Tema 2: Membranas celulares Tema 2: Membranas celulares

Introduccin: modelo unitario de membrana

Funciones
Estructura
Composicin
Lpidos
Carbohidratos
Protenas
Integrales
Perifricas
Ancladas a lpidos
Fluidez
Asimetra
Difusin de lpidos: SPT
Difusin de protenas: SPT y FRAP
Control del movimiento de los componentes de la membrana
La membrana del eritrocito
Grado: Biotecnologa
Asignatura: Biologa Celular
Departamento de Biologa Celular e Histologa
Universidad de Murcia
Todas las clulas estn delimitadas por una estructura denominada
membrana plasmtica
La membrana plasmtica tiene el grosor de unas pocas molculas, por lo
que no puede observarse al MO
El ME revel la ultraestructura trilaminar de la membrana plasmtica.
Todas las membranas examinadas mostraron las misma ultraestructura
(modelo unitario)
Introducci Introducci n n
Membraba plasmtica de eritrocito
Membraba plasmtica y retculo endoplasmtico liso de clula muscular
1. Compartimentalizacin
2. Permeabilidad selectiva
3. Transporte de sustancias
4. Respuesta a seales extracelulares
5. Interacciones intercelulares
6. Lugar para interacciones bioqumicas
7. Transduccin de energa
Funciones de la membrana Funciones de la membrana
Estructura de la membrana Estructura de la membrana
Estructura de la membrana Estructura de la membrana
Se conoce desde hace ms de 50 aos que la membrana plasmtica est
compuesta por una bicapa lpidica y protenas
Danielli & Davson (1935): protenas exterior
Singer & Nicolson (1972): modelo mosaico-fludo
Composici Composici n de la membrana n de la membrana
Lpidos y protenas unidos por enlaces no covalentes
Adems tiene carbohidratos (glucoclix)
La proporcin lpidos/protenas vara considerablemente dependiendo
del tipo celular, el tipo de organismo y el tipo de membrana.
Las diferencias en composicin se pueden correlacionar con la funcin
particular de esas membranas
Vaina de mielina
L L pidos de membrana pidos de membrana
Son anfipticos: tienen regiones polares y apolares
La mayora contienen un grupo fosfato (fosfolpidos). Las excepciones
son el colesterol y los glicolpidos
Los fosfolpidos se clasifican en :
Fosfoglicridos: son diglicridos (saturado +insaturado)
Esfingolpidos: esfingomielina
Los glicolpidos son tambin esfingolpidos y se dividen en:
Cerebrsidos: monosacrido
Ganglisidos: oligosacrido
El colesterol puede constituir el 50% de los lpidos en algunas clulas
animales.
Estructura de los lpidos de membrana
Orientacin del colesterol en una membrana
La La bicapa bicapa lip lip dica dica
Con un experimento elegante y sencillo Gorter & Grendel (1925)
propusieron que las membranas celulares estaban formadas por una
bicapa de lpidos
Membrana artificial observada con MET
Preparacin de una membrana lipdica artificial
Carbohidratos de membrana Carbohidratos de membrana
Estn unidos covalentemente a protenas (glicoprotenas) y a lpidos
(glicolpidos)
Suponen un 2-10% en peso
Todos se disponen en la cara extracelular: forman glucocalix
Varan muchsimo de estructura
Glicoprotenas:
Oligosacridos menores de 15 molculas
El cido silico es generalmente terminal
Se unen a aminocidos por dos tipos de enlaces covalentes
Funciones:
Interacciones celulares
Reconocimiento celular
Infecciones: toxina del clera y virus de la gripe se unen a
ganglisidos
Grupos sanguneos
Carbohidratos de membrana
Prote Prote nas de membrana nas de membrana
Las protenas de membrana estn distribuidas asimtricamente
Se pueden clasificar en:
(a) Protenas integrales
(b) Protenas perifricas
(c) Protenas ancladas a lpidos
Prote Prote nas integrales nas integrales
Las protenas integrales son anfipticas
Para extraerlas de la membrana se necesitan detergentes (SDS o Tritn)
Se puede determinar la orientacin de las protenas de membrana:
Utilizando tripsina en clulas intactas o permeabilizadas
Analizando la secuencia de aminocidos (20-25 Aas no polares
que formen una -hlice)
Glicoforina (bitpica)
Apolar
Polar
Polar cargado
Bacteriorrodopsina (politpica)
Prote Prote nas perif nas perif ricas ricas
Se asocian a la membrana mediante enlaces electrostticos dbiles a:
Cabezas polares de fosfolpidos
Porcin hidroflica de protena integral
Se extraen con soluciones salinas concentradas o pH alcalino
Las mejores estudiadas se encuentran en cara citoplasmtica:
Familia de la espectrina: soporte mecnico
Enzimas y protenas de transmisin de seales
Prote Prote nas ancladas a l nas ancladas a l pidos pidos
Se distinguen dos tipos:
Unidas a glicofosfatidilinositol (cara exoplsmica). Ej.: Thy-1 y
fosfatasa alcalina
Unidas a cido graso (cara protoplsmica). Ej.: Src y Ras
Distribuci Distribuci n de las prote n de las prote nas integrales nas integrales
La distribucin de las protenas de membrana se estudia mediante
criofractura
Esta tcnica pone de manifiesto la microheterogeneidad de la membrana
