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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

CENTRO DE BIOCINCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA
LABORATRIO DE GLICOCONJUGADOS BIOATIVOS I

MANUAL BSICO PARA CUIDADOS


DE ANIMAIS DE LABORATRIO EM
ESPECIAL RATOS DA LINHAGEM
WISTAR

NATAL
JUNHO DE 2010

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NDICE
Prefcio
Cuidados e manuteno dos animais de laboratrio
Ratos
Biossegurana ao cuidar do biotrio
Consideraes finais

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PREFCIO
O objetivo desse manual procurar melhorar as condies com as quais so
tratados nossos animais de experimentao, para que assim possamos obter
resultados cada vez melhores e mais confiveis. Seu contedo trata-se de
recortes provenientes do livro: Princpios ticos e Prticos do Uso de Animais
de Experimentao, produzido pelo departamento de Psicobiologia da
UNIFESP e recomendaes criadas com base em nossa realidade de trabalho
no biotrio de nosso departamento.
Dayse Santos

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CUIDADOS E MANUTENO DOS ANIMAIS DE LABORATRIO
Teoricamente, qualquer ser vivo pode ser utilizado como modelo nas
investigaes cientficas. No entanto, especificamente na rea da Biomedicina,
poucas espcies so escolhidas para tal desempenho. Para ser definido como
animal de laboratrio, a espcie tem que ser criada e produzida em condies
ideais e mantida em ambiente rigorosamente controlado, com conhecimento e
acompanhamento microbiolgico e gentico seguros, obtidos por monitorao
constante.
Animais, sejam eles de laboratrio ou no, so extremamente sensveis
a alteraes externas e necessitam de considerveis modificaes em seu
metabolismo para compensar as variaes do meio externo, que podem
influenciar os resultados das pesquisas. Desse modo, instalaes apropriadas,
equipamentos especializados e manuteno adequada aliados a pessoal
habilitado so essenciais para o bem-estar do animal, bem como para
assegurar a qualidade dos resultados da pesquisas nas quais os animais so
utilizados e a sade e segurana dos pesquisadores envolvidos.
O animal deve ser respeitado como um ser vivo, que sente dor, fome, sede e medo.

GAIOLAS
Rigorosa ateno higiene e preveno de superlotao, em nmero de
gaiolas por sala e animais por gaiola, so extremamente importantes na
reduo dos nveis de amnia que predispe a infeces respiratrias. Existem
evidncias associando a amnia com a exacerbao de problemas
respiratrios, particularmente de infeces por micoplasma no rato.
NOTAS PARA NOSSO BIOTRIO:
- Segundo o centro de Criao de Animais de Laboratrio da Fiocruz, a
quantidade de maravalha necessria para uma gaiola (410 x 340 x 175mm)
contendo ratos de aproximadamente 100g. Aps padronizao feita para o
nosso laboratrio, descobrimos que essa quantidade equivale a um recipiente
de 2L quadrado para sorvete. Essa uma forma de cumprirmos a
recomendao e evitarmos o desperdcio de maravalha. Alm disso,
importante que os cuidadores do biotrio utilizem seu bom senso para a
quantidade de maravalha de acordo com a densidade populacional da gaiola;
- Aps a lavagem as gaiolas devem ser secas com os panos presentes no
biotrio e destinados para isso, caso note que a higiene do pano est
prejudicada, traga-o para o laboratrio e lave-o, deixando de molho em gua
sanitria para que depois o devolva para o biotrio;
- A identificao da gaiola EXTREMAMENTE IMPORTANTE para o bom
andamento das pesquisas. Informaes como: N de Animais, sexo e data de
nascimento SO IMPRESCINDVEIS. Caso tenha alguma dvida, pergunte a
outros estudantes, mas as gaiolas no podem ficar sem essas informaes.
Alm disso, se pretender utilizar os animais para um determinado experimento
interessante que isso seja expresso na identificao da gaiola, pois como

