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1 Semestre:
TECNOLOGIA FARMACUTICA II
(4 ano)
1
TRABALOS LABORATORIAIS:
A!"a 1 Trabalho 1:Determinao do EHL de emulente! "ara "re"arao de emul!#e!$
Avaliao da e!tabilidade %&!i'a$
Trabalho 2: '(l'ulo do EHL de emulente! "ara "re"arar uma emul!o$
A!"a # $ Trabalho ): *re"arao da !u!"en!o de hidr+,ido de alum&nio$ -tili.ao de
v(rio! aente! vi!'o!ante! e aente! !u!"en!ore!$ /0$
Trabalho 4 1 /reme 2/A de Hidro3uinona$ /0$
A!"a % $ Trabalho 5 & En!aio! de !olubilidade de %a!e do 'om"le,o ibu"ro%eno141
'i'lode,trina$ Avaliao da e!tabilidade do! trabalho! ) e 4$
A!"a 4 $ Trabalho 5 1 *roduo e /0 de "art&'ula! de 0uito!ano$
A!"a ' $ Trabalho 6 1 *re"arao de v(rio! lote! de el de 'a%eina e /0$
A!"a ( $ Trabalho 7 1 En!aio! de 'ed8n'ia de 'a%e&na a "artir do! ele! "re"arado! na
aula anterior$
A)ALIA*+O (#,- .a nota /0na" .a .0s102"0na .e TFII):
2! aluno! no "odem 'om"en!ar %alta!9 %ora da! !emana! do! trabalho!$
2! aluno! devem tra.er bata e um "ort(til "or ru"o "ara a"re!entar e di!'utir o!
re!ultado! do trabalho na 2: "arte da aula$ ; obriat+rio "re"arar a! aula! ante! da !ua
reali.ao$
2
Tra3a"4o 5r6t01o 1
7ETERMINA*+O 7O EL 7E EMULGENTES 5ARA
5RE5ARA*+O 7E EMULS8ES9
A)ALIA*+O 7A ESTABILI7A7E F:SICA
De%inio de Emul!o e Emul!i%i'ao <!i!tema! !u"ra'oloidai!9 tri%(!i'a! ou mai!=
>?todo! de determinao do ti"o de emul!o <diluio@ 'orante!@ 'ondutividade
el?'tri'a@ determinao da vi!'o!idade e ten!o !u"er%i'ial@ %luore!'8n'ia do! +leo!
!ob lu. uv=
/la!!i%i'ao do! emulente!: "rim(rio! e !e'und(rio!
E!tabili.ao: termodinAmi'a < TB=@ me'Ani'a <%ilme inter%a'ial r&ido=@ el?'tri'a
Cn!tabilidade: %lo'ulao e 'remaem@ 'oale!'8n'ia e !e"arao de %a!e!
Deoloia
/0 da! emul!#e!
FUN7AMENTO
2 "re!ente trabalho %oi 'on'ebido "ara ilu!trar alun! a!"e'to! da teoria da! emul!#e!
enun'iada "or B'hulman e /o'Ebain <1F40=$
2! ten!ioa'tivo! hidro!!olGvei!9 'omo o !ul%ato de laurilo e !+dio e a 'etrimida9
a'umulam1!e na inter%a!e +leo1(ua da! emul!#e!9 %ormando uma 'amada %ina ou %ilme$
Be a! intera'#e! entre a! mol?'ula! 3ue 'on!tituem e!ta 'amada %orem %ra'a!9 %a'ilmente
"oder( veri%i'ar1!e o %en+meno de 'oale!'8n'ia da! ot&'ula! da %a!e di!"er!a$ A "re!ena
!imultAnea de um ten!ioa'tivo li"o!!olGvel e de outro hidro!!olGvel re!ulta na %ormao
de uma 'amada mole'ular mai! e!t(vel9 "or aumento da 'oe!o do! ten!ioa'tivo!$
Heralmente9 a 'ombinao de ten!ioa'tivo! oriina um abai,amento do! valore! da
ten!o inter%a'ial e9 'on!e3uentemente9 a di!"er!o da %a!e interna e,ie a"ena! um
"e3ueno aumento da eneria livre$
)
MATERIAL
Bero %orne'ida! ao! aluno! a! !euinte! !olu#e!:
1) Il'ool 'etoe!tear&li'o em "ara%ina l&3uida <140 m/10 ml=$
2) B"an 70 <monooleato de !orbitano= em "ara%ina l&3uida <150 m/10 ml=$
3) Bul%ato de lauril e !+dio em (ua <65 m/40 ml=$
4) /etrimida em (ua <60 m/40 ml=$
5) TJeen 70 <monooleato de "olio,ietileno1!orbitano= em (ua <150 m/40 ml=$
5ARTE I & AC*+O 7OS TENSIOACTI)OS NA INTERFASE ;LEO&<GUA
T=1n01a
a= A3ue'er a! !olu#e! em banho de (ua a K45150L/$ 2! re!"e'tivo! %ra!'o! ou
matra.e! rolhado! devero !er mantido! no banho durante a utili.ao$
b= Em %ra!'o! rolhado! de 100 ml9 aitar a! mi!tura! C= a MCCC= durante )0 !eundo!9
imediatamente ante! de utili.ar o homoenei.ador$ Em !euida9 "a!!ar 'ada uma
dela! "or um homoenei.ador manual e re'olher em tubo! de en!aio$ 2 tem"o e a
