UFPR - UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

Setor PALOTINA

Prticas de Biologia Celular

Agronomia

Perodo: 2 Semestre / 2014

Acadmico (a):_______________________
G.R.R.:_________

SUMRIO
1. RECOMENDAES PARA AS AULAS PRTICAS ................................................... 3
PRTICA 1: Microscopia e a utilizao do microscpio .............................................. 5
PRTICA 2: Citoqumica ...............................................................................................12
PRTICA 3: Organizao celular ..................................................................................15
PRTICA 4: Viso geral de clulas eucariticas: vegetal e animal ...........................18
PRTICA 5: Influncia da Temperatura e de diferentes solventes na
Permeabilidade Celular .................................................................................................23
PRTICA 6: Transporte pela Membrana Plasmtica Osmose em clula animal e
vegetal ............................................................................................................................25
PRTICA 7: Clula Vegetal ..........................................................................................29
PRTICA 8: Organelas citoplasmticas - Eletromicrografias Celulares ...................34
PRTICA 9: Observao de Ncleo e nuclolo ..........................................................36
PRTICA 10: Classificao dos cromossomos humanos e montagem de caritipo
........................................................................................................................................39
PRTICA 11: Diviso Celular .......................................................................................41

1. RECOMENDAES PARA AS AULAS PRTICAS

Para melhor aproveitamento das aulas prticas, os seguintes procedimentos so
recomendados:
1. Comparecer aula no horrio previsto, munido de jaleco branco, calado fechado,
do roteiro de aula prtica e do material solicitado pelo professor.
2. Ler cuidadosamente o roteiro da atividade antes de iniciar sua execuo.
3. Todos os desenhos/esquemas devero ser feitos lpis.
4. Esclarecer com o professor os pontos duvidosos.
5. No comer, fumar ou fazer brincadeiras no laboratrio.
6. No provar as solues ou reagentes existentes no laboratrio.
7. Jogar todos os slidos e pedaos de papel usados em frascos ou cestos para isto
destinados. No jogar nas pias materiais como fsforos, papel de filtro, ou
qualquer slido ainda que ligeiramente solvel.
8. Deixar todos os vidros com reagentes e corantes devidamente tampados.
9. Colocar lminas e lamnulas sujas em local apropriado (haver sempre um
recipiente para descarte).
10. Qualquer acidente deve ser comunicado imediatamente ao professor.
11. Limpar, no final da aula, a bancada de trabalho, deixar o microscpio como
foi encontrado (limpo, coberto e desligado) e colocar todo o material
utilizado em seu devido lugar.

2. OBJETIVOS GERAIS DA DISCIPLINA:

Conhecer a estrutura, composio qumica e fisiologia das clulas como um
fundamento para a compreenso dos demais nveis de organizao dos seres
vivos.
Relacionar os conceitos apresentados em aula terica com as observaes
prticas.

Treinar o manuseio do microscpio de luz (instrumental bsico utilizado para o

estudo da clula).

Desenvolver hbitos de trabalho em laboratrio.

3. MATERIAIS NECESSRIOS E OBRIGATRIOS PARA AS AULAS PRATICAS:

1. Apostila de Prticas de Biologia Celular - Edio 2012 (No recomendado o
uso de apostilas antigas devido s modificaes introduzidas na ltima reviso).
2. Jaleco ou avental.

4. OBSERVAES
A disciplina de Biologia Celular observa com rigor a freqncia em pelo menos
75% das aulas ministradas e critrio para aprovao na disciplina. As faltas sero
lanadas no Sistema junto com a nota no final do semestre.

5. REFERNCIAS:
DE ROBERTIS, E. M. F., HIB, J. Bases da Biologia Celular e Molecular. 4 Edio. Ed.
Guanabara Koogan. Rio de Janeiro. 2006. 389 p.
JUNQUEIRA, L. C., CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 8 Edio. Ed.
Guanabara Koogan. Rio de Janeiro. 2005. 332p.
COOPER, G. M., HAUSMAN, R. E. A Clula Uma abordagem molecular. 3 Edio.
Ed. Artmed. So Paulo. 2007. 736 p.

Roteiro de Aula Prtica n 01

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Microscopia e a utilizao do microscpio

2. OBJETIVOS
1. Conhecer os componentes do microscpio identificando suas partes.
2. Fazer observaes de materiais ao microscpio relacionando as imagens formadas e
os aumentos obtidos com seu funcionamento.
3. INTRODUO

Descrio do microscpio fotnico ou microscpio ptico (M.O.)

A palavra microscpio de origem grega (micros = pequeno, scopein = observar,

olhar com ateno). um instrumento ptico que amplia a imagem de um pequeno
objeto utilizando um sistema de lentes e fontes de iluminao, fornece uma imagem
geralmente invertida (de cima para baixo) e rebatida (da esquerda para a direita).
Todo microscpio composto de partes mecnicas e partes pticas (observao
e iluminao), que juntas nos permitem a observao detalhada de materiais em estudo.
3.1. Parte mecnica possui os seguintes componentes:

01. P ou Base: uma base firme e pesada que se contnua por um brao, e pelo
qual o microscpio pode ser erguido. Neste brao apia-se o tubo que contm o
sistema ptico de observao.
02. Tubo ou Canho: No tubo encontra-se o sistema ptico de observao. Na parte
superior temos a lente ocular e na parte inferior a lente objetiva.
03. Revlver: Encontra-se na parte inferior do tubo e onde esto rosqueadas as
lentes objetivas. Girando o revlver podemos mudar as objetivas de posio.
04. Platina: uma pequena mesa que serve de apoio ao material a ser observado.
Possui uma abertura central que permite a passagem dos raios luminosos. Na
platina podemos encontrar duas presilhas destinadas a fixar a lmina de vidro na
posio desejada.

