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4.

O princpio de Hardy-Weinberg

Em 1908 G. H. Hardy, matemtico ingls, e o mdico alemo Wilhelm Weinberg
propuseram que as populaes de seres vivos diplides se constituiriam em sistemas
hereditrios sujeitos ao mendelismo. Mostraram que a partir das freqncias allicas de um
loco podemos predizer as freqncias genotpicas se os acasalamentos fossem aleatrios. De
l para c foram cunhados diversos nomes para esta proposta. Foram adicionados critrios
evolutivos a sua enunciao e um tratamento matemticos extenso. Entre os nomes
destacamos: Teorema de Hardy-Weinberg, Equilbrio de Hardy-Weinberg. Princpio de
Hardy-Weinberg, Lei de Hardy-Weinberg. De todos eles o mais comum o Equilbrio de
Hardy-Weinberg o de aplicao mais errnea de todos.
Dadas as condies evolutivas exigidas apenas uma populao terica poderia satisfaz-
las, pois se trata de um conceito ad hoc, criado para isto. Nestas condies o melhor termo
nos parece Princpio de Hardy-Weinberg. os demais nomes podem ser utilizados, mas nem
sempre correspondem ao uso que est sendo feito do conceito. O teorema exigiria uma
demonstrao e assim, nessa populao terica, esse teorema foi demonstrado ad nauseam,
at que os biologistas se convencessem de que era preciso muita matemtica para entend-lo.
A lei exigiria a demonstrao de um estado natural estvel, reconhecido e invarivel dentro
de certos limites aceitveis, mas no subsistiria sem as suposies evolutivas. O principio
pode ser ajustado coerentemente de modo a representar uma situao real se ajustando ao
mnimo de suposies aceitveis. Uma discusso extensa destes usos no caberia aqui, mas
interessa a todos aqueles que desejam facilitar o entendimento da aplicao da matemtica
aos princpios biolgicos.
Neste texto trataremos sempre do Princpio de Hardy-Weinberg como princpio
descartando os demais conceitos como imprprios ou inconvenientes.

4.1. A proposio de Hardy e Weinberg

O Princpio de Hardy-Weinberg comea com a determinao das freqncias allicas em
uma populao. Como estes alelos esto em um loco dificilmente os alelos sero detectados
antes da deteco dos gentipos. Assim quando calcularmos as freqncias dos alelos de um
loco j teremos as freqncias dos gentipos encontrados. Com estes dados j poderemos
responder a 1 pergunta: Como poderemos descrever geneticamente uma populao? A
resposta simples: tome um ou mais locos como referencia e descreva suas freqncias. Isto
suficiente. claro que podemos adicionais mais elementos a esta resposta, mas ela
suficiente. Exemplo:

Populao de Pernambuco. Loco de ccr5. Alelos: ccr5 e ccr5. Freqncias allicas
0,9582 e 0,0418, respectivamente.

Com isto j sabemos que este loco na populao de Pernambuco tem determinadas
freqncias, porcentagens, probabilidades. claro que a estas, poderemos adicionar outras
informaes, melhorando o quadro em relao a populao ou ao loco. Mas fica uma
indagao primeira. Como ns j sabemos as freqncias genotpicas, pois foram os
gentipos que identificamos primeiro: como poderemos associar as freqncias allicas s
freqncias genotpicas que j conhecemos? Esta a grande necessidade nesta etapa do
processo de caracterizao gentica de uma populao.
Considere um loco com dois alelos A e a com freqncias p e q. Quando os gametas
carregando estes alelos se encontrarem produziro zigotos AA, Aa e aa. A formao destes
indivduos se dar da seguinte maneira (ver tabela 4.1.1):

