TOMA DE MUESTRA Y SU MANEJO PARA BIOQUIMICA SANGUINEA

El problema de tomar la muestra, es que se necesita de una buena muestra para que el laboratorio teniendo
las medidas adecuadas pueda hacer el anlisis, acerca de los perfiles que se soliciten o lo que se est
sugiriendo para el diagnstico clnico del paciente. Hay consideraciones antes para hacer la toma de sangre:
Fase preanaltica: todos los procesos involucrados desde que al paciente se le obtiene la muestra
hasta que llega al laboratorio
Fase analtica: revisin proporcionada por el laboratorio
Fase Postanaltica: interpretacin del mdico veterinario.
Se tiene que ver la disposicin econmica del dueo para hacer los anlisis que se necesitan para el
diagnstico.
Extraccin: se toma consideraciones para decir si tengo un paciente apto para estudio, tengo que
saber con qu tubo usar y que consideraciones tomar
Procesamiento de la muestra: es la fase de anlisis en laboratorio
Obtencin de los resultados: nos referimos de la fase postanalitica y la realizacin del informe, que
son datos de los anlisis.
Interpretacin del informe
La fase preanalitica: es una responsabilidad, el cual el laboratorio que lo va a procesar necesita de una
buena muestra, para un buena resultado.
Consideraciones:
1. Tener en cuenta el comportamiento del animal, para hacer la toma de muestra. El examen que se
tiene que sacar es pre o post-tratamiento(por intervencin del med. Veterinario)
Procesos por los cuales puede estar alterado el hemograma:
- Prdida de sangre aguda: los valores de la serie roja no van a variar hasta que los lquidos
extravasculares pasen hasta que haya hemodilucin, esto puede pasar a las 24 horas.
- Estrs: el paciente va a producir vasoconstriccin y en el hemograma tendr leucocitos
- Ejercicio: un paciente va a liberar todas las reservas del vaso y se producir leucocitos o valores
de eritrocito pueden estar elevados. Se tiene prdida de masa muscular, es decir si hacemos
anlisis a un paciente con ejercicio intenso este ejercicio intenso destruye parte muscular, el
musculo tiene las enzimas creatiquinasa y AST.
- Medicacin: ej. Corticoides inducen el incremento de ALT, o el uso de anticonvulsivos. El uso de
antibiticos ICC pueden daar hgado y rion. La vincristina puede producir leucopenia, como
todo frmaco quimioteraputico evitan la mitosis y por lo tanto va a daar ADN, por lo tanto, si
las quimioterapias estn basadas en la destruccin de clulas que se encuentran en divisin y
una de esas clulas son las que se encuentran en medula sea o tambin de cualquier parte
epitelial, y se puede obtener una anemia y leucopenia.
2. Tener en cuenta que especie es: gato, perro, silvestre, etc. Para la toma de muestra
3. Capacitacin y costumbre, mucho depende de la destreza con la que se aprendido de tomar la
sangre.
4. Cantidad de sangre a extraer: depende de la especie que se consulta.
5. Disponibilidad de materiales
6. Destino de anlisis: si es hemograma, bioqumica, etc
Sistema Vacutainer: se divide en 3 partes: tubo elegido, la lanceta, y la aguja depositada sobre una jebe la
cual perfora la tapa vacutainer sin romper el vaci. Este sistema de coleccin, primero ingresa la aguja
dentro de la vena, una vez ingresado donde no hay aire ni vaci, se hace presin que sirve para que la aguja
perfore el tapn de goma y entonces este se retraiga y la aguja tenga acceso al vaci, entonces sale la
sangre. Es un sistema muy interesante porque es econmico (1.50) porque el tecnlogo no tiene acceso a la
sangre, a diferencia cuando se hace toma de muestra en veterinaria si puede haber contacto con la sangre.
En veterinaria no es muy usada, ya que estos sistemas estn basados para seres humanos que sobrepasan
los 30kg, la principal condicin es el vaci que est en el tubo es para 2.5ml o 3ml. Por ej. En especies
pequeas si se desea usar este mtodo como la presin del vaco es tan grande entonces la vena colapsa a
no ser que se habla de una vena de gran calibre como al yugular.
Eleccin de jeringa
Tubos para toma de muestra, segn el color de la tapa:
- Morada: tiene el anticoagulante EDTA, este es para hemograma. En la unin europea es de color
roja, porque no hay norma internacional.
