UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN DE TACNA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA

PROYECTO DE TESIS
DETERMINACION DE SEROPREVALENCIA DE ANTICUERPOS A
Neospora caninum EN BOVINOS EN EL DISTRITO DE CAIRANI-TACNA
2014

PRESENTADO POR:
Bach. Juan El Paniagua Cahuana

PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE:

Mdico Veterinario y Zootecnista.

ASESOR:
Dr. Cecilio Hurtado Quispe.

PROYECTO DE TESIS
DETERMINACIN DE PREVALENCIA DE
I. DATOS GENERALES:
1.1 TITULO DEL PROYECTO

ANTICUERPOS SERICOS Neospora caninum

DE SEROPREVALENCIA
EN
BOVINOS EN EL DISTRITO
DE CAIRANI: DETERMINACION
DE ANTICUERPOS
A Neospora caninum EN
TACNA
2014
BOVINOS EN EL DISTRITO DE CANDARAVETACNA 2014

1.2 TIPO DE INVESTIGACIN

: Descriptiva transversal o de corte.

1.3 AREA DE INVESTIGACION

: Sanidad Animal

1.3 RESPONSABLE

: Bach. Juan El Paniagua Cahuana

1.4 ASESOR

: Dr. Cecilio Hurtado Quispe

1.5 ZONA DE TRABAJO

: Regin: Tacna; Provincia: Candarave;

Distrito:
CAIRANI

1.6 ENTIDADES DE COORDINACIN : Municipalidad de Candarave, SENASATacna

1.7 DURACION

: 4 meses

II. PLANTEAMIENTO DE LA INVESTIGACION.

2.1. Planteamiento del problema.
2.1.1. Descripcin del problema.
La Neosporosis bovina es producida por un protozoo formador de quistes
perteneciente a la familia Sarcocystidae, gnero Neospora. Solo una especie ha
sido citada, Neospora caninum por Dubey en 1998, como agente productor de una
encefalomielitis congnita y ataxia locomotora en los cachorros (Cordero del
Campillo., et al 1999).
Este parsito, denominado Neospora caninum, fue reconocido y aislado por
primera vez de perros de USA (Dubey, et al., 1988a, 1988b), y posteriormente la
infeccin natural fue descrita en una variedad de huspedes tales como ovejas,
vacas, caballos, ciervos y cabras de diferentes partes del mundo (Dubey - Lindsay,
1996).

El papel de este agente etiolgico como causal de abortos en el ganado vacuno es

de suma importancia (Wouda et al., 2000), ya que puede presentarse de forma
epidmica o endmica en un hato (Conraths y Schares, 1999).
La actividad serolgica en el mundo revela valores tan altos como del 59% en
Escocia (Buxton et al, 1997) y bajos como en Suecia que report recientemente
una prevalencia de 2% (Bjrkmann et al, 2000). En nuestro pas es altamente
seroprevalente, principalmente en las principales cuencas lecheras, llegando a
valores del 43% en Cajamarca (Cabrera et al., 2000), 57% en Arequipa (Andresen,
1999), 30% en el valle de Lima (Silva et al., 2002) y 40% en Amazonas (Quevedo
et al., 2003).
En el pas, la mayora de investigaciones relacionadas a seroprevalencia de
Neospora caninum han sido realizadas en explotaciones de tipo intensiva
establecidas en la costa peruana (Moreno et al., 1998).Estudios recientes indican
que el Neospora caninum se viene convirtiendo en un agente parasitario de gran
importancia en el Per, segn los estudios de prevalencia realizados en las
diversas cuencas lecheras (Rivera, 2001).
La identificacin de las causas que producen el aborto es necesaria para un rpido
control y evitar mayores prdidas econmicas, lo cual genera un desafo
permanente para el veterinario y el ganadero (Rivera et al., 2000).
2.1.2. Formulacin del problema.
- Cul es la seroprevalencia de Neospora caninum en los bovinos
del distrito de Candarave y que factores epidemiolgicos hacen
posible su presentacin?
2.2. Justificacin del problema.
El presente trabajo de investigacin tiene gran relevancia, porque incide en la
calidad de vida de los ganaderos de esta zona, donde sus actividades son
orientadas en la crianza de ganado vacuno para la elaboracin de quesos y
ganado para engorde, uno de los problemas que afecta el rendimiento econmico
del sector ganadero aparte de ser una zona de arduo trabajo fsico, esta
enfermedad produce abortos y mortalidad neonatal.
En nuestro pas se han reportado casos en donde se ha hallado la presencia de
N. caninum, en diferentes zonas donde se explotan vacunos, esta enfermedad
est relacionada ntimamente con la presencia de abortos, lo cual afecta el estado
sanitario del hato, es de singular importancia realizar estudios para determinar su
probable presencia en vacunos del distrito de Candarave.
Por lo tanto, es propicio realizar el presente trabajo, debido que hasta el momento
no se han realizado investigaciones de este tipo en el rea de estudio es decir en
la zona del Distrito de Candarave. Actualmente la eficacia de las vacunas y

tratamientos son muy discutibles por lo tanto de acuerdo a los resultados

obtenidos en la presente investigacin, se recomendarn las respectivas medidas
preventivas para el control de la enfermedad.
Es necesario tener conocimiento de los indicadores de la presentacin de esta
parasitosis, con la finalidad de facilitar a diferentes instituciones involucrados en la
problemtica ganadera para implementar programas de control y erradicacin. Por
tanto este conocimiento servir para la toma de las mejores medidas preventivas
y de control por parte del SENASA Tacna, el Proyecto Agropecuario y por los
mismos productores. Servir adems como antecedente para realizar futuros
estudios similares de mayor envergadura del nivel provincial, departamental y
regional.
El conocimiento de los resultados de la presente investigacin contribuir con la
sanidad de la ganadera lechera de la regin de Tacna, de manera general y ms
especficamente del distrito de Cairani.
La realizacin de sta investigacin servir como antecedente para la realizacin
de futuros trabajos similares o relacionados.
Finalmente, el desarrollo de la presente investigacin es viable, ya que contar
con el apoyo del Laboratorio de Sanidad Animal-SENASA, Municipio Distrital de
Candarave, de los propios ganaderos y de la total disposicin del investigador, as
tambin se cuenta con los medios logsticos y econmicos.