05. Charriot: As platinas fixas compensam geralmente sua imobilidade por meio de
peas deslizantes, chamadas conjunto charriot. Entre as garras do mesmo
encaixa-se a lmina com o objeto a ser observado. Pode ser deslocado para
frente ou para trs, direita ou esquerda, sempre no mesmo plano.

06. Mecanismo de Focalizao: Consiste de dois parafusos com comando externo

bilateral.
Parafuso Macromtrico: permite movimentos mais grosseiros da objetiva em
direo a platina ou vice-versa.
Parafuso Micromtrico: permite movimentos menores e mais delicados da
objetiva em direo platina ou vice-versa, para focalizao complementar.
Localiza-se prximo ao parafuso macromtrico ou adaptado sobre ele. Em certos
microscpios, s existe um parafuso em lugar do macro e micromtrico.
Parafuso Condensador: Tambm se situa na poro inferior da coluna,
destinando-se a elevar ou abaixar o condensador.
3.2. Parte ptica:

A. Sistema ptico de Observao: constitudo por um conjunto de lentes:

1. Oculares: As oculares so encaixadas na extremidade superior de tubo ou
canho.

2. Objetivas: As objetivas so engenhosos sistemas pticos, construdos de 4 a 6

ou mesmo mais lentes cuidadosamente superpostas e coladas umas sobre as outras.
Normalmente vamos encontrar 4 objetivas em cada microscpio, cada uma das
quais permitindo um aumento diferente.
a) Objetiva de menor aumento a seco (panormica)
b) Objetiva de mdio aumento a seco.
c) Objetiva de maior aumento a seco.
d) Objetiva de imerso em leo

Ampliao total ou aumento total do microscpio.

Este valor dado pelo produto do aumento da objetiva pelo aumento da ocular. Ambos
os valores so gravados pelos fabricantes, de forma que na prtica, basta multiplicarmos
para sabermos a ampliao total.
Observe a Tabela 1 abaixo como exemplo:

Tabela 1 Aumento total do microscpio ptico.

Ocular
10 X
10 X
10 X
10 X

Objetiva
4X
10 X
40 X
100 X

Aumento Total
40 X
100 X
400 X
1.000 X

B. Sistema ptico de Iluminao composto por:

1. Fonte Luminosa: Pode ser distante, como a luz solar, ou prxima como a luz
de uma lmpada. Os microscpios mais aperfeioados possuem uma lmpada embutida.
2. Espelho: Quando for o caso a luz proveniente da fonte dever ser dirigida ao
sistema ptico de observao por meio de um espelho. O espelho dever ser plano
quando a fonte luminosa distante, e cncavo quando a mesma prxima.
3. Diafragma ris: Quando for conveniente, pode-se limitar parte dos raios,
perifricos que chegam ao objeto. Para tanto o microscpio dispe de um diafragma - ris
que permite diminuir a abertura de entrada do feixe luminoso.
4. Condensador: possvel tambm aumentar a quantidade de luz que
atravessa o objeto, tanto no caso da luz ser fraca, como no caso em que o aumento da
objetiva exige raios mais intensos. Neste caso usa-se um dispositivo auxiliar o
condensador que concentra os raios luminosos.
5. Filtros: Os filtros so discos de vidro coloridos ou recobertos com gelatina
colorida que absorvem uma parte das radiaes luminosas que atingem o objeto,
permitindo usar faixas estreitas de luz, de comprimento de onda selecionado.

PREENCHA COM OS NOMES AS RESPECTIVAS PARTES DO MICROSCPIO

PTICO.

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Conceitos em Microscopia:

Poder de Resoluo (PR) Capacidade de um sistema ptico de produzir uma imagem

ntida. O olho humano tem poder de resoluo de aproximadamente 100m, enquanto
que os microscpios de luz comuns, em torno de 0,25m.
Limite de Resoluo (LR) Refere-se a menor distncia que deve existir entre dois
pontos para que apaream individualizados na imagem, ou seja, permaneam ntidos (o
LR j determinado na fabricao do equipamento).
Unidades de Medida
Uma unidade de medida que nos bastante familiar o milmetro (mm). Se
dividirmos o milmetro em 10 vezes (0,1 mm), estaremos abaixo do limite do poder de
resoluo do olho humano. Agora, dividindo-o em 1000 vezes (0,001 mm), teremos o
equivalente a um micrmetro (1m), unidade de medida que se encontra no poder de
resoluo do microscpio de luz.
Embora possamos observar, com o microscpio de luz, uma variada gama de
clulas e tecidos, a maioria das estruturas celulares menor que o poder de resoluo
deste equipamento. Para estud-las necessria a utilizao de microscpio mais
potente, o microscpio eletrnico. Neste caso, se dividirmos um micrmetro em 1.000
partes (0,001 mm), isto equivaleria a um nanmetro (1 nm), unidade de medida que se
encontra no poder de resoluo do microscpio eletrnico. A Tabela 2 resume estas
unidades de medida.

Tabela 2 Unidades de medidas frequentemente utilizadas em biologia celular.

