentes tejidos se manifiesta por una serie de alteraciones como
son: insuficiencia heptica, insuficiencia cardiaca, diabetes y lesiones celulares en
el pncreas, el hgado y el corazn (Linder, 1.988; National Research Council,
1991; Dallman, 1991). La frecuencia del estado homocigtico es de 1 en 125 a 1
21

en 300, de los que slo una parte desarrollan la enfermedad (Dallman, 1.991).
Como es de suponer un aumento de la cantidad de hierro presente en la dieta
puede agravar la enfermedad, lo que a menudo ha sido utilizado como argumento
en contra de la adicin de hierro a determinados alimentos. La hemocromatosis
adquirida suele aparecer como consecuencia de diversas situaciones tales como:
El padecimiento de talasemia homocigtica o de anemia hipoplsica.
Ambas requieren repetidas transfusiones de sangre que originan una
sobrecarga de hierro corporal. (Dallman, 1991).
La existencia de estados anmicos en los que se activa la absorcin
intestinal de hierro.
El consumo excesivo de hierro durante largos perodos de tiempo.
Ciertas hepatopatas como la cirrosis alcohlica, pueden producir
sobrecarga corporal de hierro como efecto secundario. (Conor, 1980;
Linder, 1988).
Tanto en el caso de las hemocromatosis como de ingestas excesivas de hierro, se
ha observado una alteracin de la absorcin de otros oligoelementos como el
cobre o el zinc que puede tener especial importancia cuando se administran dosis
elevadas de suplementos de hierro. (Linder, 1988; US Department of Health and
Human Services, 1988; Dallman, 1991).
5.6 Legislacin nacional e internacional para el Hierro
En lo referente a los lmites permisibles para la concentracin del hierro (Fe) en
agua potable establecidos por las entidades regulatorias tanto nacionales como
internacionales, se tienen los siguientes valores de referencia:
- La USEPA (U.S Environmental Protection Agency, National Primary and
Secondary Drinking Water Regulations) establece 0,3 mg/l como la mxima
concentracin de hierro admisible en agua potable.
- La OMS (Organizacin Mundial para la Salud, Guas para la calidad de
agua potable, tercera edicin, 2006) tambin establece un lmite permisible
de 0,3 mg/l de hierro para el agua potable.
22

- La UE (Unin Europea, Directiva 98/83/CE DEL CONSEJO relativa a la
calidad de aguas destinadas al consumo humano) establece un valor
mximo de 0,2 mg/l de hierro para el agua potable.
En el mbito nacional, la norma es proporcional a los dictmenes establecidos por
la EPA y la OMS, pues de acuerdo a la resolucin 2115 de 2007 la concentracin
mxima de hierro permitida en el agua potable es de 0,3 mg/l.
5.7 Mtodos espectroscpicos
Las mediadas basadas en la luz y otras formas de radiacin electromagntica son
ampliamente utilizadas en diversos campos de la ciencia. Las interacciones de la
radiacin con la materia son el eje central de la espectroscopa. Los mtodos
analticos espectroscpicos se fundamentan en medir la cantidad de radiacin que
producen o absorben las especies moleculares o atmicas de inters. Se pueden
clasificar los mtodos espectroscpicos segn la regin del espectro
electromagntico utilizado para la medida. Las regiones del espectro que se han
utilizado incluyen los rayos gamma, rayos X, radiacin UV, radiacin infrarroja,
microondas y radiofrecuencias.
La espectroscopa ha tenido una funcin vital en el desarrollo de la teora atmica
moderna. Adicionalmente, los mtodos espectroqumicos se han convertido quizs
en las herramientas ms utilizadas para dilucidar la estructura molecular y para la
determinacin cuantitativa y cualitativa de compuestos orgnicos e inorgnicos.
(Skoog et al. 2005).
5.7.1 La Espectrofotometra
Durante mucho tiempo los qumicos han utilizado el color como una ayuda para la
identificacin de sustancias qumicas. La espectrofotometra se puede considerar
como la extensin de la inspeccin visual en donde un estudio ms detallado de la
absorcin de la energa radiante por las especies qumicas permite una mayor
precisin en su caracterizacin y en su cuantificacin. El trmino
espectrofotometra se refiere a la medicin de la cantidad de energa radiante que
absorbe un sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, as
23

como las mediciones por separado a una longitud de onda determinada. (Day et
al. 1989).
Cuando una molcula absorbe luz, necesariamente pasa a un estado excitado de
mayor energa. Por el contrario, cuando una molcula emite un fotn, su energa
disminuye en una cantidad igual a la del fotn. (Harris, 1992)
En la prctica, cuando un rayo de Iuz pasa a travs de una solucin colorida, parte
de esta radiacin es absorbida y Ia restante es reflejada o transmitida, de acuerdo
a sus caractersticas fisicoqumicas, este fenmeno se denomina absorcin
diferencial y constituye parte fundamental de la espectrofotometra, ya que en ella
es muy importante el tipo y la cantidad de energa absorbida.
Cuando una radiacin toca una sustancia semitransparente, una parte de la
radiacin es transmitida, el remanente es reflejado o absorbido en diversos
ngulos, dependiendo de la sustancia y de la longitud de onda de la radiacin.
Dado que la intensidad de la luz transmitida es una funcin de la longitud de onda,
el espectro de absorcin de la sustancia se puede obtener y relacionar con su
estructura y su concentracin, lo cual forma las bases de anlisis cuantitativo y
cualitativo para la espectrofotometra de absorcin (Guzmn et al. 2010).
5.7.1.1 El espectrofotmetro
En la figura 1 se indican los requisitos mnimos con los que debe cumplir un
espectrofotmetro, el cual consiste en un equipo cuya finalidad es medir la
absorcin (absorbancia) o emisin (transmitancia) de luz por parte de una muestra
o analito. La luz de una fuente continua pasa a travs de un monocromador, que
selecciona una banda estrecha de longitudes de onda del haz incidente. Esta luz
monocromada atraviesa una muestra de espesor b, y se mide la potencia
radiante de la luz saliente. (Harris, 1992).

Figura 1. Esquema bsico de un espectrofotmetro.
Fuente
de luz
Selector de longitud de onda
(monocromador)
Muestra
Detector
de luz
P
0
P

b

24

Estos instrumentos se pueden clasificar en manuales o de registro, de simple o
doble haz. En la prctica, los instrumentos de un solo haz, generalmente, se
operan de forma manual. Por otra parte, los instrumentos de doble haz poseen el
registro automtico de los espectros de absorcin, pero tambin es posible
registrar los espectros con los de un solo haz. Una clasificacin alternativa se basa
en la regin espectral, pudiendo hablar as de espectrofotmetros de infrarrojo o
de ultravioleta, etc. (Day, 1989).
La mayora de los espectrofotmetros presentan un error mnimo para valores de
absorbancia intermedios (A 0.4 a 0.9). (Harris, 1992).
5.7.2 Propiedades de la radiacin electromagntica
La radiacin electromagntica es una forma de energa transmitida por el espacio
a gran velocidad. Se denomina luz a la radiacin electromagntica en las regiones
del UV/visible, y en ocasiones en la regin del infrarrojo, si bien el sentido estricto
del trmino abarca solo la radiacin visible. La radiacin electromagntica se
puede describir como una onda con propiedades de longitud de onda, frecuencia,
velocidad y amplitud.
El modelo de onda no explica fenmenos relacionados con absorcin y emisin de
la energa radiante. En relacin con estos procesos, la radiacin electromagntica
puede considerarse como paquetes discretos de energa o partculas, llamados
fotones o cuantos. (Skoog et al. 2005).
La relacin entre la frecuencia y la longitud de onda es
= c
donde c es la velocidad de la luz. En cualquier medio distinto del vaco, la
velocidad de la luz es igual a c/n, donde n es el ndice de refraccin del medio de
que se trate. Puesto que n es siempre 1, la luz se propaga ms lentamente en
un medio material que en el vaco. (Harris, 1992).
La velocidad de la luz es de aproximadamente 3 X 10
10

