Remocin de Fenantreno por Azolla

Caroliniana utilizando bioaumentacin con

microorganismos hidrocarbonoclastas







UNIVERSIDAD VERACRUZANA
INTEGRANTES:
Arias Acosta Juan Osvaldo
Barrn Mijangos Hctor
Gonzlez Quintana Jazziel
Quiroz Ramrez Stephanie

ING. AMBIENTAL 601 FCQ

CATEDRTICO:

Dra. Patricia Pavn Orozco

E.E.:

Sistemas Ambientales II: Biorremediacin

ACTIVIDAD:

Caso de Bioaumentacin / Bioestimulacion







INTRODUCCION
La Bioaumentacin es otra tcnica que es parte de la biorremediacin de suelos
contaminados. Esta tcnica consiste en el uso de enzimas o cultivos de
microorganismos con alta capacidad de oxidacin con el propsito de eliminar
sustancias indeseables, donde se asegura que estn presentes los microorganismos
especficos capaces de degradar al compuesto contaminante no deseado hasta sus
molculas bsicas.

La inoculacin controlada de cultivos bacterianos de accin dirigida, especialmente
formulado y de ocurrencia natural, para asistir a los hallados naturalmente en el suelo,
adaptadas en un medio con un contaminante igual o similar al que contiene el suelo
donde se las quiere introducir, acompaadas de otros componentes biotecnolgicos.
Por lo general los contaminantes son la nica fuente de alimento de las bacterias
inoculadas.

La bioaumentacin posibilita controlar la naturaleza de la Biomasa. Garantiza que el
tipo de microorganismos ms idneo est presente en el suelo en cantidad suficiente
para degradar en forma efectiva y eficiente los residuos contaminantes y reducirlos a
sus componentes bsicos (CO2 y H2O).

Por otra parte, la bioestimulacin, la cual es otro tratamiento que va de la mano con la
Bioaumentacin; consiste en la adicin de nutrientes, sustratos o tenso activos que
estimulen el crecimiento y actividad metablica de los microorganismos degradadores
presentes en la zona impactada incorporando una fuente de Nitrgeno, una fuente de
Fsforo y minerales que mejoran apropiadamente el PH, para mantener activa la flora
bacteriana activa que va a biodegradar el contaminante.

Algunas bacterias y cianobacterias hongos y algas poseen diversas herramientas que
les permiten utilizar HAP de bajo y alto peso molecular como nica fuente de energa y
carbono. El fenantreno es un hidrocarburo con 3 anillos aromticos que se encuentra
en altos porcentajes en productos refinados del petrleo, tiene un peso molecular de
178 y solubilidad en agua1, 29mgml la presencia de FEN en los ecosistemas se debe a
la combustin incompleta de materiales orgnicos como carbn petrleo gasolina y
madera.
Azolla es un helecho acutico que forma simbiosis con la cianobacterias Anabaena
azollae, la cual vive dentro de su fronda y puede fijar de 100 a 1564kg de
N2ha-1ao-1. Ha sido empleada en la limpieza de acuferos por su habilidad de fijar
N2 y remover P de los ecosistemas. Tambin se menciona que Azolla puede ser usado
como purificador de agua y su aplicacin biotecnolgica requiere de seleccin de
biotipos y desarrollo y mejoramiento de hbridos adems de mayor entendimiento de
los mecanismos que inducen su esporulacin y reproduccin.



Remocin de Fenantreno por Azolla Caroliniana utilizando
bioaumentacin con microorganismos hidrocarbonoclastas
Luis Alfredo Castro-Carrillo, Julin Delgadillo-Martnez, Ronald Ferrera-Cerrato y Alejandro Alarcn
FUNDAMENTO

El petrleo es una mezcla de variados hidrocarburos y otros compuestos orgnicos,
incluyendo algunos organometlicos con V y Ni, principalmente. Es tambin uno de los
recursos naturales no renovables ms importantes para la humanidad y vara en
composicin y propiedades fsico-qumicas de acuerdo a su sitio de extraccin.