Unidade de Medida
Milmetro
Micrmetro
Nanmetro

Smbolo
Equivalncia
mm
0,001 m (milsima parte do metro)
m
0,001 mm (milsima parte do milmetro)
nm
0,001 m (milsima parte do micrmetro)

4. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Microscpio ptico comum

Letras recortadas do jornal

Lminas e lamnulas

gua

Papel filtro

5. PROCEDIMENTO
Lminas com letras:
Recorte uma letra pequena de jornal. Coloque-a em uma lmina na posio que
voc a l. Coloque uma gota de gua sobre a lmina com auxilio de um conta gotas ou
pipeta.
Apie a lamnula sobre a lmina em ngulo de 45.
Encoste a borda da lamnula na borda da gota de gua at que esta se espalhe
pela primeira.
Abaixe a lamnula vagarosamente, procurando evitar a formao de bolhas de ar.
Retire o excesso de gua encostando um pedao de papel absorvente na borda
externa da lamnula, na linha de contato entre esta e a lmina.
Coloque a lmina pronta sobre a platina do microscpio, de modo a manter a letra
na posio em que lida por voc; Focalize a letra. Observe a posio da letra, na
imagem formada pelo microscpio com a objetiva de 4X e 10X; Desenhe o observado.

Como Focalizar?

Qualquer observao com o microscpio deve ser sempre iniciada com a

objetiva de menor aumento. No h exceo para esta regra. Iniciar um trabalho de
microscopia com qualquer uma das outras objetivas constitui grave falta tcnica.
Execuo:
Pe-se a lmina com a preparao sobre a platina, prendendo-a com as presilhas
ou por entre as garras de charriot e centra-se a mesma at que a preparao esteja no
foco de luz (observar por fora). Desce-se ento o tubo pelo parafuso macromtrico, at
que a lente frontal da objetiva o mais prximo possvel da lmina (observar sempre por
fora). S ento se olha pela ocular e levanta-se vagarosamente o tubo, pelo mecanismo
macromtrico, at que a imagem esteja no campo visual. Procede-se em seguida a
focalizao micromtrica, desejando-se ampliao maior basta engatar a objetiva
seguinte e realizar se for o caso pequenos ajustes no micromtrico.
Melhores contrastes podem ser obtidos com o uso do diafragma e do
condensador, de acordo com a estrutura a ser observada.

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6. CONSIDERAES FINAIS:

6.1. Que diferenas voc observou entre a posio das letras a olho nu e na
imagem ao MO?

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6.2. Nas objetivas de diferentes aumentos, o que voc notou quanto ao tamanho
da imagem e quanto rea do campo de observao?
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6.3. Por que a lamnula deve estar sempre voltada para cima quando se observa o
material ao microscpio?
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Roteiro de Aula Prtica n 02

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Citoqumica
2. INTRODUO
A constituio qumica e a localizao dos componentes celulares podem ser
estudadas mediante tcnicas especiais de colorao, denominadas tcnicas
citoqumicas. Nessas tcnicas, a reao entre certos tipos de substncias e os
componentes celulares resulta em produtos detectveis ao microscpio.
Para que uma determinada tcnica de colorao tenha valor citoqumico
necessrio que: 1) a substncia a ser identificada esteja imobilizada em sua localizao
original na clula; 2) o produto da reao seja insolvel e colorido (ou eletrondenso) e 3)
a reao seja especfica para uma determinada substncia ou grupamento qumico.
Abaixo descrio das principais tcnicas de citoquimica.
A. REAO DE FEULGEN
a reao mais conhecida e utilizada para determinaes qualitativas e
quantitativas de DNA in situ. Ela se baseia na exposio de grupamentos aldedos na
molcula de DNA, como resultado de uma hidrlise cida. Em seguida, o DNA
evidenciado pelo tratamento com o reativo de Schiff. Antes da montagem da lmina, o
material tratado com gua sulfurosa para retirar o excesso de corante.
B. REAO DE P.A.S. (Periodic Acid Schiff)
Esta reao usada para identificar acares neutros, envolvendo duas etapas.
Na primeira, o polissacarrdeo neutro submetido a uma oxidao pelo cido peridico
(H104). O cido peridico oxida os grupos gliclicos (-OH) ligados a carbonos vizinhos,
produzindo radicais aldedos. A segunda etapa caracterizada pela reao dos radicais
aldedicos com o reativo de Schiff que ter reconstituido o seu grupamento cromofrico,
formando um produto insolvel e de cor vermelho-violeta.
Em clulas animais, a reao do P.A.S. utilizada para a deteco de glicognio,
de glicoprotenas e de proteoglicanos (protenas associadas a cadeias de carboidratos
neutros). Em clulas vegetais esta reao positiva para o amido, celulose, hemicelulose
e pectinas.
C. COLORAO DIFERENCIAL E CONTRA-COLORAO
Como os diversos componentes celulares podem apresentar diferentes afinidades
por diferentes tipos de corantes, pode-se empregar mais de um corante em um nico
procedimento de colorao. Quando se utiliza um corante especfico para determinada
estrutura celular, faz-se uma colorao diferencial, sendo que as demais estruturas
podem ser coradas por meio de uma contra-colorao. A colorao diferencial uma
tcnica citoqumica para um determinado componente celular. A contra-colorao uma
colorao inespecfica que evidencia estruturas celulares que podem ser tomadas como

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referncia.
Um exemplo deste tipo de colorao pode ser observado em preparado de fgado,
no qual os grnulos de glicognio (citoplasmticos) so corados pelo P.A.S. (colorao
diferencial) enquanto que os ncleos so corados pela hematoxilina (contra-colorao).

3. PRTICA

Identificao in situ de componentes celulares.