cm/s. para la longitud de
onda se utilizan diversas unidades, dependiendo de la regin del espectro: para
radiacin visible y U-V se utiliza la unidad angstrom y el nanmetro, mientras que
25

el micrmetro es la unidad usual para la regin del infrarrojo. Un micrmetro, m,
equivale a 10
-6
m, y un nanmetro, nm, corresponde a 10
-9
m o 10
-7
cm. Por su
parte, una unidad angstrom () equivale a 10
-10
m 10
-8
cm. (Day, 1989).
5.7.2.1 Absorcin de la radiacin
Cada especie molecular puede absorber sus propias frecuencias caractersticas
de radiacin electromagntica. Este proceso transfiere energa a la molcula y
disminuye la intensidad de la radiacin electromagntica incidente. (Skoog et al.
2005).
Cuando una molcula absorbe un fotn, la energa de la molcula se incrementa.
Se dice que la molcula pasa a un estado excitado. Si una molcula emite un
fotn, su energa disminuye. El estado menor de energa de una molcula se llama
estado basal o fundamental.
Cuando una muestra absorbe luz, la potencia radiante del haz de luz disminuye.
La potencia radiante, P, se define como energa por segundo por unidad de rea
del haz de luz.
Como se muestra en la figura 1, la luz se hace pasar por un monocromador (un
prisma, una rejilla de difraccin o un filtro) para aislar una sola longitud de onda.
Esta ltima de potencia radiante P
0
, incide sobre una muestra de espesor b. la
potencia radiante del haz emergente es P; la muestra puede absorber una fraccin
de la luz, de manera que P P
0
.
5.7.2.2 Ley de Beer o de Beer-Lambert
Indica cuantitativamente la forma en que el grado de atenuacin depende de la
concentracin de las molculas absorbentes y de la longitud del trayecto en el que
ocurre la absorcin. Cuando la luz atraviesa un medio que contiene un analito
absorbente disminuye su intensidad como consecuencia de la excitacin del
analito. Cuanto ms largo sea el medio por el que pasa la luz (longitud del trayecto
de la luz), en el caso de una solucin del analito de concentracin dada, existirn
ms molculas o tomos absorbentes en el trayecto, por lo tanto, mayor ser la
atenuacin. Dicho en otras palabras, esta ley indica que la absorbancia es
26

directamente proporcional a la concentracin c de la especie absorbente y a la
longitud de trayecto b del medio de absorcin:

)
Donde a, es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Dado que
la absorbancia es una cantidad sin unidades, la absortividad debe tener unidades
que eliminen a las de b y c. (Skoog et al. 2005).
5.7.2.3 Transmitancia
La transmitancia, T, se define como la fraccin de luz incidente que sale de la
muestra.

Por lo tanto, T vara de cero a uno. El porcentaje de transmitancia es simplemente
100 * T y vara entre 0 y 100%.
5.7.2.4 Absorbancia
La absorbancia A de una solucin se relaciona con la transmitancia de manera
logartmica. Se define como:

)
Cuando no se absorbe luz, P = P
0
y entonces A = 0. La absorbancia tambin se
llama a veces densidad ptica.
La importancia de la absorbancia consiste en que esta es directamente
proporcional a la concentracin de especie absorbente en la muestra. (Harris,
1992).
27

5.8 Mtodos para la determinacin de hierro (Fe)
5.8.1 Mtodo de absorcin atmica con llama
La caracterstica fundamental que diferencia la espectrofotometra de absorcin
atmica de la ordinaria es que la muestra debe atomizarse. Esto se hace con una
flama, con un horno calentado elctricamente, o con un plasma de
radiofrecuencia. La sensibilidad y los efectos de interferencia que se observan en
la espectrofotometra de absorcin atmica dependen de los detalles del mtodo
de calentamiento.
En este mtodo la muestra es aspirada hacia una llama con temperatura de 2000
a 3000 K. La muestra se atomiza en la flama, la cual corresponde a la celda de la
espectrofotometra ordinaria. El trayecto ptico de la flama suele ser de 10 cm.
Para medir la absorbancia de la luz producida por tomos de Fe en la llama, en la
fuente de radiacin se utiliza un ctodo hecho de Fe, el cual emite luz con las
frecuencias caractersticas de los tomos de hierro, haciendo al mtodo
relativamente libre de interferencias espectrales o radiacin. La cantidad de
energa absorbida en la llama a determinadas longitudes de onda, es proporcional
a la concentracin del elemento en la muestra sobre un rango de concentracin
limitado. La mayora de los instrumentos de absorcin atmica tambin estn
equipados para operar en el modo de emisin, el cual puede proveer mejor
linealidad para algunos elementos.
5.8.2 Mtodo de absorcin atmica electrotrmica
En los atomizadores electrotrmicos, unos pocos microlitros de la muestra se
evaporan primero a baja temperatura. Luego se calcinan a una temperatura un
poco ms alta en un tubo de grafito, o cubeta de grafito calentado elctricamente.
Tras la calcinacin, la corriente se incrementa rpidamente a varios cientos de
amperios, lo que lleva la temperatura a unos 2000 o 3000 C; la atomizacin de la
muestra se da en unos pocos milisegundos a segundos. En estas condiciones, se
mide la absorcin o la fluorescencia de las partculas atomizadas en la zona
situada inmediatamente por encima de la superficie calentada.
28

Este mtodo produce una mayor sensibilidad debido a que toda la muestra se
atomiza en un periodo muy corto y el tiempo de permanencia de los tomos en el
camino ptico es de un segundo o ms.
El mtodo de absorcin atmica electrotrmica permite la determinacin de la
mayora de los elementos metlicos con sensibilidad y lmites de deteccin de 20
a 1000 veces mejores que las tcnicas convencionales de llama sin concentracin
o extraccin de la muestra. Muchos elementos se pueden determinar en
concentraciones tan bajas como 1 g/l. Una ventaja adicional del mtodo
electrotrmico es que solo se requiere un muy pequeo volumen de la muestra.
La tcnica electrotrmica se usa solo a niveles de concentracin inferiores al
rango ptimo de la absorcin atmica con llama directa, porque es susceptible a
ms interferencias que el procedimiento de llama y requiere un mayor tiempo de
anlisis.
5.8.3 Mtodo de plasma de acoplamiento inductivo (ICP)
El plasma de acoplamiento inductivo es un tipo de flama que alcanza temperaturas
mucho ms altas que las de las flamas de combustin ordinarias y es til para la
espectrofotometra de emisin. Su alta temperatura y gran estabilidad eliminan
muchos interferencias y fuentes de erros que se tienen con las flamas ordinarias.
Las ventajas principales del equipo de plasma es el costo de adquisicin y de
operacin.
Una fuente ICP consiste en una bobina de induccin de radiofrecuencia con dos
espiras se coloca alrededor de la parte superior de una antorcha de cuarzo. Argn
de alta pureza alimenta el plasma a travs de un conducto de entrada. La chispa
de una bobina de Tesla se utiliza para ionizar el gas Ar. El campo de
radiofrecuencia de gran potencia (27MHz) que oscila alrededor de la bobina de
carga acelera inmediatamente los iones Ar
+
. Los iones acelerados transfieren
energa a todo el gas mediante las colisiones entre los tomos. Una vez que el
proceso se ha iniciado, los iones absorben del campo elctrico la energa
suficiente para mantener el plasma a una temperatura de 6000 a 10000 K. Es
29