Tabela 4.1.1 Formao dos
indivduos pela juno dos
gametas.
p q
A a
p A
AA
p
2

Aa
pq
q a
aA
qp
aa
q
2


Observe que podemos dizer que A se encontra com A para formar AA com
probabilidade p p
=
p
2
. p a probabilidade de A e p
2
a probabilidade de AA. Do mesmo
modo se formaro Aa e aa com probabilidades 2pq e q
2
. As probabilidades p
2
, 2pq e q
2

descrevem as freqncias genotpicas quando A e a se encontram aleatoriamente. Observe, no
entanto que as freqncias genotpicas da populao em estudo j so conhecidas e p
2
, 2pq e
q
2
descrevem outras freqncias genotpicas. Quais? Estas freqncias so as freqncias
genotpicas de uma populao terica criada a partir das freqncias allicas da
populao real.
Vamos exemplificar com o loco ccr5. As freqncias allicas no loco, na populao
de Pernambuco so: 0,9582 para ccr5 (p) e 0,0418 para ccr5 (q) calculadas da Tabela
3.2.2. As freqncias genotpicas reais da populao de Pernambuco so as mostradas na
tabela:

Tabela 4.1.2. Freqncias genotpicas na populao de Pernambuco para o loco ccr5 nas
populaes, real e terica.
Populao N ccr5/ccr5 ccr5/ccr5 ccr5/ccr5
PE 251 233 15 3
Freqncias genotpicas na populao real 0,9283 0,0598 0,0120
Freqncias genotpicas na populao terica
0,9181
p
2

0,0801
2pq
0,0017
q
2

Freqncias Allicas p = 0,9582
q = 0,0418


Concluindo esta apresentao chamo a ateno para o fato de que estamos falando de
duas populaes diferentes. Uma a populao real e a outra a populao terica. As duas
possuem um loco com dois alelos, freqncias allicas e freqncias genotpicas. As
freqncias allicas so as mesmas, mas as freqncias genotpicas so diferentes. Mas a
maior diferena de todas que a populao terica pode respeitar qualquer suposio que
queiramos e a maio delas a suposio de acasalamentos aleatrios. As freqncias
genotpicas da populao terica esto de acordo com a aleatoriedade dos acasalamentos dos
seus indivduos. Esta exigncia seria completamente descabida para uma populao natural.
Esta a maneira de relacionar as freqncias allicas com as freqncias genotpicas atravs
de uma populao terica levando em conta certas suposies bsicas. o que veremos a
seguir.

4.2. O princpio de Hardy-Weinberg

Com as freqncias allicas de uma populao real construmos uma populao terica e
comparamos as duas distribuies de freqncias genotpicas. Fazemos isto porque a
distribuio terica tem propriedades matemticas que nos permitem tirar concluses
importantes. Se a populao real for semelhante populao terica poderemos estender as
concluses para a populao real e compreender seu comportamento gentico. importante
compreender aqui que, da em diante, a populao terica ser a representante da populao
real em todos os estudos futuros pertinentes.
Para compararmos duas populaes iniciamos verificando suas diferenas quanto as
freqncias genotpicas. Elas sempre existem, mas seu somatrio ser sempre zero. Para
contornar isto elevamos cada diferena ao quadrado e o somatrio agora ser diferente de
zero. Este nmero, em geral tende a ser muito grande e varia muito de populao para
populao. Para evitar seu crescimento desmedido dividimos cada quadrado pela freqncia
terica e assim normalizamos os resultados de modo a produzir uma distribuio que tem
algumas propriedades teis. Partes destas propriedades so descritas como suposies. Na
literatura sobre gentica de populaes estas suposies so:
Os organismos so diplides
A reproduo sexuada.
As geraes so no-superpostas.
O gene em considerao tem dois alelos.
As freqncias allicas so idnticas nos machos e nas fmeas.
Os acasalamentos so aleatrios.
O tamanho da populao muito grande (em teoria, infinito). Com tal
tamanho a deriva gentica negligencivel.
A migrao negligencivel.
A mutao pode ser ignorada.
A seleo natural no afeta os alelos em considerao.

Estas suposies so apresentadas como necessrias para apoiar o Princpio de Hardy-
Weinberg (ver Hartl e Clark, 1997 e outros textos sobre o assunto). Pelo que vimos at aqui
podemos dizer que as freqncias genotpicas de uma populao podem ser descritas como a
soma indicada do quadrado de suas freqncias allicas se os acasalamentos forem aleatrios,
sem referencia s demais suposies acima. Neste caso o Princpio de Hardy-Weinberg pode
ser enunciado assim:

Dada uma populao real qualquer e um loco nesta populao, com qualquer nmero de
alelos, suas freqncias genotpicas sero descritas pelo quadrado da soma indicada de suas
freqncias allicas.

