Proyecto para El Congreso

EVALUACION DEL EFECTO GENOTOXICO EN TOMATES TRATADOS CON
PLAGUICIDAS EMPLEANDO LA TCNICA SMART EN D. melanogaster

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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMN
FACULTAD: CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS
CARRERA: BIOQUIMICA Y FARMACIA

EVALUACION DEL EFECTO GENOTOXICO EN
TOMATES TRATADOS CON PLAGUICIDAS
EMPLEANDO LA TCNICA SMART EN D.
melanogaster

Presentado por : LAMAS CLAROS JENNY A.
MUOZ CAMACHO JUAN MARCOS


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COCHABAMBA BOLIVIA 2014
1. INTRODUCCION
El consumo de tomate es importante para la salud humana puesto que posee
innumerables propiedades alimenticias, sin embargo, algunos de estos productos
son expuestos a contaminacin qumica, constituyndose un peligro para el
consumidor.
La introduccin en el mercado de un gran nmero de nuevos productos ha tenido
una doble consecuencia en nuestro entorno. Aunque muchos de estos productos
han contribuido a mejorar la calidad de vida, otros presentan determinados riesgos
de toxicidad, como son algunos plaguicidas considerados de alto riesgo entre los
cuales estn el Captopril y Thodoron.
La exposicin directa con estos agroqumicos podra ocasionar mutaciones en
clulas somticas, y con el fin de prevenir estas consecuencias resulta
imprescindible realizar ensayos de genotoxicidad.
Las investigaciones relacionadas con la genotoxicidad adquieren cada da mayor
importancia a nivel mundial, debido al creciente deterioro del ambiente al que se
encuentra expuesto el hombre.
Dentro este marco de referencia Bejarano (2002), seala que prevenir los daos
ambientales y la salud pblica es mejor que tratar de remediarlos, particularmente
en el caso de los plaguicidas cuyos efectos crnicos que por lo general tardan
aos en manifestarse y pueden afectar a futuras generaciones.
El test de Mutacin y Recombinacin Somtica (SMART) es uno de los ensayos
de gran utilidad en esta evaluacin, por su sensibilidad, rapidez y bajo costo
econmico en la investigacin de sustancias qumicas con propiedades
mutagnicas.


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1.2. JUSTIFICACION
Uno de los pilares de la economa cochabambina es el cultivo y comercializacin
de productos agrcolas, como el tomate. Sin embargo, en el cultivo de este
producto, a fin de combatir y eliminar las plagas, una gran parte de los agricultores
usan plaguicidas considerados riesgosos para la salud humana debido a que
poseen efectos tanto txicos atacando de manera directa a rganos vitales, as
como efectos genotxicos que actan sobre la estructura del ADN.
Existen estudios que avalan los efectos genotxicos de algunos insecticidas, por
ejemplo en 2012, Rodrigo G. realiz una investigacin evaluando la genotoxicidad
de plaguicidas en tomate en el municipio de rio Chico demostrando actividad
genotxica positiva para el metabolito activo Clorpirifos; y tambin el trabajo
realizado por Gonzales M. (2006) que demostr la actividad genotxica de
ciclofosfamida y mitomicina C.
Esta situacin de peligro para la salud de la poblacin, exige realizar una
evaluacin genotxica para determinar posibles alteraciones mutagnicas,
empleando la tcnica SMART en alas de Drosophila melanogaster, que es
correlacionado al ser humano ya que existe un 75% de similitud entre las
estructuras de los genes de las D. melanogaster y la estructura gentica humana.
1.3. PROBLEMA
1.3.1. Planteamiento del problema
La produccin de tomate en la localidad de Omereque es importante debido a los
beneficios alimenticios y econmicos que representan para el departamento de
Cochabamba. Gran cantidad del tomate que se consume en el departamento
proviene de este municipio.
Sin embargo, los agricultores usan una gran variedad de plaguicidas con
dosificaciones y una frecuencia de uso no controlado a fin de combatir y eliminar
las plagas, lo cual presenta un alto riesgo toxicolgico para la salud de la
poblacin.
El poco control por parte de las autoridades de salud y medio ambiente sobre la
aplicacin de insecticidas que son restringidos a estos cultivos y la
irresponsabilidad de los agricultores en el proceso productivo al no considerar
medidas de bioseguridad como usar ropa adecuada, manipulacin con guantes o

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uso de mascarillas representa un alto riesgo toxicolgico para la salud tanto de los
cosechadores como de los consumidores.
Los factores anteriormente mencionados nos llevan a realizar una evaluacin
toxicolgica y genotxica para determinar posibles alteraciones mutagnicas en
Drosophila melanogaster.
1.3.2. Formulacin del problema
Cules son los efectos genotxicos del tomate en la localidad de Omereque
sobre D. melanogaster?

