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ANEXO E

Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE


Ingeniera en Biotecnologa
Informe de Pasantas


Nombre: Carina Alexandra Stael Muoz
Lugar de Pasanta: Centro de Nanociencia y Nanotecnologa -ESPE
Fecha: 11 de noviembre al 13 de diciembre del 2013


Prcticas pre-profesionales en la Determinacion de Metales Pesados por Espectrometra de Absorcin
Atmica (AA)

La carrera de Ingeniera en Biotecnologa abarca una formacin muy amplia que involucra algunas ramas,
entre ellas, la biotecnologa humana, ambiental, animal, vegetal, entre otras, por ello, resulta de gran
importancia que los estudiantes nos involucremos ms en estas mediante las practicas pre-
profesionales. Adems las pasantas permiten profundizar conocimientos adquiridos en las diferentes
ctedras impartidas dentro de la carrera u obtener nuevos conocimientos y experiencia en la aplicacin
de tcnicas y manejo de equipos dentro del laboratorio.
De esta manera como estudiantes podemos establecer una relacin ms prxima con las actividades y
metodologas de laboratorio, desenvolvemos como futuros ingenieros interpretando y dando respuestas
a problemas reales mediante el conocimiento que poseemos.

OBJETIVOS DE LA PASANTIA:
Consolidar y fortalecer los conocimientos tericos y prcticos sobre la tcnica de Espectrometra
de Absorcin Atmica (AA) para la determinacion de concentraciones de metales pesados.
Desarrollar destrezas en las metodologas que implican esta tecnologa como desenvolvimiento
en el laboratorio y rea de trabajo, preparacin de reactivos y estandares, manejo de equipos,
pipeteo, entre otros.
Conocer el mecanismo de funcionamiento del espectrofotmetro de absorcin atmica.
Conocer el fundamento de la absorcin atmica para la determinacin de metales pesados en
muestras de agua.
Determinar las concentraciones de metales pesados como Pb, Hg, As, Fe, Zn, Cu, Cd y Cr en
muestras de agua, suelos y sedimentos.
Realizar el tratamiento previo a las muestras que seran analizadas por Espectrometra Absorcion
Atmica.
Analizar el fundamento, calculo e interpretacin de resultados de cada una de las tcnicas y
protocolos empleados.
Analizar la importancia de la caracterizacion de suelos, aguas y sedimentos para el
planteamiento de una tecnologa o tecnica de remediacion de los mismos.
INTRODUCCIN
Los relaves y/o residuos de la minera, ya sea industrial o artesanal, son el desecho mineral slido que
posee partculas con tamao variable entre arena y limo, y que se producen, transportan y depositan en
forma de lodo en contenedores adecuados para este propsito (Bustamante et al., 2010). Por otro lado,
los relaves o colas, como tambin se los conoce, pueden contener grandes cantidades de cianuro libre y
mercurio los cuales son usados en la recuperacin del oro y otros minerales en las plantas de beneficio,
se pueden hallar tambin compuestos como plomo, cobre, calcio, magnesio, sodio, cadmio, potasio,
molibdeno, arsnico, sulfatos, compuestos fenlicos, hierro disuelto y suspendido, slidos
sedimentables, slidos suspendidos, aceites y grasas (Bustamante et al., 2010).
Los relaves presentan riesgos para el medio ambiente, sus seres vivientes y la salud de la poblacin
aledaa e incluso distante, que utiliza las fuentes hdricas contaminadas para provisin de agua (Ex-
Ministerio de Energa y Minas del Ecuador, 1999). Es por eso que se destaca la importancia de tratar este
tipo de residuos y para ello primero se necesita caracterizar los mismos.
Una forma de hacerlo es midiendo las concentraciones de los metales presentes en las muestras de
relave mediante espectrometra de absorcin atmica (AA). Existen tres mtodos de la espectroscopia
de absorcin de tomos: 1) Espectroscopia de absorcin atmica de flama (AAS-F), 2) Espectroscopia de
absorcin atmica de horno grafito (AAS-HG), 3) Espectroscopia de absorcin atmica de generador de
hidruros (AAS-GH). La Espectroscopia de absorcin atmica de flama fue la mas utiliza y para la cual
equipo de AA requiere que la muestra est en forma de dilucin, la cual entra a un nebulizador que la
transporta a un sistema energtico (llama) donde se suministra a las molculas la energa necesaria para
romper los enlaces y obtener tomos metlicos en estado fundamental (atomizacin), quienes absorben
radiacin electromagntica de una longitud de onda especfica para el elemento al cual se quiere excitar.
Los tomos no excitados absorben luz y sus electrones de valencia pasan al estado excitado. La
diferencia entre la energa incidente y la transmitida se recoge en un detector y permite realizar una
determinacin cuantitativa del elemento, ya que la cantidad de radiacin absorbida a travs de la llama
(camino ptico) ser proporcional a la cantidad de tomos del elemento presentes en la misma (Ley de
Lambert-Beer) (UCM, s/a).
Aproximadamente unos 65 elementos se pueden determinar con gran sensibilidad y precisin
empleando la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica (UCM, s/a). No obstante, a pesar de su
amplio uso no es altamente sensible, por tanto no puede emplearse para la determinacin de metales
en concentraciones a nivel de g/L (Del Carmen, 2000).
En ocasiones, las concentraciones que deseamos detectar son demasiado bajas, por lo que debemos
recurrir a tcnicas especiales que requieren complementar el equipo con ciertos accesorios, los cuales
mejoran notablemente la sensibilidad del equipo. Por ejemplo, con el generador de hidruros, que
consiste en una cmara de cuarzo calentada a una temperatura de unos 1000C, se pueden analizar los
elementos capaces de formar hidruros voltiles como el As, Hg, Se y Sb, llegando a detectarse niveles de
unos pocos ppb.
Para que los analitos (metales) puedan ser medidos por AA se requiere de un proceso previo conocido
como digestin cida (lvarez et al., 2011). La digestin cida es un mtodo usado para transferir todos
los analitos a solucin y que puedan ser analizados en forma lquida. Otro objetivo del mtodo es el de
descomponer por completo la muestra evitando su prdida o contaminacin. Los mtodos de digestin
con cido ntrico reducen posibles interferencias por la presencia de materia orgnica y dejan a los
metales en una forma que puedan ser analizados, adems los nitratos ofrecen una buena matriz para la
determinacin de metales por AA (lvarez et al., 2011).