%re3u8n'ia de aitao <manual= utili.ado! na "re"arao da! emul!#e! devero !er9
tanto 3uanto "o!!&vel9 "adroni.ado! e rei!tado!$
'= /om"arar e rei!tar o a!"e'to da! diver!a! emul!#e! a"+! "er&odo! de re"ou!o de 0
min9 15 min e 50 min$
M0st!ras a 2re2arar:
C= 5 ml de !oluo de (l'ool 'etoe!tear&li'o em "ara%ina l&3uida N 20 ml de (ua
"uri%i'ada$
CC= 5 ml de "ara%ina l&3uida N 20 ml !oluo de !ul%ato de lauril e !+dio em (ua$
CCC= 5 ml de !oluo de (l'ool 'etoe!tear&li'o em "ara%ina l&3uida N 20 ml !oluo de
!ul%ato de lauril e !+dio em (ua$
CM= 5 ml de "ara%ina l&3uida N 20 ml !oluo de 'etrimida em (ua$
M= 5 ml de !oluo de (l'ool 'etoe!tear&li'o em "ara%ina l&3uida N 20 ml !oluo de
'etrimida em (ua$
4
MC= 5 ml de B"an 70 em "ara%ina l&3uida N 20 ml de (ua "uri%i'ada$
MCC= 5 ml de "ara%ina l&3uida N 20 ml de !oluo de TJeen 70 em (ua$
MCCC= 5 ml de B"an 70 em "ara%ina l&3uida N 20 ml de !oluo de TJeen 70 em (ua$
Registar no quadro anexo o aspeto de cada emulso aps os intervalos
indicados, referindo-se exist!ncia de uma emulso est"vel ou
fenmenos de cremagem ou separa#o de fases$
2 min 15 min 50 min
Il'ool 'eto!tear&li'o
Bul%ato de Lauril e
!+dio
Il'ool 'eto!tear&li'o
N Bul%ato de Lauril e
!+dio
/etrimida
Il'ool 'eto!tear&li'o
N /etrimida
B"an 70
TJeen 70
B"an 70NTJeen 70
E,"li'ar o! re!ultado! ob!ervado!:
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
5
Tra3a"4o 5r6t01o #
C<LCULO 7O EL 7E EMULGENTES 5ARA 5RE5ARAR A SEGUINTE
EMULS+O:
/reme Hidratante:
Const0t!0ntes Massa (>)
Ma!elina bran'a 10
*ara%ina l&3uida 15
Lanolina 1
Il'ool 'et&li'o 10
Emul!ionante! <20P da %a!e oleo!a= Q
Iua 51
*ro"ilenoli'ol 497
>etil"arabeno
*ro"il"arabeno
0917
0$02
5ROCE7IMENTO
1= Rundir todo! o! 'on!tituinte! da %a!e oleo!a em banho de (ua S tem"eratura de
60165L/$
2= Di!!olver o! "arabeno! na (ua "uri%i'ada %ervente e adi'ionar o "ro"ilenoli'ol$
)= Adi'ionar lentamente a %a!e oleo!a S %a!e a3uo!a e aitar at? total arre%e'imento$
C<LCULO 7O EL 7A FASE OLEOSA
MABELCTA: 11
*ADARCTA: 11
LAT2LCTA: 10111
IL/22L /ETULC/2: 15
?UAL @ O EL 7A FASE OLEOSAA
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
5
?UAL @ O EL 7OS EMULSIONANTES:
B*AT 40: 596
B*AT 70: 49)
TVEET 20: 1596
TVEET 40: 1595
TVEET 50: 149F
TVEET 70: 15
O ALUNO 7E)ER< ESCOLER UM 5AR 7E EMULSIONANTES E FABER OS C<LCULOS9
7ETERMINE O TI5O (OCA OU ACO) 7A EMULS+O ORIGINAL9
*ara i!!o9 reali.e o! te!te! !euinte! 'om a "oro de )0 ml da emul!o anterior e rei!te
o! re!"e'tivo! re!ultado!:
a$ A!"e'to: /omente o a!"e'to eral da emul!o9 re%erindo1!e S 'olorao9 ob!ervao
vi!ual da vi!'o!idade e !en!ibilidade ao ta'to$ E,amine uma amo!tra da emul!o ao
mi'ro!'+"io +"ti'o$ Dei!te a! ob!erva#e!:
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
b$ Diluio: /olo'ar 1 "e3uena "oro de emul!o num vidro de rel+io$ Adi'ionar
uma! ota! de !oluo de a.ul de metileno$ Dei!tar a! ob!erva#e!:
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
'$ E!"alhabilidade: /om o au,&lio de uma vareta de vidro9 'olo'ar uma ota rande da
emul!o !obre "a"el de %iltro e rei!tar a! di%erena! de 'om"ortamento$ /om"arar
'om ota! id8nti'a! de (ua e "ara%ina$ Dei!tar a! ob!erva#e!:
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
E,"li'ar 'omo 'ada um de!te! te!te! "ode identi%i'ar o ti"o de emul!o e determinar de
3ue ti"o !ero a! emul!#e! e!tudada!$
6
Tra3a"4o 5r6t01o %
DSUS5ENS+O 7E I7R;EI7O 7E ALUM:NIOF
INTRO7U*+O
De%inio de !u!"en!#e!