1.4. HIPTESIS
Los tomates cultivados en la localidad de Omereque presentan una carga
genotxica que causa mutaciones positivas en los tricomas de alas de Drosophila
melanogaster.
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto genotxico de los frutos de tomates tratados con pesticidas,
provenientes del municipio de Omerque empleando la tcnica SMART en alas de
D. melanogaster
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
Identificar los plaguicidas utilizados en la produccin de frutos de tomate, en
la localidad de Omereque.
Determinar la toxicidad que presenta el extracto de tomate usando una
curva de supervivencia.
Evaluar el efecto genotxico a diferentes concentraciones de extracto de
tomate


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3. MARCO TEORICO
3.1 Cultivo de tomate en Omereque
Omereque es un municipio localizado en el departamento de Cochabamba,
bastante conocido por la produccin de tomate que abastece los mercados de
Cochabamba, Santa Cruz y Chuquisaca. Datos de la Alcalda de Omereque
informan que los productores logran comercializar aproximadamente 1.200.000
cajas de tomates.
3.2 Plaguicidas
Los plaguicidas o pesticidas son sustancias qumicas empleadas por el hombre
para controlar o combatir algunos seres vivos considerados como plagas ya que
ocasionan dao en la produccin y almacenamiento de artculos agrcolas.
La clasificacin toxicolgica de los plaguicidas en las categoras de baja
peligrosidad, nocivas, txicas o muy txicas. Dicha clasificacin se realiza
atendiendo bsicamente a su toxicidad aguda, expresada en DL50 (dosis letal al
50%) por va oral o drmica, o en CL 50 (concentracin letal al 50%) por va
respiratoria.
Estas sustancias qumicas txicas, utilizadas para eliminar las plagas agrcolas,
pueden causar efectos agudos (a corto plazo) y crnicos (a largo plazo)
irreversibles para la salud.
Los campesinos no usan recipientes especiales, guantes ni mascarillas para
manipular los qumicos. Algunos incluso prueban con la lengua el plaguicida para
ver si el agroqumico es fuerte, y cuando fumigan no usan traje de proteccin y
terminan empapados con el txico. Lo ms grave es que muchos los almacenan
debajo de sus camas, cuando stos deberan estar lejos de sus viviendas.
El 2004, la Universidad Mayor de San Simn de Cochabamba llev a cabo una
investigacin en la localidad agrcola de Parotani. El estudio revel que el 70% de
la poblacin presenta niveles bajos de acetilcolinesterasa, indicador de
intoxicacin aguda por plaguicida.
3.2 Genotoxicidad
Se la define como la accin de un agente o sustancia que interacta de forma
directa o indirecta con el ADN, modificndolo y afectando su integridad. El efecto

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genotxico del agente o sustancia genera un cambio errtico permanente
(mutacin) sobre el ADN y el genotipo afectando a la clula que esta en proceso
de divisin celular.
Existen varias pruebas para determinar la capacidad relativa de un agente de
ocasionar dao en el material gentico, entre las cuales tenemos el Ensayo
SMART, el test de Ames, la prueba de Microncleos y el Ensayo del cometa.
3.3 Drosophila melanogaster
La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, ofrece una serie de ventajas
como sistema de prueba de genotoxicidad in vivo.
Es un ser vivo eucariota, fcil de cultivar, su ciclo de generacin es corto, posee
una progenie numerosa y los ensayos somticos son baratos porque slo se
requiere el equipo de laboratorio bsico y es de bajo costo. Adems constituye un
sistema de prueba ya establecido y validado que utilizan clulas germinales, para
evaluar la toxicidad crnica en genes especialmente los que tienen que ver con los
genes recesivos ligados al sexo.
3.4 Ensayo SMART en D. melanogaster
Estas pruebas de mutacin y recombinacin somticas (SMART) son ensayos de
una sola generacin y utilizan marcadores recesivos que se expresan en la
superficie de los ojos o de las alas de las moscas adultas. Se basan en la
deteccin y cuantificacin de eventos mutacionales y de recombinacin en clulas
somticas de un organismo eucariota.
La induccin de la prdida de heterocigosis de marcadores en las clulas de los
discos de los imagos de las larvas mediante el tratamiento con compuestos
genotxicos, conduce a la formacin de un clon de clulas mutantes que despus
de la metamorfosis se expresan como manchas en los ojos o en las alas.
Adems de la cruza estndar en la prueba SMART del ala, es posible realizar una
cruza de bioactivacin elevada (BE). Las larvas de sta ltima se caracterizan por
un elevado nivel constitutivo de citocromos P450, lo que facilita la deteccin de
promutgenos y procancergenos (Graf y VanSchaik 1992). Guzmn-Rincn
y Graf(1995) y Graf et al. (1996)