METODOLOGA
Los protocolos de tratamiento de muestra previo a su analisis por Espectrometra Absorcion Atmica
dependen del estado fisico de la muestra. Si la muestra es solida (suelos o sedimentos) se requiere hacer
una digeston acida previa. Por otro lado, si la muestra es liquida esta pueda ser analizada directamente
tras una filtracion.

Digestin cida total de una muestra de suelo
Previo a la digestin cida, la muestra de suelo se debe secar al ambiente por 1 semana para eliminar el
agua contenida en ella. Una vez seca, se debe homogenizar el tamao de las partculas de suelo, para
ello es recomendable realizar una maceracin. Y finalmente se toma una alcuota de suelo de 2 g.
Para la digestin cida, por alcuota se emple 100 ml de una solucin de cido ntrico y cido clorhdrico
en una relacin (1:3), la cual se llev a 200 ml con agua destilada, y se aadi a los 2 g de suelo seco en
un recipiente plstico. Como paso final para la digestin la mezcla se lleva al mezclador rotativo por 72
horas.
Una vez realizada la digestin la alcuota se centrifuga por 10 minutos a 3000 rpm, se recoge el
sobrenadante y se filtra con filtros de jeringa de 0,45 um en tubos de vidrio completamente limpios para
su anlisis en el espectrmetro de absorcin atmica. Si no se dispone de filtros de jeringa, tras la
digestin la alcuota puede filtrarse sin previa centrifugacin al vaco con un filtro de 1,45 m.

Digestin cida secuencial de la muestra
En primer lugar, se aade 1 g de suelo y 15,2 ml acido actico 0,11 M y se pone a rotar a 40 rpm por 16 h
a temperatura ambiente. Como segundo paso, una vez transcurrido este tiempo se centrifuga a 2400
rpm por 20 minutos, se recoge el sobrenadante filtrndolo con filtros de jeringa de 0.45 um y seguido se
realizan el lavado del suelo, para ello se aade aguas destilada y se deja mezclando por 15 minutos, se
centrifuga 2400 rpm por 20 minutos y se elimina el sobrenadante. En tercer lugar, al suelo lavado se
aade 15,2 ml de cloridrato de hidroxilamina 0,5 M (con ayuda de acido ntrico concentrado) y se pone a
rotar a 40 rpm por 16 h a temperatura ambiente. Una vez transcurrido este tiempo se repite el segundo
paso de centrifugado y lavado.
Posteriormente se aade 10 ml de perxido de hidrogeno gota a gota y se deja reposar por 1 hora,
despus de lo cual se lo pone bajo bao mara a 85C por otra hora permitiendo la evaporacin del
sobrenadante hasta un volumen final de 1 ml aproximadamente. Este paso se repite nuevamente. se
aade 19 ml de acido amonio 1 M y se pone a rotar a 40 rpm nuevamente por 16 h, tras lo cual se
repiten el paso 2. Finalmente se aade agua regia y se deja secar.
Para este ensayo se requiere preparar previamente:
- 250 ml Ac Ac. 0.11 M
- 250 ml Clorifrato de hidroxilamina 0,5 M (pH2 con Ac N. c.)
- 320 ml H2O2
- 350 ml Acetato Amonio 1M (pH2 con Ac N. c.)
- 800 ml agua regia
Absorcin atmica para determinacin de metales pesados
Para determinar la concentracin de cobre, cadmio, zinc, cromo y plomo en las muestras de suelos,
sedimentos y aguas se realiz una espectrometra de absorcin atmica ya que es un mtodo til para la
deteccin y determinacin de elementos qumicos, particularmente de elementos metlicos, debido a su
alta selectividad y rapidez (Rodrguez et al., 2010). Estos anlisis se realizarn para determinar la
concentracin de metales pesados de: a) las muestras de agua filtradas, y b) los sobrenadantes recogidos
tras las digestiones acidas de los suelos.