Mantaen! e de!vantaen! da %ormulao
/la!!i%i'ao de !u!"en!#e!
/ara'ter&!ti'a! de uma !u!"en!o ideal
Cn!tabilidade termodinAmi'a <'re!'imento de 'ri!tai!@ !edimentao <!u!"en!o
de%lo'ulada/ %lo'ulada@ lei de BtoEe!=@ %lutuao da! "art&'ula!=
*oten'ial Weta ou Ele'tro'in?ti'o
Rorma! de "re"arao da! !u!"en!#e! <via 3u&mi'a9 via %&!i'a@ e,tem"orAneaX=
AdYuvante! da! !u!"en!#e! <molhante!9 !u!"en!ore! ou vi!'o!ante!9 %lo'ulante!=
/ontrolo da 3ualidade da! !u!"en!#e!
Deoloia: vi!'o!idade9 velo'idade de 'orte e ten!o de 'orte@ reorama!@ %lu,o!
no neJtoniano! <"!eudo"l(!ti'o9 dilatante9 reo"?,i'o@ ti,otr+"i'o=
FORMULA*+O:
Const0t!0ntes Massa (>)
Hidr+,ido de alum&nio 'oloidal )090
Ba'aro!e 100
*ro"ilenoli'ol 1090
>etil"arabeno 09F0
*ro"il"arabeno 0910
/elulo!e mi'ro'ri!talina <Avi'el D/15F1= 5900
*oli!orbato 20 5900
E!!8n'ia de ani! 5 ota!
Hidro,i"ro"ilmetil'elulo!e 15 '* 2950
Iua de!tilada 3$b$"$ 250 ml
5ROCE7IMENTO
1= Em 70 ml de (ua de!tilada di!!olver 100 de !a'aro!e 'om au,&lio de aitao e
tem"eratura$
2= Em 40 ml de (ua de!tilada di!!olver 09F de metil"arabeno e 091 de "ro"il"arabeno
'om au,&lio de uma "la'a de aitao 'om a3ue'imento$ To dei,ar atinir a ebulio
e "roteer a !oluo da eva"orao$
)= *ara um re'i"iente raduado de 100 ml9 tran!%erir 40 ml de (ua de!tilada$ Adi'ionar a
7
!oluo de "arabeno! e aitar$ Adi'ionar em !euida a !oluo de !a'aro!e$
4= Adi'ionar !ob homoenei.ao 'on!tante <'om vareta=:
1 590 de "oli!!orbato 20
1 1090 de "ro"ilenoli'ol
1 590 de 'elulo!e mi'ro'ri!talina
1 )0 de hidr+,ido de alum&nio
5= *re"arar uma di!"er!o de H*>/ 15 '* em 40 ml de (ua a 50L/$
5= Adi'ionar a di!"er!o anterior S !u!"en!o e aitar$
6= Adi'ionar a! ota! de e!!8n'ia de ani! e homoenei.ar$
7= /om"letar o volume de 250 ml 'om (ua de!tilada$
CONTROLO 7E ?UALI7A7E
1= Meri%i'ar a homoeneidade: ob!ervar !e e,i!tem9 ou no9 alomerado! de "art&'ula!$
Cdenti%i'ar a! "art&'ula! ob!ervada!$ Ra.er uma ob!ervao mi'ro!'+"i'a9 ante! e de"oi!
da homoenei.ao no -ltra1Turra,9 e rei!tar a! altera#e! do Avi'el$
2= Determinar a vi!'o!idade u!ando "ara o e%eito um vi!'o!&metro rotativo de ZrooE%ield$
)= Determinar o "H da !u!"en!o$
4= Determinar o rau de %lo'ulao em "roveta ao %im de 3uin.e dia!$
5= Determinar a den!idade$
5= Elaborar um r(%i'o 3ue re"re!ente a in%lu8n'ia do! "arAmetro! em e!tudo$
ALTERA*8ES 5OSS:)EIS AO 5ROTOCOLO
- Alterao da 3uantidade de 'elulo!e mi'ro'ri!talina
- Determinao da in%lu8n'ia da homoenei.ao <velo'idade e/ou tem"o= na
vi!'o!idade da !u!"en!o <E,: !em homoenei.ao9 ao %im de
1minuto e ) minuto!=
F
Tra3a"4o 5r6t01o 4
DCREME OCA 7E I7RO?UINONAF
FORMULA*+O
Lanette TXXXXXXXXXX$15900
/etiol MXXXXXXXXXXX20900
BorbitolXXXXXXXXXXX$4900
I'ido !+rbi'oXXXXXXXXX0915
Hidro3uinonaXXXXXXXXX2900
Iua "uri%i'adaXXXXXXXX50975
5ROCE7IMENTO
1= Rundir em '("!ula de ino, todo! o! 'on!tituinte! da %a!e oleo!a em banho de (ua S
tem"eratura de 60165 L/$
2= Di!!olver o ('ido !+rbi'o na (ua "uri%i'ada %ervente e adi'ionar o !orbitol$
)= Adi'ionar lentamente a %a!e oleo!a S %a!e a3uo!a e aitar at? total arre%e'imento$
4= Cn'or"orar 2P <m/m= de hidro3uinona$
CONTROLO 7E ?UALI7A7E
E%etuar en!aio! de 'ontrolo de 3ualidade de a'ordo 'om o <RH* A$C$14=$
ESTABILI7A7E 7AS 5RE5ARA*8ES
E!tudo da in%lu8n'ia da tem"eratura e da e,"o!io S lu.:
/olo'ar o 'reme em 3uatro tubo! de en!aio!9 ta"ado! 'om "ara%ilm e arma.en(1lo!