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4. MARCO METODOLOGICO
4.1. SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL
Se obtuvo tomate procedente del municipio de Omereque, comprndose ste
tomate en el mercado Calatayud y se procedi a realizar un cuarteo al azar en el
laboratorio del PROFAC. El tomate seleccionado se lav con agua destilada para
proceder a la preparacin del extracto.
4.2. PREPARACION DE EXTRACTOS
Se prepararon extractos acuosos en una relacin 1:1 (p/v), empleando 100 gr de
tomate sin pelar, que fue triturado, posteriormente se coloc el tomate triturado en
una licuadora con 100 ml de agua destilada para obtener extractos de consistencia
pastosa.
El extracto obtenido se constituy como la solucin madre que fue almacenado en
frascos ambarado para ser refrigerado a una temperatura de 4
0
C.
A partir de la solucin madre se realizaron diluciones para obtener diferentes
concentraciones a evaluar, como se detalla en la Tabla N 1.
Tabla N 1 Concentraciones del extracto a evaluar
EXTRACTOS DILUCION
Sol. Madre/agua
CONCENTRACION

Tomate
1/0 100%
1/1 50%
1/2 25%
1/4 12,5%

4.3. ENSAYO SMART EN ALAS DE Drosophila melanogaster
Los extractos de tomate a diferentes concentraciones, fueron evaluados mediante
es test de Mutacin y Recombinacin Somtica (SMART) en alas de Drosophila
melanogaster para determinar su genotoxicidad. Se trabaj con cepas de
Drosophila melanogaster correspondientes a las cepas: Mwh, Fler
3
y Orrfler
3
.

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Como control positivo se usaron los insecticidas Lorsban Plus; y como control
negativo agua destilada. Ya se tenan los datos de estos controles procedentes de
trabajos anteriormente realizados.
4.3.1. Procedimiento del Test SMART

5.

6.
7.

Separacin
Cepas
Fler
3
Mwh
Orrfler
3

SEXADO SEXADO
SEXADO
160
hembras
Descarte de
machos
60
macho
s
Descarte de
hembras
Descarte
de machos
160
hembras
CRUCE
ESTANDAR CRUCE ALTA
BIOACTIVACION (HB)
Larvas 1
er
Instar
Larvas
Larvas Larvas 1
er
Instar

Larvas 2
do
Instar
TRATAMIENTO LARVAS
DE 3
er
INSTAR CON
EXTRACTOS
TRATAMIENTO LARVAS
DE 3
er
INSTAR CON
EXTRACTOS
Larvas 2
do
Instar
DETERMINACION DE LA
TOXICIDAD DE EXTRACTOS
DETERMINACION DE LA
TOXICIDAD DE EXTRACTOS
MONTAJE DE ALAS
EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD
DE LOS EXTRACTOS
LECTURA DE ALAS
MONTAJE DE ALAS
EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD
DE LOS EXTRACTOS
Txico Sub txico
Txico Sub txico
LECTURA DE ALAS
ANALISIS
DE DATOS