2.3. Objetivos de la investigacin.

2.3.1. Objetivo general.
-

Determinar la Seropravelencia de anticuerpos anti- Neospora

Caninum
en ganado bovino en el
Distrito de
Cairani,
Departamento Tacna, Per.

2.3.2. Objetivos especficos.

-

Determinar la seroprevalencia de anticuerpos a Neospora

caninum en bovinos del distrito de Cairani.
Identificar los posibles factores de riesgo que van a condicionar la
presentacin de Neospora caninum en bovinos del distrito de
Cairani.
Determinar la seroprevalencia de anticuerpos a Neospora
caninum por edades en bovinos en el distrito de Cairani.

2.4. Hiptesis.
La seroprevalencia de Neospora caninum alcanza un porcentaje mayor al
10%, en lo bovinos lecheros del distrito de Cairani, siendo los factores
epidemiolgicos; el ingreso de animales de reemplazo al hato sin ningn
control, la presencia de caninos en los establos y el desconocimiento de la
enfermedad por los productores.

2.5. Variables.
2.5.1. Variable independiente.
-

Presencia de perros en el hato

Procedencia de los animales muestreados

Anticuerpos contra Neospora caninum.

2.5.2. Variables dependientes.

-

Poblacin de bovinos lecheros en lactacin.

Muestra de suero con reaccin positiva/negativa a la prueba

serolgica para determinar la presencia de Neospora caninum.

III. MARCO TEORICO

3.1. Antecedentes de investigacin.
Se ha encontrado que los problemas reproductivos en ganado bovino lechero
producidos por N. caninum han sido reportados alrededor del mundo.
En Europa se observ; en Espaa una prevalencia de 30.6% al evaluar a 889
vacas lecheras provenientes de 43 hatos del norte del pas (Mainar Jaime et al,
1999), Suecia report recientemente una prevalencia de 2% (Bjrkmann et al,
2000), en el Reino Unido se han reportado prevalencias de 17.1% en Inglaterra
(Davison et al, 1999) y 59% en Escocia (Buxton et al, 1997), en Dinamarca se
encontr el parsito, mediante inmunohistoquimica, en dos fetos abortados de
vacas Holstein-Friesian (Agerholm y Barr, 1994), Alemania present una
prevalencia de 4.1% mediante inmunofluorescencia indirecta, al evaluar 388 vacas
provenientes de hatos con problemas reproductivos (Conraths et al, 1996),
Holanda mostr una prevalencia de 51.5% en un estudio donde se evaluaron 50
hatos lecheros (Wouda et al, 1999), Francia realiz una encuesta serolgica
mediante una prueba de ELISA en 575 vacas de raza normanda y 219 de raza
Charolais que tuvieron problemas de aborto y encontraron una prevalencia de
26% y 14% respectivamente (Klein et al, 1997). En Asia se logr aislar el parsito

en 9 fetos y 2 terneros nacidos de vacas sospechosas de infeccin por N.

caninum en Corea del Sur (Kim et al, 2000) y Taiwn report una prevalencia de
44.9% (Ooi et al, 2000).
En el continente ocenico, se report en Australia una prevalencia de 24%
(Atkinson et al, 2000).
En el continente Americano tenemos que; en los Estados Unidos de Norteamrica
es la mayor causa de aborto en con prevalencias que van desde 2.17 a 38%
(Anderson et al, 1994). Canad reporto una prevalencia de 21.9% (Bergeron et al,
2000), Mxico presenta actualmente una prevalencia de 56% (Morales et al,
2001).
En otros pases de Sudamrica tambin se confirm la presencia del parsito,
reportndose prevalencias de 14.09% en Brasil, al evaluarse 447 sueros
provenientes de vacas lecheras de la ciudad de Bahia (Gondim et al, 1999 ) y de
56.9% en Argentina (Campero et al, 1998) en ambos casos utilizando la prueba de
inmunofluorescencia indirecta. Lozada (2004), utilizando un kit comercial de ELISA
para determinar la presencia de anticuerpos a N. caninum en la zona centro-norte
de Ecuador, hall que el 42% de las muestras fueron positivas a la presencia de
anticuerpos anti-N. caninum, el 2.8% fue sospechosa y el 55.2% result negativo.
Dicho autor menciona que los animales positivos habran estado expuestos al
parsito en algn momento de su vida y en muchos casos estaran relacionados
directamente a la etiologa de deficiencias reproductivas.
Resultados previos en otras zonas del pas indican seroprevalencias de N.
caninum de 43% en Cajamarca (Cabrera et al., 2000), 57% en Arequipa
(Andresen, 1999), 30% en el valle de Lima (Silva et al., 2002) y 40% en Amazonas
(Quevedo et al., 2003).
En el trabajo realizado por Silva (2002), en el valle de Lima se evaluaron 304
sueros de vaca lecheras adultas provenientes de 19 establos lecheros ubicados
en la zona norte (n=12) y en la zona sur (n=7) del valle de Lima para la deteccin
de anticuerpos contra N. caninum mediante la prueba de IFI. El 29.61% 5.13
(90/304) present anticuerpos contra el parsito en una dilucin de 1:200. En la
zona norte el 40.83% 8.79%(49/120) y en la zona sur 22.28% 6.01%(41/184).
A su vez, se tiene que de la totalidad de los establos evaluados presentaron al
menos un animal seropositivo, lo cual estara indicando que los animales se
encuentran expuestos a una fuente de infeccin no determinado.
Atocsa (2005), estableci la seroprevalencia de Neospora caninum en vacunos
lecheros criados al pastoreo de la provincia de Melgar, Puno, mediante la
deteccin de anticuerpos sricos por la tcnica de inmunofluorescencia indirecta
(IFI). El citado autor evalu 419 sueros obtenidos en forma aleatoria de siete
fundos ganaderos donde las prevalencias obtenidas variaron desde 4.0 7.7%
hasta 37.5 11.9%. La prevalencia general fue considerada moderada (18.1
3.7%). Todos los fundos presentaron, al menos, un animal seropositivo.

