Metodo de Feulgen y Rossenberg

Identifcacion del ADN

- Identifcacin especifca de los acidos nucleicos del ADN a partir del
reconocimiento de los grupos aldehdos de la pentosa.
Pasos
1) Hidrlisis acida:
- Se utiliza para romper los puentes de hidrogeno ue une a la do!le
h"lice mediante la desnaturalizacin de la cadena.
- Se utiliza Acido clorhdrico.
- Durante la hidrlisis acida sua#e la ma$or parte del A%N se di#ide en
compuestos solu!les $ se pierde del te&ido' sin ser remo#idos los grupos
ri!osil de!ido a la presencia de un grupo hidro(ilo en la posicin )* de la
ri!osa por lo ue este material no reaccin con el Schi+.
- ,l ADN es es parcialmente hidrolizado siendo remo#idos $ li!erados las
!ases puricas adenina $ guanina de los residuos de deso(irri!osa
-depurinizacion) .ormando acido apurinico $ generando grupos aldehdos
en el car!ono 1 de la pentosa donde se encontra!a unida la !ase
nitrogenada.
- Variables: p/' tiempo hidrlisis' t0 ' f&ador $ grado de compactacin de
la cromatina -Depende de cada te&ido).
)) Tincion con reactivo de Schi:
- 1i2e los grupos aldehdos li!erados por la hidrlisis.
Resultados:
- ADN -3romatina nuclear' cromosomas)4 5ucsia.
- 6a(ima o!ser#acion entre los 78 a los 98 minutos.
Metodo verde !etilo"#ironina
Identifcacion de ADN $ A%N
- Identifcacin de acidos nucleicos del ADn $ A%N por el reconocimiento
de los grupos .os.atos.
- :so de ) colorantes cationicos -;)
1) <erde metilo
- Su amplia confguracin en h"lice le otorga ma$or car=cter cationico' por
lo ue es atrado electrost=ticamente a los grupos .os.atos en el lado
e(terno de la cadena de ADN $ se mantiene por uniones no ionicas a las
pentosas del ADn $ las nucleoprotenas asociadas' demostrando ma$or
afnidad por mol"culas mas polimerizadas.
)) Pironina $
- Posee un le#e car=cter cationico $ una alta afnidad a zonas menos
polimerizadas.
- Posee una estructura planar ue se intercala entre los pares de !ases de
los acidos nucleicos $ no logra entrar al ADN porue sus iones son
e(cludos por el #erde metilo en el aldo e(terno de la cadena' por lo ue
se une al A%n ue al ser una estructura mas a!ierta admite .=cilmente
los cationes de la pironina' intercal=ndose entre los pares de !ases'
neutralizando los .os.atos $ eclu$endo al #erde de metilo.
%esultados4
- 3romatina ADN4 Azul #erdoso
- Nucleolo A%N4 ro&o !rillante
- A%N citoplasmatico4 ro&o
6etodo >alocianina cromoalum!re
Identifcacin acidos nucleicos en general
- Identifcacin de acidos nucleicos del ADN $ A%N a partir del
reconocimiento de grupos .os.ato
- ?a $alocianina ue no posee un car=cter acido ni !=sico' al asociarse al
Alu!bre de cro!o .orma una laca cationica ue se une selecti#amente
a los grupos .os.ato.
- Se tra!a&a en un rango entre 1'@-1'A@ reaccionando casi especfcamente
con los acidos nucleicos a un p/ menor a 1'@ donde los grupos .os.ricos
en el te&ido se encuentran disociados $ pueden .ormar una sal con la
laca de cromo.
- Se utiliza una tecnina de e(traccin para discriminar entre am!os
- %esiste la e(traccin por alcoholes o tinciones de cotnraste acidas.
%esultados4
- ADN $ A%N azul oscuro.
- 3orpBsculos de Nissl de las neuronas' cromatina nuclear inclu$endo
nucl"olos' depsitos de A%N ri!osomal en el citoplasma tam!i"n de color
azul.