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BK02Q
1/9
Deduccin de la Ecuacin de Michaelis Menten

El propsito de esta deduccin es desarrollar una expresin matemtica til para describir
Vo, que es la Velocidad inicial (velocidad instantnea) de una enzima, que define el tiempo
en que la enzima modifica a su sustrato nico. Toda la deduccin parte de la expresin de la
reaccin enzimtica:

E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2


en donde E es la concentracin molar de la enzima, que para propsitos del formulismo de
Michaelis Menten se mantiene constante. S es la concentracin molar del sustrato, que
puede variar con el tiempo, y P es la concentracin del producto, que tambin vara con el
tiempo.

La reaccin ocurre en dos etapas: Durante la primera la enzima E se une al sustrato S para
formar el complejo ES y est definida por la suma algebraica de las constantes K
+1
y K
-1
.

Durante la segunda etapa el complejo ES se desintegra despus de alcanzar el estado
reactivo de la enzima, para dar paso a la aparicin del producto P, y est definida por la
suma algebraica de las constantes K
+2
y K
-2
. Sin embargo como K
-2
est muy poco
favorecida se puede eliminar del clculo.

El tiempo que la enzima tarda en alcanzar su estado excitado para modificar al sustrato
corresponde a la velocidad inicial (instantnea) de la enzima y se denota por Vo. Dado que
la enzima debe emplear un cierto tiempo para excitarse, este punto de la reaccin constituye
el Paso limitante de la velocidad de reaccin. En este punto de la reaccin la velocidad
depende exclusivamente de la concentracin del complejo Enzima Sustrato [ES], por lo
que se presenta una cintica de primer orden, en la que la velocidad depende de la
concentracin de uno de los reactantes. Por lo tanto Vo podra determinarse a partir de la
expresin de la ecuacin de velocidad de primer orden, que para esta reaccin corresponde
a la forma:


K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
en la que
-d [ES]
d t
-d [ES]
d t
-d [ES]
d t
es la desaparicin de
[ES] en funcin del
tiempo, es decir la
velocidad, o sea Vo.

Por lo tanto:

Vo = K
+2
[ES] Vo = K
+2
[ES]

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2/9
Pero ni K
+2
ni [ES] pueden determinarse directamente, debido a que no es posible medir la
fraccin de la poblacin molecular de la enzima que est efectivamente acomplejada con
el sustrato en un momento dado y consecuente K
+2
no se puede calcular a partir de la
expresin de la reaccin en equilibrio. As que se debe encontrar otra expresin para Vo a
partir de otras variables que si se puedan medir.

Para desarrollar esa otra expresin escribiremos primero la ecuacin para la reaccin
directa o de ida de la primera etapa de la reaccin enzimtica, cuya velocidad depende de
las concentraciones de la enzima E y del sustrato S, por lo tanto ser una ecuacin de
segundo orden que rinde la formacin del complejo Enzima Sustrato [ES]

E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2


Esta ecuacin de segundo orden que describe la parte sombreada de la reaccin tiene la
forma:


K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=
K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=
K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=


En esta expresin ([ET] [ES]) corresponde a la enzima libre en el sistema, es decir la E
que est del lado izquierdo del rea sombreada que representa la concentracin de la
enzima que an no se acompleja con el sustrato.

Despus escribiremos la ecuacin para la desintegracin del complejo Enzima Sustrato
[ES] resultado de la suma de dos reacciones, a saber: La reaccin directa o de ida de la
segunda etapa que rinde el producto P y que es descrita por K
+2
y la reaccin inversa o de
vuelta de la primera etapa, descrita por K
-1
. La reaccin de formacin del complejo ES a
partir de la Enzima y el Producto descrita por K
-2
se puede eliminar del clculo debido a
que est muy poco favorecida bajo las condiciones de reaccin actuales.

E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2
E + S ES E + P E + S ES E + P
K
+1
K
-1
K
+2
K
-2


Esta ecuacin que describe la parte sombreada de la reaccin tiene la forma:


K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=


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3/9
Al considerar estas dos ecuaciones estamos incluyendo en el clculo a K
+1
, K
+2
y K
-1
que
dan cuenta de las reacciones termodinmicamente favorecidas del proceso completo de la
reaccin enzimtica. Dado que ambas ecuaciones comparten un trmino, como se
demuestra en la siguiente comparacin.


K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=
K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=
K
+1
([E
T
]-[ES]) [S]
-d [ES]
d t
=

K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
-d [ES]
d t
=


Es posible igualarlas de la siguiente manera:


K
+1
([E
T
]-[ES]) [S] = K-1[ES] + K+2 [ES] K
+1
([E
T
]-[ES]) [S] = K-1[ES] + K+2 [ES]


Y a partir de esta ecuacin igualada se reordena de la siguiente manera:

A) Se despeja K
+1
que est multiplicando y pasa dividiendo del otro lado de la
ecuacin.