tanto el calor que la antorcha de cuarzo debe protegerse con un flujo de gas Ar
como refrigerante que fluye alrededor del borde externo de la antorcha.
La mayora de los elementos de ionizan al estado +1 en el plasma, y la emisin de
los iones excitados es la seal analtica.
La mezcla puede introducirse en el plasma por medio de un nebulizador ordinario.
Sin embargo, la concentracin de analito necesaria para obtener una seal
adecuada puede reducirse en un factor de 10 a 20 con un nebulizador ultrasnico,
en el cual la solucin de muestra se coloca en un cristal piezoelctrico que oscila a
una frecuencia cercana a 1 MHz. Esto crea un aerosol muy fino, que es
transportado por una corriente de Ar de un lado a otro en un tubo caliente, donde
se vaporiza el solvente. Esta corriente se hace pasar despus por una zona
refrigerada, en la cual el solvente se condensa y se elimina. El analito llega a la
flama de plasma como una fina nube seca. No se consume energa de la flama en
la evaporacin del solvente, por lo cual queda ms energa disponible para la
atomizacin.
La excitacin eficiente que provee el ICP conlleva a bajos lmites de deteccin
para muchos elementos. Esto, junto con el rango dinmico extendido, permite una
efectiva determinacin multielemento de metales.
5.8.4 Mtodo de la fenantrolina
El hierro es llevado a solucin, reducido al estado ferroso hirviendo con cido e
hidroxilamina, y tratado con 1,10-fenantrolina a un pH de 3.2 a 3.3. Tres molculas
de fenantrolina quelan cada tomo de hierro ferroso para formar un complejo rojo-
naranja. La solucin coloreada obedece a la ley de Beer; su intensidad es
independiente del pH entre 3 a 9. Un pH entre 2.9 y 3.5 asegura un rpido
desarrollo del color en presencia de un exceso de fenantrolina. Los estndares
coloridos son estables al menos por 6 meses.
Se pueden detectar concentraciones de hierro total o disuelto tan bajas como 10
g/l, con un espectrofotmetro usando celdas de 5 cm y un paso de luz ms largo.
(APHA et al. 1992).
30

5.8.4.1 Interferencias
Entre las sustancias que interfieren se encuentran agentes oxidantes, cianuro,
nitratos y fosfatos, cromo, zinc en concentraciones 10 veces superiores a las del
hierro, cobalto y cobre en exceso de 5 mg/l, y nquel en exceso de 2 mg/l. El
bismuto, cadmio, mercurio, y molibdeno y la plata precipitan la fenantrolina. La
ebullicin inicial con cido convierte los polifosfatos en ortofosfatos y remueve el
cianuro y los nitratos. Agregando hidroxilamina en exceso se eliminan los errores
causados por concentraciones excesivas de reactivos fuertemente oxidantes. En
presencia de iones metlicos interferentes, se debe usar un exceso de fenantrolina
para reemplazar aquella complejada por los mismos. (APHA et al. 1992).
5.9 Validacin de tcnicas
Para lograr precisin en un resultado analtico es imprescindible la utilizacin de
un mtodo confiable. Para asegurar confiabilidad, los mtodos analticos deben
someterse a un procedimiento de validacin ya sea de carcter prospectivo,
retrospectivo o de revalidacin; de modo tal que se pueda comprobar si el mtodo
es lo suficientemente confiable y los resultados previstos satisfacen los requisitos
analticos prestablecidos.
La validacin constituye un requisito imprescindible para las buenas prcticas de
laboratorio, conforme lo establecen diferentes agencias reguladoras y la
determinacin de la incertidumbre debe formar parte de este proceso de validacin
y es esencial para un control continuo de la calidad. A partir del criterio de que no
existe un modelo nico para validacin y que los parmetros a evaluar cambian de
acuerdo con los requisitos legales de diferentes organizaciones y de los
requerimientos analticos particulares; solo es recomendable el seguimiento de
una gua general para la validacin de mtodos analticos, en conformidad con
pautas aceptadas internacionalmente.
Validar un mtodo de anlisis es el proceso que se sigue para definir un requisito
analtico y confirmar que el mtodo considerado tiene capacidades de rendimiento
consistentes con las requeridas por la aplicacin. (Ortiz, J. et al. 2007).
31

Est implcito que los estudios para determinar los parmetros de rendimiento se
llevan a cabo mediante equipos que cumplen con las especificaciones, funcionan
correctamente y estn adecuadamente calibrados. Igualmente, el operador que
realiza los estudios debe ser competente en el campo de trabajo en estudio y debe
contar con suficientes conocimientos respecto al trabajo como para poder tomar
decisiones apropiadas a partir de las observaciones realizadas a medida que el
estudio progrese. (Vargas, J., 2009).
5.9.1 Estandarizacin y calibracin
El proceso de calibracin y estandarizacin es una parte fundamental en los
procedimientos analticos. La calibracin determina la relacin entre la respuesta
analtica y la concentracin del analito. Por lo general se realiza de acuerdo a
estndares qumicos.
Algunos procedimientos analticos comparan una propiedad del analito (o el
producto de una reaccin con el analito) con un estndar, de modo que la
propiedad analizada sea muy cercana a la del estndar.
Entre los mtodos analticos ms precisos se encuentran las titulaciones. En una
titulacin el analito reacciona con un reactivo estandarizado (el titulante) mediante
una reaccin estequiomtrica conocida.
En lo que a los estndares respecta, estos pueden ser externos o internos. Un
estndar externo se prepara por separado de la muestra, mientras que un
estndar interno se agrega directamente a la muestra. Los estndares externos se
utilizan para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de
interferencia de los componentes matriz en la disolucin del analito. Se prepara
una serie de estndares externos que contienen concentraciones conocidas del
analito. Generalmente, se utilizan tres o ms disoluciones en el proceso de
calibracin.
La calibracin se lleva a cabo al obtener la seal de respuesta (absorbancia) como
funcin de la concentracin conocida del analito. Luego, se obtiene la curva de
calibracin al representar los datos grficamente y ajustarlos a una ecuacin
32

matemtica adecuada. El paso siguiente corresponde a la prediccin, donde se
utiliza la seal de respuesta obtenida para predecir la concentracin desconocida
del analito c
u
, a partir de la curva de la calibracin o de la ecuacin de ajuste. La
concentracin del analito en la muestra original se calcula a partir de c
u
, al aplicar
los factores de dilucin segn los pasos realizados en la preparacin de la
muestra. (Skoog et al. 2005)
5.9.2 Parmetros de rendimiento a considerar
Los parmetros de rendimiento se establecen de acuerdo a la naturaleza del
mtodo y siguiendo los requisitos establecidos por los distintos organismos
competentes. Para este caso, dichos parmetros obedecen al Protocolo de
Estandarizacin de Mtodos Analticos (IDEAM, 1999), el cual define los
siguientes:
Exactitud: Es el grado de aproximacin entre el valor obtenido
experimentalmente y el valor real o aceptado; generalmente se expresa en
trminos de error.
Precisin: Indica el grado de concordancia entre los resultados obtenidos
para rplicas de una misma muestra, aplicando el mismo procedimiento
experimental, bajo condiciones predefinidas. Generalmente se expresa en
trminos de desviacin estndar.
Lmite de deteccin: El lmite de deteccin se define a partir de la mnima
cantidad detectable por encima del ruido de un procedimiento y dentro de
un lmite de aceptacin
Linealidad: Se refiere a la proporcionalidad entre la concentracin y la seal
producida por el instrumento y se debe verificar si en el laboratorio se
cumple el rango y tipo de linealidad que reporta la literatura del mtodo.
Sensibilidad: Es la medida del factor de respuesta que tiene el instrumento
en funcin de la concentracin. Generalmente se mide como la pendiente
de la curva de calibracin.
33

Repetibilidad: Es una medida de la precisin de los datos obtenidos por un
solo operador trabajando siempre en las mismas condiciones (equipos,
materiales y reactivos)
Ver anexo 2.
6. DESARROLLO METODOLGICO
6.1 Documentacin y montaje de la metodologa
6.1.1 Seleccin del mtodo
De acuerdo a los requerimientos del proceso de investigacin, se tomaron como
gua base las tcnicas propuestas por el Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater (APHA et al. 1992), adicionalmente se utilizaron como
respaldo la NTC 4754 del ICONTEC, y, la norma venezolana COVENIN 2120-84
(ambas basadas en el Standard Methods). En lo referente al proceso de validacin
de la tcnica, se utiliz como base el Protocolo de Estandarizacin de Mtodos
Analticos del Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales
(IDEAM. 1999).
El mtodo seleccionado fue el 3500-Fe D., Mtodo de la Fenantrolina del Standard
Methods (APHA et al. 1992), el cual consiste en el proceso de quelacin de cada
tomo de hierro ferroso por tres molculas de fenantrolina, para as formar en
condiciones de pH cido un complejo rojo-naranja. Esta solucin obedece a la ley
de Beer y su color se analiza en un espectrofotmetro a una longitud de onda de
510 nm, para de esta forma determinar la relacin absorbancia/concentracin.
Los principales criterios de seleccin para este mtodo fueron:
Es adecuado para el anlisis de aguas naturales y/o tratadas.
Complejidad relativamente baja en la aplicacin general del mtodo.
Confiabilidad en los resultados obtenidos en estudios de referencia
similares.
34