durante uma <dua!= !emana <!= em 'ondi#e! di%erente! de tem"eratura e e,"o!io S lu.$
1 tubo nL1 tem"eratura ambiente e e,"o!io S lu. !olar$
1 tubo nL2 tem"eratura ambiente e au!8n'ia de lu. <envolver o tubo em "a"el de
alum&nio=$
1 tubo nL ) e!tu%a 40 L/ e au!8n'ia de lu.$
1 tubo nL4 %riori%i'o entre 2 1 7 L/ e au!8n'ia de lu.$
ALTERA*8ES AO TRABALO
1 *o!!&vel in'or"orao de antio,idante! e 'ontrolo de "H$
1 *o!!&vel in'or"orao da hidro3uinona na %a!e a3uo!a$
10
Tra3a"4o 5r6t01o '
ENSAIOS 7E SOLUBILI7A7E 7E FASE 7O COM5LEEO
IBU5ROFENO& G&CICLO7EETRINA
/i'lode,trina! </D= !o 'om"o!to! '&'li'o! derivado! do amido
%ormado! "or unidade! de lu'o!e em lia#e! [1 194: 5 unidade! de
li'o!e <[ /D=9 6 unidade! de li'o!e <41 /D= e 7 unidade! de li'o!e
<\1/D=$
Devido S !ua 'on%ormao e!trutural em 'one trun'ado <interior
hidr+%obo/ e,terior hidr+%ilo= %ormam 'om"le,o! de in'lu!o 'om BA
<!ub!tAn'ia ativa= de 'ara'ter&!ti'a! diver!a! ] ^ a"li'abilidade
Em relao S !olubilidade do! 'om"le,o! %ormado!9 e,i!tem e!!en'ialmente doi! ti"o!
de .0a>ramas .e so"!30"0.a.e .e /ases (F0>!ra A):
T02o A <A*@ AL@ AT=: %ormao de 'om"le,o! !olGvei! em (ua$
o T02o AL: h( uma de"end8n'ia linear da !olubilidade total do
!ub!tra'to 'om a 'on'entrao de /D9 obtendo1!e 'om"le,o! de 1:
ordem em relao S 'on'entrao de /D$
o T02o A2: a"re!enta um de!vio "o!itivo da linearidade a 'on'entra#e!
elevada! de /D e 'orre!"onde S %ormao de 'om"le,o! de maior
ordem mole'ular$
o T02o AN: a"re!enta um de!vio neativo da linearidade a 'on'entra#e!
elevada! de /D9 !endo um do! !i!tema! meno! %re3uente!9 'uYa
o'orr8n'ia "ode !er e,"li'ada devido a intera'#e! 'om"le,a! entre
!oluto1!oluto e !oluto1!olvente$
T02o B <ZB@ ZC=: %ormao de 'om"le,o! "ou'o !olGvei! 3ue de"oi! !e tornam
in!olGvei! em (ua
o <"onto A: limite de !olubilidade do 'om"le,o@ "onto Z: "onto em 3ue
todo o %(rma'o livre %oi 'on!umido=
11
2 ti"o de diarama 3ue a"are'e 'om mai! %re3u8n'ia ? o AL <1:1=$ Te!te 'a!o9 a
'on!tante de e3uil&brio <_!= ? determinada tendo em 'onta o de'live da "oro linear
da 'urva obtida <t [=: Hs I t> J C KSL (1&t> J) I .e1"0Me C So (1& .e1"0Me)
2 intervalo `ideala de valore! da 'on!tante de e3uil&brio !er( a"ro,imadamente entre
100 5 000
>1
1$
5ROCE7IMENTO
1= De a'ordo 'om o m=to.o .e 0>!140 e Connors <1F55=9 "re"arar 1000 ml de uma
!oluo1me a3uo!a de 1/D 'om uma dada 'on'entrao <b 10/1000 ml=9 *> c
11)4$F7/ mol e9 !euidamente9 "re"arar !olu#e! 'om um radiente 're!'ente de
1/D <ver Ta3e"a 1=$ <' /ras1os 2or 1a.a tem2o .e re1o"4a e o Mo"!me a
2re2arar = .e ', m"=
Ta3e"a 1 $ /om"o!io da! !olu#e! a "re"arar no en!aio de !olubilidade de %a!e$
Frascos % gua (v/v) % soluo de CD (v/v)
1 100 0
# 65 25
% 50 50
4 25 65
' 0 100
12
F0>!ra A: Diarama te+ri'o de !olubilidade de %a!e da! 'i'lode,trina!@ ada"tado de Hiu'hi T$9 /onnor! _$A$9
*ha!e1!olubilitd te'hni3ue!9 Adv$Anal$/hem$Cn!tr$9 49 11611229 <1F55=
2= Adi'ionar um e,'e!!o <e100m= de BA <ibu"ro%eno= em relao S !ua !olubilidade
<B0 b 21m / 1000 ml= a 'ada %ra!'o$ <DruZanE=
)= 2! %ra!'o! devidamente rolhado! !o 'olo'ado! a aitar < b 125 r"m= em banho de