K
+1
([E
T
]-[ES]) [S] = K-1[ES] + K+2 [ES] K
+1
([E
T
]-[ES]) [S] = K-1[ES] + K+2 [ES]


=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
K
+1
=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
K
+1
=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
[ES] + K
+2
[ES]
K
+1


B) Se factoriza el segundo trmino de la ecuacin.

=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
+ K
+2
K
+1
[ES]
1
.
=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
+ K
+2
K
+1
[ES]
1
.
=
([E
T
]-[ES]) [S]
K
-1
+ K
+2
K
+1
[ES]
1
.


desde esta expresin la suma algebraica de las constantes se renombra como Km

K
-1
+ K
+2
K
+1
=
Km
K
-1
+ K
+2
K
+1
=
Km
K
-1
+ K
+2
K
+1
=
Km


por lo que la ecuacin se transforma en:

=
([E
T
]-[ES]) [S]
[ES]
1
.
Km
=
([E
T
]-[ES]) [S]
[ES]
1
.
[ES]
1
.
Km
que equivale a
=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]
=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]
=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]

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4/9

C) Se descompone el segundo trmino de la ecuacin para obtener la forma
factorizada

=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]
=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]
=
([E
T
]-[ES]) [S] Km [ES]


=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]
=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]
=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]


D) Se despeja el componente [ES][S] que est restando y pasa sumando del otro
lado de la ecuacin,

=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]
=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]
=
[E
T
] [S] - [ES] [S] Km [ES]


=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]
=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]
=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]


E) Se realiza la suma algebraica del primer trmino de la ecuacin.

=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]
=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]
=
[E
T
] [S] Km [ES] + [ES] [S]


=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])
=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])
=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])


F) Se despeja (Km + [S]) desde el primer trmino, en donde est multiplicando y
pasa dividiendo al otro lado de la ecuacin.

=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])
=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])
=
[E
T
] [S] [ES] (Km + [S])


=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])
=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])
=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])


G) Se sustituye el valor de [ES] en la ecuacin

=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])
=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])
=
[E
T
] [S]
[ES]
(Km + [S])

Vo = K
+2
[ES] Vo = K
+2
[ES]

Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])
Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])
Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])


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5/9
Cuando el sistema alcanza la saturacin, es decir cuando toda la enzima se halla
acomplejada con el sustrato, se alcanza la velocidad mxima del sistema o Vmax
este estado corresponde a la reaccin directa o de ida de la segunda etapa de la
reaccin, descrita por K
+2
, y es cuando se est produciendo producto P a la mayor
tasa. La velocidad en este punto depende solo de la concentracin del complejo
Enzima - Sustrato [ES] implicando que es una reaccin de primer orden, y dado que
el sistema est saturado, [ES] equivale a la concentracin de la enzima total o [E
T
]
por tanto en este punto la ecuacin de primer orden:

Vo = K
+2
[ES] Vo = K
+2
[ES]


se puede escribir como sigue

Vmax = K
+2
[E
T
] Vmax = K
+2
[E
T
]


H) Podemos entonces sustituir la ecuacin en la ecuacin como se demuestra
abajo


Vmax = K
+2
[E
T
] Vmax = K
+2
[E
T
]

Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])
Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])
Vo = K
+2
[E
T
] [S]
(Km + [S])



con esta sustitucin final obtenemos la Ecuacin de Michaelis Menten.


Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])











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6/9
Aplicacin de la Ecuacin de Michaelis Menten

La ecuacin de Michaelis Menten en realidad describe la velocidad inicial Vo del sistema
enzimtico relacionando la velocidad del sistema en el estado de saturacin Vmax con la
concentracin del sustrato [S] y la Km. Sin embargo en cierto estado del sistema es posible
calcular el valor de Km.