Disponibilidad en el laboratorio de la Universidad Autnoma de Colombia de
reactivos, equipos, materiales y facilidad de acceso a los mismos.
Fcil preparacin de reactivos adicionales y montaje de equipos.
Reactivos de complejidad relativamente baja en cuanto a las precauciones
y riesgos a considerar en su manipulacin.
La no necesidad de incurrir en gastos adicionales. (Anexo 1)
6.1.2 Funcionamiento del equipo de medicin
Para llevar a cabo las mediciones se utiliz un espectrofotmetro visible
GENESYS 20, Thermo Scientific (Figura 2), el cual consiste en un equipo de
bajo costo y de fcil uso, diseado para llevar a cabo anlisis de rutina que
satisfagan los requerimientos de laboratorios de enseanza, control de calidad y
produccin. Es un equipo fiable, robusto y preciso. Con solo cuatro piezas mviles
no requiere mucho mantenimiento. El diseo ptico incorpora un monocromador
de rejilla proporcionando un sistema compacto y un rango de longitud de onda que
va de 325 a 1100 nm. El teclado incorporado y la pantalla LCD de lectura de 2
lneas y 20 caracteres muestran los datos e instrucciones sencillas. Las muestras
pueden ser medidas en 4 pasos simples:
1. Seleccionar la longitud de onda
2. Seleccionar el modo (Abs, %T, C)
3. Insertar el blanco y presionar 0 Abs o 100% T
4. Insertar la muestra y observar o imprimir las lecturas
Para mayor informacin revisar anexo 9.
35

Figura 2. Equipo de medicin. Fuente: El autor.
6.1.3 Inventario de reactivos
Se revisaron meticulosamente cada uno de los reactivos requeridos, se hizo una
relacin de los mismos teniendo en cuenta los diferentes parmetros
especificados, tales como: cantidad requerida (aproximada) y disponibilidad, grado
de pureza, contenido de hierro, estabilidad y condiciones de almacenamiento.
Anexo
6.1.4 Inventario de vidriera y otros equipos
Se llev a cabo una relacin de los diferentes implementos de vidriera requeridos
junto con los dems elementos y equipos de medicin, teniendo en cuenta para
los primeros especialmente aspectos como: cantidad, volumen y error (Anexo 4).
6.1.5 Limpieza del material
Para asegurar una efectiva descontaminacin del material, se realizaron continuos
lavados con HCl al 10%. Como primera media se enjuagaba pieza por pieza con
HCl al 10%, y posteriormente se hacan dos enjuagues con agua desionizada,
asegurando as la eliminacin de cualquier residuo, especialmente posible trazas
de hierro. Este procedimiento se repeta una y otra vez luego de cada ensayo.
36

6.1.6 Formato para captura de datos
Con el fin de mantener un orden secuencial en los datos obtenidos, se elabor un
formato para la captura de los mismos, registrando as: la fecha, el nmero del
ensayo, el operador, la dilucin, volumen de patrn adicionado, el valor de la
concentracin (terica), volumen total de la solucin y el valor de la absorbancia
(Anexo 5).
6.1.7 Rango de aplicacin del mtodo
El rango total de concentracin de Fe dentro del cual se realizaron los ensayos
comprendi desde los 0.02 mg/l hasta 2.0 mg/l (Tabla 1). Dicho rango total se
analiz desde dos sub-rangos (rango bajo y rango alto) con el fin de observar el
comportamiento de la lnea de tendencia en diferentes intervalos y sus
repercusiones en la curva de calibracin. El rango bajo comprendi las
concentraciones respectivas (0 0,18 mg/l); mientras que el rango alto incluy las
concentraciones mayores (0.2 mg/l 2.0 mg/L).
El rango se defini de acuerdo a las pautas establecidas en el Standard Methods,
considerando desde luego que dicho rango incluyera el valor lmite de
concentracin de Fe para agua potable que manda la normatividad Colombiana
(Res 2115/2007), el cual corresponde a 0,3 mg/l Fe, y de este modo determinar si
las muestras analizadas cumplen o no con dicha normativa.

37

Serie de
Diluciones
Concentracin
(terica) Fe
(mg/l)
Agua
desionizada
_
Blanco _
P
3-1

0,02
P
3-2

0,04
P
3-3

0,06
P
3-4

0,08
P
3-5

0,10
P
3-7

0,14
P
3-9

0,18
P
2-1

0,20
P
2-2

0,40
P
2-3

0,60
P
2-4

0,80
P
2-5

1,00
P
2-6

1,20
P
2-8

1,60
P
2-10

2,00

Tabla 1. Serie de diluciones utilizadas con su concentracin terica de Fe.
6.2 Anlisis del Hierro
En primera instancia se consultaron detalladamente cada uno de los
procedimientos requeridos para la aplicacin del mtodo. Posteriormente se
elabor un plan de trabajo involucrando entre otras cosas, la preparacin de las
diferentes soluciones, y el anlisis de patrones y muestras. Para obtener
resultados ms confiables de los anlisis se tuvo en cuenta la estabilidad y/o
duracin de reactivos, reservas, patrones y muestras. La mayor parte de las
soluciones, bajo ciertas condiciones son estables por meses y algunas incluso lo
son indefinidamente. nicamente los patrones de hierro requeran preparacin
diaria, y as mismo las muestras.
A lo largo de 10 das se realiz un total de 17 ensayos, los dos primeros fueron
descartados teniendo en cuenta la familiarizacin con todo el equipo de trabajo en
el laboratorio, y descartando as errores significativos potenciales por falta de
38

prctica. Se elaboraron 15 curvas de calibracin bajo las mismas condiciones de
trabajo.
6.2.1 Solucin reserva de hierro (P
1
)
Se agregaron lentamente 10 ml de cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
) a 25 ml de
agua destilada, se disolvieron 0,702 g de sulfato ferro-amnico
(Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
.6H
2
O). Luego se agreg gota a gota de solucin de
permanganato de potasio 0.1N (KMnO
4
) hasta obtener un leve color rosado
persistente. Se diluy a 500 ml con agua desionizada y se mezcl. Concentracin
= 200 g Fe / ml de Solucin.

Figura 3. Diagrama de flujo para la preparacin de la solucin reserva de hierro
(P1)

2

Se midi 5 ml de la solucin de reserva (P
1
) y se transfirieron a un baln
volumtrico de 100 ml; se diluy a volumen con agua desionizada. Concentracin
= 10 g Fe / ml Solucin.
Inicio
Agregar 10 ml de H
2
SO
4

a 25 ml de H
2
O
Disolver 0.702 g de
(Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
.6H
2
O)
Aadir KMnO
4
gota a gota
hasta color rosado
Diluir a 500 ml con H
2
O
desionizada
Fin
Conc. = 200 g Fe / ml de
Solucin
39

2
.
3

Se transfirieron 10 ml de la solucin P
2
a un baln volumtrico de 100 ml; se diluy
a volumen con agua desionizada.

