FUNDAMENTO

Preparacin y esterilizacin de materiales y medios de cultivo.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es
enorme, la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de
los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso
rehidratar.
La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de
medio y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento)
siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se
esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los componentes previamente
esterilizados en el autoclave.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:
1. Agar: Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene de
ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.
2. Azcares: Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms
empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
3. Extractos: Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o vegetales
obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.
4. Peptonas: Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o
Enzimtica de protenas animales o vegetales.
5. Fluidos corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
microorganismos patgenos.
6. Sistemas amortiguadores: Son sales que se aaden al medio para mantener
el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej. fosfatos bisdicos o
bipotsicos.
7. Indicadores de pH: Son indicadores cido-base que se aaden para detectar
cambios de pH en el medio.
8. Agentes reductores: Sustancias que se aaden al medio para crear las
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o
anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato.
9. Agentes selectivos: Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares etc.
que a determinadas concentraciones en el medio actan como agentes selectivos
frente a determinados microorganismos.
Tipos de medios de cultivo.
Por su consistencia:
a) Slidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus
componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en
slant (tubos con la superficie del medio inclinada).
b) Lquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers.
Por su composicin:
a) Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de
microorganismos.
b) Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado
grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.
c) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.
d) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna
propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee.
Siembra de microorganismos
En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el
cual se lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) de un
cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento.
PARA UNA CORRECTA REALIZACIN DE LA SIEMBRA SON NECESARIAS
CIERTAS CONDICIONES:
1) Que se lleve a cabo con instrumentos estriles sobre medios de cultivo
estriles.
Para estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos
microorganismos que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de
trabajo. Esto se consigue con la esterilizacin, proceso que consiste en conseguir
que todos los microorganismos presentes mueran desde el punto de vista
microbiolgico.
La esterilizacin
Se utilizan dos tipos principales de esterilizacin:
Por MTODOS FSICOS (calor, filtracin, radiaciones).
Por MTODOS QUMICOS (empleo de soluciones qumicas).
Los medios de cultivo se esterilizan en el AUTOCLAVE, el cual hace uso del calor
hmedo. El autoclave es un aparato que permite elevar la presin y la temperatura
con lo que se consigue un aumento en la temperatura de ebullicin del agua.
Todo el material de vidrio (pipetas, tubos, varillas.etc..) se esteriliza con calor seco,
siendo el "horno Pasteur" el aparato ms empleado (se somete a temperaturas de
140-180 C durante 2h-3h).
En el caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el
momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al rojo,
teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
2) Que el inculo no se contamine, modifique o destruya:
Normalmente se emplea el calor directo, flameando las bocas de los tubos de
ensayo, matraces, pipeta, etc. antes y despus de su utilizacin, a pesar de estar
esterilizados previamente.
3) Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo ms
prximas a la esterilidad para evitar contaminaciones durante el manejo del
instrumental y de los medios de cultivo.
Esto se resuelve con el uso de cabinas estriles (con flujo de aire y luz
ultravioleta). Cuando no se dispone de ellas, se utiliza un mechero Bunsen que,
debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba, es
capaz de crear un ambiente semiestril en la zona inmediata alrededor y debajo
de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen
considerablemente.
Cultivo de exudado farngeo
El exudado farngeo o frotis farngeo es una prueba de laboratorio que se realiza
para aislar e identificar microorganismos que puedan causar una infeccin en la
garganta.
Se realiza utilizando un hisopo especial que se introduce por la boca y permite
tomar una muestra de secreciones tomadas de la pared posterior de la garganta,
mismas que se colocan en un plato especial (cultivo) que permite el crecimiento de
las bacterias.
Este examen se realiza para determinar las causas de alguna infeccin de nariz y
garganta que no responde adecuadamente al tratamiento. Con frecuencia, este
tipo de afecciones se deben a un virus, pero el cultivo permite determinar cundo
se debe a una bacteria (principalmente estreptococo).
Cabe sealar que un cultivo de este tipo tambin puede hacerse con prueba de
antibiograma, la cual le ayuda al mdico a determinar qu antibiticos funcionarn
mejor en el tratamiento, su realizacin es sencilla, indolora y lleva poco tiempo. Se
le solicita al paciente que incline la cabeza hacia atrs con la boca abierta,
mientras el tcnico de laboratorio o mdico frota con un hisopo o aplicador de
algodn estril a lo largo de la parte posterior de la garganta, cerca de las
amgdalas. Si el profesional no puede ver con claridad la parte posterior de la
garganta, presionar la lengua con un abatelenguas para ver mejor, es posible
que el mdico deba raspar la parte posterior de la garganta varias veces sobre las
zonas inflamadas o enrojecidas, lo cual mejora las probabilidades de detectar
bacterias.
Cuando la muestra llega al laboratorio, los microorganismos se colocan en una
caja de vidrio donde se encuentra un medio de cultivo que permite su
reproduccin. El tipo de bacteria se determina con ayuda del microscopio, adems
de observar la forma en que se desarrolla y el medio en que crece, en caso de
realizarse la prueba de antibiograma, los grmenes se someten a distintos
antibiticos para establecer a cules son sensibles o resistentes.
Es necesario que el paciente no se lave la boca ni utilice enjuague bucal antes del
examen, el exudado farngeo no representa ningn riesgo, aunque es importante
sealar que el paciente debe contener la sensacin de nusea y molestias al
momento del examen. Si el impulso de vomitar o toser no es fcil de soportar, es
probable que se deba aplicar anestesia tpica para evitar este acto reflejo.