(ua termo!tatado a 'er'a de )6L/ at? !e atinir o e3uil&brio$
4= A"+! 1h e 2h re'olher a! amo!tra! <10 ml=9 %iltrar e "ro'eder ao re!"etivo
do!eamento "or e!"e'tro!'o"ia -M1MCB a 255 nm$ Diluir a! amo!tra!9 !e ne'e!!(rio9
'om a !oluo (ua:etanol <50:50@v/v=$
5= *re"arar uma 'urva de 'alibrao de ibu"ro%eno$
*re"arar uma !oluo me de BA <5m/ml=9 "or e,em"lo: "e!ar 250m de BA
e diluir em 50ml de !oluo (ua:etanol <50:50@v/v=$
A "artir da !oluo me9 "re"arar !olu#e! de 0$19 0$29 0$4 e 0$5 m/ml de BA$
Determinar a! ab!orv8n'ia! de 'ada uma da! !olu#e! "or e!"e'tro!'o"ia -M1
MCB a 255 nm$
Determinar a e3uao da re'ta$
CONTROLO 7E ?UALI7A7E
1= De"re!entar ra%i'amente o diarama de !olubilidade de %a!e! <'on'entrao de BA
ver!u! 'on'entrao de /D@ m/ml@ "ara 'ada tem"o de re'olha= e 'la!!i%i'(1lo$
2= Determinar a 'on!tante de 'om"le,ao <_!= ao %im de 2 hora! <'a!o a inter'e"o no
r(%i'o d8 um valor neativo u!ar o B0 te+ri'o$ /omentar$
)= Cndi'ar "o!!&vei! m?todo! de 'om"le,ao e 'ara'teri.ao$
1)
Tra3a"4o 5r6t01o (
5RO7U*+O 7E 5ART:CULAS 7E ?UITOSANO
MATERIAIS E M@TO7OS
5ARTE I
*re"arar 20 ml de !olu#e! de 3uito!ano </B= a 1P9 195P e 2P <m/v= numa !oluo
a3uo!a dilu&da de ('ido a'?ti'o <2P v/v=9 S tem"eratura ambiente$
Nota: Esta 2r0me0ra 2arte ser6 2re2ara.a 2e"o .o1ente no .0a anter0or N a!"a9
5ARTE II
EsO!ema /ator0a" %
#
2ara a 2ro.!PQo .e 2artR1!"as .e O!0tosano 0n1or2ora.as 1om
C"or0.rato .e L0.o1aRna
*re"arar a! "art&'ula! de 3uito!ano "or eli%i'ao i+ni'a !eundo o de!enho %a'torial )
2
a"re!entado na! tabela! 1 e 2$
Ta3e"a 1 $ T02os .e est!.o e 2arSmetros a aMa"0ar no .esenMo"M0mento .e 2artR1!"as .e O!0tosano9
5M: 2eso mo"e1!"arT A5M & a"to 2eso mo"e1!"arT M5M & m=.0o 2eso mo"e1!"arT B5M & 3a0Uo 2eso
mo"e1!"ar9
Ti"o de e!tudo
/om"o!io do
!i!tema
Ratore! em e!tudo
Mari(vei!
T&vei!
0 1 2
E!3uema
%a'torial )
2
/B/Tri"oli%o!%ato
<T**=
*ro"oro
/B/T**
1:1 195:1 2:1
*> do /B Z*> >*> A*>
14
Ta3e"a #& EsO!ema /ator0a" %
#
(# /atores a % nRMe0s) !t0"0Va.o 2ara a aMa"0aPQo .o e/e0to .a 2ro2orPQo CSCT55
(Fator A) e .o 2eso mo"e1!"ar .o O!0tosano (Fator B) na >ran!"ometr0aW esta30"0.a.eW 1a2a10.a.e .e 1ar>a .as
2artR1!"as9
Rator A: 011:1@ 11 195:1@ 21 2:1
Rator Z: 01 bai,o@ 11 m?dio@ 21 alto
19 5RE5ARA*+O 7AS 5ART:CULAS COM 5ROTE:NA
Di!!olver a ovalbumina <2MA= <1P m/v= em 5 ml da !oluo de 3uito!ano 'on%orme
o e!3uema da tabela 2$
>edir 10 ml de uma !oluo de T** <1P <m/v=9 "H 795= "ara um 'o"o de
"re'i"itao de 50 ml <F 'o"o! devidamente identi%i'ado! de a'ordo 'om o de!enho
e,"erimental=$
>edir ) ml da !oluo de 3uito!ano 'om 2MA 'om uma !erina$
En'ai,ar uma aulha de 21 aue <H= na !erina$
Adi'ionar a !oluo de 3uito!ano ota a ota <'er'a de 2 ml/295 minuto!= S !oluo de
T**9 a 3ual !e deve en'ontrar !ob aitao man?ti'a 'on!tante <200 r$"$m9
velo'idade m&nima da "la'a de aitao da aula=$ 2 aluno deve ter o 'uidado de
manter uma di!tAn'ia de 10 'm entre a e,tremidade da aulha e a !u"er%&'ie da
!oluo de T**$ 2b!ervar a %ormao de mi'rorAnulo!$ Bero aitada! F !olu#e! de
'ada ve.$