La contaminacin de los ecosistemas con petrleo es un problema que ha estado
presente a travs del tiempo y muchos estudios se han enfocado en la evaluacin de la
degradacin de hidrocarburos persistentes en el ambiente, en especial los aromticos
polinucleares (HAP).

El fenantreno (FEN) es un hidrocarburo con tres anillos aromticos que se encuentra
en altos porcentajes en productos refinados del petrleo; su presencia en los
ecosistemas se debe a la combustin incompleta de materiales orgnicos como
carbn, petrleo, gasolina y madera. Una mnima porcin es derivada de incendios
forestales y erupciones volcnicas. El FEN y otros contaminantes pueden ser asimilados
por las races de las plantas y acumulados, metabolizados o volatilizados (Raynolds y
Skipper, 2005).

Algunas bacterias y cianobacterias, hongos y algas poseen diversas herramientas que
les permiten utilizar HAP como fuente de energa y carbono; as como las bacterias
tambin hay planta acuticas usadas para la limpieza de aguas residuales urbanas e
industriales contaminadas con metales pesados y compuestos orgnicos, sin embargo,
son pocos los reportes que existen sobre ellas.

El Azolla es un helecho acutico que forma simbiosis con las cianobacterias Anabaena
azollae, la cual vive dentro de su fronda y puede fijar de 100 a 1564 kg de N
2
por ha por
ao (Quintero-Lizaola y Ferrera-Cerrato, 2000). Ha sido empleada en la limpieza de
acuferos por su habilidad de fijar N
2
y remover Fsforos de los ecosistemas. El Azolla
puede ser usado como purificador de agua y su aplicacin biotecnolgica requiere de
seleccin de biotipos y desarrollo y mejoramiento de hbridos, adems de mayor
entendimiento de los mecanismos que inducen su porulacion y reproduccin.



DESCRIPCION DEL PROYECTO
Materiales y Mtodos
Fase I.- Seleccin de colectas de Azolla tolerantes al fenantreno.
En esta fase se utilizaron cuatro colectas de Azolla de diferentes zonas de Mxico,
cuyas caractersticas se encuentran en la Tabla 1.

Fase I. Seleccin de colectas de Azolla tolerantes al fenantreno (aqu se utilizaron
cuatro colectas de Azolla de diferentes zonas de Mxico), Tabla I.
1. Se estableci un experimento completamente al azar con cinco diferentes
concentraciones de fenantreno Sigma 96% de pureza; FEN), de 0, 25, 50, 75 y
100mgl-1 en la solucin nutritiva para cada uno de las cuatro colectas
evaluadas.
2. Las unidades experimentales con 5 repeticiones, fueron recipientes de plstico
de 0,5l de capacidad y 86,5cm2 de rea,
3. Aadir 300ml de solucin nutritiva Yoshida compuesta por (gl-1) 0,05
NaH2PO42H2O; 0,09 K2SO4; 0,11 CaCl2; 0,4 MgSO47H2O; 0,01 MnCl2H2O; y
cido ctrico monohidratado 0,015g, y por (mgl-1) 0,1 (NH4)6Mo7O24 4H2O;
1,1 H3BO3; 0,4 ZnSO47H2O; 0,04 CuSO45H2O; 9,6 FeCl36H2O.
4. El FEN ser disuelto previamente en acetona para su distribucin en la solucin
nutritiva y se coloc el helecho acutico hasta despus de 24h, para permitir la
volatilizacin del solvente.
5. En cada recipiente se colocar 1g de peso fresco de las diferentes colectas de
Azolla para cada recipiente.
6. El experimento se llevar a cabo en cmara de crecimiento con temperatura de
27C y humedad relativa de 60%.
7. Fotoperodo de 12h e intensidad lumnica de 280molcm-2s-1 (se mantuvo el
nivel de solucin nutritiva en cada unidad experimental). Esta fase
experimental concluy cuando el helecho llen la superficie del recipiente de la
primera unidad experimental, ~28 das despus de la inoculacin (DDI).
TABLA 1
CLASIFICACION DE LAS COLECTAS DE Azolla DE ORIGEN MXICANO, UTILIZADAS EN EL
EXPERIMENTO
Lugar de coleccin Altitud (m) Catlogo IRRI Clasificacin taxonmica*