Rivera et al. (2004), hallaron en la Estacin Experimental del IVITA- Pucallpa que
la neosporosis no est, al parecer, muy difundida en el hato, pues slo el 15% de
los bovinos adultos presentaron anticuerpos contra el protozoo N. caninum. Estos
autores mencionan que la escasa difusin del N. caninum en el hato en estudio
podra ser debida a la nula introduccin de animales positivos o a la ausencia de
perros infectados. En comparacin, en el estudio realizado en la provincia de
Chachapoyas (zona de selva alta), se menciona una prevalencia del 40.4%. Esta
diferencia puede deberse a que all hubo introduccin de animales, principalmente
de Cajamarca, donde se reporta una prevalencia superior al 50%(Cabrera et al.,
2000). La baja prevalencia del parsito en la EE IVITA constituye una ventaja para
la inmediata erradicacin de los animales reactores del hato y una seal de aleta
para reforzar la bioseguridad, no introduciendo animales sin un previo descarte de
este parsito.
Como se indico anteriormente Quevedo (2003), report la prevalencia de
anticuerpos contra Neospora caninum en bovinos de dos distritos de la provincia
de Chachapoyas, la cual fue de 40.4% (107/265). La presencia de anticuerpos
indica que estos animales fueron expuestos al parsito en algn momento de la
etapa pre o postnatal. Todas las ganaderas de los distritos de Molinopampa y
Leymebamba de la misma provincia, tuvieron animales reactores a N. caninum.
En el mbito regional se tiene que Cahuana (2006) report una seroprevalencia
del 28%(32/115) en el sector Sama Grande del distrito de Sama-Incln. En este
estudio se obtuvieron 115 muestras sanguneas de bovinos lecheros distribuidos
por edad (2 a 4.5, < 4,5 a 7 y < 7 a 10 aos) y por lugar de procedencia (Arequipa,
Ite, Sama y la Yarada). A travs de una prueba de IFI se determin una
seroprevalencia a N. caninum la cual resulto ser moderada y con un valor de
28.70% 8.27; considerando la edad de los animales se observ que los animales
de < 7 a 10 aos presentaron los valores ms elevados de seroprevalencia (44.4
32.46%), luego los animales de 2 a 4.5 aos (27.87 11.25%) y finalmente los
animales de < 4,5 a 7 aos (26.67 12.92%) respectivamente. De otro lado, la
seroprevalencia del parasito considerando el lugar de procedencia fue de 30.00
16.40% para animales procedentes de Arequipa, 50.00 40.01% para Ite, 30.00
10.74% para Sama y ausente para la Yarada, respectivamente. Analizando la
edad y la procedencia de los animales como posibles factores de riesgo, stos no
resultaron estadsticamente significativos. Por lo tanto, la edad y la procedencia no
representan factores que influencien o condicionen la presencia de la enfermedad.
Tambin Alarico (2012) report una una seroprevalencia positiva de 44,10 %, de
un total de 195 animales muestreados, 86 resultaron positivos en el distrito de
Locumba.

