Practica #2

AO DE LA INVERSIN PARA EL DESARROLLO RURAL Y LA SEGURIDAD
ALIMENTARIA

FACULTAD: Ingeniera
E.A.P: Agroindustria
ASIGNATURA: Microbiologa General
TEMA: Primera Prctica:

Preparacin de Medios de Cultivos
CICLO: IV
DOCENTE: Blgo. Mblgo. Eterio Alva Muoz
ALUMNO:

Pumayalla Briceo Germain

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
INGENIERA AGROINDUTRIAL
MICROBIOLOGA GENERAL

Blgo. Mblgo. Eterio Alva Muoz Pgina 1

I. INTRODUCCIN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en
concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten
el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en
el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin,
preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de
microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que
pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente
para preparar un medio slido se parte de un medio lquido al que se le
aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Los
medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por
sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son
usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras
sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las
cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o
sintticos: son los medios que tienen una composicin qumicamente
definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en
trabajos de investigacin.
Un medio de cultivo est constituido por una mezcla de agua y
sustancias orgnicas e inorgnicas, los que en conjunto proporcionan
los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los
microorganismos. La composicin de los medios de cultivo vara en
funcin de: a) grupo microbiano que se pretende estudiar, b)
complejidad qumica, c) estado fsico, y d) aplicacin.


II. OBJETIVOS

- El objetivo de la presente prctica es aprender a preparar correctamente
los principales de medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de
microbiologa, como instrumentes de suma importancia en la
dignosticacin de bacterias patgenas dentro de los individuos.
Asimismo, conocer los diferentes tipos de cultivo, su calcificacin y su
importancia en la diagnosticaran.
- Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el
desarrollo de los microorganismos in vitrio
- Preparar medios de uso general en laboratorio
- Conocer los nutrientes de casa medio preparado y su funcin que ejerce
cada uno.
- Identificar colonias bacterianas en forma macroscpica.

III. MARCO TEORICO
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se
han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.


La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares
en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base
de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a
la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la
sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en
pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-
positivas).



CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.
1. Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia
inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las
reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones
de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la
preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo
provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios
es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade
a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales
como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.


Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2. consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que
muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.
3. presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones
atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse
a cualquiera de las citadas condiciones.



4. condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas
en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas
en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de
agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y
evitar as que se deseque el medio.
5. Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que
en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de
los microorganismos fotosintticos.
6. pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No
se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no
impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar
sus procesos metablicos normales.
7. Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre
15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o
incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los
patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos,
alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios.



8. Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir
el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en
dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).
LOS REQUERIMIENTOS NECESARIOS PARA
UN CULTIVO DE BACTERIAS SON:

Medio de carbono.
Presencia o ausencia de oxgeno.
Atmsfera adecuada.
Agar-agar.
Para un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un
gel coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y
que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas,
en concreto de miembros orientales del gneroGelidium. Se utiliza como
agente solidificante en la preparacin de dulces, cremas y lociones, as como
en las conservas de pescado y carne; para texturizar y emulsionar los helados
y postres congelados; para clarificar, durante el proceso de fabricacin del vino
y la elaboracin de la cerveza; y tambin para dar apresto (almidonar) las telas.
Adems, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve
por el efecto de las sales, ni se consume por la accin de la mayora de los
microorganismos.
El agar se extrae de las algas marinas hacindolas hervir. Posteriormente, el
producto resultante se deja enfriar y secar, y al final se solidifica en pastillas o