Cerro gordo, Veracruz 1435 8028 A. mexicana

Guamchil, Sinaloa 50 - A mexicana

Tlhuac, Distrito F. 2240 - A. filiculoides

Crdenas , Tabasco 10 4139 A. caroliniana

8. Se colectar la biomasa del helecho acutico y se secar a 70C durante 72h.
Terminado este proceso de secado se pes el material vegetal.
Fase II. REMOCIN DE FENANTRENO POR AZOLLA CAROLINIANA UTILIZANDO
BIOAUMENTACIN CON BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS Y OSCILLATORIA SP.
1. De acuerdo a los resultados obtenidos en la Fase I, se seleccionar la colecta de
Azolla que mostr mayor tolerancia a FEN (en condiciones de invernadero).
2. Se requieren recipientes de plstico (600ml de capacidad y 157,5cm2 de rea)
conteniendo 300ml de solucin Yoshida.
3. Se inocula un consorcio con dos microorganismos degradadores de FEN,
Bacillus stearothermophillus y Oscillatoria sp. (BST+OSC). La bacteria B.
stearothermophillus fue asilada de un suelo contaminado con petrleo de
Minatitln, Veracruz, Mxico, y tiene la capacidad de producir un surfactante
til en la degradacin de hidrocarburos del petrleo.
4. Los biosurfactantes han sido considerados de importancia en la
biorremediacin de ambientes contaminados pues son biodegradables, de baja
toxicidad y mejoran la biodisponibilidad de los compuestos txicos (Amzcua-
Vega et al., 2004).
5. La cianobacteria Oscillatoria es aislada previamente de un acufero
contaminado con petrleo en Tabasco; es fijadora de N2 atmosfrico y tiene
capacidad fotosinttica.
6. Para su inoculacin, ambas cepas fueron propagadas por separado en medios
de cultivo para bacterias (Merck) y cianobacterias (Allen, 1968) e incubadas
durante 48 a 120rpm y 27oC.
7. De cada cultivo microbiano se tomaron 5ml (109 clulas ml1), para inocular
las respectivas unidades experimentales.
8. El experimento factorial 32 tuvo un diseo experimental completamente al
azar con 11 repeticiones por tratamiento.
El factor inoculacin del helecho tuvo dos niveles:
1) A. caroliniana (Tabasco) no inoculada
2) A. caroliniana inoculada con BST+OSC.
Para el factor FEN se consideraron tres concentraciones: 20, 40 y 60mg FEN por litro de
solucin nutritiva. Adems, se incluy un tratamiento testigo sin FEN y sin inoculacin
del consorcio microbiano. Variables de crecimiento de A. caroliniana Se determin el
peso fresco de A. caroliniana a los 49 DDI en las cinco repeticiones restantes de cada
tratamiento y la fitomasa fue luego secada a 70oC por 48h para determinar el peso
seco. Se calcul el porcentaje de inhibicin o estimulacin del crecimiento del helecho
por efecto de las diferentes concentraciones de FEN tomando en cuenta como 100%
de crecimiento al promedio del tratamiento testigo.
Tambin, se determin la tasa de crecimiento relativo y el tiempo de duplicacin
basado en peso seco, de acuerdo a la metodologa utilizada por Quintero-Lizaola
(1998) y Vidal et al. (1992). Para la tasa relativa de crecimiento se utiliz la ecuacin
TCR= (LnW2-LnW1)/(t), donde TCR: tasa de crecimiento relativo (gg1da1), LnW2;
logaritmo natural del peso final, LnW1: logaritmo natural del peso inicial, y t: tiempo
de crecimiento (das). En el caso de la tasa de duplicacin, esta se calcul como
TD=Ln2/TCR, donde TD: tiempo de duplicacin expresado en das. Actividad de la
enzima nitrogenasa.
A los 7, 14 y 21 DDI, se realiz la prueba de reduccin de acetileno para determinar la
actividad de la enzima nitrogenasa. Se coloc 1g de helecho acutico en frascos de
vidrio de 25ml que fueron sellados hermticamente con un tapn de goma. Una hora
despus, se extrajo 10% del aire, emplazndolo por acetileno comercial. Se extrajo
una muestra de la fase gaseosa y se transfiri a tubos al vaco (Vacutainer) de 10ml.