3
.
Inicio
Transferir 5 ml de solucin P
1
a
baln volumtrico de 100 ml
Diluir a volumen con H
2
O
desionizada
Fin
Inicio
Transferir 10 ml de solucin P
2
a
baln volumtrico de 100 ml
Diluir a volumen con H
2
O
desionizada
Fin
Solucin
Solucin
40

6.2.4 Preparacin de reactivos
6.2.4.1 Solucin de fenantrolina
Se midi 500 mg de 1,10-monohidrato de fenantrolina en una balanza electrnica.
Luego se adicionaron 500 ml de agua desionizada. Finalmente se agregaron 6
gotas de HCl concentrado y se agit hasta asegurar una disolucin completa de la
fenantrolina.
6.2.4.2 Solucin de hidroxilamina
Se midi 100 g de hidroxilamina en una balanza electrnica. Posteriormente se
agregaron 100 ml de agua desionizada y se agit hasta lograr una completa
disolucin.
6.2.4.3 Solucin de acetato de sodio
Se midi 25 g de acetato de sodio en una balanza electrnica. Luego se
adicionaron 100 ml de agua desionizada y se agit hasta lograr una mezcla
homognea.
6.2.4.4 Solucin buffer de acetato de amonio
Se midi 125 g de acetato de amonio en una balanza electrnica. Esto se disolvi
en 75 ml de agua desionizada. Finalmente se agregaron 350 ml de cido actico
glacial y se agit.
6.2.5 Preparacin curva de absorbancia
Para verificar la longitud de onda de mayor sensibilidad, es decir, donde se
presenta la mxima absorcin de luz por parte de la muestra, se elabor una curva
midiendo la absorbancia a diferente longitud de onda. Para esto se utiliz la
dilucin ms concentrada, la P
2-10
(2 mg Fe/l), comparndola contra un blanco de
referencia. Se midi la absorbancia en un rango de longitud de onda de 400 nm
hasta 600 nm a intervalos de 10 nm. Como resultado, la grfica demostr el valor
terico de 510 nm recomendado por la bibliografa.
41

Grfica 1. Curva de absorbancia para determinar la longitud de onda de mxima
absorcin.

6.2.6 Preparacin de la curva de calibracin
Se prepararon en balones volumtricos de 50 ml debidamente marcados, una
serie de diluciones (Figura 6) a partir de los patrones P
2
y P
3
de la siguiente
manera:

0.010
0.040
0.070
0.100
0.130
0.160
0.190
0.220
0.250
0.280
0.310
0.340
0.370
0.400
400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600
A

(nm)
42

Patrones Serie de
diluciones
Volumen de
patrn aadido
(ml)
Volumen total
(ml)
Concentracin
terica (mg/l)
Agua destilada _ 50 _
Blanco de reactivos _ 50 _
P3 P
3-1
1 50 0,02
P
3-2
2 50 0,04
P
3-3
3 50 0,06
P
3-4
4 50 0,08
P
3-5
5 50 0,10
P
3-7
7 50 0,14
P
3-9
9 50 0,18
P2 P
2-1
1 50 0,20
P
2-2
2 50 0,40
P
2-3
3 50 0,60
P
2-4
4 50 0,80
P
2-5
5 50 1,00
P
2-10
10 50 2,00
Tabla 2. Patrones preparados con sus respectivas series de diluciones y la
concentracin de hierro terica para cada una de ellas.

Figura 6. Serie de diluciones preparadas. Fuente: El autor.
Una vez agregados los volmenes especficos de patrn a cada una las diluciones
en un baln volumtrico de 50 ml, se procedi de la siguiente manera con cada
una de las mismas: Se agreg 0.5 ml de la solucin de hidroxilamina y 0,5 ml de la
solucin de acetato de sodio respectivamente. Se diluy a unos 30 ml con agua
desionizada y posteriormente se adicionaron 5 ml de la solucin de fenantrolina.
Se complet a volumen con agua desionizada, se agit fuertemente y se dej en
reposo por al menos 10 minutos para lograr el mximo desarrollo del color.
43

Finalmente se transfiri una porcin de cada dilucin a la celda de absorcin para
tomar su respectiva medida de absorbancia a una longitud de onda de 510 nm.

Figura 7. Diagrama de flujo del proceso de preparacin de la curva de calibracin.
Inicio
Transferir cantidad determinada de
analito a un baln volumtrico de 50 ml
Agregar 0.5 ml de la solucin de
hidroxilamina y 0.5 ml de la solucin de
acetato de sodio
Diluir con agua desionizada hasta unos
30 ml
Agregar 5 ml de la solucin de fenantrolina
Completar a volumen con agua
desionizada y agitar. Dejar en reposo por
10 min
Transferir una porcin a la celda absorcin
y medir la absorbancia a 510 nm
Ajustar 100% T en el equipo utilizando el
blanco de reactivos
Fin
44

6.3 Anlisis en muestras de agua natural
Para comprobar el mtodo se aplic en muestras de agua natural provenientes de
un pozo profundo, sin mecanismos de tratamiento, ubicado en el casco urbano del
municipio de Orocu (Casanare). Se tomaron dos diferentes muestras de
aproximadamente tres litros cada una. Una muestra fue destinada para el anlisis
de hierro total; mientras que la otra fue utilizada para analizar el hierro ferroso, por
lo cual requiri un tratamiento diferente. Esta muestra se tom directamente de la
fuente, se acidific con cido clorhdrico concentrado (aproximadamente 2ml HCl /
1L H
2
O) para prevenir la oxidacin. Posteriormente ambas muestras fueron
refrigeradas a no menos de 4 C hasta su anlisis.
En dos das se realizaron tres series de anlisis para determinar hierro total y
ferroso. Cada serie fue de cinco diluciones, es decir, se prepararon 30 diluciones,
15 para determinar hierro total y 15 para determinar hierro ferroso.
Para el anlisis de hierro total se midi 50 ml de la muestra sin acidificar en un
Erlenmeyer de 100 ml, se agregaron 2 ml de HCl concentrado y 1 ml de la
solucin de hidroxilamina. Se agregaron algunas perlas de vidrio y se llev a
ebullicin hasta que el volumen se redujo a 15 20 ml. Se dej enfriar a
temperatura ambiente y se transfiri a un baln volumtrico de 50 ml. Se
agregaron 10 ml de la solucin buffer de acetato de amonio y 4 ml de la solucin
de fenantrolina. Se diluy hasta el aforo con agua destilada y se dej en reposo
entre 10 15 min para luego tomar la medida de absorbancia.

45

Figura 8. Diagrama de flujo del proceso para determinacin de hierro total.
Para la determinacin de hierro ferroso se transfirieron 25 ml de la muestra
acidificada a un baln volumtrico de 50 ml, se agregaron 10 ml de la solucin de
fenantrolina y 5 ml de la solucin buffer de acetato de amonio, se agit y se diluy
a volumen dejando en reposo entre 5 a 10 min sin exponer a la luz solar.
Posteriormente se tom la medida de la absorbancia.

Agregar 10 ml de buffer de acetato de
amonio y 4 ml de solucin de fenantrolina,
diluir hasta el aforo
Inicio
Transferir 50 ml de muestra a un
erlenmeyer de 100 ml
Agregar 2 ml de HCl conc. y 1 ml de la
solucin de hidroxilamina
Agregar perlas de vidrio y llevar a
ebullicin hasta reducir a un volumen de
15 20 ml
Enfriar a temperatura ambiente y transferir
a baln volumtrico de 50 ml
Fin
Dejar en reposo 10 15 min y tomar
medida de la absorbancia
46

Figura 9. Diagrama de flujo del proceso para determinacin de hierro ferroso.