en escamas. En un principio se llam agar-agar, un trmino que se utiliza en
Malasia para denominar a un alga local.
Pero existen diferentes tipos de agar de acuerdo a las especificidades que
cada uno tenga, sin embargo cada tipo de agar debe de cumplir con los
requerimientos:
Fuente de energa.- Las bacterias pueden ser fottrofas o quimiottrofas. Las
fotottrofas absorben energa del sol y las quimiottrofas de compuestos
orgnicos.
Fuente de carbono.
Fuente de nitrgeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrgeno atmosfrico a
travs de las protenas o por la degradacin de aminocidos o pptidos.
Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales
(P).
Vitaminas.
Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorcin de los
nutrimentos.
Tambin requiere de los requerimientos nutricionales ptimos para su
desarrollo:
Protenas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran
disponibles en el comercio, preparadas por digestin parcial de carne con
enzimas peptdicas; consisten en polipptidos, dipptidos y aminocidos.
Carbohidratos.- Sumistran carbono para la sntesis, y adems su fermentacin
libera energa utilizable en el metabolismo.
Factores accesorios de crecimiento.- Son tambin requerimientos por
algunas bacterias. Entre ellos estn las vitaminas del complejo B; estas
suministran enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de
sintetizar otros factores necesarios para algunas bacterias son obtenidos de los
nutrimentos ms complejos.
Sales minerales.- Elementos como K, Ca, Na, etc.; tambin son requeridas por
algunas bacterias en su desarrollo.


Atmsfera.- Algunos microorganismos precisan oxgeno para su desarrollo,
otros son incapaces de reproducirse en presencia de este elemento, en cambio
otros organismos pueden crecer en una atmsfera con oxgeno, logran
sobrevivir y crecer sin el, se les llama anaerobios facultativos.
Presin osmtica.- Las clulas pueden encogerse y ser destruidas en
soluciones hipertnicas; inversamente se rompen por entrada de agua, en las
soluciones hipotnicas.
Temperatura.- La temperatura para la cual los organismos microbianos crecen
mejor, es considerada como temperatura ptima.
Luz.- La mayora de las bacterias se desarrollan mejor en ausencia de luz. La
luz ultravioleta puede ser letal.
Reaccin.- La mayora de las bacterias crece en un medio ligeramente alcalino
(pH 7.2 a 7.6). Los hongos crecen con facilidad en los medios cidos (pH 5).
Actualmente existen diferentes formas y mtodos de cultivar en el mercado, ya
que pueden cultivarse en placas, tubos etc.
Mtodo de placas.- El propsito de usar medios slidos pulverizados en cajas
petris, consiste en inocular cantidades sucesivas menores de material en el
medio, de manera que en algn tiempo sean colocados en una capa tan
delgada que les permita el crecimiento de colonias individuales aisladas.
Medios inclinados.- Este tipo de cultivo es empleado principalmente para
resembrar cepas aisladas, sea para identificacin interior o para basecultivo.
Cultivos por agitacin.- Este medio de cultivo es empleado particularmente en
el aislamiento de anaerobios esporulado. Se calienta un tubo o botella a 50C y
luego se deja enfriar.
Cultivos por picadura.- En este mtodo el material de laboratorio es colocado
en un alambre recto e introducido al medio. El mtodo puede ser tambin
empleado para conservar los cultivos patrn.
Cultivos lquidos.- Al inocular en un medio lquido como el agua con peptona o
el caldo con tioglicolato, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por
frotamiento contra la pared del tubo.
De acuerdo a las especifidades de cada medio pueden clasificarse en:


Medios bsicos.- Son los medios ms simples, contienen extracto de carne,
peptona, sal y agua. El extracto o infusin de carne proporciona aminocidos,
vitaminas, sales y pequeas cantidades de elementos como C, N y otros
elementos. Ejem: Agar de infusin, Agar cerebro-corazn.
Medios enriquecidos.- Son aquellos medios bsicos que han sido
complementados con lquidos corporales, vitaminas especficas, aminocidos,
protenas y otros nutrientes. Ejem: Agar sangre y agar chocolate.
Medios selectivos.- Son medios de agar bsico, enriquecidos agregndole
ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayora de las bacterias y
permitiendo el desarrollo de unas cuantas. Ejem: Agar con sangre y bilis al
40%, Agar sal y manitol.
Medios diferenciales.- Son medios a los que se les han agregado ciertos que
reaccionan con un tipo especfico de bacterias. Ejem: Agar de McConckey,
Agar EMB, Agar XLD.
Medios de enriquecimiento.- Son los medios que contienen alguna sustancia
inhibidora por lo que se crea un medio favorable para lmites mas estrechos de
bacterias. Ejem: Agar S.S., Agar de Lowensten-Jensen.
Medios especiales.- Son los medios para comprobar una o ms caracterziticas
bioqumicas. Ejem: Agar TSI, Agar CIT, Agar LIA, Agar MIO.
METODOS:

Caldo Comn:
Medio de cultivo lquido, compuesto principalmente de extracto de carne, NaCl,
peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin
de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin.