OBJETIVOS
Esta aula prtica tem como objetivo demonstrar ao aluno como podemos
identificar os componentes macromoleculares nas clulas e tecidos a partir de coloraes
ou testes citoqumicos.
O aluno dever, nesta parte da aula, compreender os mecanismos clssicos de
reao citoqumica

Princpios da Citoqumica
O aluno dever fazer em duas lminas limpas um espalhamento de clulas da
mucosa oral e, posteriormente, promover a fixao do material em soluo de etanolcido actico (3:1), por 5 minutos. Aps a lavagem da lmina em lcool 70% e gua
corrente, o aluno dever proceder da seguinte maneira:
Acidofilia: Corar uma das lminas processadas em soluo de Xilydine Ponceau a pH
2,5. Lavar o material em gua corrente. Colocar uma lamnula sobre o material e
observar.
Basofilia: Corar a outra lmina em soluo de Azul de Toluidina a pH 4,0. Lavar em gua
corrente. Colocar uma lamnula sobre o material e observar.

**OBSERVE COM A LENTE OBJETIVA DE 40X

Responda:
1. Quais os mecanismos citoqumicos que envolvem a reao de acidofilia e
basofilia?
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2. Qual a finalidade de utilizar-se do etanol-cido actico antes da colorao?

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3. Quais os elementos visualizados pelo Xilydine Ponceau? E pelo Azul de
Toluidina?
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4. Esquematize as observaes.
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Roteiro de Aula Prtica n 03

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Organizao celular

2. CLULA PROCARITICA
2.1. INTRODUO
As clulas procariticas apresentam os seguintes componentes: uma membrana
de revestimento chamada membrana plasmtica e apenas um compartimento interno, o
citoplasma. O citoplasma preenchido por uma substncia homognea denominada
hialoplasma no qual se acham pequenos grnulos formados por RNA, denominados
ribossomos, onde ocorre a sntese de protenas e de enzimas e o cromossomo formado
por DNA, geralmente preso a algum ponto da membrana plasmtica, que ocupa um
espao denominado nucleide. A clula procaritica no possui ncleo, de maneira que o
cromossomo se encontra no citoplasma, mergulhado no hialoplasma. Alm desses
componentes, as bactrias, as rickettsias e cianofceas possuem uma membrana externa
chamada parede celular.
2.2. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Bactrias provindas de meio de cultura

Microscpio de Luz

Lminas e Lamnulas

Papel absorvente

Conta-gotas ou pipeta

Recipiente com gua.

Corante Azul de metileno

2.3. PROCEDIMENTO
Coletar material da placa de petri com um palito de dente e fazer um esfregao
sobre uma lmina. Pingar uma gota de azul de metileno e/ou gua. Colocar a lamnula,
evitando a formao de bolhas; retire o excesso de corante com papel absorvente.
Observe nas objetivas 4, 10 e 40X. Coloque leo de imerso e observe na objetiva de
100x. Faa um esquema do material observado no aumento de 1000X.

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1000X
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Obs: Ao final da observao, limpe com soluo de limpeza a objetiva.

3. CLULA EUCARITICA
3.1. ASSUNTO
Observao de clulas eucariticas de fungos filamentosos e leveduriformes

3.2. INTRODUO
Os fungos filamentosos so organismos bem adaptados, possuem inmeras espcies
j identificadas e muitos so patgenos, causando muitas doenas em animais e plantas.
Eles tm grande importncia no equilbrio do ecossistema e por essa razo no podem
ser considerados exclusivamente patgenos. Eles possuem espcies sexuadas e
assexuadas. Fixam-se em um substrato e formam grandes colnias atravs de suas hifas
multinucleadas. Formam clulas especializadas em propagar sua espcie, os condios ou
esporos. Uma estrutura chamada conidiforo responsvel pela produo dos condios.
Os fungos unicelulares ou leveduriformes so de grande importncia clinica e
biotecnolgica. So fungos utilizados nos diversos processos fermentativos como o da
cerveja, vinho e po. Outros fungos leveduriformes so de interesse mdico e podemos
citar as clamdias.

3.3. MATERIAIS E REAGENTES:

Placa com colnias de fungos filamentosos

Saccharomyces cerevisae diluda em gua e acar

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Lminas e lamnulas

Lamparina

Ala de coleta

gua

3.4. PROCEDIMENTO
A coleta do fungo filamentoso se faz semelhante coleta feita com os procariotos.
Para as leveduras usar pipetas de Pasteur, pingar uma gota na lmina, cobrir com a
lamnula. Observar em objetivas de 4, 10, 40. Observar hifas, condios e um conidiforo
(se houver) nos fungos filamentosos. Nas leveduras observar formato das clulas e
clulas em brotamento.
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400 X
1.000X
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Roteiro de Aula Prtica n 04

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Viso geral de clulas eucariticas: vegetal e animal

2. OBJETIVOS:
1. Conhecer o material que deu origem ao termo clula, introduzido por Robert Hooke.
2. Conhecer e diferenciar a morfologia de uma clula eucaritica animal e uma clula
vegetal.
3. Identificar que algumas clulas vegetais podem ser mortas na maturidade.

3. CLULA EUCARITICA VEGETAL (CEBOLA)

3.1. INTRODUO
A clula vegetal apresenta algumas estruturas restritas, no compartilhadas com a
clula animal. Estas so: parede celular, vacolo de suco celular e plastos. A parede
celular constituda por fibrilas de celulose e uma matriz formada por hemicelulose,
pectinas, glicoproteinas, gua e por vezes, lignina. O vacolo pode ocupar at 90% do
volume celular e apresenta diversas funes, dentre estas participa do turgor celular e da
rigidez do tecido.

3.2. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Bulbo de cebola (Allium cepa)

Microscpio de Luz

Lminas e Lamnulas

Papel absorvente

Conta-gotas ou pipeta

Recipiente com gua

Lmina de Barbear ou Bisturi.

3.3. PROCEDIMENTO
Retirar delicadamente um pedao da epiderme do catafilo da cebola (preferncia
a parte interna). Distender suavemente o material coletado sobre a lmina, com o auxilio
de um pincel molhado em gua. Pingar sobre o material distendido uma gota de gua.