Inicio
Transferir 25 ml de muestra a un baln
volumtrico de 50 ml
Agregar 10 ml de solucin de
fenantrolina y 5 ml de la solucin buffer
de acetato de amonio
Agitar y diluir a volumen
Dejar en reposo de 5 a 10 min y tomar
medida de la absorbancia
Fin
47

7. ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS
Para el desarrollo del trabajo de investigacin se realizaron en total 17 juegos de
ensayos. Los primeros dos se tomaron como prctica base para la familiarizacin
con reactivos, equipos y materiales de laboratorio, con el fin de desarrollar la
destreza y habilidades necesarias para llevar a cabo los ensayos posteriores con
un mayor grado de seguridad y confianza. Posteriormente se realizaron 15
ensayos ms, destinados a la construccin de la curva de calibracin.
7.1 Curva de calibracin el Hierro
Para cada uno de los ensayos se graficaron sus tres respectivas curvas; una del
rango total y las otras del rango bajo y alto respectivamente, obteniendo as un
anlisis ms detallado de la dispersin de los datos en cada ensayo que permitiera
seleccionar el ms confiable. Como los datos mostraron un comportamiento lineal,
el anlisis se realiz mediante la determinacin de la ecuacin de la recta y = mx +
b, donde m es la pendiente de la curva y b es la interseccin de la recta con el eje
Y. Adicionalmente, como otro criterio de confianza se determin el factor de
correlacin, para conocer la linealidad de los datos en cada una de las rectas. Los
resultados obtenidos se relacionan a continuacin:

48

Ensayo Ecuacin de la recta R
2

3 y = 0,1931x + 0,0012 0,9998
4 y = 0,1909x + 0,0020 0,9998
5 y = 0,2039x + 0,0003 0,9998
6 y = 0,2061x + 0,0046 0,9997
7 y = 0,1926x + -0,0017 0,9999
8 y = 0,1917x + 0,0012 0,9999
9 y = 0,1955x + 0,0004 0,9994
10 y = 0,2000x + -0,0008 0,9999
11 y = 0,1949x + -0,0005 0,9997
12 y = 0,1999x + 0,0030 0,9997
13 y = 0,2001x + 0,0036 0,9998
14 y = 0,1941x + 0,0008 0,9997
15 y = 0,1980x + 0,0033 0,9999
16 y = 0,1978x + 0,0011 0,9999
17 y = 0,1939x + -0,0010 0,9999
Tabla 3. Ecuaciones de la recta obtenidas para los ensayos en el rango total.
Se observa una buena linealidad para el rango total definido, pues todos los
factores de correlacin estn por encima de 0,999; sin embargo, posteriormente
se analizaron las curvas con mayor detalle.
Una vez analizadas en detalle cada una de las curvas y sus respectivas
ecuaciones se tom el factor de correlacin como primer criterio de seleccin.
Como segundo criterio de seleccin se consider el menor valor de interseccin
con el eje Y (b). Partiendo de esto se seleccion la ecuacin obtenida del ensayo
No. 16 como la ms adecuada para construir la curva de calibracin. Para dicha
ecuacin el factor de correlacin fue 0,9999; el punto de interseccin con el eje Y
(b) fue 0,0011 y su pendiente (m) fue de 0,1978. En consecuencia, la ecuacin de
la curva de calibracin para la determinacin de hierro en agua por el mtodo de la
fenantrolina es:
A =mC +b;
Reemplazando se tiene:
A =0,1978C +0,0011;
Y al despejar C tenemos:
49

Donde A es la absorbancia medida a 510 nm y C la concentracin real de hierro.

Fecha de realizacin : 2013 - 01 - 30
Dilucin Concentracin
(mg/l)
Absorbancia
Agua
destilada
_ 0.0000
Blanco _ 0,0017
P3-1 0,02 0,0039
P3-2 0,04 0,0079
P3-3 0,06 0,0119
P3-4 0,08 0,0164
P3-5 0,10 0,0205
P3-7 0,14 0,0287
P3-9 0,18 0,0386
P2-1 0,20 0,0424
P2-2 0,40 0,0809
P2-3 0,60 0,1203
P2-4 0,80 0,1586
P2-5 1,00 0,1979
P2-10 2,00 0,3969
Tabla 4. Datos de la curva de calibracin para la determinacin de hierro (Ensayo
No. 16).

50

Grfica 2. Curva de calibracin para la determinacin de Fe correspondiente al ensayo No. 16.
y = 0,1978x + 0,0011
R = 0,9999
0.0000
0.0500
0.1000
0.1500
0.2000
0.2500
0.3000
0.3500
0.4000
0.4500
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

Concentracin de Fe (mg/l)
CURVA DE CALIBRACIN PARA LA DETERMINACIN DE Fe
51

7.2 Anlisis estadstico
Una vez realizados los ensayos de laboratorio se llev a cabo el anlisis
estadstico de los datos de absorbancia obtenidos (tabla 6). En primera instancia
los datos fueron organizados; para cada conjunto de datos se determin el
promedio, desviacin estndar, coeficiente de variacin, y se aplic el T
estadstico para el rechazo datos no confiables de acuerdo a los parmetros
establecidos en el protocolo del IDEAM. Dicha funcin estadstica se aplic a los
valores extremos (mayor y menor) de cada serie de datos, los valores obtenidos
se compararon con el T de las tablas para un nivel de confianza del 95% y n
mediciones, lo cual determin el rechazo de un dato, el cual correspondi a la
dilucin P
2-2
del ensayo No. 6 (0,1701), pues para n = 15 el T alto dio como
resultado 3,58, valor superior al 2,41 de las tablas (ver tabla 6).
Posteriormente se determinaron las concentraciones reales de cada dilucin a
partir de los datos de absorbancia y aplicando la ecuacin de la recta obtenida.
Estos valores reales se compararon con los tericos mediante un nuevo anlisis
estadstico, determinando as promedio, desviacin estndar, rango, coeficiente de
variacin y porcentaje de error.
Se observ que la mayor variabilidad o dispersin en la tendencia de los datos se
dio en el rango bajo, principalmente debido al tamao de los mismos. Por otra
parte, los datos obtenidos para el rango alto mostraron una mayor consistencia y
por ende una baja dispersin en la lnea de tendencia. En conclusin, todos los
ensayos mostraron una tendencia similar en el comportamiento de la curva, pero
fueron por lo menos 5 de estos los que arrojaron datos lo suficientemente
confiables para ser considerados en la construccin de la misma, sin embargo, se
determin el ensayo No. 16 como el ms adecuado para tal fin.
Finalmente se determin el lmite de deteccin del mtodo (LDM), que para este
caso fue de 0,0032 mg/l; es decir que por medio de este mtodo, para muestras
de agua con concentraciones de hierro por encima de 0,0032 mg/l, se obtendr
52

como respuesta una seal con una probabilidad del 99% de ser diferente del
blanco (ver tabla 6).

Concentracin Fe (mg/l)
Ensayo Blanco Referencia de
concentracin baja
Referencia de
concentracin
media
Referencia de
concentracin alta
3 0,0054 0,0478 0,7619 1,9628
4 -0,0012 0,0478 0,7557 1,9521
5 0,0099 0,0433 0,8123 2,0675
6 0,0099 0,0568 0,8542 2,0845
7 -0,0012 0,0299 0,7619 1,9360
8 -0,0012 0,0478 0,7713 1,9414
9 -0,0034 0,0276 0,7807 1,9574
10 -0,0099 0,0254 0,7965 2,0063
11 0,0010 0,0232 0,7744 1,9521
12 0,0077 0,0500 0,8251 2,0173
13 0,0054 0,0478 0,8092 2,0283
14 0,0032 0,0276 0,7838 1,9521
15 0,0010 0,0455 0,8123 2,0118
16 0,0032 0,0343 0,7965 2,0008
17 0,0010 0,0321 0,7651 1,9574
Valor terico 0,0000 0.0400 0,8000 2,0000
Valor mnimo 0,0232 0,7557 1,9360
Valor mximo 0,0568 0,8542 2,0845
Promedio 0,0391 0,7907 1,9885
Desviacin
estndar
0,0109 0,0279 0,0466
CV 27,80 3,50 2,30
% Error -2,20 -1,16 -0,57
LDM = 0,0032
Tabla 5. Anlisis estadstico
7.3 Sensibilidad
La sensibilidad hace referencia a una medida del factor de respuesta del
instrumento en funcin de la concentracin del analito. Para este caso
corresponde al promedio de las pendientes obtenidas al graficar los datos
53

generados en cada ensayo, cuyo valor fue 0,1968, con una desviacin estndar
de 0,0044 y un coeficiente de variacin de 2,28% (tabla 7).