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somos muitos cuidando do biotrio, a ausncia dessa informao pode causar
problemas como a utilizao de animais que j estavam destinados para outro
fim.
Ventilao
A ventilao de considervel importncia em biotrios de ratos devido
alta susceptibilidade desta espcie a doenas respiratrias. Um bom sistema
de ventilao requer manuteno e avaliao constantes, incluindo medidas no
nvel de rudo de equipamentos, ar condicionado e exaustor.
Ventilao deficiente e superpopulao so fatores que facilitam o
desenvolvimento de problemas respiratrios e podem favorecer o
estabelecimento de doenas, bem como levar contaminao por odores de
animais de espcies diferentes.
Umidade e temperatura
Variaes bruscas de temperatura e umidade podem causar estresse,
queda de resistncia e maios susceptibilidade s infeces, acarretando em
problemas respiratrios em animais mantidos em umidade alta e/ou baixas
temperaturas.
A manuteno da umidade e temperatura essencial para a
reprodutibilidade dos resultados.
NOTA PARA NOSSO BIOTRIO:
- comum que os bebedouros para os animais vazem ou abram. Caso
verifique esse acontecimento, lave ou limpe a gaiola imediatamente, tomando o
cuidado para sec-la bem. Lembre-se: a umidade faz mal aos nossos animais.
Rudos
A maioria das espcies de animais tem o sentido da audio bem
desenvolvido; dessa forma, pode-se deduzir que alguns rudos em salas
contendo animais iro perturb-los.
NOTA PARA NOSSO BIOTRIO:
- Procure fazer o mnimo de rudo, no leve equipamentos sonoros para o
biotrio.

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Transporte
Os animais devem ser transportados de uma sala para outra com o
mnimo de perturbao de seu bem-estar. importante lembrar que o
bebedouro deve estar voltado para cima, para evitar que os animais se
molhem, bem como a forrao da gaiola. Animais levados em grupo devem ter
espao suficiente para assegurar sua liberdade de movimento.
Alimentos
O armazenamento de alimentos requer controle rigoroso, como local
seco, com baixa temperatura, escuro e bem ventilado a fim de minimizar a
possibilidade de contaminao e deteriorao.
importante ressaltar que os recipientes de alimentos sejam de fcil
limpeza e desinfeco.
NOTA PARA NOSSO BIOTRIO:
- No utilize a p de lixo do biotrio para pegar a comida e coloc-la nas
gaiolas, afinal de contas, voc no gostaria que em sua casa a p de lixo fosse
utilizada para colocar o feijo em seu prato. Pense nisso!
O hbito natural do rato de coprofagia pode distorcer consideravelmente
a influncia da dieta nos resultados experimentais. Aproximandamente 50 a
65% da produo de fezes de ratos com dietas adequadas podem ser
reingeridas por coprofagia: presumivelmente este comportamento pode ser
aumentado por dietas deficientes.
Hidratao
Os bebedouros devem sempre ser substitudos por outros esterilizados e
preenchidos com gua fresca, em lugar de completar os que esto em uso. A
freqncia da substituio da gua dos bebedouros ajuda a impedir o
desenvolvimento de microoganismos. Assim, quanto maior a freqncia de
troca da gua, menor o risco de doenas. Ressalta-se que todo equipamento
distribuidor de gua requer higienizao freqente e monitoramento peridico
para evitar contaminao bacteriana.
NOTA PARA NOSSO BIOTRIO:
- Esterilizar todos os bebedouros pode ser impraticvel para nossa realidade,
mas a lavagem das garrafas um procedimento simples e importante para
assegurar a sade dos animais. Sempre que as gaiolas forem limpas, os
bebedouros devem obrigatoriamente ser lavados com detergente neutro e
escova para tubos, lembrando que aps a lavagem um enxge minucioso
deve ser feito para evitar que permaneam resduos de detergente nas
garrafas.