Matematicamente:
(p + q)
2
= (p
2
+ 2pq + q
2
) onde p e q so freqncias allicas.

O afastamento destas condies, ou seja, se as freqncias genotpicas das duas
populaes forem diferentes, os acasalamentos, nesta populao, no so aleatrios.
importante notar que aquelas suposies citadas acima no esto relacionadas com o
Princpio de Hardy-Weinberg, mas sim com a necessidade de estender este principio para
explicar outros fenmenos. No necessria qualquer meno ao tamanho populacional, mas
a exigncia de organismos diplides procede. De agora em diante chamaremos a populao
terica de populao terica associada.
Faremos agora a 3 pergunta: Como sabermos se uma distribuio genotpica de uma
populao real difere significativamente de sua populao terica associada?

Como falamos antes, comparamos suas diferenas. Os grupos sanguneos do sistema MN
nos seres humanos so controlados por dois alelos, M e N. Cada alelo codifica uma molcula
de polissacardeo na superfcie das hemcias e pode ser distinguido por meio de reagentes
qumicos apropriados. Os tipos de molculas so designados M e N respectivamente e os
alelos M e N so codominantes, o que quer dizer que se expresso nos heterozigotos. Numa
amostra de 1000 ingleses Race e Sanger (1975) encontraram: 298 M, 489 MN e 213 N. O
calculo da freqncia p de M e q de N e a comparao com a populao terica associada
podem ser realizados como se segue. Na tabela 4.2.1 temos:

Tabela 4.2.1 Avaliao da diferena entre a distribuio genotpica real e a distribuio genotpica terica
associada.
SISTEMA SANGUNEO N MM MN NN p q
Populao real (O) 1.000 298 489 213 0,543 0,458
Freqncias genotpicas na populao real 0,298 0,498 0,213
Freqncias genotpicas na populao terica 0,294 0,496 0,209
Populao terica (E) 1.000 294,3 496,4 209,3
Diferena (d) 3,694 -7,387 3,694
d
2
13,644 54,575 13,644
d
2
/E 0,046 0,110 0,065 0,221

O quadrado as diferenas so divididas por E (as freqncias genotpicas tericas
correspondentes) e somadas s parcelas de cada gentipo. O total 0,0639 foi obtido pela
seguinte frmula:

E
E O


=
2
2
) (


Esta a frmula para se calcular o qui-quadrado uma estatstica que avalia diferenas
entre distribuies esperadas e observadas. A distribuio esperada a distribuio de
freqncias genotpicas da populao terica e a distribuio observada a distribuio de
freqncias genotpicas da populao real. o que se v na ltima linha da tabela acima. O
resultado desta frmula comparado com os resultados de uma tabela de qui-quadrado de
referncia. Se o qui-quadrado calculado for menor que o qui-quadrado de tabela podemos
dizer que as diferenas entre as duas distribuies no so significativas e usar a distribuio
terica como se fosse a distribuio real. A partir da a populao terica representar a
populao em estudos futuros. O qui-quadrado de referencia, na tabela do qui-quadrado,
3,841. Qualquer valor menor que este implica a no-diferena entre a populao real e a
terica e aceitamos a distribuio terica como se fosse a real. Esta distribuio terica vai
predizer o quanto acharemos de cada gentipo em amostras futuras.

4.3. Aplicao do princpio de Hardy-Weinberg

Uma aplicao forense.

