PRACTICA N 04

REGULACIN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUNEA

ACCION DE LA HORMONA INSULINA

I.-INTRODUCCION:
La insulina es una hormona principal que regula el metabolismo de secretada por las
-clulas de la islotes de Langerhans del pncreas. La principal funcin de la insulina
es contrarrestar la accin concertada de varias hormonas generadoras de
hiperglicemia y para mantener bajos los niveles de glucosa en sangre. Adems de su
papel en la regulacin metabolismo de la glucosa, la insulina estimula la lipognesis,
disminuye la liplisis, y aumenta el transporte de aminocidos en las clulas. Debido
a que hay numerosas hormonas, trastornos hiperglucmicos no tratados asociados con
la insulina generalmente llevar a la hiperglucemia severa y acortamiento de la vida.
1

La insulina tambin ejerce actividades tpicamente asociadas con factores de
crecimiento. La insulina es un miembro de una familia de estructuralmente y
funcionalmente similar molculas que incluye la insulina-como factores de
crecimiento (siglas en Ingls: IGF-1 y IGF-2), y relaxina. La estructura terciaria de
las cuatro molculas es similar, y todas tienen promotora del crecimiento actividades.
La insulina estimula y modula la transcripcin translocacin de protenas, el
crecimiento celular, la sntesis de ADN, y la replicacin celular, efectos que tiene en
comn con los factores de crecimiento similares a la insulina y relaxina.
1








La insulina ejerce todas sus actividades biolgicas, tanto como una hormona y
como un factor de crecimiento, mediante la unin a un complejo receptor de la
superficie celular. El receptor de insulina es un miembro de la que abarca la
membrana familia de receptores que alberga la actividad de la tirosina quinasa
intrnseca. Sin embargo, el receptor de la insulina es nico en que es un complejo
heterotetramrico compuesto por dos completamente extracelular -pptidos que
estn unidas por puentes disulfuro de los dos transmembrana que abarca la -
pptidos. Tanto la - y -subunidades del receptor complejos se derivan de un solo
gen (smbolo = INSR). Este procesamiento del receptor es una reminiscencia del
procesamiento de la protena preproinsulina que conduce a dos pptidos (A y B)
disulfided unidos entre s para formar la insulina bioactiva. Dos variantes de corte y
empalme de la alterantive preproprotena receptor de la insulina se generan a partir
del precursor de ARNm INSR. Un formulario contiene exn 11 secuencias
(denominado formulario IR-B), mientras que el IR-A forma no lo hace. El resultado
de la splicing alternativo es que la -subunidad de la forma de IR-B tiene una de 12
aminocidos extensin en su extremo C-terminal. Esta forma de la -subunidad se
conoce como CT. La insulina receptor tambin se puede unir los factores de
crecimiento relacionados mencionados anteriormente, el IGF-1 e IGF-2.
2












Mltiples funciones de la insulina. Cuando la insulina se une a su receptor
desencadena la autofosforilacin del receptor que genera sitios de atraque para las
protenas sustrato del receptor de insulina (IRS-1IRS4). Protenas IRS, a su vez
desencadenan la activacin de una amplia gama de protenas transductoras de seal
(muy simplificado en esta Figura). Los resultados finales de la activacin del
receptor de la insulina son muy variadas y en muchos casos del tipo de clula
especfico, pero incluye alteraciones en el metabolismo, los flujos de iones, la
translocacin de protenas, las tasas de transcripcin, y las propiedades de
crecimiento de las clulas de respuesta. Las flechas representan , activacin de
funciones positivas. T-lneas representan funciones inhibidoras.
2



La funcin ms importante de la insulina es contrarrestar la accin concertada de
varias hormonas que causan hiperglicemia y de mantener niveles de glucosa
sangunea bajos. Debido a que existen varias hormonas hiperglicemiantes,
enfermedades que no se tratan y que estn asociadas con la insulina generalmente
conducen a hiperglicemia severa y una disminucin de la expectativa de vida.
2

Adems de su papel en la regulacin del metabolismo de la glucosa, la insulina
estimula la lipognesis, disminuye la liplisis, e incrementa el transporte de
aminocidos a la clula. La insulina tambin modula la trascripcin, alterando el
contenido celular de numerosos mRNA. La insulina estimula el crecimiento, la
sntesis de DNA, y la replicacin celular, efectos que son comunes a los de los
factores de crecimiento similares a la insulina (IGFa) y a la relaxina. La insulina se
sintetiza como una preprohormona en las clulas- de los islotes de Langerhans en el
pncreas. La secuencia lder de la preprohormona es eliminada en la cisterna del
retculo endoplasmtico y la hormona es empaquetada en vesculas secretorias en el
Golgi, es plegada en su estructura nativa, y fijada en su conformacin por la
formacin de 2 uniones disulfuro. Una actividad de proteasa especfica rompe la
molcula, que se disocia como pptido C, dejando el pptido amino terminal B unido
por un puente disulfuro al pptido carboxiterminal A.
3