1.1 Anlisis de Cu, Zn, Cd, Pb Fe y Cr
Para determinar la cantidad de metales pesados de Cu, Zn, Cd, Pb, Fe y Cr en las muestras se uso el
espectrofotmetro de absorcin atmica Perkin Elmer AANALYST 800 equipado con una lmpara de
ctodo hueco para cada Cu, Zn, Cd, Pb, Fe y Cr, que se encuentra en el Laboratorio de Biotecnologa
Ambiental ubicado en el CEINCI (Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE). Se aplic el mtodo
modificado de absorcin atmica para cromo total citado en el apartado 3500-Cr B del Standard
Methods (Greenberg et al., 1992). Las soluciones estndares para calibrar el equipo se preparan a partir
de los respectivos estndares de 1000 mg/L (Sigma-Aldrich. Inorganic Ventures).

1.2 Anlisis de As y Hg
Para determinar la cantidad de arsnico y mercurio en las muestras se usa el espectrofotmetro de
absorcin atmica AANALYST 800 acoplado el generador de hidruros FIAS 100, que se encuentra en el
Laboratorio de Biotecnologa Ambiental ubicado en el CEINCI (Universidad de las Fuerzas Armadas -
ESPE). Se utilizara una lmpara de descarga de As Perkin Elmer para el caso del arsnico. El mtodo de
generacin de hidruros por espectrometra de absorcin atmica citado en el apartado 3500-As B del
Standard Methods (Greenberg et al., 1992) se empleo para la medicin de arsnico. Para la medicin de
las concentraciones de mercurio se emplear la tcnica de absorcin atmica con vapor fro empleando
el mtodo modificado EPA 3112B. Las soluciones estndares para calibrar el equipo se preparan a partir
de soluciones madre de 1000 ppb, preparadas a partir del estndar de 1000 mg/L (Sigma-Aldrich.
Inorganic Ventures). Adems, se prepara una solucin portadora de cido clorhdrico (Fisher Scientific,
USA) al 3%, y una solucin reductora de hidrxido de sodio (Merck) al 0,05% y borohidruro de sodio
(Fisher Scientific, USA) al 0,2%. El gas de arrastre se mantendr en un flujo de 70 mL/min.
Todas las muestras sern filtradas con filtros de jeringa 0,22m WHATMAN PVDF. De este filtrado se
toma 1 mL para la medicin de arsnico y 1 mL para la medicin de mercurio.
A las alcuotas preparadas para anlisis de Hg y los respectivos estndares se les debe aadir 100 L de
cido clorhdrico concentrado por cada 10 mL de solucin y 1 o 2 gotas de permanganato de potasio,
esto se realiza para evitar interferencias qumicas y perdidas por evaporacin.
Mientras que para la medicin de Arsnico, las muestras deben ser previamente tratadas, para ello se les
aade 1 ml de una solucin de Ioduro de potasio (5%) y cido actico (5%), y 1 ml de cido clorhdrico
(37,8%), y se deja reposar de 30-45 minutos. Transcurrido este tiempo se le aade a 7 ml de agua
destilada. Para la preparacin de las soluciones estndares se emple la frmula

, donde

,
es la concentracin del reactivo original de 1000 ppm,

, la concentracin y volumen,
respectivamente, de la solucin estndar a prepararse, y