Posteriormente, se determin la cantidad de acetileno y etileno en un cromatgrafo
de gases (Hewlett Packard 5890) con temperatura de columna de 60oC y de detector
de 70oC. La actividad nitrogenasa fue estimada de acuerdo con la metodologa
propuesta por Ferrera-Cerrato et al. (1993).
Poblacin microbiana en la rizsfera de A. caroliniana A los 49 DDI, se determin la
poblacin de algunos grupos Tabla I Clasificaci n de las colectas de Azolla de origen
me xicano, utilizadas en el experimento Lugar de coleccin Altitud (m) Catlogo IRRI
Clasificacin taxonmica*Cerro Gordo, Veracruz 1435 8028 A. mexicana Guamuchil,
Sinaloa 50 - A. mexicana Tlahuac, Distrito Federal 2240 - A. filiculoides Crdenas,
Tabasco 10 4139 A. caroliniana IRRI: International Rice Research Institute.
*Clasificacin de acuerdo a anlisis molecular segn Zimmerman et al. (1993).
594 AUG 2008, VOL. 33 N 8 microbianos en la rizsfera del helecho acutico, por el
mtodo de cuenta viable. Se prepararon diluciones decimales acuosas y siembra en
placa de agar con el medio mineral mnimo modificado (Hernndez-Acosta et al., 2003)
derivado del medio fuente combinada de carbono (Rennie, 1981) y que consta de dos
soluciones. Solucin 1:0,8g K2HPO4; 0,2g KH2PO4; 0,1g NaCl2; 28,0mg Na2FeEDTA;
25,0mg Na2MoO4; 0,25g extracto de levadura; y 900ml agua destilada. Solucin 2:
2,0g MgSO4; 0,06g CaCl2; 100mg de FEN diluidos en 10ml de acetona y 100ml de agua
destilada.
Las dos soluciones se esterilizaron por separado a 18lbsplg2 durante 18min y cuando
tibias se mezclaron. Para degradadores de FEN que no fijan N2 atmosfrico se utiliz
el medio de cultivo anterior ms 1,5g NH4NO3. Se us agar papa glucosa ms rosa de
bengala para hongos totales (Beever y Bollard, 1970).
Contenido de fenantreno.
El anlisis del contenido de FEN de la solucin nutritiva se realiz semanalmente
durante 49 das. Durante los primeros seis muestreos se utiliz slo una repeticin por
tratamiento. En el muestreo final se utilizaron cinco repeticiones. Para ello, a cada
unidad experimental se le retir el helecho, para ello se utiliz el mtodo de extraccin
en fase lquida con embudo de separacin. La solucin nutritiva (~300ml) se deposit
en el embudo y se mezcl con 150ml de diclorometano. Se agit vigorosamente y se
permiti la separacin de las fases. El diclorometano se colect en matraz baln de
fondo plano y se concentr la muestra en un rotavapor. Este proceso se repiti dos
veces adicionando diclorometano, agitando y concentrando la muestra. La lectura del
FEN se realiz en espectrofotmetro UV-VIS (Hewlett Packard Modelo Chemstation) a
253nm. Se prepar una curva de calibracin con 1; 0,8; 0,6; 0,4 y 0,2 mg FENml1 de
diclorometano (Soroka y Soroka, 2002). La degradacin de FEN fue expresada como
porcentaje.
Observacin microscpica del icrosimbionte Anabaena azollae
Se observaron los posibles cambios en la morfologa microscpica de la cianobacteria
en las frondas de A. caroliniana por efecto del contaminante. A los 28 DDI, se tom una
muestra de A. caroliniana en fresco de cada tratamiento. Una porcin de frondas
(0,1g) fueron cuidadosamente maceradas en portaobjetos. Se trat de retirar la
mayora de los fragmentos de tejidos de A. caroliniana y solo dejar la savia con las
cianobacterias libres. Sin realizar tincin, se coloc un cubreobjetos y se observ en
microscopio ptico, en campo claro y con el objetivo 40 para la toma de micrografas.
Anlisis estadstico
Los datos de cada variable en cada fecha de muestreo, se sometieron a un anlisis de
varianza y prueba de comparacin de medias (Tukey, =0,05), mediante el programa
SAS para Windows versin 8.2, 1999-2001.