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Iniciar a colocao da lamnula em posio de 45, com relao lmina, e ir abaixando

lentamente at que a mesma fique totalmente sobre a lmina, evite a formao de bolhas
de ar; Caso haja excesso de lquido, retirar com papel absorvente, para manter a
lamnula fixa; analisar ao microscpio, utilizando as objetivas de 4X, 10X e 40X;
Esquematizar nos aumentos de 100X e 400X.
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4. PLASMODESMOS em Pimento (Capsicum sp.)

Estas estruturas permitem a passagem de lquidos, solutos e, possivelmente,
macromolculas, entre os citoplasmas das clulas vegetais. PRESENTE NA PAREDE
CELULAR.
4.1. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Fruto de Pimento (Capsicum sp.)

Microscpio de Luz

Lminas e Lamnulas

Papel absorvente

Conta-gotas ou pipeta

Recipiente com gua

Lmina de Barbear ou Bisturi.

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4.2. PROCEDIMENTO
Retirar uma fatia bem fina da casca do pimento com auxlio de uma lmina de
barbear. Transferir a fatia para uma lmina com algumas gotas de gua. Colocar a
lamnula e retirar o excesso de gua se houver. Focalizar e analisar nas objetivas de 4X,
10X, 40X e 100X esquematizar no aumento de 1000X.

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A clula animal tambm apresenta plasmodesmos? Discuta.

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5. CLULA EUCARITICA ANIMAL (MUCOSA ORAL)

5.1. INTRODUO
As clulas eucariticas se caracterizam pela presena de um sistema interno de
membranas, o sistema de endomembranas, que formam compartimentos funcionais no
citoplasma celular. O sistema de endomembranas, oriundo evolutivamente de

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invaginaes da membrana plasmtica, compreende o envoltrio nuclear, o retculo

endoplasmtico, o aparelho de Golgi, os lisossomos, e os endossomas. Nos
compartimentos membranosos do citoplasma celular ocorrem vrios processos
metablicos

especficos,

funcionando

como

pequenos

rgos,

as

organelas

citoplasmticas. O envoltrio nuclear delimita o compartimento nuclear, cujo principal

componente o material gentico.
Em microscopia de luz pode-se facilmente observar na clula eucarionte dois
compartimentos: o ncleo, limitado pelo envoltrio nuclear e o citoplasma, limitado pela
membrana plasmtica.
5.2. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Microscpio de luz

Lminas e lamnulas

Papel absorvente

Conta-gotas ou pipeta

Cubeta para colorao

Esptulas ou palitos de dente

Corantes (hematoxilina, azul de metileno ou orcena actica e eosina)

Soluo de lcool: ter para limpeza do Microscpio

leo de imerso

5.3. PROCEDIMENTO
Fazer uma raspagem delicada da mucosa na regio da lngua ou da bochecha (de
baixo para cima), com auxlio e uma esptula de madeira ou palito de dente; Fazer um
pequeno e fino esfregao, do material recolhido na esptula, sobre a lmina; Deixar a
lmina secar; Colocar algumas gotas do corante azul de metileno ou orcena actica e
deixar corar por 3 minutos; Iniciar a colocao da lamnula em posio de 45 com
relao lmina e ir abaixando lentamente at que a mesma fique totalmente sobre a
lmina evitando a formao de bolhas de ar; Caso haja excesso de lquido, retirar com
papel absorvente, para manter a lamnula fixa; Analisar em aumentos crescentes,
utilizando as objetivas de 4X, 10X, 40X e 100X; Esquematizar no aumento de 400X e
1.000X.

21

_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

22

Roteiro de Aula Prtica n 05

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Influncia da Temperatura e de diferentes solventes na Permeabilidade

Celular
2. OBJETIVOS (LISTAR OS OBJETIVOS DA AULA):
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
3. INTRODUO
A temperatura pode influenciar na maior ou menor passagem de substncias
atravs da membrana plasmtica. Isto pode ser verificado atravs de experincias com
variaes de temperatura, em que ocorre acelerao ou diminuio da passagem dessas
substncias.

Os

diferentes

tipos

de

solventes

podem

ocasionar

diferentes

comportamentos na membrana celular.

4. MATERIAIS E REAGENTES:
Beterraba
Termmetros
Beckers
Tubo de ensaio grande
Papel absorvente
Bisturi ou Faca
Pina
Metanol
Acetona
gua Destilada
Estante para tudo de ensaio
Provetas de 50 ml
5. PROCEDIMENTOS
5.1. Procedimento I
Corte tiras de beterraba de 4cm x 0,5cm x 0,5 cm. Lave bem, vrias vezes at que
a gua no fique mais vermelha.

23

Prepare uma srie de tubos de ensaio com 10 mL de gua destilada com os

seguintes rtulos: Geladeira, Controle, 80C. Coloque uma tira de beterraba nos dois
primeiros tubos; coloque um deles na geladeira e anote a temperatura deste. Deixe o
tubo controle no porta tubos e anote a temperatura ambiente.
Para o terceiro tubo, aquea a gua em um Becker, at a temperatura indicada,
coloque nesta gua a tira de beterraba.
Depois de meia hora agite bem os tubos de ensaio para espalhar o pigmento e
retire as tiras de beterraba. Faa todas as observaes necessrias.
5.2. Procedimento II
Corte tiras de beterraba no tamanho estipulado no procedimento, lave bem, vrias
vezes at que a gua no fique mais vermelha.
Prepare uma srie de tubos de ensaio com os seguintes rtulos: controle, metanol
e acetona. No tubo controle colocar 10 mL de gua destilada, no tubo metanol colocar
10mL de metanol e no tubo acetona colocar 10mL de acetona.
Aps as solues estarem nos tubos de ensaio colocar um tira de beterraba em
cada tubo. Depois de meia hora agite bem os tubos de ensaio para espalhar o pigmento
e retire as tiras de beterraba. Faa todas as observaes necessrias. Descreva o que
ocorreu.