Ese estado del sistema referido antes es el que corresponde a la mitad exacta de la
velocidad mxima es decir:
[S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax
[S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax
[S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax

en este estado se cumple la siguiente expresin matemtica a partir de la ecuacin de
Michaelis Menten:

Ecuacin original:

Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])


cuando Vo = Vmax entonces se expresa como:

=
Vmax [S]
(Km + [S])
Vmax
2
=
Vmax [S]
(Km + [S])
Vmax
2
=
Vmax [S]
(Km + [S])
Vmax
2


que al ser divida por Vmax se transforma en:

=
[S]
(Km + [S])
1
2
=
[S]
(Km + [S])
1
2
=
[S]
(Km + [S])
1
2

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7/9
y despejando (Km + [S]) que est dividiendo en el segundo trmino de la ecuacin pasa
multiplicando al otro lado de la ecuacin:

=
[S]
(Km + [S])
1
2
=
[S]
(Km + [S])
1
2
=
[S]
(Km + [S])
1
2


=
[S]
(1) (Km + [S])
2
=
[S]
(1) (Km + [S])
2
=
[S]
(1) (Km + [S])
2


continuando con el despeje el 2 del trmino de la izquierda que est dividiendo, pasa
multiplicando del otro lado de la ecuacin:

=
[S]
(1) (Km + [S])
2
=
[S]
(1) (Km + [S])
2
=
[S]
(1) (Km + [S])
2


= 2 [S] (1) (Km + [S]) = 2 [S] (1) (Km + [S]) = 2 [S] (1) (Km + [S])


que equivale numricamente a:

= 2 [S] Km + [S] = 2 [S] Km + [S] = 2 [S] Km + [S]


Ahora se despeja [S] del trmino izquierdo, que est sumando y pasa restando del otro lado
de la ecuacin:

= 2 [S] Km + [S] = 2 [S] Km + [S] = 2 [S] Km + [S] = 2 [S] Km + [S]


= 2 [S] [S] Km = 2 [S] [S] Km = 2 [S] [S] Km


Finalmente se realiza la resta algebraica indicada en la ecuacin.

= 2 [S] [S] Km = 2 [S] [S] Km = 2 [S] [S] Km


= [S] Km = [S] Km = [S] Km = [S] Km


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8/9
de donde se deduce que cuando que cuando Vo = Vmax la Km tiene el mismo valor
numrico que la concentracin del sustrato [S] en ese punto preciso, como se demuestra en
la siguiente grfica.
[S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax
Km [S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax
Km [S]
Vo
Vmax
Vo = Vmax
Km

Esta estrategia de clculo de Km tiene la desventaja de estar basada en una curva
hiperblica con aproximacin asinttica a Vmax, lo que significa que nunca se llega a
determinar el valor de Vmax con precisin, por lo que el clculo de Km resulta mas
preciso cuando se realiza a partir de la linearizacin de la ecuacin de Michaelis Menten
que se consigue gracias a la:


Transformacin de Lineweaver Burk

Esta consiste en la obtencin de los dobles recprocos o inversos de los dos trminos de la
ecuacin de Michaelis Menten como se muestra a continuacin:

Ecuacin de Michaelis Menten original:
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])
Vo =
Vmax [S]
(Km + [S])

Obtencin de los dobles recprocos:
(Km + [S]) 1
=
Vmax [S] Vo
(Km + [S]) 1
=
Vmax [S] Vo
(Km + [S]) 1
=
Vmax [S] Vo


Descomponiendo esta ecuacin de acuerdo a la suma algebraica indicada se obtiene:

=
Km
Vmax [S]
1
Vo
[S]
Vmax [S]
+ =
Km
Vmax [S]
1
Vo
[S]
Vmax [S]
+ =
Km
Vmax [S]
Km
Vmax [S]
1
Vo
1
Vo
[S]
Vmax [S]
[S]
Vmax [S]
+

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9/9
A continuacin se factoriza el componente
Km
Vmax [S]
Km
Vmax [S]
Km
Vmax [S]
y se realiza la divisin

algebraica indicada en el componente
[S]
Vmax [S]
[S]
Vmax [S]
[S]
Vmax [S]
lo que transforma la ecuacin en:

=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vo
1
Vmax
1
Vmax
+
[S]
1
.


que corresponde, trmino a trmino con la ecuacin de la recta, como se demuestra abajo:

=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
m . x
y + b
=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
m . x
y + b
=
Km
Vmax
1
Vo
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
Km
Vmax
Km
Vmax
1
Vo
1
Vo
1
Vmax
1
Vmax
+
[S]
1
.
=
m . x
y + b =
m . x
y + b


en donde m es la pendiente de la curva, b es el intercepto al origen y x e y son las
variables independiente y dependiente respectivamente.

A partir de la ecuacin se puede graficar la curva de cintica enzimtica linearizada
como se demuestra abajo.

Pendiente =
Km
Vmax
1
Vmax
-1
Km
1
Vo
1
[S]
Pendiente =
Km
Vmax
1
Vmax
-1
Km
1
Vo
1
[S]
Pendiente =
Km
Vmax
Pendiente =
Km
Vmax
Km
Vmax
1
Vmax
1
Vmax
-1
Km
-1
Km
1
Vo
1
Vo
1
[S]
1
[S]


que resulta mas precisa para el clculo.