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4.4.1. Cultivo de cepas de D. melanogaster
Se obtuvieron diferentes cepas de D. melanogaster, identificndose tres tipos:
fler3, Orrfler y Mwh. Estas cepas se cultivaron por separado en frascos de vidrio
donde se prepar un medio de mantenimiento que sirven como alimentos para las
moscas. Generalmente estos medios de mantenimiento duran aproximadamente
unos 15 das y pasado este tiempo se volvi a preparar el medio. En dicho medio
de mantenimiento, las moscas cruzan y las hembras depositan sus huevos que en
pocos das llegan a emerger tenindose un gran nmero de moscas en poco
tiempo.
4.4.2. Sexado: Separacin de moscas machos y hembras
Una vez preparado el extracto, se procedi al sexado de las moscas de las
diferentes cepas empleando un estereoscopio en el que se observaron las
caractersticas anatmicas y diferencias morfolgicas de machos y hembras. Se
sacrificaron a todas las moscas adultas quedando en los frascos solo huevos. Se
dej un tiempo esperando a que los huevos eclosionen, al trmino de 5 horas esto
sucedi y obtuvimos moscas adultas que an son vrgenes ya que an no han
llegado a su tiempo de cruzamiento.
Posteriormente en un frasco de vidrio se trasvaso cierta cantidad de moscas y se
tap con un tapn empaado con ter hasta que quedaron dormidas y con la
ayuda de un estereoscopio se van seleccionando moscas machos y hembras de
cada cepa.
Cepa Machos Hembras
Fler
3
Descarte 160
Orrfler
3
Descarte 160
Mwh 60 Descarte

Las moscas seleccionadas se colocaron por 24 horas en frascos de vidrio con un
pequeo trozo de pltano (lugar y tiempo en el que las hembras depositan
huevos).

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Posteriormente se prepar el medio de ovoposicin que reemplaza el trozo de
pltano, este es un medio nutritivo para los huevos de las moscas.
4.4.3. Cruzamiento
Los cruzamientos se realizaron en los frascos de preparacin con el medio de
ovoposicin. Los cruces son de tipo Estndar y de Alta Bioactivacin:
Cruce Estndar (ST): 80 hembras vrgenes de la cepa fler
3
se cruzan con
40 machos de la cepa mwh.
Alta Bioactivacin (HB): 80 HEMBRAS orrfler
3
se cruzan con 40 machos
mwh.
El cruce se realiza para obtener larvas de 3er instar

4.4.4. Tratamiento de larvas de tercer instar de D. melanogastercon
extractos
Al cabo de 5 das del cruzamiento, se pes en una balanza 1.5 g de Drosophila
Instant Medium (Carolina Biological Suppy, Brulington) en frascos de vidrio y se
aadieron 5 ml de cada concentracin que se est evaluando.
Seguidamente se cont 50 larvas de tercer instar procedentes de los cruces
realizados, Estndar y Alta Bioactivacion y se colocaron en los frascos
anteriormente descritos, dejndolas por 48 horas con los extractos. Las larvas de
tercer instar se alimentaron con el preparado entre el medio Carolina Biological y
el extracto que se estudi.
4.4.5. Prueba de toxicidad en las D. melanogaster del extracto de tomate
Para determinar la toxicidad de los extractos evaluados se realiz un recuento de
las moscas adultas sobrevivientes procedentes de las larvas de 3er instar que
fueron expuestas a las diferentes diluciones del extracto de tomate.
4.4.6. Prueba de toxicidad subletal empleando la tcnica SMART
a. Montaje de alas, se debe sacrificar a las moscas procedentes de los
cruces que aun queden vivas y luego empleando el estereoscopio y pinzas
muy finas, se retiran cuidadosamente las dos alas de las moscas y se

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procede a montarlas en un portaobjetos. En un portaobjetos pueden caber
las dos alas de unas 10 moscas. Cada portaobjetos se debe identificar.
b. Lectura de alas, empleando el objetivo 40x del microscopio se procede a
revisar los pelos presentes en la superficie de las alas de D. melanogaster.
Siendo muy cuidadoso/a se buscan mutaciones en los pelos, a dichas
mutaciones se les denominan manchas que pueden ser simples o dobles.
Para la observacin de los pelos en las alas se tomaron en cuenta las
diferentes reas en que se subdivide el ala de la mosca. Se pueden
identificar manchas resultantes de dos marcadores genticos:
Marcador gentico mwh, se observa el crecimiento de tres o ms pelos en
lugar de uno
Marcador gentico Flr
3
, el pelo tiene la caracterstica de presentar una
base ensanchada respecto a la base delgada que presenta un pelo normal.
Tambin se pueden clasificar las manchas que se observan, esta
clasificacin se realiza de acuerdo al tipo y tamao de mancha
Manchas simples pequeas, cuando se presentan manchas con la
expresin del fenotipo mwh y Flr
3
y el nmero de clulas afectadas es de 1
o 2.
Manchas simples grandes, cuando el nmero de clulas afectadas es
mayor a 2.
Mancha gemela, son aquellas manchas que expresan ambos marcadores,
es decir mwh y Flr
3
ubicados de forma adyacente.