Ventajas y Desventajas del proyecto
Ventajas Desventajas
No requiere rea adicional para
llevar a cabo el tratamiento, ni el
uso de maquinaria pesada.
La recoleccin de Azolla tolerantes
al fenantreno se colecta en
diferentes partes del pas.
Efectividad del proceso
independientemente de las
concentraciones.
El proceso ocupa muchas sustancias.
El proceso se estimula en
presencia de dosis bajas.
Se lleva a cabo en un periodo de
tiempo largo.
Degradacin de contaminantes
especficos.
Requiere mucha experimentacin.
Estabilidad del sistema.
Dosis ms altas (70mgkg-1)
inhiben tanto el crecimiento de la
bacteria como su actividad
nitrogenasa.

Resultados y Discusin
Seleccin de colectas de Azolla tolerantes al FEN La presencia de FEN en la solucin
nutritiva, independientemente de su concentracin, redujo significativamente el
crecimiento de las cuatro colectas de Azolla. Las colectas de A. mexicana de Guamuchil
(Sinaloa) y de Cerro Gordo (Veracruz) fueron las ms susceptibles al FEN, el cual
produjo la muerte de estas colectas aun en las concentraciones ms bajas. A.
caroliniana (Tabasco) mostr mayor tolerancia al FEN. El tiempo requerido para que
esta colecta llenara la superficie del recipiente en presencia de 25mg FEN fue de 25
DDI, mostrando el mayor peso seco (0,16g). El tratamiento con 50mg de FEN tuvo 3,2g
de peso fresco y 0,11g de peso seco, los cuales fueron mayores al testigo (2,7g de peso
fresco y 0,06 de peso seco). En presencia de 75mg FEN la produccin de biomasa del
helecho fue similar al testigo. En contraste, A. caroliniana no mostr crecimiento en
presencia de 100mg FEN, tratamiento en el cual las races de helecho estuvieron
separadas y consecuentemente, la parte area estaba muerta (datos no presentados).
Aun cuando no se tienen reportes respecto al comportamiento de Azolla ante los HAP,
la presencia de hidrocarburos del petrleo tiene efectos negativos en el crecimiento de
este helecho acutico. Cohen et al. (2002) mencionaron que A. pinnata no fue capaz de
tolerar la presencia de diesel a concentraciones de 2,4lm2. Hasta donde pudimos
conocer, el presente es de los primeros estudios que mencionan los efectos negativos
del FEN en el crecimiento de cuatro colectas de Azolla, de las cuales A. caroliniana tuvo
mayor tolerancia a concentraciones bajas.
Remocin de FEN por A. caroliniana utilizando bioaumentacin con BST+OSC
En la segunda fase del estudio se utiliz el complejo de A. caroliniana (Tabasco)
expuesta a concentraciones de FEN no mayores a 60mg por litro de solucin nutritiva.
A los 42 DDI, A. caroliniana llen la superficie del recipiente en el tratamiento con
40mg FEN inoculado con BST+OSC. La produccin de materia seca fue
