Los anticuerpos monoclonales

Los anticuerpos monoclonales

La curiosidad como fuente de
riqueza
Antecedentes
Antecedentes
Burnet (1959): Teora de la seleccin clonal
Waldenstrm (1961): GM
Potter (1972): Mielomas en ratones
Askonas y Williamson: Inmortalizacin y
clonado in vivo
1927 1927- -2002 2002
Csar Milstein y
Georges Khler
(1975):
Hibridizacin de clulas
somticas
Teor
Teor

a y aspectos generales de la producci

a y aspectos generales de la producci

n
n
de hibridomas
de hibridomas
Littlefield (1960): Medios selectivos y
fusgenos
Hibridoma:
No presenta exclusin allica
No se producen nuevas cadenas de Igs
Mieloma no secretor
Anticuerpos policlonales:
Son aquellos que proceden de
distintos clones de linfocitos
B estimulados
Anticuerpos monoclonales:
Son aquellos que derivan de un
solo clon de linfocitos B y son
especficos para un epitope
determinado, constituyendo
una poblacin homognea
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
Preparation of Myeloma Cells
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
Immortal Tumor Of Lymphocytes
+
8 - Azaguanine
Myeloma Cells
High Viability & Rapid Growth
HGPRT
-
Myeloma Cells
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
Immunization Of Mice & Selection Of Mouse Donor For
Generation Of Hybridoma cells
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
ANTIGEN ( Intact cell/
Whole cell membrane/
micro-organisms ) +
ADJUVANT
(emulsification)
Ab titre reached in Serum
Spleen removed
(source of cells)
2.000-5.000 hbridos/10
8
esplenocitos
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
Screening Of Mice For Antibody Production
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
After several
weeks of
immunization
Serum Antibody Titre Determined
(Technique: - ELISA / Flow cytometery)
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
Fusion of Myeloma Cells with Immune Spleen Cells &
Selection of Hybridoma Cells
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
FUSION
PEG
MYELOMA CELLS
SPLEEN CELLS
HYBRIDOMA CELLS
ELISA PLATE
Feeder Cells
Growth Medium
HAT Medium
1. Plating of Cells in
HAT selective
Medium
2. Scanning of Viable
Hybridomas
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
Cloning of Hybridoma Cell Lines by Limiting Dilution or
Expansion
HYBRIDOMA TECHNOLOGY
A. Clone Each Hybridoma
B. Test Each Supernatant for Antibodies
C. Expand Clones
Mouse
Ascites
Method
Tissue
Culture
Method
1-15 mg/mL 0,01-0,5 mg/mL
Purificaci
Purificaci

n de
n de
AcMo
AcMo
Preparacin de la muestra
Purificacin principal
Purificacin posterior
EVOLUTION OF MONOCLONAL ANTIBODY
FDA APPROVED MONOCLONAL ANTIBODIES
H 2003 Psoriasis Raptiva

Genentech/Xoma
C 1997 Non-Hodgkins Lymphoma Rituxan BiogenIdec/Genentech/Roche
M 2003 Non-Hodgkins Lymphoma Bexxar Corixa/GlaxoSmithKline
C 2004 Colorectal Cancer Erbitux

BMS/ImClone Systems
H 2003 Asthma Xolair Novartis/Genentech/Tanox
PD 2002 Rheumatoid Arthritis Humira

Abbott/CAT
H 2001 Chronic Lymphocytic
Leukemia
Campath Schering /ILEX Oncology
H 2000 Acute Myleoid Leukemia Mylotarg

Wyeth
C 1998 Acute Transplant Rejection Simulect Novartis
C 1998 Crohns, Rheumatoid Arthritis Remicade J & J
H
H
1998
2004
Breast Cancer
Colorectal Cancer
Herceptin
Avastin
Genentech/Roche
H 1998 Viral Respiratory Disease Synagis MedImmune/Abbott
H 1997 Acute Transplant Rejection Zenapax PDLI
M 2002 Non-Hodgkins Lymphoma Zevalin