4.4.7. Anlisis de datos
Una vez realizado el recuento de las mutaciones en las alas, se llenan datos en un
programa computarizado. Se us el Test Binomial Condicional de Kastenbaum
Bowman. Se obtuvieron resultados que indican si las diluciones de los extractos
son genotxicos; estos resultados se determinan de acuerdo a la frecuencia en el
que aparecen las manchas.
Resultado positivo: la frecuencia de manchas totales de los tratamientos es dos
veces mayor (m=2) a la frecuencia encontrada en el control negativo.

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Resultado negativo: la frecuencia de manchas totales es menor que la frecuencia
encontrada en el control negativo.
Resultado inconcluso: la frecuencia de manchas totales no es dos veces mayor
a la frecuencia hallada en el control negativo.
5. RESULTADOS
5.1 Sobrevivencia de larvas de 3er. Instar a diferentes concentraciones
% DE SOBREVIVENCIA

Cruce
Concentraciones Evaluadas
12,5 25 50 100
ST 89 96 90 88
HB 94 91 97 95

Todos estos resultados de sobrevivencia que son mayores al 70% revelan que las
concentraciones que fueron utilizadas del extracto de tomate son no txicas.
5.2 Porcentaje de sobrevivencia de larvas de 3er. Instar en Controles K (-) y K
(+)
Estos resultados que se presentan proceden de trabajos anteriores, los cuales
indican que el porcentaje de sobrevivencia de las moscas en el control negativo
(agua destilada) son del 83% para el cruce ST y 95% para el cruce HB.
Controles

Concentraciones
Evaluadas
% DE SOBREVIVENCIA
Cruce ST Cruce HB
Agua destilada
K (-)

83%

95%

Lorsban Plus
100% 0 0
50% 0 0

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K (+)

25% 0 0
12.5% 0 0
Se evidencia que en el caso del control positivo K (+), las diferentes
concentraciones presentan un porcentaje de sobrevivencia del 0% para ambos
cruces.
Comparacin de porcentaje de sobrevivencia entre K (-) y las
concentraciones del extracto (%)

Cruce

K (-)
Concentracin %
12,5 25 50 100
ST 83 89 96 90 88
HB 95 94 91 97 95

Se observa que tanto en el Control Negativo K () como en las diferentes
concentraciones del extracto, existe una sobrevivencia de las D. melanogaster
mayor al 70% por lo que ninguna posee un efecto txico directo

5.3. EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD
Los resultados fueron obtenidos mediante la aplicacin del test binomial propuesto
por Kastembaun e Bowman, tanto para los cruces ST y HB donde se observaron
Manchas Simples Pequeas (MSP), Manchas Simples Grandes (MSG), Manchas
Gemelas (MG) y Manchas Totales (MT).
80
85
90
95
100
K - 12,5 25 50 100
ST
HB

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Se hace una relacin entre el nmero de manchas totales (MT) que es la suma de
manchas simples (MSP y MSG) y manchas gemelas MG. Esta sumatoria se divide
entre el nmero de pares de alas que se observan en microscopio.
Nmero de Manchas
Nmero de Moscas
Se obtuvo un valor numrico que se compara con el valor obtenido en el Control
Negativo K (-); de esta manera se logr obtener la frecuencia de mutaciones
genticas que aparecen en las alas de las moscas que han sido expuestas al
extracto respecto a la frecuencia de mutaciones genticas en las alas de las
moscas que han sido expuestas a agua destilada. Entonces se determin si existe
un resultado positivo o un resultado negativo de las diferentes diluciones del
extracto de tomate.

5.3.1. Cruce ST
5.3.1.1. MSP
Las MSP, son las que presentan una o dos clulas con el marcador
Genotpico mwh o Flr
3
. El valor de la frecuencia del control negativo es de 0,30
MSP/Mosca, para considerar que las concentraciones que se utilizaron en la
prueba presentan accin genotxica positiva, la frecuencia de MSP/Mosca tendr
que ser dos veces mayor a la frecuencia de MSP/Moscas del control Negativo
(m=2).
De las cuatro concentraciones aplicadas, la concentracin del 12,5% presenta una
frecuencia de 0,55 MSP/Mosca, demostrando ser inconclusiva, debido a que el
nmero de manchas encontradas no son suficientes para poder establecer si el
extracto acuoso de tomate presenta o no genotoxicidad a esta concentracin.
A diferencia de los otros tres tratamientos al 25%, 50% y 100% que llegan a
formar un grupo


