Historia sobre RFLP

En 1985, Sir Alec Jeffreys descubri los RFLP se refiere a secuencias especficas
de nucletidos en el ADN que son reconocidas y cortadas por las enzimas de restriccin o
tambin denominadas endonucleasas de restriccin y que varan entre individuos. En un
cromosoma humano, una enzima de restriccin puede producir un gran nmero de cortes en
los lugares donde reconozca la secuencia especfica para hacerlo. Las secuencias de restriccin
presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposicin diferentes en el ADN de
diferentes individuos de una poblacin, por lo que se dice que la poblacin es polimrfica para
estos fragmentos de restriccin. Los RFLP son marcadores genticos del ADN y se pueden
encontrar en regiones que codifican protenas o exones, en los intrones o en el ADN que separa
un gen de otro. Lo nico que se necesita para que puedan ser marcadores genticos es que
sean polimrficos teniendo ms de un alelo. La tcnica RFLP se usa como marcador para
identificar grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades
genticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos, ya que puede
mostrar la relacin gentica entre individuos.














Aplicacin de RFLP en el diagnstico
Cuando un RFLP normalmente se asocia con una enfermedad de origen gentico, la presencia o
ausencia de ste puede usarse a modo de consejo sobre el riesgo de desarrollar o transmitir la
enfermedad. De acuerdo con el patrn de herencia, si su padre presentar el alelo normal de la
enfermedad, mientras que su madre ser portadora, es decir heterozigota. El varn afectado
habr heredado de su madre el cromosoma con el alelo de la enfermedad y dada su condicin
de hemizigoto, manifestar el fenotipo correspondiente a la misma. Sin embargo no podemos
predecir, ms all del modelo mendeliano, el genotipo de la hermana ni el del feto que se est
desarrollando.
Representado en la imagen podemos ver de forma simplificada, el resultado obtenido al
caracterizar mediante PCR el locus polimrfico. En el margen izquierdo se presenta un patrn
correspondiente al nmero de repeticiones del dinucletido CA de 1 a 6 y perpendicularmente
a cada individuo el alelo correspondiente a cada uno de ellos. Podemos ver que el varn
afectado ha heredado de su madre el alelo de 2 repeticiones, por lo que podemos inferir que
dicho alelo est junto al alelo de la enfermedad. Segn ello, la hermana habr heredado de su
padre el alelo 4 del polimorfismo junto con el alelo normal de la enfermedad y de su madre el
alelo 6 que tambin en este caso ir junto al alelo normal. Por lo tanto la hermana ser
homozigota para el alelo normal de la enfermedad. Siguiendo un razonamiento similar
podemos inferir que el feto ser una nia que presenta dos alelos del polimorfismo y
heterozigota para la enfermedad, pues ha heredado de su madre el alelo 2 del polimorfismo
que como hemos indicado anteriormente est acompaado por el alelo que causa la
enfermedad.

Como se pudo apreciar en el ejemplo anterior se utilizo como marcador del locus de la
enfermedad a un locus altamente polimrfico, los cromosomas paternos presentan alelos
distintos y por lo tanto los podemos identificar sin duda alguna, es decir: no existe
recombinacin entre ambos locus y por lo tanto el alelo del polimorfismo que en la madre va
junto al alelo de la enfermedad continuar junto a ste en los cromosomas de la
descendencia. Estas dos caractersticas son fundamentales en el momento de escoger un
determinado polimorfismo en el desarrollo de una estrategia de diagnstico indirecto.

Si el marcador utilizado no presenta muchos alelos entonces pueden darse situaciones de duda
cuando uno o ambos padres sean homozigotos para un determinado alelo del marcador. En
este caso se dice que la familia es "no informativa" para dicho marcador y por lo tanto
deberemos utilizar otro polimorfismo en el diagnstico de dicha familia. Por otra parte, si el
marcador no esta ntimamente ligado, es decir existe recombinacin entre el locus de la
enfermedad y el locus del marcador, el diagnstico deber tener en cuenta dicha posibilidad.
En la siguente imagen anexada mas adelante se presenta la genealoga correspondiente a una
familia en la que se hereda una enfermedad con una herencia autosmica dominante. Con una
probabilidad del 50% la madre afectada transmitir a sus descendientes el carcter. La
utilizacin de un locus polimrfico ligado al carcter en cuestin nos permitir establecer un
diagnstico ms ajustado para el feto en desarrollo. En la seccin A se muestra el resultado
obtenido al analizar un polimorfismo (repeticin del dinucletido CA). Vemos que la madre
presenta los alelos 6 y 2 y el padre los alelos 4 y 7. Por su parte el hijo normal es portador de los
alelos 2 y 7, el primero procedente de la madre y el segundo del padre. Si el carcter es
penetrante, podemos considerar que el alelo 2 en la madre est junto al alelo normal del locus
de la enfermedad. Por lo tanto, si el feto presenta el alelo 2 del polimorfismo podremos inferir
que tambin ha heredado el alelo normal del otro locus.
En la seccion B, si la distancia que separa a ambos locus es tal que permite la recombinacin
entre ellos, es posible que el feto haya heredado de su madre el alelo 2 del polimorfismo junto
con el alelo de la enfermedad, debido a la recombinacin de ambos locus en la meiosis de la
madre. La frecuencia con la que se presentar este segundo caso ser la frecuencia de
recombinacin entre los loci implicados. As, si la distancia que les separa es de 5 cM, es decir
su frecuencia de recombinacin es del 5%, el diagnstico que daremos en el caso presentado
en la Figura 21 ser de un 95% de probabilidad de que el feto sea normal como en la seccin A y
de un 5% de que el feto haya heredado el alelo de la enfermedad junto con el alelo 2 del
polimorfismo en la seccin B
http://web.udl.es/usuaris/e4650869/docencia/segoncicle/genclin98/temes_teoria/diagostic_mol/diagn
o3.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Polimorfismos_de_longitud_de_fragmentos_de_restricci%C3%B3n