BiogenIdec
C 1994 Acute Cardiac Conditions ReoPro J&J/Eli Lilly
M 1986 Organ Transplant Rejection Orthoclone-OKT Ortho Biotech
Antibody
Type
(2)
Date of
FDA
Approval Indications Name of Product
(1)
Company Name
OKT3-Muromonab 1992: Prevencin del rechazo en los
trasplantes de rin.
Abciximab (Reopro) 1997: Acta inhibiendo la agregacin
plaquetaria. Anti IIb-IIIa. Prevencin en pacientes de alto
riesgo de trombosis coronaria aguda que sean sometidos a
angioplastia coronaria transluminal percutnea.
Rituximab (Mathera) 1999: Especfico para los receptores de
superficie CD20 de los linfocitos B humanos. Est indicado en
el tratamiento de linfoma folicular de clulas B que hayan
recado o sean refractarios a otros tratamientos.
Trastuzumab (Herceptin) 2000: Un anticuerpo monoclonal
IgG humanizado dirigido contra el receptor HER2,
presente en las clulas tumorales. Ha sido evaluado en
clnica en ensayos para el tratamiento de mujeres con cncer
de mama metastticos avanzado con sobrexpresin de
HER2.
Infliximab (Remicade) 2000: Se trata de un anticuerpo
monoclonal quimrico capaz de unirse de forma selectiva al
factor de necrosis tumoral de tipo alfa (TNF-a), inhibiendo
sus efectos biolgicos. Enfermedad de Crohn y Artritis
reumatoide.
Palivizumab (Synagis) 2000: Es un anticuerpo monoclonal
IgG1 humanizado, se emplea en la profilaxis de la
infeccin por virus respiratorios sincitiales.
Basiliximab (Simulect) 2000: Es un anticuerpo
monoclonal de tipo quimrico anti CD-25. Tratamiento
preventivo del rechazo agudo en pacientes sometidos a
trasplante de rin.
Daclizumab (Zenepax) 2000: Es un anticuerpo monoclonal
de tipo quimrico anti CD-25. Tratamiento preventivo del
rechazo agudo en pacientes sometidos a trasplante de
rin.
Alteraciones relacionadas a las clulas
plasmticas
S.P.
Gamopatas
Tejidos
Mdula sea
Leucemia de clulas
plasmticas
A. Gamopata monoclonal benigna
B. Gamopata monoclonal de
significado desconocido
A. Plasmocitoma seo aislado
B. Plasmocitoma extramedular
A. Mieloma mltiple
B. Macroglobulinemia de
Waldenstrm
Mieloma mltiple
Es rara por debajo de los 40 aos
La edad media del diagnstico es de
62 aos
Epidemiologa
1-2 pacientes c/100.000 habitantes
por ao.
Incidencia
Es una neoplasia monoclonal maligna
de linfocitos B, que puede
diferenciarse completamente, hasta
clulas plasmticas y que proliferan
en la mdula sea
Definicin
Cuadro clnico inicial
%
2-4 Fiebre
3-6 Esplenomegalia
10-15 Infeccin
25-30 Perdida de peso
30-40 Sndrome anmico
65-70 Dolor seo
*
* El dolor seo es signo cardinal
Las fracturas patolgicas tambin son comunes
Pruebas tiles en el diagnstico de
Mieloma Mltiple.
1. Aspirado de mdula sea.
2. Electroforesis de protenas sricas.
3. Determinacin de inmunoglobulinas
y protena de Bence-Jones.
Criterios mayores de diagnstico
Sem Oncol 1986;13:300-309
(Durie y Salomon)
1. Plasmocitoma en biopsia de tejido.
2. Plasmocitosis en mdula sea con > 30%
de clulas plasmticas.
3. Pico monoclonal en la electroforesis de
suero: IgG > 35 g/L, IgA > 20 g/L,
4. Excrecin de cadenas ligeras en la
electroforesis de orina 1.0 g/ 24 horas.
En la ausencia de amiloidosis.
Sem Oncol 1986;13:300-309
Criterios menores de diagnstico
1. Plasmocitosis en mdula sea con 10-
30% de clulas plasmticas.
2. Pico monoclonal presente, pero menor
a los niveles definidos anteriormente.
3. Lesiones lticas en hueso.
4. IgM normal < 500 mg/L, IgA < 1 g/L
o IgG < 6 g/L.
(Durie y Salomon)
Mieloma mltiple
A. Pueden provocar el Rion de Mieloma.
B. Ocurre por obstruccin y prdida de
nefronas Insuficiencia renal.
o En una electroforesis de orina de 24 horas.
o Se presentan en el 50-80% de los
pacientes con mieloma.
o Son cadenas ligeras kapa o lambda, que se
eliminan por orina.
Protena de Bence-Jones
1o IgG
2o IgA
97 % secretan
inmunoglobulinas
monoclonales.
Protenas sricas
elevadas
Electroforesis de protenas sricas
Factores pronsticos
Cancer 1975;36: 842
Estadio I Estadio III
> 12 g en 24
horas
Elevada
< de 3 lesiones
lticas
Elevado
< 8.5 g/dL
< 4 g en 24
horas
Excrecin urinaria
de Protena de
Bence- Jones
Baja
Produccin de
protena
monoclonal
Parmetros
Normal Estructura sea
Normal Calcio serico
> 10 g/L Hemoglobina
* El Estadio II es una etapa intermedia.
Cancer 1975;36: 842
Factores pronsticos
10 25 %
15 30 %
25 40%
Sobrevida a 5
aos
Grande
III
Intermedia
II
Pequea
I
Masa tumoral Estadio
Nivel serico elevado de 2
microglobulina = mal
pronstico.
ndice de marcado de clulas
plasmticas elevado = mal
pronstico
Otros
factores
> de 2 mg/100 ml de suero.
Creatinina
srica
1
Factores pronsticos
1. Empeora el pronstico independientemente del estadio.
Cancer 1975;36: 842
Tratamiento
Talidomida + Dexametasona.
Trasplante de clulas
hematopoyticas.