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6. CONCLUSIONES
En el municipio de Omereque, los plaguicidas ms utilizados son el Lorsban Plus
(cuyos principios activos son Clorpirofo y Cipermetrina) y el Caporal para el cultivo
de tomate.
El insecticida Lorsban Plus a una concentracin igual o mayor al 12,5% presenta
accin txica letal que se demuestra mediante la curva de supervivencia. Las
diferentes concentraciones del extracto de tomate presentan una supervivencia
mayor al 70% por lo que no se consideran txicas.
Los extractos acuosos de tomates procedentes de Omereque y en
concentraciones de 100, 50 y 25% presentan genotoxicidad que se evidencia por
la aparicin de manchas totales en una frecuencia 2 veces mayor a la frecuencia
de manchas en las alas de D. melanogaster tratadas con agua destilada.
Los efectos genotxicos causados por el Lorsban Plus contenido en los tomates
cultivados en el municipio de Omereque se demuestran por la mutacin de los
pelos en las alas de D. melanogaster que se evidencia por la aparicin de
manchas, sobre todo manchas simples pequeas.

7. BIBLIOGRAFIA
Martnez, C, y. Mendieta K. EVALUACION GENOTOXICA EN LECHUGAS
PRODUCIDAS EN EL VALLE CENTRAL DE VINTO MEDIANTE EL TEST DE
MUTACION Y RECOMBINACION SOMATICA (SMART), Tesis de grado para
optar el ttulo acadmico de licenciatura en Bioqumica y Farmacia, Cochabamba
2014
Ramrez, J. y Lacasaa, M. PLAGUICIDAS: CLASIFICACIN, USO,
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RIESGOS LABORALES, Universidad Pompeu Fabra. Barcelona, Espaa 2001
OIT. GUA SOBRE SEGURIDAD Y SALUD EN EL USO DE PRODUCTOS
AGROQUMICOS Ginebra, Oficina Internacional del Trabajo, 1993
Contreras, Bravo; Zuhey, Lilia y vila, Meja EXPRESIN DE GFP EN DISCOS
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Mexicano de Morelos, Mxico, 2010

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Vasquez C., Lpez X., ESTUDIOS GENOTXICOS, Disponible en:
http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol28/n2/revis2a.htm
FUNDESNAP-SENASAG., MEDIDAS PARA EL CONTROL DE REAS
PROTEGIDAS, LOS INSECTICIDAS Y SUS ALCANCES Disponible en:
http://www.uv./cienciahombre/revistae/vol19num1/articulos/fundesnap/index.htm

RESUMEN

Bolivia es un pas agrcola y debido a que esta actividad es muy importante
econmicamente, se hace primordial el cuidado y control de los cultivos. Por esta
situacin, los agricultores utilizan los plaguicidas sin un control adecuado.
En el presente trabajo se hizo una evaluacin del efecto genotxico que pueden
causar los plaguicidas que se utilizan en la produccin de tomate en la localidad
de Omereque, lugar de donde se obtuvieron las muestras. Con estas muestras de
tomate se obtuvo un extracto acuoso de consistencia pastosa.
La evaluacin se realiz mediante la prueba in vivo de Mutacin y Recombinacin
Somtica (SMART), que emplea a Drosophila melanogaster como organismo
experimental ya que ste organismo posee una sensibilidad mutagnica elevada
para determinar la actividad recombinognica y mutagnica. Se llev a cabo dos
tipos de cruces con las cepas de moscas: Estndar (ST), en el cual hembras
vrgenes de la cepa Flr3 fueron cruzadas con machos de la cepa Mwh, cruce que
detecta mutgenos de accin directa; y el cruce de Alta Bioactivacin (HB), donde
se cruzaron hembras vrgenes de la cepa Orrflr3 con machos de la cepa Mwh,
cruce que posee la capacidad de detectar mutgenos de accin indirecta. Las
larvas de tercer instar procedentes de ambos cruces fueron expuestas al extracto
de tomate y a sus diferentes concentraciones de 100%, 50%, 25%, 12.5% durante
48 horas. Se us agua destilada como control negativo y como control positivo
Lorsban Plus.
Posteriormente se analizaron en microscopio las mutaciones producidas en las
clulas somticas que dan origen a las alas, mutaciones que son causadas al
someter las moscas de D. melanogaster a tratamiento con las diferentes
concentraciones del extracto de tomate.

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