La secrecin de insulina por las clulas- es regulada principalmente por los
niveles de glucosa. Un incremento en el ingreso de glucosa a las clulas- del
pncreas conduce a un concomitante incremento en el metabolismo. El incremento en
el metabolismo lleva a una elevacin del radio ATP/ADP. Esto a su vez lleva a la
inhibicin de un canal de potasio sensible al ATP (canal K-ATP). El resultado neto es
la despolarizacin de la clula llevando a un influjo de Ca
2+
y a la secrecin de
insulina.
3
El canal KATP es un complejo de 8 polipptidos que comprenden cuatro copias
de la protena codificada por el gen ABCC8 (cassette de unin ATP, subfamilia C,
miembro 8) y cuatro copias de la protena codificada por el gen KCNJ11 (canal de
potasio inwardly-rectifying, subfamilia J, miembro 11). La protena ABCC8
codificada tambin se conoce con el nombre de receptor de sulfonilurea (SUR). La
protena KCNJ11 codificada forma la parte central del canal KATP y se llama Kir6.2.
Como podra esperarse, el papel de los canales KATP en la secrecin de insulina
presenta un blanco teraputico viable para el tratamiento de la hiperglicemia debido a
la insuficiencia de insulina como es tpico de la diabetes tipo-2.
3

La insulina, secretada por las clulas- del pncreas, entra directamente al
hgado por va de la vena porta, en donde ejerce efectos metablicos profundos. Estos
efectos son la respuesta de la activacin del receptor de la insulina que pertenece a la
clase de receptores de la superficie celular que tienen una actividad de tirosina cinasa
intrnseca El receptor de la insulina es un heterotetrmero de 2 sub-unidades
extracelulares unidas por puentes bisulfuro a 2 sub-unidades transmembrana . Con
relacin a la homeostasis de glucosa heptica, los efectos de la activacin del receptor
son eventos especficos de fosforilacin que llevan a un incremento en el
almacenamiento de glucosa con una disminucin concomitante en la secrecin de
glucosa por el hgado a la circulacin como se esquematiza luego (solamente se
representan aquellas respuestas en el nivel de fosforilacin de la sintasa de glicgeno
y de la glicgeno fosforilasa).
3

En la mayora de tejidos no hepticos, la insulina aumenta el ingreso de glucosa
incrementando el nmero de transportadores de glucosa en la membrana celular:
GLUTs. Los transportadores de glucosa estn en un estado continuo de movimiento.
Un incremento en el contenido de GLUTs en la membrana celular se obtiene por un
aumento en el reclutamiento de los transportadores a la membrana de la clula, que se
obtienen de una reserva especial de transportadores preformados que se localizan en
el citoplasma. GLUT1 est presente en la mayora de tejidos, GLUT2 se encuentra en
las clulas- del pncreas, hgado, intestino, y rin, GLUT3 se encuentra en las
neuronas, GLUT4 se encuentra en el corazn, tejido adiposo y msculo esqueltico y
GLUT5 se encuentra en el cerebro y los testculos.
4