significativamente mayor (P<0,05) en los tratamientos de A. caroliniana con 20mg FEN
y en A. caroliniana inoculada con BST+OSC en presencia de 40mg FEN, en comparacin
con el tratamiento de A. caroliniana inoculada con BST+OSC y 60mg FEN (Tabla II). El
efecto negativo de los HAP como el fenantreno, en el crecimiento de microorganismos
simbiticos ha sido demostrado previamente (Alarcn et al., 2006; Franco-Ramrez et
al 2007), denotando la toxicidad de los HAP en microorganismos simbiticos y en sus
hospedantes, como fue el caso de Azolla-Anabaena.
Considerando la ausencia del consorcio microbiano (BST+OSC), la dosis de 20mg FEN
estimul 19,7 y 4,5% el crecimiento del helecho con respecto al testigo; sin embargo,
conforme las concentraciones de FEN incrementaron, el crecimiento fue
disminuyendo. Aun cuando no se observaron diferencias significativas entre los
tratamientos inoculados con BST+OSC, el crecimiento de Azolla fue estimulado en
19,7% por la bioaumentacin en presencia de 40mg de FEN (Tabla II). En contraste, en
presencia de 60mg FEN e inoculacin de BST+OSC, el crecimiento del helecho fue
reducido en 6,67%. La TCR fue significativamente mayor en los tratamientos A.
caroliniana con 20 mg FEN y en A. caroliniana inoculada BST+OSC en presencia de
40mg FEN, mismos que presentaron menor TD en comparacin con el resto de los
tratamientos (Tabla II).
Esto indica que la colecta de A. caroliniana tiene la capacidad de crecer mejor en
concentraciones bajas de contaminante (20mg FEN) y que la inoculacin del consorcio
microbiano permiti el crecimiento de Azolla en presencia de 40mg FEN, lo que denota
un efecto benfico de la bioaumentacin a esta concentracin de FEN. Estos
resultados representan uno de los primeros reportes acerca del beneficio de la
bioaumentacin con microorganismos hidrocarbonoclastas en Azolla expuesta a HAP.







TABLA II
VARIABLES DEL CRECIMIENTO DE A.coroliniana EXPUESTA A CONCENTRACIONES DE FENANTRENO EN LA
SOLUCION NUTRITIVA Y BIOAUMENTACIN CON UN CONSORCIO MICROBIANOAILADO DE UN HUMEDAL
CONTAMINADO CON PETRLEO, A LOS 49 DDI
Tratamiento
Fenantreno
(mg/l)
Peso fresco(g) Peso seco(g) Etimulacin*
(%)
TCR** TD (dias)
Azolla
0
2.82 1.32
--- 0.22 3.2
20
3.18 1.58
19.7 0.39 1.7
40
3.09 1.49
12.88 0.34 2
60 2.96 1.32 0 0.22 3.2


Azollla con
BST + OSC
20 3.14 1.38 4.54 0.26 2.6
40 3.24 1.58 19.7 0.4 1.7
60 2.78 1.1 -6.67 0.04 18.7


*Estimulacion o inhibicin del crecimiento de A. caroliniana con respecto al tratamiento sin inculacion y sin fenantreno.
** gr producido / gr inoculados por da
TCR: tasa de crecimiento relativo, TD: tiempo de duplicacin, BST: Bacillus stearothermophilus, OSC: Oscilatoria sp.