- Roja: Bioqumica, se coagula porque no tiene ningn aditivo
- Amarilla: posee un gel separador, para al momento de centrifugar se separe la sangre (parte
celular) del plasma (parte slida).
- Verde: heparina
- Celeste: citrato
Cantidad de sangre: si el tubo marca una cantidad especfica, se debe sacar lo que se indica. El tamao
involucra que poseen un aditivo, x ej. Si yo uso un tubo grande que contigo EDTA para 3,4,5,6 o 7 ml, se
debe sacar lo que se indica, por el vaco que contiene, si no se cumple se puede tener un exceso de EDTA,
entonces este exceso produce dismorfia eritrocitaria, entonces se puede tener equinocitos in vitro por
exceso de EDTA. Igual para el citrato de sodio, si tengo un exceso, entonces se ve reflejado en la prueba de
coagulacin.
Para hacer un hemograma lo necesario es 0.5ml, un equipo automatizado requiere 10 a 20 ul. Un tubo de
0.5ml tiene 500ul.
La gran mayora de prueba se utiliza suero, por lo tanto, se necesita una cantidad moderada de suero,
entonces la primera muestra en sacar en un perfil preoperatorio, donde utilizo el tubo de tapa roja y
amarilla y el morado, primero recolectar en el tubo de tapa roja, porque la primera muestra de sangre es la
que tiene mayor presin.
La mezcla en el tubo con EDTA es por induccin. Qu ocurre si la muestra posee cogulos, lo que ocurre es
que en coagulo se van a agregar las clulas de la sangre, entonces en un paciente con proceso de anemia se
va a observar ms anemia de la que tiene y tambin muchos equipos automatizado se van a obstruir,
porque se tapona la aguja, y se va a usar ms reactivo para destruir ese coagulo para hacer la lectura de la
muestra.
EDTA est pegada a las paredes por esa la muestra se tiene que mover. Exceso de EDTA se va a tener algo
alterado, y las protenas y solidos totales suben, y se observa los equinocitos.
Cuando se hace hemostasia, es que toda la sangre arterial que estoy obstruyendo el calibre de la vena se va
a expandir, y tiene que generar presin por un lado, por eso se pone la aguja y por ah hace el regreso la
sangre.
Hemolisis, significa que cuando se tiene el suero esta de un color rosado o vino tinto, entonces hemolisis
significa que tengo hemoglobina libre producto de varios gr o uno solo que se han roto, el problema de la
hemolisis es que causa alteraciones en los resultados de bioqumica, se produce hemolisis por:
- Una hemostasia prolongada, no debera durar ms de 30 seg o 1 min. A mayor tiempo el lquido
tisular se empieza a acumular y el lquido tisular adyacente se puede entrar a la muestra y el factor
tisular lisa los glbulos rojos.
- Calibre utilizado es de 21, mientras la aguja sea ms corta es mejor, porque si no la sangre demora
en caer. La aspiracin fuerte, la jeringa sirve para la presin negativa, pero esta no debe ser alta
porque puede colapsar la vena o forzar una rpida entrada de glbulos rojos, y produce
apiamiento y destruccin de glbulos rojos.
- Las punciones seriadas, se debe de cambiar de vena porque el factor tisular puede entrar en el vaso
sangunea.
La membrana de los glbulos rojos en tensin alta se rompe y produce hemolisis.
Agitacin enrgica: solo el hemograma o sustrato de sodio unas 20 veces. Los tubos de bioqumica es una
agitacin de 3 a 5 veces, evitando la hemolisis.
En anemia hemoltica es la nica situacin en que se aceptara hemolisis.
En bioqumica, la lipemia, aumento de triglicridos en suero, los triglicridos es una molcula grande, lo que
hace es cuando la luz ingresa se refracta o dispersa, entonces esta dispersin genera que este medio turbio,
blanquecino medio lechoso, esto es importante los triglicridos aparecen por el alimento que van a
consumir, por eso cuando piden ayuno, es porque puede haber alta probabilidad de lipemia. El problema de
esto es que la mayora de pruebas de bioqumica se miden por espectrofotmetro que consiste en el paso
de luz, y si una muestra tiene estas caractersticas va a dar resultados incorrectos, en med.veterinaria lo
bueno es que uno de los principales signos es que el animal no come o sino tiene que hacer el ayuno
correspondiente.
Un gato gordo o perro gordo, no debera dar lipemia si es saludable.