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24

Roteiro de Aula Prtica n 06

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Transporte pela Membrana Plasmtica Osmose em clula animal e

vegetal
2. OBJETIVOS
1. Mostrar que a diferena de concentrao nas solues promove o deslocamento de
gua (transporte) para fora ou para dentro da clula vegetal.
2. Observar e diferenciar o processo de osmose nas clulas animais e vegetais.
3. Visualizar o fenmeno de plasmlise e desplasmlise.

3. INTRODUO
O sangue constitudo por elementos celulares que circulam em um meio fludo,
o plasma. No plasma ocorre tambm o transporte de nutrientes, hormnios, protenas e
metablitos diversos. Dentre os elementos celulares, as clulas vermelhas (hemcias ou
eritrcitos) so as mais abundantes 4,5 milhes por mL de sangue no homem, e 4
milhes na mulher. Possuem 6,5 a 8,5 m de dimetro, no apresentam ncleo e
organelas citoplasmticas, perdidas durante o processo de diferenciao celular. A
sobrevivncia mdia das hemcias no sangue circulante de cerca de 120 dias. Seu
formato bicncavo proporcionado pela presena de protenas na membrana plasmtica,
que se conectam a protenas, do citoesqueleto, capacitando o eritrcito a suportar a
tenso na membrana plasmtica na medida em que a clula atravessa os capilares
sanguneos. Ser utilizado nesta prtica o sangue para observao de osmose nas
clulas animais.
Com relao s clulas vegetais, quando se coloca uma clula vegetal em uma
soluo em que a quantidade de sal (soluto) for maior na soluo do que na clula, a
clula perder gua e o protoplasma, com o vacolo, vai-se retraindo at separar-se da
parede celular. Esse fenmeno denominado plasmlise e o inverso, desplasmlise.
4. MATERIAIS:
Microscpio de Luz
leo de imerso
Lmina e Lamnulas
Papel absorvente
Soluo de lcool: ter para limpeza do Microscpio

25

 Conta gotas ou pipeta

Recipiente com gua
Algodo
Microlancetas descartveis e estreis
lcool Iodado (para desinfeco dos dedos)
Solues de Cloreto de Sdio (NaCl 3%)
Bulbo de cebola
5. PROCEDIMENTO
Lavar bem as mos e limpar o dedo indicador com soluo de lcool iodado;
Perfurar o dedo anular com a microlanceta; Retirar trs gotas de sangue do dedo e
transferir para trs lminas limpas.
1. Em uma das lminas pingar uma gota de gua, homogeneizar e colocar a
lamnula, iniciando sua colocao em posio de 45 com relao lmina e ir abaixando
lentamente at que a mesma fique totalmente sobre a lmina, evitando a formao de
bolhas de ar.
2. Em outra lmina pingar uma gota de NaCl 3%, homogeneizar e colocar a
lamnula como descrito anteriormente.
3. Analisar em aumentos crescentes, utilizando as objetivas de 4X, 10X, 40X e
100X. Esquematizar no aumento de 400X ou 1000X.
4. Realizar o mesmo procedimento com catafilos de cebola.
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_______________________________________________________________________

gua destilada
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3% NaCl
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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Cebola
Cebola

gua destilada
3% NaCl
_______________________________________________________________________
______________________________________________________________________

6. CONSIDERAES FINAIS:
6.1. Como podemos explicar os resultados encontrados na lmina que continha a
soluo de gua? (clula animal e vegetal)
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
______________________________________________________________________

6.2. Como podemos explicar os resultados encontrados na lmina que continha a

soluo de 3% de NaCl (clula animal e vegetal)
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
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Roteiro de Aula Prtica n 07

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Clula Vegetal

2. AMILOPLASTOS de Solanum tuberosum.

2.1. MATERIAIS:

Microscpio

Batata inglesa

Lmina, lamnula e bisturi

gua destilada

Conta-gotas ou pipeta

Corante Lugol

2.2. PROCEDIMENTO
Faa cortes finos (transparentes) no tubrculo da batata, coloque na lmina com
gua e lamnula. Use a objetiva de menor aumento para obter a imagem ao M.O.
Com a objetiva de maior aumento observe e desenhe duas ou trs clulas intactas
(parede celular) e contendo vrios gros de amido (amiloplasto).

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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Com gua
______________________________________________________________________

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Repita o procedimento anterior, porm agora substitua a gua pelo lugol. Com a
objetiva de maior aumento observe e desenhe duas ou trs clulas intactas (parede
celular) e contendo vrios gros de amido (amiloplasto).
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_______________________________________________________________________
Com lugol
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2.3. QUESTIONRIO
A. Qual a finalidade do Lugol nessa prtica?
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B. Qual a constituio do gro de amido?
_______________________________________________________________________
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C. Qual o papel do amido nas plantas?
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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3. CLOROPLASTOS em Elodea sp.

3.1. MATERIAIS:

Lminas e lamnulas

Pina

Folhas de Elodea sp.

3.2. PROCEDIMENTO
Retire uma folha de Elodea sp. e coloque-a em uma lmina com gua, acrescente
a lamnula. Observe ao microscpio.
Observe os cloroplastos, sua composio e forma. As folhas, sendo muito finas
podem ser facilmente observadas. Aps intensificar a iluminao e com o passar do
tempo, sob observao ao microscpio, ocorre variao no comportamento dos
cloroplastos (ciclose).