Ensayo Pendiente (m)
3 0,1931
4 0,1909
5 0,2039
6 0,2061
7 0,1926
8 0,1917
9 0,1955
10 0,2000
11 0,1949
12 0,1999
13 0,2001
14 0,1941
15 0,1980
16 0,1978
17 0,1939
Promedio 0,1968
Desv. Estndar 0,0045
CV 2,28
Tabla 6. Anlisis de las pendientes para determinar la sensibilidad del mtodo.
7.4 Precisin
Considerando el coeficiente de variacin (CV) como punto de referencia para
determinar la precisin, se encontr que para el valor de referencia de
concentracin baja (0,04 mg/l Fe) la precisin tuvo una variabilidad del 27,80%;
para el valor de referencia de concentracin media (0,80 mg/l Fe) la variabilidad en
la precisin fue del 3,50%; y para el valor de referencia de concentracin alta (2
mg/l Fe) la variabilidad fue de 2,30% (ver tabla 6).
Analizando estos resultados se evidenci que entre menor sea la concentracin a
determinar, el mtodo muestra una mayor variabilidad en los resultados en
comparacin con las concentraciones ms grandes. Las desviaciones o errores
son comunes en este tipo de ensayos, y esto se debe principalmente a
54

limitaciones humanas al realizar mediciones, pues concentraciones muy pequeas
demandan gran exactitud en los procedimientos. A pesar de evidenciar errores
graduales dependiendo del rango de concentracin, se obtuvo una muy buena
precisin en la aplicacin del mtodo.
7.5 Exactitud y porcentaje de recuperacin
No se cont con un patrn de hierro con trazabilidad para la determinacin de
estos parmetros propuestos en el protocolo de estandarizacin del IDEAM, pues
no se consigui con las fuentes consideradas en primera instancia y no se dispuso
de un presupuesto para la compra.
7.6 Linealidad
Al determinar las ecuaciones para cada una de las curvas y su respectivo
coeficiente de correlacin, se observ que este ltimo siempre estuvo muy
prximo a 1 (ver tabla 4), lo cual indica una evidente correlacin y/o relacin de
proporcionalidad muy alta entre la concentracin del analito y la seal del grado de
respuesta del instrumento de medicin, es decir, la absorbancia, para todos los
rangos de anlisis.
7.7 Lmite de deteccin del mtodo
El lmite de deteccin del mtodo de la fenantrolina para la determinacin de hierro
en muestras de agua natural obtenido experimentalmente fue de 0,0032 mg/l. Este
representa la mnima concentracin detectable, y por encima de la cual se
obtendr una respuesta del instrumento de medicin con una probabilidad del 99%
de ser diferente del blanco.
7.8 Muestra de agua natural
Una vez se obtuvo la curva de calibracin y su respectiva ecuacin, se procedi a
realizar el anlisis de una muestra de agua natural para determinar hierro total y
ferroso. Todas las muestras dieron resultado positivo para hierro total, obteniendo
una concentracin promedio de 0,1309 mg/l. Respecto al hierro ferroso, algunas
55

muestras dieron resultado negativo, no obstante, la concentracin promedio
determinada fue de 0,0143 mg/l (ver tabla 8).

56

ANLISIS DE HIERRO EN MUESTRAS DE AGUA NATURAL

Ensayo 1 2 3

Fecha
preparacin
2012.12.07 2012.12.07 2012.12.11

Operario
preparacin
Manuel F. Castro C. Manuel F. Castro C. Manuel F. Castro C.

Operario lectura Manuel F. Castro C. Manuel F. Castro C. Manuel F. Castro C.

Preparacin
diluciones hierro
total y ferroso
Volumen
muestra para Fe
total (ml)
15 -20 15 - 20 15 - 20

Volumen
muestra para Fe
ferroso (ml)
25 25 25

Volumen Total
dilucin (ml)
50 50 50

Hierro total
Diluciones
T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 Prom S CV Talto Tbajo
Absorbancia
0,0205 0,0186 0,0311 - 0,0419 0,0237 0,0241 0,0348 0,0241 0,0246 0,0246 0,0250 0,0241 0,0400 0,0209 0,0270 0,0072 26,61 2,0772 1,1636
Concentracin
Fe (mg/l)
0,0978 0,0886 0,1514 - 0,2063 0,1140 0,1163 0,1704 0,1163 0,1186 0,1186 0,1210 0,1163 0,1967 0,1001 0,1309 0,0363 27,74 2,0772 1,1636
Hierro ferroso
Diluciones
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 F12 F13 F14 F15 Prom S CV Talto Tbajo
Absorbancia
0,0017 0,0035 0,0004 -0,0013 -0,0013 0,0088 0,0074 0,0066 0,0057 0,0061 0,0048 0,0039 0,0044 0,0052 0,0031 0,0039 0,0030 76,23 1,6124 1,7455
Concentracin
Fe (mg/l)
0,0032 0,0121 -0,0034 -0,0121 -0,0121 0,0388 0,0321 0,0276 0,0232 0,0254 0,0187 0,0143 0,0165 0,0209 0,0099 0,0143 0,0152 105,79 1,6124 1,7455
Tabla 7. Resultados del anlisis de hierro total y ferroso en la muestra de agua natural.
57

8. CONCLUSIONES
Se llev a cabo la validacin del mtodo espectrofotomtrico para la
determinacin de hierro en muestras de agua naturales, dejando una base
para futuras investigaciones en este campo de estudio, en el programa de
Ingeniera Ambiental de la Universidad Autnoma de Colombia.

Se seleccion el mtodo de la fenantrolina del Estndar Methods de la
APHA, como el ms adecuado por su bajo nivel de complejidad,
confiabilidad, y facilidad de montaje, para llevar a cabo su validacin y la
determinacin de hierro en muestras de agua naturales.

Se realiz el montaje para la aplicacin del mtodo de la fenantrolina en las
instalaciones del laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad
Autnoma de Colombia, al disponer de todos los reactivos, equipos y
materiales necesarios.

Se realizaron todos los ensayos pertinentes y el respectivo anlisis de los
datos obtenidos, permitiendo as la determinacin de la curva de
calibracin: A =0,1978C +0,0011.

Se tom una muestra de agua natural de un pozo profundo ubicado en el
casco urbano del municipio de Orocu (Casanare), y se realiz su
respectivo anlisis en el laboratorio.

El anlisis de la muestra de agua natural dio resultados positivos tanto para
hierro total como para hierro ferroso, siendo la concentracin promedio
obtenida experimentalmente para el primero de 0,1309 mg/l; mientras que
para el segundo fue de 0,0143 mg/l. En ambos casos, los valores obtenidos
cumplen con la Resolucin 2115 de 2007, cuyo valor de referencia para
hierro total en agua potable corresponde a 0,3 mg/l.
58

9. RECOMENDACIONES
Para cumplir con todos los lineamientos establecidos en el Protocolo de
Estandarizacin de Mtodos Analticos del IDEAM, y asegurar as una mayor
confiabilidad en los resultados obtenidos, se recomienda contar con un patrn
certificado, cuyo anlisis complementario permita determinar parmetros de
rendimiento adicionales como la exactitud y el porcentaje de recuperacin.
Algunas cantidades de reactivos indicadas en la bibliografa pueden ser muy altas
en relacin con lo que realmente se utilizar; por ejemplo: en lugar de preparar
diluciones de 100 ml (como manda la bibliografa) se pueden preparar de 50 ml,
pues solo se utilizar una pequea porcin para tomar la medida de la
absorbancia en el espectrofotmetro. Se recomienda calcular la cantidad
necesaria de cada reactivo con anterioridad para optimizar el uso de los mismos.
Al utilizar algunos reactivos concentrados almacenados en recipientes diferentes
al de fbrica no se obtuvieron los resultados esperados; se recomienda utilizar
reactivos puros que estn almacenados en sus recipientes de fbrica.
En los anlisis de muestras de agua natural correspondientes a la determinacin
de hierro ferroso se observ una alta variabilidad en los resultados (hacindolos
poco confiables); esto posiblemente debido al tiempo de almacenamiento de la
muestra. Aunque esta se almacen en condiciones ideales, se recomienda llevar a
cabo el anlisis de laboratorio en el menor tiempo posible una vez sea
recolectada, pues el hierro ferroso es inestable y existe una alta probabilidad de
cambio al estado frrico.