En el hgado el ingreso de glucosa se incrementa dramticamente debido a la
actividad incrementada de las enzimas glucocinasa, fosfofructocinasa-1 (PFK-1), y
piruvato cinasa (PK), las enzimas claves reguladoras de la gluclisis. Los efectos
ltimos son inducidos por la activacin dependiente de la insulina de la
fosfodiesterasa, con disminucin de la actividad de a PKA y disminucin de
fosforilacin de la piruvato cinasa y fosfofructocinasa-2, PFK-2. La defosforilacin
de la piruvato cinasa incrementa su actividad mientras que la defosforilacin de la
PFK-2 le hace mas activa como cinasa. La actividad de cinasa de la PFK-2 convierte
la fructosa-6-fosfato en fructosa-2,6-bifosfato (F2,6BP). La F2,6BP es un activador
alostrico potente de la enzima limitante de la gluclisis la PFK-1, y es un inhibidor
de la enzima gluconeognica, fructosa-1,6-bifosfatasa. Adems, fosfatasas especificas
para las formas fosforiladas de las enzimas glucolticas aumentan su actividad bajo la
influencia de la insulina. Todos estos eventos llevan a la conversin de las enzimas
glucolticas a sus formas activas y consecuentemente a un incremento significativo de
la gluclisis. Adems, la actividad de la glucosa-6-fosfatasa se disminuye. El efecto
neto es un aumento en el contenido de glucosa en el hepatocito y de sus derivados
fosforilados, con la disminucin de la glucosa sangunea.Adems de los eventos
descritos anteriormente, la disminucin del cAMP y el aumento de la actividad de la
protena fosfatasa se combinan para convertir a la glicgeno fosforilasa en su forma
Vas involucradas en la
regulacin del glicgeno
fosforilasa por activacin de la
epinefrina de los receptores -
adrenrgicos. Vea el
metabolismo del glicgeno
para los detalles de la accin de
la epinefrina. PLC- es
fosfolipasa C-. El sustrato
para la PLC- es el
fosfatidilinositol-4,5-bifosfato,
(PIP2) y los productos son
inositol trifosfato, IP3 y
diacilglicerol, DAG.
Igualmente fosforilaciones
mediadas por la calmodulina
llevan a la inhibicin del
glicgeno sintasa.
inactiva y a la glicgeno sintasa a su forma activa, con el resultante de que no
solamente la glucosa es dirigida a productos glucolticos, sino tambin a que el
contenido del glicgeno se incremente. Por el contrario, la epinefrina disminuye la
secrecin de insulina por una va de regulacin acoplada al cAMP. Adems, la
epinefrina contrarresta el efecto de la insulina en el hgado y tejidos perifricos, en
donde se une a receptores -adrenrgicos, induce la actividad de la adenilciclasa,
incrementa el cAMP, y activa a la PKA de forma similar al glucagn. Los ltimos
eventos inducen la glucogenolisis y gluconeognesis las cuales son hiperglicemiantes
y que por tanto contrarrestan el efecto de la insulina en los niveles de la glucosa
sangunea. Adems, la epinefrina influye en la homeostasis de la glucosa a travs de
su interaccin con receptores -adrenrgicos.
5









.



II.-REACTIVOS A UTILIZAR
- Conejos adultos de ms de 2 kg. de peso corporal sometidos a ayuno de 8
horas.
- Solucin de insulina cristalizada (Lilly): I Unidad por ml.
- Jeringas hipodrmicas de 2,5 cc. 5,0 cc.
- Glucmetro.

III.- PROCEDIMIENTO
EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LA GLICEMIA
Determinar con exactitud el peso de los conejos sometidos a ayuno con la finalidad
de calcular la cantidad de insulina a inyectar.












Dosis de la solucin de insulina cristalina (I Unidad por ml) inyectar I Unidad por
Kilogramo de peso corporal.
Peso= 2,200 kg
Color=Gris
Utilizar una jeringa hipodrmica de 2,5 ml. 5,0 ml. Que facilita la medida
de la dosis.
EXTRACCION DE LAS MUESTRAS DE SANGRE Y ADMINITRACION
DE INSULINA.
Extraer una primera muestra de sangre del pabelln auricular del conejo. La
que servir para establecer los valores basales de glicemia.








Inyectar por va subcutnea la cantidad calculada de insulina.










Luego extraer muestras de sangre a los 15, 30 y 60 minutos despus de
inyectada la insulina, lo que hace un total de tres muestras en una hora.








Con cada una de la citadas muestras realizar la determinacin de glucosa
segn el mtodo de glucocinta.













Despus de esto llevar los cuatro tubos de ensayo (La 1 muestra basal y las 3
restantes de acuerdo a los tiempos luego de aplicada la insulina) a una balanza
para equilibrar sus pesos agregando agua a los casquetes si fuera necesario.















Posteriormente llevar cada tubo de ensayo a la centrifugadora por un tiempo
de 10 minutos aproximadamente con el objetivo de separar el plasma
sanguneo del suero sanguneo.











Una vez separados estos dos componentes, extraer el suero de cada tubo de
ensayo utilizando una pipeta autoclavable y colocar las muestras en nuevos
tubos de ensayo.
















Luego se procede a agregar 1ml de reactivo glicemia enzimtico a las cuatro
muestras de suero.

























Seguidamente se lleva a los tubos de ensayo a los Baos Mara y se
mantienen ah por 10 minutos.



Anotar los resultados en relacin al tiempo.
- Hacer una grfica de glicemia vs tiempo

IV.-RESULTADOS













Basal(B) 15 30 60
D 1,054 0,393 0,340 0,099
D-B 1,029 0,368 0,315 0,074
Glucosa(g/l) 307,671 110,032 94,185 22,126






307,671
110.032
94.185
22,126
Basal
15
30
60
Glicemia
Tiempo

GRAFICO: GLICEMIA Vs TIEMPO































V.- CUESTIONARIO:

1) Explique usted brevemente la regulacin de la glicemia, como resultado, en
trminos generales, de la tasa de llegada e ndice de salida de la glucosa de la
sangre.