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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Com lugol
Com gua
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3.3. QUESTIONRIO
A. O que voc observou de diferente quando aumentou a intensidade luminosa?
Descrever sobre o movimento de ciclose.
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_______________________________________________________________________
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B. O que pode ser observado na presena do lugol?
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4. CROMOPLASTOS em Tomate (Lycopersicon sp.) ou Pimento (Capsicum sp.)

4.1. MATERIAIS:

Microscpio

Lminas e lamnulas

Lmina de barbear

gua destilada

Conta-gotas ou pipeta

Tomate e pimento amarelo

4.2. PROCEDIMENTO:
Cortar um tomate ao meio e raspar sua polpa, regio de mesocarpo. No caso do
pimento, cortar uma fatia bem fina da casca com lmina de barbear. Colocar cada
material em uma lmina diferente, contendo uma gota de gua, cobrir com lamnula.

Analisar em aumentos crescentes, Utilizando as objetivas de 4x, 10x e 40x.

Esquematizar no aumento de 400x.
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Tomate

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_______________________________________________________________________
Pimento
_______________________________________________________________________

5.2. QUESTIONRIO
A - Diferencie cloroplastos, cromoplastos e leucoplastos.
_______________________________________________________________________
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Roteiro de Aula Prtica n 08

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Organelas citoplasmticas - Eletromicrografias Celulares

2. OBJETIVOS

1. Entender o funcionamento de um Microscpio Eletrnico

2. Analisar algumas eletromicrografias celulares
3. Distinguir a organizao celular e as estruturas celulares aps observao das
micrografias
3. INTRODUO
O Microscpio eletrnico (emprega feixe de eltrons) possibilitou a visualizao de
estruturas celulares no visveis no microscpio ptico, porque seu poder resolutivo
muito maior.
Os eltrons so produzidos graas ao aquecimento, no vcuo, de um filamento de
tungstnio o ctodo que emite eltrons. Essas partculas so aceleradas devido a
uma diferena de potencial de 60 a 100 kV existente entre o ctodo e o nodo. Este
ltimo uma placa perfurada no centro s permite a passagem de parte dos eltrons,
formando um feixe. Os eltrons passam por uma
bobina ou lente magntica, tambm chamada de
condensadora, que os dirige em feixe uniforme na
direo do objeto. Aps atravessar o objeto, onde
muitos eltrons so desviados, o feixe passa por outra
bobina, que corresponde objetiva do microscpio
ptico. Por fim, uma terceira bobina projeta os eltrons
sobre uma tela fluorescente onde elas formam uma
imagem visvel ou sobre um filme fotogrfico.
Os eltrons desviados por certas estruturas da
clula em estudo no contribuiro para formar a
imagem. Essas estruturas aparecem escuras e so
chamadas eltron-densas. Os componentes celulares
que desviam uma pequena percentagem de eltrons
aparecero em diversas tonalidades de cinza.
A tela fluorescente em que a imagem se forma
uma placa revestida por ZnS (sulfeto de zinco), substncia que emite luz ao ser

34

excitada pelos eltrons. Na prtica, as observaes mais cuidadosas so efetuadas nas

micrografias obtidas pela retirada da tela do trajeto dos eltrons, os quais incidiram sobre
um filme fotogrfico
4. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:
Sero utilizadas as micrografias obtidas do Laboratrio de Microscopia da
Universidade Federal do Paran Campus Palotina.
5. PROCEDIMENTO
Os alunos receberam as micrografias que devero ser analisadas, desenhadas e
caracterizadas.

35

Roteiro de Aula Prtica n 09

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Observao de Ncleo e nuclolo

2. OBJETIVOS (LISTAR OS OBJETIVOS DA AULA):
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
3. INTRODUO:
O ncleo tem como fundamental funo abrigar o material gentico de uma clula
eucaritica. Ele atua como centro de controle do metabolismo celular onde se utiliza de
vias de transcrio e traduo dos genes, produzindo desta forma diferentes protenas. O
ncleo em geral nico, mas algumas clulas apresentam mais de um ncleo e, funo
de sua atividade proteica, por exemplo: clula muscular esqueltica, clula heptica e os
osteoclastos do tecido sseo. Ao microscpio de luz o ncleo tem contorno ntido e seu
contedo se cora fortemente por corantes bsicos.
O nuclolo: encontrado no ncleo de clulas eucariticas e constitudo pelo
segmento do DNA que contm os genes que codificam os RNAs e protenas. O nuclolo
uma estrutura dinmica, que se movimenta e altera seu volume dentro do ncleo.
Podemos observar nuclolos na clula que est em interfase. Podemos usar o ncleo
dos hepatcitos ou raiz de cebola (clula vegetal).

4. PRTICA I: Imprint de fgado de boi

4.1.

4.2.

MATERIAIS E REAGENTES:

Fgado de boi

Lminas e lamnulas

Corante azul de metileno ou orcena

Pipeta

leo de imerso

PROCEDIMENTO

Com uma lmina tocar suavemente sobre a superfcie do fgado, fazendo imprint
de suas clulas. Deixar secar. Corar o material com o corante deixando agir por 5

36

minutos. Cobrir com a lamnula procedendo como j aprendido. Observar at aumento de

100X.

1. Observar clulas mononucleadas e binucleadas, procurar ncleos com nuclolos

evidentes.
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400 X
1.000X
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5. PRTICA II: Ncleo e nuclolo em clula vegetal

5.1. MATERIAIS E REAGENTES:

Folhas de Tradescantia sp. e ou Elodea sp.