3.2 Marco Conceptual

3.2.1 Etiologa.
El primer reporte de infeccin producida por Neospora caninum, protozoo de
aspecto similar al Toxoplasma gondii,
fue realizado en Noruega por
observaciones a una camada de perros con diagnstico de encefalopata mortal
(Bjerkas et al., 1984). Posteriormente, en Estados Unidos se aisl un parsito
similar en perros con alteraciones neurolgicas. Despus de varios estudios, se
logr identificar y describir a este nuevo parsito con caractersticas diferentes a
las del Toxoplasma gondii y se le denomin Neospora caninum (Dubey et al,
1988).
N. caninum se incluye dentro del philum Apicomplexa, clase Sporozoea, subclase
Coccidia, orden Eucoccidia, suborden Eimeriina y familia Sarcocystidae, junto con
los gneros Toxoplasma, Sarcocystis, Hammondia y Besnoitia (Dubey et al.,
1988).
Recientemente se ha incluido dentro del gnero Neospora a una especie que ha
sido encontrada en caballos y presenta diferencias moleculares con Neospora
caninum. Esta nueva especie se denomina Neospora hughesi (Marsh et al, 1998).
3.2.2. Epidemiologa.
Neospora caninum fue reconocido como causante de problemas nerviosos en
caninos, posteriormente se relaciona por primera vez con un cuadro de aborto
bovino en un establo lechero de Nuevo Mxico (Thilsted y Dubey, 1989). Desde
entonces se ha comprobado que este protozoo afecta a diferentes especies
animales como cabras, ovejas, yeguas, ratones, ciervos (Dubey y Lindsay, 1996),
bfalo de agua, coyote, zorro rojo y camellos, de manera experimental a gatos,
jerbos (Dubey, 1999), primates no humanos (Barr et al, 1994) y cerdos (Jensen et
al, 1998). Los problemas de abortos asociados a infeccin por Neospora caninum
e infecciones congnitas han sido reportados en bovinos de leche y carne
(Anderson et al, 2000).
3.2.3. Ciclo Biolgico
Se determin que el perro es el hospedero definitivo de este parsito y son ellos
los que diseminan al medio ambiente los ooquistes no esporulados (McAllister et
al, 1998). Estos ooquistes se hacen infectivos al esporular en el medio ambiente a
las 24 horas. Los ooquistes esporulados al ser ingeridos por algn animal
hospedero llegan al tracto intestinal liberando los esporozotos y estos penetran en
las clulas entricas transformndose en taquizotos (Lindsay et al, 1999).
Estos taquizotos son viables a 4C por 14 das, pero no resisten temperatura de
congelacin, penetran en las clulas hospederas por invasin activa localizndose
en el citoplasma, dentro de una vacuola parasitfora, la cual se puede apreciar en

nmero variado dentro de una misma clula hospedera (Dubey y Lindsay, 1996).
Estos taquizotos se dividen rpidamente por endodiogenia y suelen agruparse
formando quistes tisulares de forma redondeada a oval. Se pueden apreciar con
mayor frecuencia en tejido nervioso, luego pueden transformarse en bradizotos.
Se sugiere que slo los bradizotos pueden inducir la excrecin de ooquistes en el
perro (Lindsay et al, 1999), estos bradizotos son resistentes a la solucin de HCl
Pepsina (Dubey y Lindsay, 1996).
3.2.4. Patogenia
La informacin obtenida hasta el momento sobre el mecanismo de accin
patgena de Neospora caninum es muy limitada, se ha llegado a determinar que
el perro es el hospedero definitivo de este parsito (McAllister et al, 1998) y la
nica forma de transmisin reconocida en bovinos es la vertical, de madre a cra
va trasplacentaria (Bjrkman et al, 1996). La forma de transmisin horizontal, por
contacto directo, no es muy frecuente en los bovinos pero s en caninos (Bergeron
et al, 2000). Aunque se lleg a determinar contagio por ingesta de alimento
contaminado con ooquistes provenientes de perros infectados (De Marez et al,
1999) y experimentalmente, por ingesta de calostro contaminado con ooquistes
(Uggla et al, 1998). Una vez dentro del organismo hospedero, los taquizotos
pueden infectar las clulas de casi todos los tejidos del animal, evidencindose un
mayor tropismo hacia las clulas del sistema nervioso central, clulas musculares
esquelticas y cardiacas y clulas endoteliales (Dubey y Lindsay, 1996).
Experimentalmente, se ha observado que los taquizotos se adhieren a las clulas
y posteriormente las invaden, rodendose de una parte de la membrana
plasmtica de la clula hospedera (Dubey, 1999), mediante este proceso el
parsito se puede localizar intracitoplasmticamente en los primeros cinco minutos
de contacto con la clula (Dubey y Lindsay, 1996).
La multiplicacin activa de los taquizotos de Neospora caninum en las clulas
infectadas ocasiona la destruccin de las mismas y da lugar a la aparicin de
focos de necrosis, los cuales constituyen la principal lesin de esta enfermedad
(Lindsay et al, 1999). En el rea de multiplicacin parasitaria, el hospedero
desarrolla una respuesta inflamatoria no purulenta, constituida por macrfagos,
linfocitos y clulas plasmticas que rodean a dichas reas necrticas. En el
sistema nervioso central el parsito invade de forma activa neuronas y astrocitos,
provocando trastornos neuromusculares graves por destruccin de clulas
nerviosas lo que afecta la transmisin del impulso nervioso (Dubey y Lindsay,
1996).
El conocimiento de los mecanismos de accin patgena del parsito responsable
de la muerte del feto es tambin escaso. Se sabe que el aborto puede presentarse
entre el tercer y noveno mes de gestacin, ocurriendo con mayor frecuencia entre
el cuarto y sexto mes (Anderson et al, 1994), se sugiere que el aborto se
producira tanto por la invasin placentaria con la respectiva necrosis y placentitis
que se desencadena en este rgano, como por las lesiones inducidas en el feto.
Sin embargo, en todos los casos no produce la muerte (Dubey y Lindsay, 1996).