Agar Comn:
Medio de cultivo semislido, se preparan a partir de los medios lquidos,
agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para
preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad
de las bacterias


Agar Sabouraud:
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo). En el
medio de cultivo, la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de
cloranfenicol y el pH cido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el
crecimiento de hongos y leva- duras. El agar es el agente solidificante. Puede
ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.



IV. MATERIALES

Reactivos para: Agar comn, Agar sabouraud
Peptona
Cloruro de sodio (NaCl)
Extracto de carne
Glucosa
Agua destilada
Agar Agar

Material de vidrio
Matraz Erlenmeyer
Probeta

Equipo
Balanza
Autoclave
Cocina elctrica
Otros
Algodn
Papel
esptula


V. PROCEDIMIENTO

Agregar 1g. de Agar.
Aadimos 0.25g. de Pectona
Agregamos 0.25g. de Nacl.
luego, agregamos 0.15g.
deextracto de carne.
finalmente se tapa el matraz
y se calienta para que sea
asimible a los microbios.


Agregar 1g. de Agar.
Aadimos 0.5g. de Pectona
Agregamos 2g. de Glucosa.
finalmente se tapa el
matraz y se calienta para
que sea asimible a los
microbios.


VI. DISCUSIONES
1. Segn el manual de microbiologa general de la UNAM, un gel de agar al 1-
2% se licua alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de los 40C,
dependiendo de su grado de pureza.

2. WARAUYA, dice que cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo
necesario para el crecimiento, lo cual vara segn el organismo que se
quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una
fuente de energa y otros factores de crecimiento. Los requerimientos
nutricionales de las bacterias varan desde los sencillos compuestos
inorgnicos de las auttrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de
crecimiento de algunas hetertrofas. Algunos medios, como por ejemplo el
agar nutritivo son capaces de soportar el crecimiento de muchas
bacterias.

3. Raphaell, Mellor nos cuenta que los medios de cultivo contienen distintos
nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas
como la sangre o el extracto de caldo de carne.

4. Lynch, acota que en algunos medios se aaden indicadores de pH que
cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y
se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir
fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo
se realiza en un tubo cerrado.



VII. CONCLUSIONES
1. Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo al porcentaje de
Agar en tres grupos: medios slidos, medios semi-slidos y medios
lquidos.

2. Se concluye que a 42C la sustancia recin empieza a solidificarse.

3. El agar Sabouraud es un tipo de medio de cultivo selectivo que contiene
peptonas. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente
dermatofitos.

4. Por medio de esta prctica al investigar la teora y realizar la preparacin
de un medio de cultivo, se logr la elaboracin adecuada de los mismos,
as como la seleccin apropiada para el uso que se les dar
posteriormente a los medios del mtodo de esterilizacin que eliminara
los restos microbianos que pudiesen haber quedado en el medio de
cultivo ya que si existe alguno de estos, ya no sera adecuado para el
uso que se le pudiera llegar a dar.

5. Se observ (con la teora) que de acuerdo al tipo de bacteria que se
requiera sembrar, ser el tipo de medio de cultivo, esto, ya que cada
bacteria requiere cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus
colonias, adems de que cierto tipo de medios de cultivo, nos pueden
mostrar de acuerdo a su composicin ciertas caractersticas que
presentan determinado tipo de bacterias, ya sea por su pH y que este
sea indicado por los indicadores de los medios o por que reaccione con
ciertos componentes del medio creando colores o formas.