Lminas e lamnulas

Corante azul de metileno ou orcena actica

Pipeta

leo de imerso

5.2. PROCEDIMENTO
Retire uma folha de Elodea sp. e coloque-a em uma lmina com corante,
acrescente a lamnula. Observe ao microscpio.
Com cuidado retire a epiderme inferior da folha de Tradescantia sp. Coloque a
epiderme retirada sobre uma lmina com algumas gotas de gua e cubra com uma
lamnula.

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1. Observar clulas com ncleos com nuclolos evidentes.

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_______________________________________________________________________

400 X
400X
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Roteiro de Aula Prtica n 10

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Classificao dos cromossomos humanos e montagem de caritipo

2. MATERIAIS:

Fotografias de cromossomos humanos em metfase

Tesoura

Cola

Lpis

3. PROCEDIMENTO:
a) na micrografia ampliada fornecida, circunde com o lpis os cromossomos homlogos;
b) com a tesoura e corte os pares;
c) cole os cromossomos recortados no local correspondente.
Roteiro de Classificao:
GRUPO A os seis maiores cromossomos. O par 1 metacntrico, o 2
submetacntrico, e o par 3 metacntrico.
GRUPO B pares 4 e 5, ambos submetacntricos. O tamanho de seus braos curtos
equivale a 1/3 de seus braos longos. Os dois pares no so distinguveis
morfologicamente.
GRUPO C 15 cromossomos no homem, e 16 na mulher. O cromossomo X pertence a
este grupo. impossvel a identificao individual dos cromossomos pela anlise
morfolgica. Devem ser dispostos no cariograma em ordem decrescente de tamanho.
GRUPO D Pares 13, 14 e 15. So autocntricos, de tamanho mdio, com satlites nem
sempre visveis, e braos curtos. No so distinguveis entre si pela anlise morfolgica.
GRUPO E trs pares de cromossomos. O 16 metacntrico. Os pares 17 e 18 so
submetacntricos. O par 17 tem braos ligeiramente maiores que os braos curtos do par
18.
GRUPO F Pares 19 e 20, os menores metacntricos. Identificao visual impossvel
pela anlise morfolgica.
GRUPO G 4 cromossomos na mulher e 5 no homem (devido a presena do
cromossomo y). So os menores acocentricos. Os pares 21 e 22 apresentam satlite,
nem sempre visveis nos braos curtos (no possvel a distino entre os dois pares). O
Y identificvel, em muitos casos, pela posio paralela dos braos longos, pela
ausncia de satlite e pela localizao preferencial na periferia da placa metafsica.

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______________________________________________
GRUPO A ou (1 3)

_________________________________
GRUPO B ou (4-5)

_____________________________________________________________________________________________
GRUPO C ou (6-12) (+X)

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GRUPO D ou (13-15)

____________________________________
GRUPO F ou (19-20)

________________________________________________
GRUPO E ou (16-18)

_______________________________________________
GRUPO G ou (21-22)

Roteiro de Aula Prtica n 11

Data:___/___/___

1. ASSUNTO: Diviso Celular

2. OBJETIVOS

Analisar as clulas eucariticas na interfase e na diviso:

Caracterizar os fenmenos que ocorrem durante as fases da mitose.

3. INTRODUO
Todos os organismos vivos so clulas ou agregados de clulas; e como
unidades bsicas da vida as clulas so altamente organizadas, capazes de efetuar seu
metabolismo e reproduo independente. Assim, uma clula sempre surge de outra
clula preexistente, pelo mecanismo de diviso celular. Uma vez formada, a clula
apresenta um ciclo de vida, o ciclo celular, cuja durao varia de acordo com o seu tipo e
o organismo. Durante um dos perodos do seu ciclo celular, denominado de interfase, a
clula cresce e executa suas atividades metablicas. Posteriormente, a prpria clula se
divide, formando duas novas clulas, as clulas filhas. Este perodo da diviso celular
finaliza o ciclo de vida da clula. As clulas filhas formadas podem iniciar um novo ciclo
celular.
A diviso celular um fenmeno complexo e altamente regulado. Antes da clula
se dividir ela deve duplicar seu DNA, de modo que as duas clulas filhas recebam a
mesma informao gentica que a clula me. Esta diviso conhecida como mitose,
que em organismo unicelulares se confunde com a prpria reproduo da espcie. Nos
organismos pluricelulares, a mitose permite o crescimento e o desenvolvimento do
organismo, que depende do crescimento e da multiplicao de suas clulas, atuando,
tambm, nos fenmenos de reparao e renovao tecidual. Didaticamente, a mitose
dividida nas fases de prfase, metfase, anfase e telfase.
Os melhores materiais para a observao da mitose so os tecidos em fase de
crescimento, tais como as extremidades das razes das plantas e os brotos das folhas. A
regio meristemtica das razes de cebola (Allium cepa) constitui um timo material para
observao e reconhecimento das fases da mitose.
4. MATERIAIS, EQUIPAMENTOS E REAGENTES:

Microscpio de luz.

Lminas permanentes

5. PROCEDIMENTO
Observar as clulas nas diferentes fases do ciclo celular (interfase e diviso).
Esquematizar.
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_______________________________________________________________________
Intrfase
Prfase

Aumento:
Aumento:
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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Metfase
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Aumento:
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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

Anfase
Aumento:

Telfase
Aumento:

_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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6. QUESTIONRIO
1 Qual (is) critrio (s) voc utilizou para inferir, que determinadas clulas que estavam
sendo visualizadas, estavam em:
PRFASE: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

METFASE: ____________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

ANFASE: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

TELFASE: _____________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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