La forma de transmisin vertical, frecuente en bovinos, podra mantener la

infeccin latente por muchos aos en un mismo hato (Schares et al, 1998). Se ha
establecido una relacin directa entre la infeccin por Neospora caninum en vacas
de establos lecheros y la presencia de perros infectados por este parsito (Wouda
et al, 1999b). Habindose llegado a encontrar el parsito en canales bovinas
(Wyss et al, 2000).
3.2.5. Signos clnicos.
En los bovinos adultos el aborto es el nico signo clnico observado en hembras
gestantes infectadas, los abortos pueden producirse en cualquier poca del ao y
presentarse en forma espordica, o en forma de brotes endmicos, sin otras
seales de enfermedad previa (Dubey y Lindsay, 1996). El aborto puede
producirse en vacas de primer parto o multparas, la fertilidad despus del aborto
no se ve afectada y las vacas entran en celo sin mayor dificultad. Un pequeo
porcentaje de animales puede volver a abortar en la gestacin siguiente y en otras
posteriores (Stenlund et al, 1999). Los abortos suelen presentarse entre el tercer
mes hasta el trmino de la gestacin siendo la mayor frecuencia de abortos entre
el cuarto y el sexto mes de gestacin (Anderson et al, 1994). Vacas seropositivas,
con anticuerpos contra Neospora caninum, son ms susceptibles para abortar que
vacas seronegativas (Wouda et al, 1998). No se ha establecido si la infeccin por
este parsito puede causar problemas reproductivos en estados tempranos de
gestacin, pero se report muerte y momificacin de fetos de aproximadamente 3
meses de edad gestacional asociado a brotes de neosporosis (Anderson et al,
2000).
La infeccin del feto no siempre provoca la muerte y en ocasiones se produce el
nacimiento de terneros infectados congnitamente y con signos nerviosos (Dubey,
1999). Los fetos presentan lesiones en cerebro e hgado, compatibles con
encefalitis multifocal con gliosis y hepatitis multifocal, placenta (Schares et al,
1997), corazn, compatible con miocarditis difusa no supurativa (Agerholm y Barr,
1994), rin, msculo esqueltico y glndula adrenal (Anderson et al, 1994). El
feto abortado se presenta usualmente autolisado, con acumulacin de fluido
serosanguinolento en las cavidades del cuerpo (Anderson et al, 2000).
En caninos, el signo clnico ms relevante es la paresia e hiperextensin de los
miembros posteriores con atrofia de la musculatura de la zona y rigidez del tarso,
esto es observable en los primeros seis meses de vida en cachorros nacidos
infectados. Debido a la presentacin de una severa polimiositis y una
meningoencefalomielitis diseminada, igualmente se puede presentar miocarditis,
neumona y dermatitis (Peters et al, 2000).

3.2.6. Diagnstico
Aunque la infeccin por N. caninum en los fetos abortados solo puede
diagnosticarse en cada caso individual -deteccin de anticuerpos especficos y/o
identificacin del parsito en los tejidos (inmunohistoqumica, PCR)-, los anlisis
serolgicos en los animales adultos proporcionan una informacin inicial acerca de
la magnitud del problema.
El diagnstico etiolgico del aborto en el ganado bovino es complejo y laborioso y,
de hecho, solamente se consigue determinar su origen en menos del 50% de los
casos remitidos a los laboratorios especializados. En aquellos casos en los que se
llega a un diagnstico etiolgico, ms del 90% corresponden a agentes infecciosos
y parasitarios entre los que, actualmente, ocupa un lugar destacado N. caninum.
La valoracin adecuada de los datos de la anamnesis y la investigacin
epidemiolgica, as como de los datos obtenidos en el examen clnico y lesional de
los animales afectados (hembras abortadas y sus fetos) debe realizarse siempre,
aunque es imprescindible la realizacin del diagnstico laboratorial para confirmar
la etiologa del aborto teniendo en cuenta otras posibles causas infecciosas y no
transmisibles (lvarez, 2003).
a. Pruebas serolgicas
a.1. Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI).
La IFI detecta, fundamentalmente, anticuerpos que se unen a los antgenos
localizados en la superficie celular de N. caninum. Se considera como resultado
positivo cuando se observa la fluorescencia en toda la superficie del taquizoto,
que normalmente aparece cuando se analizan sueros con ttulos moderados o
altos. El patrn de IFI vara cuando se analizan sueros con ttulos bajos,
reducindose considerablemente la fluorescencia o quedando restringido a la
parte apical del taquizoto. En la IFI se ha empleado como antgeno taquizotos de
N. caninum de aislados de origen bovino y canino, no existiendo evidencias de
que las posibles diferencias antignicas entre los diferentes aislados puedan
afectar a la precisin de la prueba.
La IFI requiere para su realizacin de una experiencia previa y el tiempo necesario
para la realizacin de la tcnica en comparacin con el ELlSA y la subjetividad
inherente a su sistema de interpretacin, hacen que en la actualidad se utilice
cuando se trabaja con un nmero reducido de muestras. Esta tcnica serolgica
se ha empleado en el diagnstico de la infeccin y en estudios epidemolgicos en
un gran nmero de especies, incluyendo el perro, el zorro, el gato, el ganado
bovino, la cabra, la oveja, diversas especies de roedores y primates. As mismo, la
IFI ha sido considerada como la tcnica de referencia ("gold estandar") en la
neosporosis, con la cual han sido comparadas otras tcnicas serolgicas.
Esta prueba tiene una sensibilidad de 98% y una especificidad de 99% (Packham
et al, 1998).