Muchos pacientes con lipemia correlaciones con disfuncin heptica pueden tener ictericia.
La sangre que se recolecta es venosa, no arterial, porque las venas son ms fciles de recolectar porque son
ms visibles. La arteria puede contener sangre ms limpia y alterar los resultados.
Se recomienda conservar las muestras en refrigeracin (4 - 8C) porque si se hace en congelacin (a partir de
0C) se puede formar cristales estos rompen los glbulos rojos y alteran la muestra. El suero es mucho
mejor cuando lo colocas en bao mara, para que haya mejor generacin de cogulos.
ndice ictrico: es que tan amarillo es tu suero
Fundamentos bioqumicos: La mayora de laboratorios usan como mtodo de anlisis la
espectrofotometra, est dividida en diferentes celdas y nace el tema nanmetros, que es la medicin de la
longitud de onda, y hay longitud de onda que capta mejor los colores. Cada color tiene una longitud de
onda.
En la espectrofotometra, pasa lo siguiente si yo quiero captar el color verde en un tubo, yo tengo que captar
la longitud de onda de ese color en un color 135 o 130, es decir que capto la mayor capacidad de ese color
verde pero es rojo. Entonces, la espectrofotometra es lo siguiente, se compone por un haz de luz (una
lmpara) que emite la luz normal comn y corriente, hay unos filtros, que filtran la luz a una determinada
magnitud de onda, tenemos luego una cubeta o posillo de medicin, y lo que pasa es cuando se pone un
lquido, por ej. Yo quiero medir enzima ALT que se encuentra en el hgado, entonces se destruy el
hepatocito y lanz el ALT a la sangre, entonces medimos el suero que contiene ALT que combinado con un
reactivo que antagoniza la reaccin de ALT, entonces ALT + Reactivo se va a generar una reaccin la cual va a
ser medida, entonces ese combinacin la meto en la cubeta, y obtengo la transcriptancia, esto quiere decir
que la cantidad de luz de la original ha llegado a pasar esta materia, cuando una materia ha absorbido una
luz quiere decir que tiene una determinada absorbancia pero la luz que pasa es la reflejancia, por lo tanto la
maquina lo que lee es la transcriptancia, pero determina la absorbancia.
Si es una muestra ictrica la transcriptancia ser menor.
Suero con albumina, he cogido parte del suero en donde hay albumina en cantidad desconocida y lo
combino con un reactivo que tiene la capacidad de mezclarse con la albumina que se encuentra en la
sangre, esto da como resultado, un producto coloreado, el cual significa lo siguiente, mientras ms albumina
se colorea ms, de color verde tiene metodologa VBC que significa verde de bromocresol, que solo
reacciona con la albumina, esto significa que cuando un paciente tiene por ej. 2.0 gr/dl y otro paciente tiene
4.0 gr/dl, esto significa que como toda prueba colorimtrica, que si yo combine este reactivo en el primer
paciente ser un verde claro y en otro un verde intenso, entonces se hace la prueba de espectrofotometra
que si medir la intensidad de luz, entonces la absorbancia, a menos albumina menor absorbancia.
Las pruebas colorimtricas: captan el cambio de color.
Las pruebas cinticas: estn basadas en UV, la longitud de onda no se puede ver pero la maquina si, se ve
velocidad de absorcin (absorbancia y tiempo) de lo q fue ALT, si un paciente tiene mayor ALT y la pendiente
hacia abajo, la reaccin enzima+sustrato=producto, si la flecha esta hasta baja, se mide el sustrato en el
tiempo a partir de lo que es UV, porque a ms tiempo pase la enzima consume el sustrato para dar un
producto.
La metodologa en patologa clnica para la medicin de enzimas, si el paciente X tena una cantidad de ALT,
yo quiero medir la cantidad enzimtica de ese ALT, entonces el suero del paciente con ALT lo mezclo con un
reactivo que reaccione a ALT y por lo tanto cuando se pasa a la maquina sucede lo siguiente, en el tiempo 0,
se mezcl suero + reactivo (ALT+reactivo), se mezcl rpidamente y se coloc en el espectrofotmetro, y
marca una absorbancia a los 20 seg el sustrato se fue consumiendo, a los 30 seg pasa lo mismo y as. Y con
esto se genera la curva de regresin lineal, por lo cual si esa curva tiene mayor pendiente significa es se
absorbe mayor sustrato.