59

10. BIBLIOGRAFA
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(AWWA), Water Pollution Control Federation (WPCF) (1999). Standard Methods
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INDUSTRIALES MINISTERIO DE FOMENTO (COVENIN) 2120 de 1984.
Determinacin de Hierro. Mtodo de la Fenantrolina.

63

ANEXOS

64

ANEXO 1: Mtodo colorimtrico de la fenantrolina para la
determinacin de hierro en aguas
(Ver documento anexo)

65

ANEXO 2: Protocolo de estandarizacin de mtodos analticos del
IDEAM

66

ANEXO 3: Inventario de reactivos

67

Descripcin Frmula Qumica Disponible Cantidad
aprox.
Si No
cido Clorhdrico concentrado HCl X 250 ml
Hidroxilamina NH
2
OH.HCl X 20 g
Acetato de Amonio NH
4
C
2
H
3
O
2
X 125 g
cido Actico Glacial
concentrado
CH
3
COOH X 350 ml
Acetato de Sodio NaC
2
H
3
O
2
.3H
2
O X 300 g
1,10-Fenantrolina
monohidratada
C
12
H
8
N
2
.H
2
O X 3 g
Permanganato de Potasio 1N KMnO4 X 50 ml
Sulfato Ferro Amnico Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
.6H
2
O X 0,75 g
cido Sulfrico concentrado H
2
SO
4
X 10 ml
Agua desionizada X 35 L

68

ANEXO 4: Inventario de vidriera y equipos

69

Descripcin Capacidad Cantidad Tipo Error
Baln volumtrico 50 ml 20 A 0,006 ml
Bureta 25 ml 4 B 0,03 ml
Bureta 50 ml 1 B 0,075 ml
Pipeta aforada 10 ml 2 B 0,03 ml
Pipeta aforada 5 ml 1 B 0,022 ml
Probeta 1000 ml 1
Vaso de precipitados 50 ml 1
Matraz Erlenmeyer 100 ml 5
Espectrofotmetro Thermo Scientific
GENESYS 20,
1
Balanza analtica OHAUS 210 g 1
Agitador magntico 1
Plancha de calentamiento 1

70

ANEXO 5: Formato de captura de datos

71

Ensayo No.
Fecha
preparacin

Operario
preparacin
Operario
lectura

Diluciones
Concentracin
Fe (mg/l)
Absorbancia
Agua
destilada
Blanco
P3-1
P3-2
P3-3
P3-4
P3-5
P3-7
P3-9
P2-1
P2-2
P2-3
P2-4
P2-5
P2-6
P2-8
P2-10
Agua Natural
72

ANEXO 6: Grfica de los ensayos No. 3 a 10

73

-0.0500
0.0000
0.0500
0.1000
0.1500
0.2000
0.2500
0.3000
0.3500
0.4000
0.4500
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

Concentracin
Absorbancia Vs Concentracin
Fe (mg/l)
Ensayo No. 3
Ensayo No. 4
Ensayo No. 5
Ensayo No. 6
Ensayo No. 7
Ensayo No. 8
Ensayo No. 9
Ensayo No. 10
74

ANEXO 7: Grfica de los ensayos No. 11 a 17

75

0.0000
0.0500
0.1000
0.1500
0.2000
0.2500
0.3000
0.3500
0.4000
0.4500
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00
A
b
o
s
r
b
a
n
c
i
a

Concentracin
Absorbancia Vs Concentracin
Fe (mg/l)
Ensayo No. 11
Ensayo No. 12
Ensayo No. 13
Ensayo No. 14
Ensayo No. 15
Ensayo No. 16
Ensayo No. 17
76

ANEXO 8: Datos de ensayos

77

Ensayo 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Fecha
preparacin
2012.12.07 2012.12.07 2012.12.11 2012.12.11 2012.12.12 2012.12.13 2012.12.14 2012.12.14 2013.01.22 2013.01.28 2013.01.28 2013.01.29 2013.01.29 2013.01.30 2013.01.30
Operario
preparacin
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Operario
lectura
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Manuel F.
Castro C.
Preparacin
solucin reserva
Fe (P1) 1 ml =
200g Fe
Sulfato ferro-
amnico (g)
0,7020
Volumen final
P1 (ml)
500
Preparacin
solucin patrn
(P2) 1 ml = 10g
Fe
Volumen P1
(ml)
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
Volunen final
P2 (ml)
100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Preparacin
solucin patrn
(P3) 1ml = 1g
Fe
Volumen P2
(ml)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
Volumen final
P3 (ml)
100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Diluciones
Concentracin
(m/l)
Absorbancia
Agua destilada _ 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000
Blanco _ 0,0022 0,0009 0,0031 0,0031 0,0009 0,0009 0,0004 -0,0009 0,0013 0,0026 0,0022 0,0017 0,0013 0,0017 0,0013
P3-1 0,02 0,0070 0,0052 0,0070 0,0074 0,0017 0,0052 0,0031 0,0022 0,0031 0,0074 0,0066 0,0026 0,0066 0,0039 0,0035
P3-2 0,04 0,0106 0,0106 0,0097 0,0123 0,0070 0,0106 0,0066 0,0061 0,0057 0,0110 0,0106 0,0066 0,0101 0,0079 0,0074
P3-3 0,06 0,0146 0,0141 0,0128 0,0159 0,0097 0,0141 0,0101 0,0101 0,0106 0,0146 0,0150 0,0114 0,0155 0,0119 0,0101
P3-4 0,08 0,0159 0,0195 0,0168 0,0227 0,0146 0,0173 0,0137 0,0150 0,0141 0,0205 0,0186 0,0146 0,0205 0,0164 0,0146
P3-5 0,10 0,0186 0,0218 0,0205 0,0269 0,0186 0,0200 0,0186 0,0191 0,0191 0,0232 0,0241 0,0177 0,0241 0,0205 0,0186
P3-7 0,14 0,0259 0,0278 0,0278 0,0325 0,0237 0,0269 0,0273 0,0269 0,0246 0,0297 0,0329 0,0283 0,0325 0,0287 0,0269
P3-9 0,18 0,0381 0,0376 0,0320 0,0410 0,0315 0,0348 0,0381 0,0367 0,0329 0,0367 0,0400 0,0367 0,0395 0,0386 0,0334
P2-1 0,20 0,0367 0,0391 0,0419 0,0414 0,0405 0,0419 0,0448 0,0419 0,0438 0,0424 0,0367
P2-2 0,40 0,0773 0,0794 0,0820 0,0742 0,0773 0,0820 0,0799 0,0794 0,0830 0,0851 0,0814 0,0809 0,0809 0,0757
P2-3 0,60 0,1124 0,1158 0,1169 0,1180 0,1163 0,1226 0,1244 0,1209 0,1215 0,1203 0,1135
P2-4 0,80 0,1518 0,1506 0,1618 0,1701 0,1518 0,1537 0,1555 0,1586 0,1543 0,1643 0,1612 0,1561 0,1618 0,1586 0,1524
P2-5 1,00 0,1918 0,1931 0,2020 0,2020 0,1993 0,2083 0,2076 0,1952 0,2020 0,1979 0,1925
P2-6 1,20 0,2321 0,2291 0,2441 0,2581
P2-8 1,60 0,3107 0,3063 0,3261 0,3335
P2-10 2,00 0,3893 0,3872 0,4101 0,4134 0,3840 0,3851 0,3883 0,3979 0,3872 0,4001 0,4023 0,3872 0,3990 0,3969 0,3883
78

ANEXO 9: Ficha tcnica del espectrofotmetro

79

Validacion Método Determinación de Hierro en Agua

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DETERMINACIN DE HIERRO (Fe) EN AGUAS

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