3.2.7. Tratamiento
El tratamiento de la neosporosis en caninos ha sido satisfactorio en algunos perros
con signos iniciales de la enfermedad, la respuesta del paciente depender del
estado en que se encuentre la enfermedad al momento de iniciarse el tratamiento.
Se ha establecido que una combinacin de trimetoprim y sulfadiazina en una dosis
standard de 15 mg/kg, dos veces al da, y pirimetamina a 1 mg/kg por da todo
durante cuatro semanas revierte la parlisis asociada a Neospora caninum en
algunos perros. Trabajos experimentales in vitro e in vivo con diferentes drogas no
han dado resultado en bovinos (Dubey y Lindsay, 1996).
3.2.8. Control
Las medidas preventivas y de control estn orientadas reducir la exposicin de los
hospederos naturales (bovinos y perros), sin embargo deben estar adecuadas a
las caractersticas de cada explotacin. Por lo tanto lo ms recomendable sera,
evitar el contacto de los perros con el ganado sobre todo en poca de paricin.
a. Control de la transmisin vertical
La transmisin congnita es la forma ms comn de infeccin de N. caninum en
los bovinos (Dubey, 2002). El nacimiento de terneros clnicamente sanos, pero
infectados transplacentariamente es otro problema en el control de la enfermedad,
por que estos animales pueden ser utilizados para la reposicin de animales y de
esta manera la parasitosis permanece en el rebao. Por lo tanto la primera medida
de prevencin y control es el monitoreo serolgico de todos los animales del hato,
con la intencin de reducir los animales seropositivos dentro del hato. lvarez et al
(1999) mencionan las siguientes medidas para este fin:
- Eliminar las vacas seropositivas si la tasa de infeccin es alta y se
comprueba gran implicancia de neosporosis en la tasa de abortos.
- Eliminar las vacas seropositivas si la tasa de infeccin es baja aunque
la neosporosis no intervenga en la tasa de abortos.
- Si no es posible la eliminacin de animales, se opta por la separacin
gradual en el siguiente orden: vacas seropositivas con abortos que
tienen cras seropositivas primero, luego vacas seropositivas con
antecedentes de aborto y por ltimo vacas seropositivas.
- Evitar la reposicin con terneras infectadas. Las terneras con madres
seropositivas que nacen sin infeccin deben ser alimentados con
calostro de madres seronegativas.
- Descartar neosporosis y otros problemas reproductivos antes de
introducir animales en la explotacin.

b. Control de la transmisin horizontal

El conocimiento de esta ruta de transmisin es limitado. A pesar que no existen
reportes que demuestren que esta se presente en forma natural y que
presumiblemente ocurra en forma escasa, se sabe que el perro es el nico
hospedador definitivo y con esta informacin se han podido plantear medidas para
reducir la contaminacin ambiental con ooquistes (lvarez et al., 1999) como:
- Eliminar los fetos, fluidos y placentas evitando que puedan ser ingeridos
por los perros, lamidos por la hembra abortada o entrar en contacto con
otras vacas.
- Evitar la exposicin del alimento (pienso, concentrado, ensilaje, pastos,
etc.) y agua con las heces de perros.
- Controlar y disminuir en lo posible el contacto de perros lugares de
alojamiento de animales.
- Evitar alimentar a los perros con carne cruda.
En general, la neosporosis se presenta como una causa ms de aborto
y el control debe ir encaminado, fundamentalmente, a reducir la
prevalencia de la infeccin en las explotaciones con brotes declarados y
a prevenir su propagacin a otras evitando tanto la transmisin
horizontal como la vertical.
Las medidas de control de la infeccin, en un futuro, debern incluir
adems el tratamiento qumico y la inmunoprofilaxis.
3.2.9. Zoonosis.
Hasta el momento, no se ha detectado la presencia de N. caninum en el hombre,
pero su estrecha relacin con T. gondii patgeno importante en mujeres gestantes
y en individuos inmunodeprimidos y el hecho de que la infeccin haya sido
establecida experimentalmente en el macaco apuntan la posibilidad de la infeccin
humana. En estudios realizados en mujeres con historia de abortos se han
detectado la presencia de anticuerpos frente a N. caninum. Aunque la tasa de
eropositividad fue muy baja, estos resultados indican que anticuerpos frente a N.
caninum pueden estar presentes en el suero humano y no se debe descartar la
posibilidad de la infeccin por este parsito afecte al hombre.

IV. METODOLOGIA DE LA INVESTIGACIN

4.1. Lugar de Estudio.
El presente trabajo de investigacin se realizar en el distrito de Candarave
perteneciente a la provincia de Candarave y regin de Tacna, Candarave se
encuentra se encuentra a 3.415 msnm de altitud y est ubicado a 70 12'15" de
longitud Oeste, 17 15'30" latitud Sur. A 170 Km. al noreste de la ciudad de Tacna
(6 horas y 30 minutos en auto). Su nombre, de origen aymara, significa "Lugar de
Cndores". Se ubica en una explanada al fondo de una gran hondonada. Al pie
del volcn Yucamani, presenta un clima Clima de Yunga, con temperaturas
ligeramente altas, poca humedad, aire transparente. (Fuente: MINCETUR, 2005.)
4.2. Tipo de investigacin.
El tipo de investigacin ser descriptiva transversal o de corte. Se utiliza
cuando se estudia determinado fenmeno en un momento dado. Es empleado
para conocer la evolucin de un suceso o fenmeno en una poblacin.
Corresponden a este tipo, los estudios de prevalencia. En este tipo de estudio, los
datos y mediciones de los individuos se toman una sola vez.
4.3. Poblacin y muestra.
El Universo de animales para esta investigacin, es la poblacin total de
bovinos en el distrito de Candarave, es de 1752 bovinos, MINAG-DIA (2008).
4.3.1. Tamao de la Muestra.
Para determinar el tamao de la muestra, se aplicar la frmula de
proporciones en poblaciones finitas validada por Daniel (1996).
n

Donde:

NZ 2 pq
E 2 ( N 1) Z 2 pq

eliza

n= Tamao de la muestra en relacin a la poblacin total

N= Tamao de la poblacin total
Z= Nivel de Confianza estandarizada
p= Proporcin determinada anteriormente
q= 1- p
e= Precisin

:
: 943
: 1.96
: 0.20
: 0.80
: 0.05

(943)(1.96) 2 (0.20)(0.80)
0.05 2 (943 1) (1.96) 2 (0.20)(0.80)

n=195
El tamao de la muestra (n = 195) representa el nmero de animales
a muestrearse.
Para mejorar la cobertura del muestreo, las muestras fueron
estratificadas por establos utilizando la siguiente frmula.
Nh
nh

-------- x n
N

Donde:
nh
Nh
N
n

=
=
=
=

nmero de muestras del establo h.

nmero de animales del establo h.
Poblacin total.
Tamao muestral.