A"+! a adio da totalidade da !oluo de 3uito!ano9 manter o! mi'rorAnulo! de
/B/T** em aitao no meio de "re"arao durante )0 minuto! a 25K2L/$
Riltrar "or ravidade9 u!ando "a"el de %iltro "reviamente humede'ido "ara tubo! de
en!aio devidamente identi%i'ado!$
>edir o volume do %iltrado e uard(1lo "ara "o!terior do!eamento da 2MA$
Lavar a! "art&'ula! no %iltro 'om um Ya'to de (ua de!tilada$
/olo'ar a! "art&'ula! entre dua! %olha! de "a"el de %iltro "ara remover o e,'e!!o de
(ua "re!ente S !ua !u"er%&'ie$
Rator A
Rator Z
0 1 2
0 00 01 02
1 10 11 12
2 20 21 22
15
Be'ar a! "art&'ula! S tem"eratura ambiente$ *e!ar a! "art&'ula!$
A'ondi'ionar a! "art&'ula! de 3uito!ano !e'a! num %ra!'o de vidro ti"o CC9 rolhado e
devidamente rotulado$
#9 5RE5ARA*+O 7AS 5ART:CULAS )ABIAS (CONTROLO)
>edir )0 ml de uma !oluo de T** <1P <m/v=9 "H 795= "ara um 'o"o de "re'i"itao
de 50 ml$
>edir F ml9 da !oluo de 3uito!ano de *> m?dio e de 1$5P de 'on'entrao9 'om
uma !erina$
En'ai,ar uma aulha de 21 aue <H= na !erina$
Adi'ionar a !oluo de 3uito!ano ota a ota <'er'a de 2 ml/295 minuto!= S !oluo de
T**9 a 3ual !e deve en'ontrar !ob aitao man?ti'a 'on!tante <200 r$"$m9
velo'idade m&nima da "la'a de aitao da aula=$ 2 aluno deve ter o 'uidado de
manter uma di!tAn'ia de 10 'm entre a e,tremidade da aulha e a !u"er%&'ie da
!oluo de T**$
A"+! a adio da totalidade da !oluo de 3uito!ano9 manter o! mi'rorAnulo! de
/B/T** em aitao no meio de "re"arao durante )0 minuto! a 25K2L/$
Riltrar "or ravidade9 u!ando "a"el de %iltro "reviamente humede'ido "ara um 'o"o
devidamente identi%i'ado$
Huardar o %iltrado "ara "o!terior do!eamento da 2MA$
5ARTE III & CARACTERIBA*+O F:SICO&?U:MICA 7AS 5ART:CULAS
7E ?UITOSANO
19 O3serMaPQo ma1ros1X201a e m01ros1X20a
2! aluno! devero ob!ervar a! 'ara'ter&!ti'a! ma'ro!'+"i'a! da! "art&'ula! ao lono da
!ua "re"arao9 "ro'edendo nomeadamente ao rei!to do! "arAmetro! 3ue !e !euem:
/ara'teri.ao da %orma <a'i'ular9 'olunar9 lamelar9 em lAmina9 tabular ou
i!om?tri'a=$
15
2b!ervao de "art&'ula! i!olada! ou a!!o'iada! <rau! de a!!o'iao lamelar9
areado9 alomerado9 'onlomerado9 e!%erulite ou dru!a= em !u!"en!o no meio de
"re"arao$
Alterao do a!"eto <tran!"arente9 tran!lG'ida ou o"a'a= ao lono do tem"o de
reti'ulao$
/a!o !eYa ne'e!!(rio9 "ro'eder S 'on%irmao da! ob!erva#e! ma'ro!'+"i'a! utili.ando
o mi'ro!'+"io +ti'o9 'on%orme de!'rito no "onto 3ue !e !eue <'ara'teri.ao do
tamanho da! "art&'ula!=$
2$ Cara1ter0VaPQo .o taman4o .as 2artR1!"as (#9Y9%Z9 M01ros1o20a Xt01a .a
Farma1o2e0a 5ort!>!esa [ K144L):
E!'olher 20 "art&'ula! ao a'a!o ma! re"re!entativa! da di!tribuio ranulom?tri'a do
material$ >ontar a! "art&'ula! numa lAmina de vidro lim"a e e,aminar ao mi'ro!'+"io
+"ti'o 'om a obYe'tiva de 4f$ ; im"ortante re"artir a! "art&'ula! na lAmina de %orma
di!"er!a tornando "o!!&vel di!tinuir individualmente 'ada uma da! "art&'ula! a
'ara'teri.ar$
De'orrer ao mi'r+metro da o'ular <K50m= "ara medir o tamanho da! "art&'ula!9
de%inindo o tamanho da! "art&'ula! e!%?ri'a! "elo diAmetro9 en3uanto 3ue o tamanho
da! "art&'ula! irreulare! deve !er a'om"anhado de uma in%ormao 'om"lementar