VIII. CUESTIONARIO
Define los siguientes trminos.
1. Elemento traza: Es un compuesto qumico que es necesario en cantidades
nfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiologa de un organismo.
Tambin puede ser referido como micronutriente.

2. Macronutrientes: Son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte
de la energa metablica del organismo. Los principales son glcidos,
protenas, y lpidos. Otros incluyen alcohol y cidos orgnicos.

3. Micronutrientes: Son sustancias que el organismo de los seres vivos
necesitan en pequeas dosis. Son indispensables para los diferentes
procesos bioqumicos y metablicos de los organismos vivos y sin ellos
moriran. Algunos de los ms importantes micronutrientes son el yodo, el
hierro y la vitamina A. Existen otros micronutrientes como el zinc, el cido
flico, el calcio y todas las vitaminas y minerales.

4. Reactivo grado reactivo o qumicamente puro: Son aquellos cuyo grado
de impureza es mnimo, son utilizados en laboratorios.

5. Peptona: Son una variedad de hidrolizados protenicos derivados de
casena, carne y vegetales, que en su presentacin final ofrecen una fuente
efectiva de nitrgeno y carbono en otros nutrientes. En formulaciones
adecuadas estimulan y promueven el crecimiento bacteriano.

6. Cloruro de sodio: Es un compuesto inico formado por un catin sodio
(Na+) y un anin cloruro (Cl-), y como tal, puede reaccionar para obtener
cualquiera de estos dos iones. Como cualquier otro cloruro inico soluble,
precipita cloruros insolubles cuando es agregado a una solucin de una sal
metlica apropiada como nitrato de plata.


7. Extracto de carne: Es un caldo de carne muy concentrado, normalmente
de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para
elaborar consoms y sopas.

8. Glucosa: Es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6. Es una
hexosa, es decir, contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es,
el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula (es un grupo aldehdo).
Es una forma de azcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel.

9. Agar: Es una gelatina vegetal de origen marino. Qumicamente el agar es
un polmero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla
heterognea de dos clases de polisacridos: agar pectina y agarosa. El
agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de
bacterias y hongos, pero no para virus (aunque los virus bacterifagos
crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar).

10. Autoclave: Es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un
cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una
reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su
construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada
en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas
superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor
produce la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas
las esenciales para la vida y la reproduccin de stos, cosa que lleva a su
destruccin.



Agar; peptona; cloruro de
sodio; extracto de carne
Agua destilada
50ml
(Baln de fondo plano)
(Todo lo pesado)
(El baln de fondo plano
con algodn)
Pesar
Colocar
AADIR
Mezclar
Sellar
b. Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir
en esta prctica

HAGAR COMUN

1g; 5g; 26g; 16g


Pesar
Colocar
AADIR
Mezclar
Sellar
Agar Sabouraud

-Procedemos a calentar los tres balones de fondo plano, con la
intencin de poder disolver totalmente los productos mezclados,
para ello calentamos en la cocina elctrica hasta notar la presencia
de burbujas en la superficie del cultivo (no hervir)
Agar; peptona; glucosa
1g; 5g; 2.5g
Agua destilada
50ml
(Baln de fondo plano)
(Todo lo pesado)
(El baln de fondo plano
con algodn)


IX. BIBLIOGRAFA
1. Diagnstico y tratamiento clnicos dados por el laboratorio. John Bernard
Henry. Ed. Salvat
2. Mtodos de laboratorio.Lynch, Raphaell, Mellor, Spare, Inwood.Ed.
Interamericana.
3. Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de
Mtodos Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia. Universidad
Central de Venezuela
4. Dugas Beverly Tratado de Enfermera Prctica Nueva Editorial
Interamericana Mxico, 1999.
5. Biotecnologa Vegetal (cultivo de tejidos, manual )Gonzalez, Cruz,
Camarillo, Silos. 2000. SEP. 133p.
6. La Ingeniera Gentica y sus Aplicaciones. Pellon. Acribia. 1986. Mexico.
237 p.
7. Introduction to Biotechnology and Genetic Engineering. Nair. Infinity
Science Press. India. 2008. 791 p

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