AO DE LA PROMOCIN DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y

DEL COMPROMISO CLIMTICO

FACULTAD: MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA: TECNOLOGIA MEDICA

AREA: LABORATORIO CLINICO

ASIGNATURA: BIOQUIMICA CLINICA

PRACTICA: N 4 - DETERMINACIONES POR ESPECTROFOTOMETRIA

APELLIDOS Y NOMBRES: CODIGOS

CARDENAS AYALA JEMY 2013221116
CAMAC DE LA CRUZ CESAR 2013221101
MARTIN MARCELO EDITH 2013221133
MONTERO GAVILAN KATHERINE 2013221137


DOCENTE: Lic.TM PALOMINO ACOSTA, JUDITH



HUANCAYO 2014

DETERMINACIONES DE ESPECTROFOTOMETRIA

La espectrofotometra es la medicin de la cantidad de energa radiante que
absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la longitud de onda; es el
mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y
bioqumicas.
La espectrofotometra es muy utilizado en la bioqumica clnica para la medicin
de varios analitos entre ellos tenemos: glucosa, colesterol, triglicridos, urea,
creatinina, TGO, TGP, amilasa, protenas, albumina, etc.

OBJETIVOS
Determinar fotomtricamente la concentracin de sustancias utilizando el factor y
la curva de calibracin.
Conocer las caractersticas importantes de la curva de calibracin, y hallar el factor
de la calibracin.

CONTENIDO
FORMAS DE OBTENER LA CONCENTRACIN DE UNA SOLUCIN
Factor de calibracin
Se obtiene dividiendo la concentracin del estndar entre la lectura de su
absorbancia dicho valor se multiplica por la lectura del tubo problema para obtener
la concentracin de este. Este mtodo solo puede aplicarse en compuesto que
cumple la ley de Lambert y beer.

Curva de calibracin
Se realizan diferentes concentraciones de una sustancia y se construye uh grafio
en un sistema de coordenadas en donde se grafican las concentraciones
conocidas frente a su lectura de absorbancia, luego el valor de la absorbancia de
la muestra problema esta se interpola en la grfica para la determinacin de su
concentracin.



DESARROLLO

EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS






espectrofotmetro Bao maria Gradilla




Tubos de 13 x 100 mm,
12 x 75mm
Micropipeta de 200ul Micropipeta de 1000








Micropipeta de 10 ul

Punteras azules Punteras amarillas









Reactivo de glucosa Agua destilada

Calculo de la concentracin de una solucin problema mediante el uso de un
factor
Procedimiento para la determinacin de concentracin de glucosa

CONCEPTOS

Carbohidratos.- tambin llamados glcidos, hidratos de carbono o sacridos, son
elementos principales en la alimentacin, que se encuentran principalmente en
azucares, almidones y fibra. La funcin principal de los carbohidratos es el aporte
energtico.
Tipos:
carbohidratos simple; incluyen los azucares, tales como el azcar de las
frutas, fructuosa, sacarosa, glucosa.
Carbohidratos complejos; incluyen todos aquellos que estn compuestos
por ms de tres azucares unidos.

Glucosa.- es un monosacrido. Contiene 6 tomos de carbono es por eso que es
una hexosa, y es una aldosa. Es una forma de azcar que se encuentra libre en
las frutas y en la miel.es la fuente primaria de la sntesis de energa de las clulas,
mediante su oxidacin catlica, y es el componente principal de polmeros de
importancia estructural como la celulosa y de polmeros de almacenamiento
energtico como el almidn y el glucgeno.


Fundamento de glucosa oxidasa


Rotula los tubos de acuerdo al siguiente cuadro

ROTULAR BLANCO ESTANDAR MUESTRA
Estndar (100mg%) - 10 ul -
Muestra - - 10 ul
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml

imagen




Incubar 5 minutos
Leer a 505 nm


estndar muestra
absorbancia
0.192 0.183

Obtencin del factor de calibracin

= 521

CM = F x Abs (Mx)
CM = 521 x 0.183
CM = 95mg%
muestra
concentracin 95mg%

Calculo de la concentracin de una solucin problema mediante el uso de la curva
de calibracin:

Procedimiento

Prepara 20ml de una solucin de glucosa de 250mg% a partir de 2000mg%
C1 x V1 = C2 x V2
2000 x V1 = 250 x 20ml

v1= 2.5 ml
A partir de esta solucin (250mg%) preparar diluciones de 1000ul de volumen con
concentraciones de 50mg%, 100mg%, 15mg%, 200mg%.

1. C1 x V1 = C2 x V2
250 x V1 = 50 x 1000ul

v1= 200ul

2.- C1 x V1 = C2 x V2
250 x V1 = 100 x 1000ul

v1= 400ul

3. C1 x V1 = C2 x V2
250 x V1 = 150 x 1000ul

v1= 600ul

4.-C1 x V1 = C2 x V2
250 x V1 = 200 x 1000ul

v1= 800ul


Luego de tener listo los clculos, rotular tubos de 12 x 75 mm y prepara las
diluciones.
Rellenar la tabla
50mg% 100mg% 150mg% 200mg% 250mg%
Glucosa 200ul 400ul 600ul 800ul 1000ul
250mg%
Agua
destilada
800ul 600ul 400ul 200ul 0

Rotular los tubos de 13 x 100mm y a cada uno de ellos agregar las diluciones y el
reactivo segn el procedimiento de la prueba siguiendo el esquema:
imagen