relativamente S %orma a"re!entada "ela "art&'ula <diAmetro de Reret=$
Determinar o valor m?dio da! 20 "art&'ula! ob!ervada!9 o 3ual 'on!tituir( o
diAmetro m?dio da "o"ulao de "art&'ula! em 'au!a$
%9 7eterm0naPQo .a 1a2a10.a.e .e 1ar>a
)$1$ *re"arao da 'urva de 'alibrao a utili.ar no do!eamento de 2MA:
*re"arar uma !oluo me de 2MA 'om 'on'entrao de ) m/ml9
utili.ando o !obrenadante obtido a3uando da "roduo da! "art&'ula! de /B/T**
va.ia! <'ontrolo=$
E%e'tuar dilui#e! a "artir da !oluo anterior de modo a obter !olu#e! de
2MA a 195 m/ml9 1 m/ml9 095 m/ml9 094 m/ml e 09) m/ml <ateno u!ar o
!obrenadante 'ontrolo "ara a! dilui#e!=$
16
Ler a ab!orv8n'ia de 'ada uma da! !olu#e! de 2MA "re"arada! num
e!"e'to%ot+metro no !eu 'om"rimento de onda <= m(,imo de ab!oro <270 nm=$
>edir a ab!orv8n'ia do! %iltrado! obtido! "ara 'ada um do! lote! de "art&'ula! em
e!tudo <c 270 nm=$ -tili.ar o !obrenadante da! "art&'ula! va.ia! <'ontrolo= 'omo
bran'o$
Determinar a 'on'entrao de "rote&na no !obrenadante "ela lei de Lambert-Beer$
E,"re!!ar a e%i'i8n'ia de a!!o'iao <EA= "ela ma!!a de BA en'a"!ulada "or
milirama de "art&'ula! !e'a!:
100 <P=
=
SA total Massa
te sobrenadan no SA Massa SA total Massa
EA
A 'a"a'idade de 'ara <//= !er(:
100 <P=
=
partculas Massa
te sobrenadan no SA Massa SA total Massa
CC
17
Tra3a"4o 5r6t01o Z
5RE5ARA*+O 7E )<RIOS LOTES 7E GEL 7E CAFE:NA
INTRO7U*+O
De%inio de Hel
/la!!i%i'ao do! aente! eli%i'ante!
Deoloia
/0 do! Hele!
DGEL 7E CAFE:NAF
Const0t!0ntes Massa (-)
/a%e&na )
Hidro,i"ro"ilmetil'elulo!e 2
Etanol F5L 10
Iua "uri%i'ada 3$b$"$ 100
5ROCE7IMENTO
5RE5ARAR #', G 7E GEL
1$ Di!!olver a 'a%e&na em 200 ml de (ua "uri%i'ada 3uente$
2$ Di!"er!ar o "ol&mero na !oluo anterior$ -tili.ar uma da! o"#e!: -ltra1Turra,9
aitador de h?li'e ou aitador me'Ani'o$
)$ Adi'ionar o etanol e aitar$
4$ /om"letar 'om (ua "uri%i'ada at? 250$
ALTERA*8ES \ TECNICA
2utro! vi!'o!ante!: /arbo"ol F)4@ /arbo,imetil'elulo!e !+di'a$
Aente! "romotore! de "ermeao: mentol9 bi!abolol
CONTROLO 7E ?UALI7A7E
1= Avaliar o! 'ara'tere! oranol?ti'o!$
2= Determinar a reoloia do el em vi!'o!&metro de ZrooE%ield utili.ando uma aulha
ade3uada S vi!'o!idade e!"erada$
)= Determinar o "H$
)= E%etuar o do!eamento da !ub!tAn'ia ativa$
1F
Tra3a"4o 5r6t01o [
A)ALIA*+O IN VITRO 7A 5ERMEA*+O CUT]NEA 7O GEL 7E
CAFE:NA
A)ALIA*+O IN VITRO 7A 5ERMEA*+O CUT]NEA
2! e!tudo! de "ermeao t8m 'omo obYetivo determinar o "er%il 'in?ti'o da !ub!tAn'ia
em an(li!e9 o 3ual re%lete a! varia#e! da 'on'entrao ao lono do tem"o a!!im 'omo a
di%u!o atrav?! da "ele$ E!te ti"o de e!tudo! reali.am1!e 3uando !e "retende avaliar a
entrada em 'ir'ulao da! !ub!tAn'ia!9 nomeadamente durante o "ro'e!!o de
de!envolvimento de %ormula#e! t+"i'a! e "ara avaliao da to,i'idade a"+! e,"o!io
"or via 'utAnea <Zo'E - et al9 2004=$
/omo a %ormulao de!envolvida ne!te trabalho !e de!tina a uma a"li'ao t+"i'a
"retendeu1!e avaliar 3ual o "er%il de "ermeao e 3ual a 'on'entrao de %(rma'o 3ue
atrave!!a a barreira$ *ara e!te e%eito utili.aram1!e '?lula! de di%u!o de Rran. 3ue !o do!