2
-Interferon.
Quimioterapia.
Macroglobulinemia de Waldenstrm
Es ms comn entre los 60-70 aos
de edad.
Corresponde aproximadamente al
2% de todas las enfermedades
malignas hematolgicas.
Frecuencia
Desconocida. Etiologa
Es una gammopata monoclonal que
se caracteriza por la presencia en el
suero de niveles elevados de IgM.
Definicin
Macroglobulinemia
de Waldenstrm
Macroglobulinemia de Waldenstrm
Se presentan menos lesiones
seas, comparativamente con el
mieloma mltiple.
SME
Est infiltrada por linfocitos y
clulas plasmticas.
Mdula
sea
Caractersticas de presentacin en 227
pacientes.
Wintrobe 1999.
3 Fenmeno de Raynaud
8 Problemas visuales
11 Sntomas neurolgicos
23 Prdida de peso
44 Hemorragia
44 Debilidad y fatiga
Frecuencia Sntomas
Hallazgos fsicos en 267 pacientes
Wintrobe 1999.
15 Prpura
17
Anormalidades
neurolgicas
30 Adenomegalia
37 Esplenomegalia
38 Hepatomegalia
Frecuencia Examen fsico
Wintrobe 1999.
Confusin, estupor, coma.
Alteraciones
neurolgicas
Hemorragia, papiledema
visin borrosa.
Retina
Hipervolemia
Insuficiencia cardiaca.
Hemodinmica
Ditesis hemorrgica.
Coagulacin
Se presenta en 2/3 de los
pacientes.
Frecuencia
Sndrome de hiperviscocidad serica.
Plasmafresis Quimioterapia
Tratamiento
Mediana de sobrevida
Buena respuesta: 4 aos.
Mala respuesta :< 2 aos.
Clorambucil
Ciclofosfamida
FIN