El FEN, a excepcin de la dosis de 40mg, inhibi la actividad de la enzima nitrogenasa
en A. caroliniana con respecto al testigo (Figura 1). Por su parte, la inoculacin del
consorcio BST+OSC contribuy a la disminucin de la actividad enzimtica, la cual fue
en general muy similar a la observada en el testigo no inoculado (Figura 1). La actividad
nitrogenasa en sistemas simbiticos como el caso de Azolla-Anabaena no ha sido
previamente evaluada en presencia de HAP. No obstante, Stahl y Williams (1986)
indicaron que la presencia de petrleo redujo significativamente la actividad
nitrogenasa en el sistema simbitico trbol-Rhizobium. Por otra parte, se tienen
antecedentes de que esta actividad enzimtica en races de trbol inoculadas con
Rhizobium leguminosarum var. trifolii, puede ser estimulada en presencia de dosis
bajas de Cr (10mgkg1); sin embargo, dosis ms altas (70mgkg1) inhiben tanto el
crecimiento de la bacteria como su actividad nitrogenasa (Casella et al., 1988). Por su
parte, la actividad nitrogenasa y la absorcin de N (NH4 + y NO3 ) en Nostoc
muscorum son sensiblemente afectadas por la aplicacin de Cr, Ni y Pb (Rai y Raizada,
1989). Adems, la nitrogenasa en bacterias de vida libre fijadoras de N2 atmosfrico
presenta variaciones en su inhibicin y/o estimulacin por efecto de plaguicidas, de
manera particular la presencia de paraquat resulta en la inhibicin de esta actividad
enzimtica (Jagnow et al., 1979). Dado que las unidades experimentales no estuvieron
en un sistema completamente cerrado, se consider la evaluacin de los
microorganismos en la rizsfera del helecho.
Tcnicas de bioestimulacin y bioaumentacin
Estimulantes de la actividad microbiana: aceptores de electrones, nutrientes, o
dadores de electrones. Es lo que se denomina tcnicas de Bioestimulacin. Se ha
demostrado que en la mayora de casos el factor limitante de los procesos de
biodegradacin es el agotamiento de aceptores de electrones ms que el agotamiento
de nutrientes como nitrgeno y fsforo.
Actualmente, existe un producto en el mercado capaz de abastecer de oxgeno al
emplazamiento contaminado denominado ORC (Oxygen Release Compound),
compuesto que libera oxgeno.
Hasta la fecha, han surgido diferentes productos capaces de suministrar hidrgeno al
medio para estimular la biodegradacin anaerobia de los contaminantes clorados, los
ms ampliamente utilizados son el HRC (Hydrogen Release Compound) y el CAP18,
ambos compuestos que liberan hidrgeno.
Microorganismos responsables de la biodegradacin de los contaminantes presentes
en el emplazamiento en estudio.
Es lo que se denomina tcnicas de Bioaumentacin.
Actualmente, existen dos productos en el mercado BIO-DECHLOR INOCULUM y KB-1
DECLORADOR que contienen microorganismos capaces de degradar los disolventes
clorados va decloracin reductiva y que se aplican directamente en el subsuelo.
En el presente proyecto se han considerado ambas tcnicas de bioremediacin in-situ
(Bioestimulacin y bioaumentacin) ya que son medidas adicionales altamente
recomendadas y efectivas para reducir el tiempo requerido por la MNA para alcanzar
los objetivos de limpieza en aguas subterrneas contaminadas. Todos los compuestos
anteriores han sido diseados para ser de fcil aplicacin, de bajo coste, seguros
medioambientalmente, y altamente efectivos. por definicin, un remedio que incluya
la introduccin de cualquier tipo de estimulante/potenciador ya no se considera
atenuacin natural. [U.S EPA, 1999, p. 4]
Bioestimulacin de la degradacin aerobia mediante un compuesto liberador de
oxgeno
Descripcin del compuesto
El ORC (Oxygen Release Compound) [Regenesis, 2004a] es un producto diseado
especficamente para el tratamiento in-situ de la contaminacin de las aguas
subterrneas por hidrocarburos de petrleo (BTEX y MTBE) o por cualquier otro
contaminante degradable aerbicamente (compuestos alifticos menos clorados como
el CV o el DCE).
El ORC tambin est disponible en forma de filtros de varios dimetros los cuales se
instalan en pozos. Estos filtros se sacan y se reemplazan por otros al final de su vida til
(cuando se agota la liberacin de oxgeno).
Tipos de aplicacin del producto
El ORC puede ser aplicado:
1. En el fondo de una excavacin por deposicin del producto.
2. En la zona saturada (aguas subterrneas) contaminada mediante tres
mtodos: (1) instalacin de filtros, (2) equipos de inyeccin directa o
(3) relleno de pozos.
Bioestimulacin de la degradacin anaerobia mediante compuestos liberadores de
hidrgeno
Descripcin de los compuestos
El HRC (Hydrogen Release Compound) [Regenesis, 2004b] es un producto
especficamente diseado para el tratamiento in-situ de las aguas subterrneas
contaminadas por disolventes clorados (PCE, TCE, TCA, TCM (cloroformo) y sus
derivados) o por cualquier otro contaminante degradable anaerobicamente.
El tiempo de actuacin del producto (estimulando la decloracin reductiva) se estima
entre 12 y 18 meses, liberando indirecta y lentamente hidrgeno al medio.
CAP18TM [DBI, 2003a] es otro compuesto lquido muy levemente viscoso derivado de
aceites vegetales de soja y que se utiliza para la bioestimulacin de la degradacin
anaerobia mediante la liberacin de hidrgeno.
CAP18 TM est catalogado como un nutriente que estimula la degradacin anaerobia
de los contaminantes.