, el volumen requerido del reactivo que


debemos colocar, estas fueron aforadas con una solucin de cido ntrico al 2%.
Procedimiento de programacin y lectura del espectrofotmetro de absorcin atmica Perkin Elmer
AANALYST 800
1. Encender el equipo y abrir el software
2. Colocar la lmpara (longitud de onda) para medicin del metal de inters, metal Na
3. Abrir y Programar el mtodo
a. Escoger el mtodo
b. Ingresar en el sistema del equipo las concentraciones de las soluciones standares
realizados.
c. Elegir la lnea de tendencia requerida para la calibracin
d. Elegir la longitud de onda de acuerdo a las soluciones estndares preparadas.
4. Encender la lmpara
5. Alinear el cabezal
a. Alineacin horizontal
i. Colocar agua destilada
b. Alineacin vertical
i. Encender la lmpara y dejar que se caliente
ii. Colocar el estndar de alineado
iii. Ajustar la absorbancia a aproximadamente 0,2
iv. Colocar en agua y finalizar
6. Calibracin del equipo
a. Encerara a blanco con agua destilada hasta obtener una absorbancia de 0,000
b. Leer estndares de calibracin preparados desde la menor concentracin hasta la mayor
concentracin tras una homogenizacin adecuada
c. Observar que el coeficiente de correlacin sea superior o igual a 0,99
7. Lectura
a. El dato que se presenta en los resultados corresponde al promedio de las tres
mediciones por alcuota que realiza el equipo.

Clculo de concentraciones de metales pesados en suelo y porcentaje de metales pesados removidos
Para determinar la concentracin del metal en la muestra de suelo o sedimento, la concentracin en
solucin (mg/l) se multiplic por el volumen de la solucin que se utiliz para la extraccin de metales
(200 ml) y se dividi para la cantidad de sedimento de la que se extrajo (2 g).
Y finalmente, para estimar el porcentaje de remocin de metales pesados es necesario conocer la
concentracin inicial y final de los siete contaminantes, con esta informacin se realiz balances de masa
para cada elemento o compuesto (Ecuacin 1), donde representa la masa de contaminante en el agua
de muestra:








Conociendo la cantidad de contaminante removido, empleando la ecuacin 2 se determina el porcentaje
de remocin en cada ensayo.

(Ecuacin 2)
CONCLUSIONES
La importancia de la determinacin de la concentracin de estos metales en los suelos,
sedimentos y aguas analizados provenientes de relaveras se debe a que debido a la cercana de
estas al ro Amarillo, y su mala construccin o mantenimiento, estos componentes se pueden
infiltrar y provocar la contaminacin de las aguas subterrneas y superficiales, pudiendo generar
riesgos para el medio ambiente, sus seres vivientes y la salud poblacional.
La espectrometra de absorcin atmica es una tcnica ampliamente extendida para la
determinacin de metales en aguas, debido a su alta selectividad y rapidez.
Es importante la optimacin la preparaciones de soluciones patrn que permitan establecer
grficas de calibracin adecuadas para la determinacin del metal de inters, en este caso en
particular del metal sodio.
Es importante que se defina la sensibilidad que se desea obtener previo a la eleccin de la
tcnica para la determinacin, debido a que la espectrometra de absorcin atmica de llama,
tiene una sensibilidad de tan solo ppms.
La absorcin atmica se fundamenta en la ley de Lambert-Beer, determinando la concentracin
de tomos del elemento basado en su proporcionalidad con la cantidad de radiacin absorbida
por ellos, cuya diferencia es detectada en un lector ptico.
A pesar de su amplio uso en determinacin de metales, no es altamente sensible, es decir,
cuando se requiere un control de metales que se desean encontrar, o son txicos, a nivel ug/L,
es conveniente utilizar absorcin atmica de generador de hidruros que proporciona una alta
sensibilidad
REFERENCIAS
lvarez, E., Guerrero, N. (2011). Digestin cida de muestras. Universidad Nacional de Colombia. [En
lnea] Disponible en: http://es.scribd.com/doc/91230155/Ensayo-Digestion-Acida
Rodriguez, R., Doimeadios, M. (2000). Aportaciones al conocimiento del estado medioambiental de
hidrosistemas de inters internacional situados en Castilla - La Mancha. Espaa. 167-168.
Universidad Complutense de Madrid (UCM). (s/a). Determinacin de Zn en aguas por absorcin
atmica en llama. [En lnea] Disponible en: http://www.ucm.es/info/analitic/perso-leon/Practica3.pdf
Bustamante, T., Lara, R. (2010). El Dorado o la caja de Pandora: matices para pensar la minera en
Ecuador. FLACSO. Quito, Ecuador.
Espectroscopia de emisin y absorcin atmica. [En lnea] Disponible en:
http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8252/4/T7Abasorc.pdf
Ros, M., Torres, D. Prez (2009). Determinacin de metales pesados por mtodos analticos en
residuos de sulfato de ZINC producido en un laboratorio de qumica analtica. Entre Ciencia e
Ingeniera. 3(5): 9-29. [En lnea] Disponible en:
http://faccbi.ucpr.edu.co/ecei/attachments/062_DETERMINACION_DE_METALES_PESADOS_POR_ME
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PRODEMINCA. (1999). Monitoreo Ambiental de las reas Mineras en el Sur del Ecuador. Ex-Ministerio
de Energa y Minas del Ecuador, Swedish Environmental Systems (SES).
Lenntech. (2012). Elementos. [En lnea] Disponible en:
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/index.htm