!i!tema! mai! laramente u!ado! no! e!tudo! de "ermeao 'utAnea `in vitro e !o
relativamente !im"le!$ E!ta! '?lula! !o 'on!titu&da! "or doi! 'om"artimento!9 o
'om"artimento !u"erior ou dador e o 'om"artimento in%erior ou re'etor 3ue e!to
!e"arado! "or uma membrana$ A %ormulao a e!tudar dever( !er a"li'ada no
'om"artimento dador em 'ima da membrana e a %a!e re'etora 'olo'ada no 'om"artimento
re'etor onde 'onta'ta diretamente 'om a !u"er%&'ie in%erior da membrana$
5ROCE7IMENTO
2 e!tudo da 'ed8n'ia `in vitroa da 'a%e&na "ela! %ormula#e! de!envolvida! !er(
reali.ado 'om re'ur!o a '?lula! verti'ai! de di%u!o de Rran. de %lu,o e!t(ti'o em vidro$
2 volume do 'om"artimento re'etor ? de a"ro,imadamente 15690 mL9 'om uma (rea de
di%u!o de 295 'm2$
20
Fase re1etora: A !eleo da %a!e a utili.ar no en!aio de 'ed8n'ia deve ba!ear1!e na
!olubilidade da !ub!tAn'ia ativa$ A!!im9 uma ve. 3ue a 'a%e&na ? !olGvel em (ua9 o"tou1
!e "or utili.ar a (ua 'omo %a!e re'e"tora$
Mem3rana: Titrato de 'elulo!e$ /ortar a membrana e ativar 'om miri!tato de i!o"ro"ilo
ante! de !er 'olo'ada no !i!tema9 durante )0 minuto!$
Fase .a.ora: *ara o e!tudo `in vitroa da 'ed8n'ia da !ub!tAn'ia ativa "or 'ada uma da!
%ormula#e!9 utili.ou1!e 'er'a de 2 de amo!tra <%a.er o en!aio em 2 '?lula! "or
%ormulao=$
Tem2erat!ra .o ensa0o: A tem"eratura da %a!e re'etora deve !er de 'er'a de )2K1L/9
durante todo o en!aio9 "or !er e!ta a tem"eratura da "ele humana$ A!!im9 ante! de !e
"ro'eder ao en'himento da! '?lula! de di%u!o 'om a %a!e re'etora9 e!ta deve !er
"reviamente a3ue'ida num banho termo!tati.ado9 a )6L/9 'om o intuito de !e manter a
tem"eratura re'omendada <)2K1L/= no interior do 'om"artimento re'etor$ A"+! a
montaem da! '?lula! e!ta! !ero mantida! no banho termo!tati.ado a )6L/ durante todo
o en!aio$
Re1o"4as:
Detirar uma al&3uota de 1$5 ml atrav?! do brao da '?lula ao! !euinte! tem"o! <intervalo
%le,&vel=: 159 )09 509 659 F09 120 minuto! <diluir a "artir da 1:h !e ne'e!!(rio em 112 ml
(ua= "ara tubo! de en!aio devidamente identi%i'ado!$
A"+! 'ada amo!traem9 o me!mo volume 'om %a!e re'etora deve !er re"o!to$ Ler a!
ab!orv8n'ia! de!ta! amo!tra! a 272 nm$
Monta>em .o s0stema
1$ /olo'ar a membrana9 "reviamente hidratada9 !obre o 'om"artimento re'etor$
2$ /olo'ar o 'om"artimento dador !obre o 'om"artimento re'etor 'om a membrana e
vedar a unio do! doi! 'om"artimento! utili.ando *ara%ilmg$
21
)$ Cntrodu.ir um "e3ueno maneto no 'om"artimento da %a!e re'etora de 'ada '?lula9 de
%orma a "o!!ibilitar a aitao man?ti'a 'ont&nua de!ta %a!e9 durante todo tem"o do
en!aio <!imulao da 'ir'ulao !anu&nea=$
4$ 2 'om"artimento re'etor !er( 'uidado!amente "reen'hido 'om a %a!e re'etora
evitando1!e a in'or"orao de bolha! de ar na inter%a'e membrana1%a!e re'etora <medir o
volume de %a!e re'e"tora=$
5$ /olo'ar a amo!tra <e2= a anali!ar no 'om"artimento dador9 !obre a membrana9 e
rei!tar rioro!amente a !ua ma!!a$
6$ /olo'ar a! '?lula! num banho termo!tati.ado <*re'i!term Bele'tag 1'om 'abea de
a3ue'imento hulabog= <)6L/=9 onde !ero mantida! !ob aitao <*la'a de aitao
modelo >ultimati' FB * Bele'tag= durante todo o en!aio$
?UANTIFICA*+O
A 3uanti%i'ao da 'a%e&na na! al&3uota! re'olhida! ao lono do en!aio no 'om"artimento
re'etor !er( %eita "elo m?todo de -M$
C!rMa .e Ca"03raPQo .a Ca/eRna:
1$ *re"arar uma !oluo me de 'a%eina 2m/ml em (ua <e,em"lo: 100m de 'a%e&na
em 50ml@ a3uea !e ne'e!!(rio=$
2$ Diluir e!ta !oluo 1 "ara 100 ml <20/ml=$
)$ A "artir da !oluo "re"arada em 29 "re"arar !olu#e! 3ue 'ontenham: 19 29 49 109 15
%/ml$
4$ -tili.ar o e!"e'tro%ot+metro "ara determinar a ab!orv8n'ia de 'ada uma de!ta!
!olu#e! a 272 nm$
RESULTA7OS:
Dei!tar o! re!ultado! obtido!$
De"re!entar ra%i'amente o! re!ultado!$
22