Tipos de aplicacin del compuesto
El HRC es un lquido altamente viscoso que puede ser aplicado:
(1) En el fondo de una excavacin por deposicin del producto
(2) En la zona saturada (aguas subterrneas) contaminada mediante equipos
de inyeccin directa o mediante relleno de pozos
Bioaumentacin de los degradadores de etenos clorados mediante cultivos
microbianos
El KB-1TM [SIREM, 2003a] es un cultivo microbiano natural y no patgeno que
contiene varias especies de Dehalococcoides, el nico grupo de microorganismos
documentados hasta el momento capaces de degradar etenos clorados, como el PCE,
TCE, DCE y VC, a productos finales, no txicos y aceptables medio ambientalmente,
como el eteno.
El KB-1TM es un enriquecimiento derivado de las bacterias que se han hallado
naturalmente en subsuelos y aguas subterrneas contaminadas por compuestos
clorados.

CONCLUSION
Se observaron diferencias en la tolerancia de colectas de Azolla hacia concentraciones
crecientes de FEN. A caroliniana fue la colecta con la mayor tolerancia a FEN
propiciando la remocin de este de la solucin nutritiva. La presencia de FEN produjo
disminucin significativa en el crecimiento, TD y actividad nitrogenasa en el
simbiosistema Azolla-Anabaena. La aplicacin de bioaumentacion con Bacillus
stearothermophilus y oscillatoria sp. Produjo mayor degradacin de FEN en
concentraciones de 20mgl1 pero su efecto fue limitado en concentraciones >40mg
FEN. Ms aun la presencia de FEN produjo cambios morfolgicos en la cianobacteria
Anabaena azollae cuyas cadenas de clula fueron ms cortas y los heterocistos se
encontraron libres lo que denota toxicidad en la simbiosis y muerte del helecho en
concentraciones de FEN >60mgl1.
REFERENCIAS
Gua tcnica de Atenuacin Natural Monitorizada en emplazamientos
contaminados.
Tcnicas de bioestimulacin y bioaumentacin para la potenciacin de la
biodegradacin de contaminantes.
http://www.ingenieroambiental.com/7/37786-1.pdf

Remocin de fenantreno por azolla caroliniana utilizando bioaumentacin
con microorganismos hidrocarbonoclastas Luis Alfredo Castro-Carrillo, Julin
Delgadillo-Martnez, Ronald Ferrera-Cerrato y
Alejandro Alarcn.