4.4. Diseo de la Investigacin.

4.4.1. Mtodo de muestreo.
- Sern tomadas 195 muestras de sangre en una cantidad de 6ml
correspondiendo a una por animal.
- Las muestras sern obtenidas a travs de la puncin de la vena
coccgea, previa desinfeccin de la zona y recibidas en un tubo al
vacio con separador de suero. El tubo ser codificado y se
registrar los datos correspondientes en la ficha de muestreo.
- Las muestras sern trasvasadas en los viales dentro de las 24
horas posteriores a la toma, tiempo en que se produce la
separacin del suero sanguneo.

Los viales sern conservados a temperatura de conservacin de

-20C. hasta que sean enviados al Laboratorio de Sanidad
Animal.
El mtodo de encuesta es el que se utiliza para conocer los
factores epidemiolgicos esta se realizar en el momento de la
toma de la muestra.

4.4.2. Mtodo de Laboratorio.

El mtodo a utilizar para el anlisis de las muestras ser la Prueba
de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI).
- Se realizar la dilucin del suero problema, colocando el buffer
dilutor y de suero, hasta obtener una dilucin de 1:200.
- Luego se colocar 9 I del suero diluido, en lminas de 18
pocillos para IFI, fijada previamente con taquizoitos de N.
caninum.
- Seguidamente, se lleva a estufa (37C) en cmara hmeda, por
30 minutos y luego se procedi a lavarla con buffer de lavado en
agitacin durante 10 minutos (2 veces).
- A continuacin del lavado, la lmina ser secada y se colocar en
cada pocillo 6 de conjugado, marcado con isotiocianato de
fluorescena.
- Se coloca nuevamente en la incubadora a 37C en cmara
hmeda, por 30 minutos.
- Despus de transcurrido este tiempo se lava la lmina en buffer
de lavado rpidamente, luego se coloca en Azul de Evans
(MERCK) durante 10 minutos (2 veces).
- La lmina nuevamente es lavada con buffer de lavado durante 5
minutos y despus con agua destilada por otros 5 minutos.
- Finalmente la lmina se seca, para adicionarle glicerina (lquido
de montaje) y una laminilla cubreobjetos.
- La lectura de las lminas procesadas se realizar en el
microscopio de fluorescencia con el objetivo de inmersin (100X).
a. Lectura de resultados
La fluorescencia completa del taquizoito, se interpretar como
un resultado seropositivo, mientras que la fluorescencia parcial
o ausente del taquizoito, indicar un resultado seronegativo.
4.5. Mtodos y tcnicas de recoleccin de datos.
Los datos que servirn para determinar la seroprevalencia, que son
resultado de la Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI),
estarn dados como seropositivos o como seronegativos. Estos
datos sern ordenadamente registrados para su posterior anlisis.

Los datos correspondientes a las encuestas, que sirven para

identificar los factores epidemiolgicos tendrn que ser ordenados y
registrados para su posterior anlisis. Estas encuestas sern
realizadas en el momento de la toma de muestras.

4.6. Mtodos y tcnicas de anlisis de datos.

Determinacin de la seroprevalencia:
Para determinar la seroprevalencia (P) de Neospora caninum en
Bovinos Lecheros del distrito de Locumba y considerando la
seropositividad de los sueros a la prueba serolgica, los resultados
se expresarn en porcentaje con su respectivo intervalo de
confianza. Para estimar estos valores se usarn las siguientes
frmulas:
La seroprevalencia a la prueba, se estimar utilizando la siguiente
frmula:
N muestras positivas
P = -----------------------------------

X 100

N total de muestras
La seroprevalencia corregida, para calcular la seroprevalencia real
o corregida, teniendo como base el 98% de sensibilidad y 99% de
especificidad de la prueba utilizada, sta se estimar utilizando la
siguiente frmula:

Donde:
p
p

=
=
=
=

prevalencia corregida.
prevalencia encontrada.
sensibilidad de la prueba
especificidad de la prueba

Intervalo de confianza, los resultados sern expresados con un

intervalo de confianza del 95%, su estimacin ser mediante la
siguiente frmula:

Donde:
p = prevalencia encontrada
z = 95% de nivel de confianza.
n = tamao muestral.
-

Identificacin de los factores epidemiolgicos;

El anlisis de datos se realizar a partir de las encuestas. Los
resultados que se obtengan sern expresados en porcentajes.

V. ASPECTO ADMINISTRATIVO.
5.1. Plan de trabajo y cronograma de actividades.
Plan de trabajo:
1. Elaboracin del proyecto de tesis.
- Investigacin preliminar (revisin bibliogrfica).
- Redaccin preliminar.
- Presentacin del proyecto de tesis.
- Revisin y correcciones del proyecto de tesis.
- Aprobacin del proyecto de tesis.
2. Toma de muestras.
- Se tomarn las muestras correspondientes.
- Se realizara la encuesta epidemiolgica a cada establo al
momento de la toma de muestra.
- Culminado el muestreo se viajar al Laboratorio de Sanidad
Animal- SENASA (Lima) para el anlisis correspondiente.
3. Trabajo de Laboratorio.
- Capacitacin previa para la realizacin de la prueba de
inmunofluorescencia indirecta (IFI).
- Realizacin efectiva del anlisis de las muestras.
4. Anlisis de resultados.
- Codificacin y tabulacin de los resultados.
- Interpretacin de resultados.
- Sistematizacin de la informacin.
5. Elaboracin del Informe Final.
- Elaboracin del informe de tesis.
- Presentacin del informe de tesis.