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MANIPULAO DOS ANIMAIS
Os animais reagem diferentemente aos estmulos externos e necessitam
de um determinado perodo para se adaptar s condies ambientais. Desse
modo, devem ser manuseados cuidadosamente e todos os fatores externos
serem considerados para assegurar o bem-estar animal e a confiabilidade dos
resultados.
O manuseio precisa ser firme e gentil para produzir um animal dcil e
calmo.
LUMINOSIDADE E EXPERIMENTAO
O estmulo luminoso produz variaes nos nveis hormonais dos
animais, assim, o ciclo reprodutivo de muitas espcies controlado pelo ritmo
circadiano imposto ao animal. Uma determinada dose de uma droga aplicada
em diferentes horrios do dia produz efeitos diferentes. Logo, o horrio para
realizar um experimento deve ser sempre especfico e mantido durante todo o
experimento.
PROCEDIMENTOS ANTI-SPTICOS
Assepsia o conjunto de meios para impedir a penetrao de
microorganismos em local que no os contenha. Procedimentos anti-spticos
incluem no somente esterilizao da rea cirrgica do animal, mas tambm de
toda a sala onde a cirurgia for realizada. O ambiente precisa ser calmo, limpo,
com circulao do menor nmero de pessoas possvel, ausncia de janelas, e
no conter outros animais que no sero operados. A rea a ser operada deve
ser limpa e desinfetada com lcool a 70% ou outros desinfetantes anti-spticos
disponveis, antes e ao final da cirurgia. O algodo ou gaze embebido na
soluo deve ser descartado aps o uso, sendo jamais reutilizado.
Os roedores so animais que possuem sensibilidade olfativa aguada e
podem detectar odor de sangue e outros produtos. Vale enfatizar que, alm do
uso do avental, as mos e os antebraos devem ser lavados e desinfetados
antes e aps a manipulao de animais, bem como as bancadas de trabalho.
SOBRE O USO DO TER ETILICO COMO ANESTSICO
o agente mais comumente utilizado apesar de suas desvantagens,
induzindo salivao excessiva e irritao do epitlio respiratrio. A popularidade
contnua do ter provavelmente atribuda tradio, baixo custo, e fcil
utilizao com o mnimo de equipamento. Certamente de fcil controle,
relativamente seguro, oferece bom relaxamento muscular para procedimentos
de curta durao seguidos de rpida recuperao. Seu uso obviamente tem
atrativos e vantagens para muitos investigadores, para os quais a cirurgia
somente um requerimentos ocasional. Deve-se sempre ter em mente a alta
inflamabilidade e natureza explosiva do ter, e, portanto, procedimentos
apropriados devem ser adotados para sua estocagem. Por suas propriedades
carcinognicas, vem sendo recomendada sua substituio por outros mais
seguros.

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ter e eutansia
Anestsicos inalantes, que incluem ter, halotano, metoxifluorano
(inalao por vapor), so importantes na eutansia de algumas espcies.
Clorofrmio e ter so relativamente baratos, enquanto o halotano, o
metoxifluorano e o xido nitroso so caros. Equipamentos especiais de
anestesia esto disponveis para a utilizao desses inalantes e, embora no
sejam essenciais, so teis e reduzem o vazamento e a contaminao do
ambiente.
Agentes inflamveis como o ter no devem ser usados na presena de
chama ou onde equipamentos eltricos no sejam resistentes a choques.
Quando so utilizados clorofrmio ou outros gases inalantes, deve ser
providenciado um sistema de exausto adequado.
NOTA PARA NOSSO LABORATRIO:
- Em nosso laboratrio utilizamos um dessecador (Figura 1) como ambiente
para induo de anestesia e eutansia por agente inalante. No fundo do
dessecador, colocamos um chumao grande de algodo embebido em ter. O
procedimento realizado na capela de exausto para evitar contaminao do
ambiente com ter.

Figura 1 Dessecador.

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RATOS
O rato um mamfero da ordem Rodentia que compreende vrias
espcies, destacando-se o rato marrom (Rattus norvegicus) e o rato preto
(Rattus rattus), existentes no mundo todo. O rato empregado nas pesquisas
cientificas, no mundo todo, uma variedade albina da espcie chamada Rattus
norvegicus albinus que se caracteriza pela ausncia completa do pigmento
melanina nos plos e na ris. Sua origem data de 1905, quando o pesquisador
Donaldson ao se transferir para o Instituto Wistar na Filadlfia, por ser o
primeiro diretor cientifico da instituio, levou consigo quatro casais de ratos
daquela colnia. Foram esses animais que deram origem famosa linhagem
de rato Wistar, uma das mais usadas no mundo, inclusive no Brasil. A
importncia dessa linhagem deve-se ao fato de o Dr. Donaldson ter realizado
inmeras pesquisas, juntamente com a equipe formada no Instituto Wistar, para
obter dados fundamentais desta linhagem, principalmente curvas de
crescimento do animal, do crnio, do esqueleto, de vrios rgos
individualmente. Todos esses resultados foram reunidos no famoso livro The
rat: Data and References Tables for the Albino rat (Mus norvegicus albinis) and
the Norway Rat (Mus novergicus), cuja primeira edio foi publicada em 1915
e a segunda em 1924. Todos esses dados foram fundamentais na
caracterizao da linhagem Wistar e na difuso de seu uso nas pesquisas.
Caractersticas
- Desenvolvimento ontogentico:
A gestao do rato dura aproximadamente 20 a 23 dias. Entretanto, o
tempo da fertilizao ao nascimento pode prolongar-se por at 30 dias ou mais
devido implantao atrasada seguida por um acasalamento ps-parto.
A gestao do rato pode ser dividida em trs perodos:
1- Pr-implantao ou tudo ou nada, que abrange do primeiro ao
quinto dia da gestao, perodo importante para a implantao e
desenvolvimento inicial do embrio;
2- Organognico, do 6 ao 15 dia da gestacional, no qual os rgos so
formados;
3- Fetal do 16 ao 21 dia, no qual o feto j est com os rgos
desenvolvidos inicia seu crescimento intra-uterino, com o crescimento
ponderal e funcional dos rgos.
O tamanho da ninhada varia conforme a linhagem, mas normalmente se
observa de 8 a 15 filhotes na linhagem Wistar. A sexagem dos filhotes pode ser
facilmente feita em recm-nascidos por comparao da distancia anogenital
entre os companheiros da ninhada. Esta distncia no macho ser duas vezes
maior que na fmea. Alm disso, a papila genital do macho maior. Os
mamilos nos filhotes fmeas so visveis por volta de uma semana e os
testculos no macho podem normalmente ser observados na bolsa escrotal por
volta de trs semanas se o filhote for mantido com sua cabea pra cima. Os
testculos dos machos so retratis.