Fluidez de la membrana Fluidez de la membrana
El estado de los lpidos en la membrana puede describirse por su fluidez
Los lpidos pueden existir en dos formas dependiendo de la temperatura:
Fase lquida cristalina: rotacin y movimiento lateral
Fase slida cristalina: movimiento restringido
La temperatura a la que ocurre este cambio se denomina T de transicin
La T de transicin depende de:
Los cidos grasos de los fosfolpidos
Saturados: mayor empaquetamiento mayor T transicin
Insaturados (cis): menor empaquetamiento menor T
transicin
Colesterol:
Efecto complejo y depende de composicin de la membrana:
Restringe el movimiento de cabezas de fosfolpidos
Separa colas de fosfolpidos: regin interna ms fluida
Aumenta estabilidad e impide transiciones bruscas:
A 37C efecto neto es disminuir la fluidez
Por debajo de la T de transicin mantiene la membrana
fluida
(a) >T transicin (b) <T transicin
Importancia de la fluidez de la membrana Importancia de la fluidez de la membrana
Compromiso entre estado rgido/estructura ordenada y lquido fluido/viscoso
La fluidez permite:
Interacciones moleculares en la membrana
Uniones intercelulares, sinapsis, complejos fotosintticos, etc.
Transmisin de seales intracelulares
Su crecimiento a partir de la incorporacin de nuevos lpidos y protenas
Procesos celulares bsicos: movimiento, crecimiento, divisin, secrecin,
endocitosis, etc.
Mantenimiento de la fluidez de la membrana Mantenimiento de la fluidez de la membrana
La T interna de todos los organismos, excepto mamferos y aves, vara
Los organismos mantienen la fluidez de la membrana ajustando su composicin
Desaturacin de cidos grasos
Intercambio de cidos grasos entre diferentes molculas (fosfolipasas +
aciltransferasas) formando fosfolpidos con dos cidos grasos insaturados
Sntesis de nuevos fosfolpidos
Asimetr Asimetr a de la membrana a de la membrana
Movimientos de los lpidos de membrana
Flipasas Flipasas
Difusi Difusi n de l n de l pidos pidos
SPT para fosfolpidos
Difusin lateral: 1m/s
Intercambio con sus vecinas: 10
7
veces/s
Flip-flop: muy lento
La difusin lateral se estudia mediante SPT (single particle tracking): los lpidos
son marcados con partculas de oro y se observan directamente en el microscopio
Difusi Difusi n de prote n de prote nas nas
Frye & Edidin (1970): demostraron la difusin de las protenas
de membrana fusionando clulas humanas y de ratn
Posteriormente las tcnicas de SPT y FRAP (fluorescence
recovery after photobleaching) han determinado la velocidad
de difusin de las protenas
FRAP FRAP
Control del movimiento de los componentes de la membrana Control del movimiento de los componentes de la membrana
La velocidad de movimiento de las protenas de membrana obtenida con las
tcnicas de FRAP y SPT es menor que la esperada basada en el tamao de
las partculas y la viscosidad de la membrana
Algunas protenas de membrana aparecen completamente inmobilizadas:
Complejos multiprotecos (gran Pm bajo coeficiente de difusin)
Protenas unidas a citoesqueleto o a matriz extracelular
Esta restriccin en el movimiento genera dominios de membrana y
polaridad celular
Enterocito
Espermatozoide
La membrana plasm La membrana plasm tica del eritrocito tica del eritrocito
La membrana del eritrocito es la ms estudiada y conocida
Por qu?
Clulas baratas y obtenidas en grandes cantidades
No necesidad de disgregacin
Carecen de otras membranas
Las membranas se obtienen fcilmente incubando las clulas
en medio hipotnico (fantasmas)
MET: tincin negativa
Protenas integrales:
Glicoforina A: 60% carbohidratos cargados negativamente impidiendo que
los eritrocitos se agreguen
Banda 3 (homodmero): antiporte HCO
3
-
/ Cl
-
Esqueleto (crtex celular)
Est formado por varias protenas perifricas que mantienen la integridad de
la membrana
Confiere capacidad de deformacin a los eritrocitos para pasar por capilares
de dimetro inferior al de ellos
Mantiene la forma del eritrocito y restringe el movimiento de protenas
perifricas
Espectrina:
Forma un filamento de 100 nm constituido por una subunidad y otra

enrolladas
Dos molculas unidas cabeza-cabeza forman un filamento de 200 nm
Se une a membrana a traves de una unin no covalente a anquirina
(sta se une a porcin citoplasmtica de la banda 3)
Actina y tropomiosina: unen las colas de la espectrina en forma penta o
hexagonal
Karp (1996). Cell and Molecular Biology. Concepts and Experiments. J ohn
Wiley & Sons. pp: 119-146. Excelente. 5 edicin traducida al espaol
publicada 2009.
Lodish et al. (2000) Molecular Cell Biology (4 ed.). Freeman. pp: 78-83.
Para completar algunos detalles sobre las protenas de membrana y el efecto
del colesterol en la fluidez. 5 Edicin traducida al espaol editada por
Mdica Panamericana (2005).
Bibliograf Bibliograf a a