La insulina es una hormona que promueve la entrada de glucosa al musculo y al hgado,
adems de promover la glucognesis en el hgado y la glucolisis. Esto se debe a que la
insulina obliga a las clulas a usar la glucosa y a almacenarla en molculas ms
complejas como el glucgeno. La insulina disminuye los niveles de glucosa en la
sangre.


2) Explique de manera suscinta el efecto de la insulina sobre la glicemia: con
especial referencia al metabolismo de los carbohidratos.

Debido a que la insulina disminuye el nivel de glucosa, podemos encontrar la relacin
entre diferentes procesos metablicos y la insulina:

La Glucolisis consiste en la degradacin de glucosa para obtener energa, por
tanto, la insulina estimula la glucolisis en el musculo.
La glucognesis consiste en la formacin de glucgeno a partir de glucosa. La
insulina aumenta la glucognesis debido a que esta hormona busca almacenar la
glucosa como fuente de reserva.
La gluconeognesis consiste en la formacin de glucosa a partir de compuestos
no glcidos. Al ya haber glucosa, la insulina no activa la gluconeognesis en
el hgado.
La glucogenlisis es el proceso de degradacin del glucgeno para obtener
glucosa. Por tanto, la insulina disminuye la glucogenlisis en el hgado ya
que busca el almacenamiento de la glucosa.

En conclusin, la insulina disminuye el nivel de azucares y su funcin en el hgado
depende de cuanta cantidad de glucosa hay en el organismo.



















3) Cul es el efecto metablico de la insulina sobre el hgado y sobre los msculos
y qu efectos produce sobre la glicemia?

Efecto metablico de la insulina en el hgado

La insulina disminuye la produccin de glucosa en el hgado porque disminuye la
gluconeognesis y la degradacin del glucgeno.
Favorece la actividad de la glucgeno-sintetasa, estimulando la sntesis de glucgeno a
partir de la glucosa.
Inhibe la conversin de cidos grasos y aminocidos en cetocidos y la de aminocidos
en glucosa (gluconeognesis).
A la larga, provoca la actividad de las enzimas piruvato-cinasa, fosfofructo-cinasa y
glucocinasa, que son glucolticas, mientras que inhibe las enzimas gluconeognicas:
piruvato-carboxilasa, fosfoenolpirvico-carboxicinasa,
fructosa-disfosfatasa y glucosa-6-fosfatasa. Su accin en el hgado es, pues,
fundamentalmente opuesta a la que produce el AMPc; pero la insulina no modifica los
niveles basales de AMPc, sino que suprime el aumento de AMPc producido por otras
hormonas (glucagn y adrenalina) y, como se ha indicado anteriormente, reduce la
sensibilidad de la proten-cinasa AMPc-dependiente a
la estimulacin por AMPc.
Un nivel elevado de insulina permite el reclutamiento de GLUT-2 , que son permeables
en el hgado.






























Efecto metabolico de la insulina en el musculo

La insulina aumenta la sntesis del glucgeno, al buscar sustancias de reserva para la
futura degradacin. Los niveles circulantes de insulina aumentados, producen un
aumento en la entrada de glucosa, mediante el reclutamiento de transportadores de
glucosa sensibles a la insulina (GLUT-4).
La modificacin que produce la Insulina sobre las enzimas en el musculo esqueltico es
mediante la desforforilacin, y en cada una de ellas va a depender si su estado
fosforilado o desfosforilado es activo o inactivo. Pero el efecto final es el siguiente:




















VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1.- Michael W King PhD .19962013. Introduccin a las Actividades de Insulina.
http://themedicalbiochemistrypage.org/es/insulin-sp.php (Consultado 13 de septiembre
2014)

2.- Acciones de la Insulina.
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S012000112005000400005
(Consultado 13 de septiembre 2014)

3.- Secrecin de la Insulina.
http://bases.bireme.br/cgibin/wxislind.exe/iah/online/?IsisScript=iah/iah.xis&src=googl
e&base=LILACS&lang=p&nextAction=lnk&exprSearch=424658&indexSearch=ID
(Consultado 13 de septiembre 2014)

4.- J. Cabezas Cerrato.2003. Endocrinologa y Nutricin: Resistencia a la accin de
la insulina. Volume 50, Issue 10, 2003, Pages 396406
5.- Michael W King PhD .19962013. La Insulina de Accin y Funciones
http://themedicalbiochemistrypage.org/es/insulin-sp.php(Consultado 13 de septiembre
2014)