Um homem que vem de uma dada populao apontado por uma mulher como pai do seu
filho. Antes do uso do DNA em Gentica de Populaes para a determinao de paternidade
a soluo ficava sempre incompleta, pois as provas eram muito difceis de conseguir. Com a
possibilidade de se comparar gentipos da me, do filho e do suposto pai fica mais fcil
resolver o problema. Temos que responder a uma pergunta: Fulano o pai biolgico de
Beltrano? Como o filho tem DNA dos seus pais, separados, em dois conjuntos de
cromossomos ns podemos analisando o DNA do beltrano separar o DNA da me e o do seu
pai biolgico. Depois disto basta comparar o DNA do filho que pertence ao seu pai biolgico
com o DNA do suposto pai. Se houver coincidncia em todos os locos calcula-se a
probabilidade de paternidade. Se no houver coincidncia em todos os locos o suposto pai
dito excludo do grupo dos possveis pais do beltrano. Nestes casos a excluso de
paternidade decisiva. No h como atribuir paternidade a algum que no tem o mesmo
DNA do requerente.
O calculo da probabilidade leva em conta as freqncias allicas no loco e a ocorrncia
dos alelos nos envolvidos. De um modo geral podemos, preliminarmente, definir o ndice de
paternidade como o nmero que representa o quanto a evidencia de DNA favorvel a
paternidade. Os ndices significativos esto acima de 1.000. A probabilidade de paternidade
calculada de forma simples a partir do ndice da seguinte maneira?

1 +
=
IP
IP
P
As probabilidade aceitveis como definidoras da paternidade esto acima de 0,999, isto
conseguido aumentando o nmero de locos examinados. A seguir damos um exemplo de uma
anlise de paternidade para o trio me-filho-suposto pai usando-se dez locos.


LOCO Me Filho (a) SPai AO
Freqncia
do alelo
obrigatrio
ndice de
Paternidade
(IP)
IP
acumulado
CSF1PO 11/11 10/11 10/10 10 0,2819 3,5474 3,55
THO1 6/6 6/7 7/8 7 0,2648 1,8882 6,70
TPOX 8/10 8/9 8/9 9 0,1119 4,4683 29,93
vWA 16/18 16/17 17/18 17 0,1798 2,7809 83,23
D16S539 11/12 11/13 13/13 13 0,1361 7,3475 611,53
D7S820 9/11 11/12 11/12 12 0,1749 2,8588 1.748,23
D13S317 9/14 8/14 8/11 8 0,1048 4,7710 8.340,81
D18S51 12/14 12/14 14/14 14 0,1313 7,6161 63.524,79
D21S11 29/30 29/29 29/29 29 0,2125 4,7059 298.940,19
D8S1179 13/14 13/13 10/13 13 0,2829 1,7674 528.349,58
0,9999981


A anlise da paternidade precisa de freqncias allicas. Na primeira linha verificamos
que o alelo obrigatrio est presente no suposto pai, em homozigose. O ndice de paternidade,
calculado como 1/2p, sendo p a freqncia do alelo obrigatrio, 1,7737 mas como ele
homozigoto a freqncia ser 1/p e fica 3,5474. O ndice de paternidade calculado para cada
loco vai constituir o produtrio:
i
IP . i o nmero da linha onde o IP se encontra. No
nosso caso
i
IP =528.349,58 e a probabilidade de paternidade 0,9999981 o que significa
paternidade praticamente provada. Estas operaes e o resultado se baseiam no fato de
que as freqncias allicas foram calculadas na populao de Pernambuco e a populao se
encontra de acordo com o Princpio de Hardy-Weinberg para os locos analisados.


4.4. Extenso do princpio de Hardy-Weinberg


Quando um loco contiver mais de dois alelos as freqncias genotpicas sero
representadas da seguinte maneira:
j
k i
j i
i
k
i
i k
p p p p p p p

=
=
+ = + + + + 2 ) (
1
2 2
3 2 1
L
Daqui qualquer p pode ser calculado da seguinte maneira:

j
k
j i
i i
p p p p

+ = 2
2

para qualquer alelo.

Lendo a frmula:
A freqncia de qualquer alelo em um loco igual a: o quadrado da freqncia do
homozigoto mais duas vezes o somatrio do produto da freqncia do alelo em questo
pela freqncia de todos os outros alelos.

Observao ao estudante.
Esta definio no uma definio operacional, uma frmula de laboratrio. uma
explicao bsica do principio de Hardy-Weinberg.