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Ao fazer a sexagem so necessrios alguns cuidados com a
manipulao dos filhotes. Antes de manipul-los necessrio usar luvas,
esfregando-as na maravalha da caixa do animal (evitando desfazer o ninho) e
em seguida na rao, s ento pegar os filhotes de forma rpida e suave.
Esses cuidados so necessrios para que a me no rejeite o filhote ao
retorn-lo para a caixa devido ao odor estranho da mo do experimentador.
O desmame ocorre com a substituio da suco mamria pela
alimentao slida dos filhotes, h diminuio da sntese de prolactina nas
mes e consequentemente tem-se o trmino do perodo de lactao que
acontece aproximadamente no 21 dia ps-natal. Nesse perodo os filhotes
devem ser separados por sexo para evitar acasalamento precoce.
Machos jovens no devem ser usados para acasalamento at
completarem pelo menos 3 meses ou at pesarem aproximadamente 300 a
450g (FIGURA 2).
O rato como um animal macrosmtico, alta sensibilidade olfativa, possui
grandes dimenses do bulbo olfativo, sendo esse sentido o mais desenvolvido
nesses animais. Por isso, o experimentador deve evitar o uso de perfumes
quando trabalhar com esses animais, assim como manobras que promovam
alterao no odor do ambiente do biotrio ou sala de experimentao
(exemplo: presena de sangue fresco em avental e/ou sobre bancadas).
Rattus norvegicus Rato Wistar EPM 1:
DADOS FISIOLGICOS
- Maturidade sexual: macho: 70 dias (250 300g) fmea: 80 dias (150
200g) Ciclo estral: de 4 a 5 dias Perodo de gestao: de 20 a 22 dias
Aleitamento: 21 dias Vida reprodutiva: macho: 1 ano fmea: 1 ano
Figura 2 Dados fisiolgicos para o rato da linhagem Wistar. Fonte: Internet. Observar a
discrepncia com o peso recomendado para o inicio do acasalamento para os machos em
relao ao descrito no manual da UNIFESP.

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BIOSSEGURANA AO CUIDAR DO BIOTRIO
de EXTREMA importncia que todos os estudantes que cuidam dos
animais do biotrio tomem os cuidados inerentes a realizao dessa atividade,
fazendo o uso de:
1234567-

LUVAS;
TOCA;
MSCARA;
JALECO DEVIDAMENTE FECHADO;
CALADOS FECHADOS;
CALA COMPRIDA;
CULOS DE PROTEO;

Ao voltar do biotrio, tudo deve ser desinfetado com lcool 70%. Voc no vai
querer carrear microrganismos do biotrio para sua casa!

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CONSIDERAES FINAIS
Esse manual no tem a inteno de perfazer todos os dados e aspectos
a respeito do rato da linhagem Wistar. As informaes aqui contidas so de
cunho bsico e destinadas especificamente para ajudar a melhorar e
uniformizar o tratamento dado aos animais em nosso laboratrio. O
Glicoconjugados bioativos I. Recomendo a todos que leiam o livro da UNIFESP
que deu base para a criao desse guia. Espero que ele tenha servido para
ampliar seus conhecimentos de forma significativa e que os componentes de
nosso grupo possam dar contribuies para o aperfeioamento do mesmo.

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