Revisin y correcciones del informe de tesis.

Aprobacin de la tesis.
Sustentacin de la tesis.

Cronograma de actividades:
Actividades
Revisin bibliogrfica
Elaboracin del proyecto
Organizacin de recursos
Ejecucin del proyecto
Recoleccin de datos
Anlisis e interpretacin de datos
Redaccin final y sustentacin

Meses
1
2
x
x
x
x
x

x
x

5.2. Recursos.
5.2.1. Recursos humanos.
- Asesores.
- Tesista.
5.2.2. Recursos Materiales.
a. Materiales y equipos de campo:
- Tubos Vacutainers (7 y 10 ml.)
- Agujas venoject (21 X 1 Y 21 X 1.5)
- Holders.
- Crioviales plsticos (1.5 mi) para conservacin de suero.
- Pipetas de transferencia (3 ml.)
- Unidad isotrmica (cooler conservador).
- Alcohol y algodn.
- Cinta de rotulacin (Masking tape).
- Marcador.
- Materiales de sujecin.
- Fichas de campo y encuestas.
- Botas y mameluco.
b. Materiales, equipos e insumos de laboratorio:
- Centrfuga (3000 rpm.).
- Microscopio de inmunofluorescencia.
- Isotiocianato de fluorescena.
- Azul de Evans
- Glicerina.
- Tubos de centrifuga
- Pipetas de 1ml, 2ml, 5ml, 10ml.

Microplacas de 96 posillos.
Beakers
Probetas de 100ml.
Balanza analtica.
Papel toalla.
Solucin Buffer de fosfatos (PBS).

5.3. Presupuesto estimado.

Descripcin
Medida Cantidad
P.U.
Materiales y equipos de campo
Cooler
Unidad
1
35
Conservador de muestras
Unidad
4
2
Agujas para vacutainer N 20Gx1"
Unidad
250
0.5
Agujas descartables N 25Gx5/8"
Unidad
250
0.3
Tubos al vaco con separador de
suero
Unidad
250
1.2
Holder (sujetador) de tubos al vaco
Unidad
3
1
Jeringa automtica tuberculina 3ml.
Unidad
1
EE
Desinfectante (Alcohol medicinal)
Litro
2
8
Algodn hidrfilo
Paq.x500gr
4
5
Gradillas para 40 tubos
Unidad
3
10
Viales 45x1.5-2.0ml
Unidad
250
0.4
Botas de jebe
Par
1
EE
Mameluco
Unidad
1
EE
Soga
Metros
6
0.5
Mocheta
Unidad
1
EE
Fichas de campo y encuestas
Unidad
250
0.1
Sub total
Materiales, equipos e insumos de laboratorio
Tubos de centrifuga
EE
Pipetas de: 1ml, 2ml, 5ml, 10ml
EE
Erlenmeyer de diferentes
capacidades
EE
Microplacas de 96 posillos de
poliestereno
EE
Gradillas
EE
Beakers de 100ml, 200ml
EE
Botellas autoclaves
EE
Probetas de 100ml
EE
Multitest slide, 12 wel, 7mm diam.
ICN:6041205
EE
Cmara hmeda
EE
Estufa incubadora
EE
Balanza analtica
EE

Total
35
8
125
75
300
3
0
16
20
30
100
0
0
3
0
25
740
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

Congeladora -20C
Microscopio de inmunofluorescencia
Vortex
Micropipetas multicanal 5-50ul
Antgeno de Neospora caninum
Solucin Buffer de fosfatos(PBS)
Sub total
Material de escritorio
Hojas
Millar
Tipeo e impresin de tesis
Unidad
Fotocopias
Empaste de tesis
Unidad
Sub total
Otros
Anlisis de suero para Neospora
caninum (IFI)
Prueba
Cmara fotogrfica digital
Unidad
Alquiler de movilidad
Dias
Viajes y estadia
Dias
Sub total
Imprevistos(10%del total)
TOTAL (S/.)
EE: En existencia

EE
EE
EE
EE
EE
EE
EE

0
0
0
0
0
0
0

1
3

12
100
20
75
207

241
1
7
7

10.15
EE
10

2446.15
0
70
300
2782.41
372.941
4136.091

5.4. Financiamiento
Las fuentes de financiamiento estarn a cargo de Senasa y el ejecutor.
VI. BIBLIOGRAFA.
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VII. ANEXOS

ANEXO 01
FICHA DE TOMA DE MUESTRA
Fecha:.

Ficha N:
.

Datos del predio:

Nombre del Propietario:
.
Nombre del Establo:
..

Identificacin

Raza

Edad

Procedencia

Observacion
es

ENCUESTA EPIDEMIOLGICA
1. Ha tenido alguna vez problemas de abortos?
a)Si..
b)No
2. En qu tercio de la gestacin alguna vez observo aborto en
sus vacas?
c)En el
a)En el primer..
b)En el segundo
tercer.
3.Que hace con los fetos y/o placentas de los partos o
abortos?
a)Los ignora
d)Los entierra..

b)No los ve..

4. Existe la presencia de perros en su

predio?
a)Si.
b)No..
5. Ha visto la presencia de zorros por su predio o
alrededores?
a)Si.
b)No..

c)Se los da al
perro.