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RESUMO: TESTE IMUNOENZIMTICO (ELISA)

Os Imunoensaios que utilizam antgeno ou anticorpo marcado (Imunofluorescncia,


Radioimunoensaio, western Blot, PCR e ELISA) com uma enzima so denomidados ensaios
imunoenzimticos, entre os quais o mais empregado o mtodo ELISA.
A Tcnica do Elisa uma tcnica fundamental para avaliaes imunolgicas e
bioqumicas que consiste em detectar anticorpos contra o parasita atraves da utilizao de um
segundo anticorpo (anti-imunoglobulina humana produzido em animais de laboratorio)
conjugados a enzimas, que em presena de susbtratos especiIicos geram produtos coloridos,
cuja quantiIicao e feita espectrofotometricamente.
Este metodo oIerece alto nivel de sensibilidade e reprodutibilidade e permite
automao, tornou-se um metodo de eleio para exame de um grande numero de amostras.
Um dos principais problemas neste teste e a presena de reaes Ialso-positivas, onde o valor
da densidade optica lida no espectroIotmetro Iica muito proximo a linha de corte entre a
amostra positiva e negativa.Tm-se varios tipos de ELISA, como o direto, indireto,
competitivo e as variaes destes.
No ELISA direto, o antigeno adsorvido a Iase solida reage diretamente com um
anticorpo, especiIico para o antigeno, ligado a uma enzima, Iormando um complexo
insoluvel. Esta enzima que reage com o substrato fazendo com que o cromgeno mude de cor.
O ELISA Indireto um ensaio em que o antgeno aderido a placa preparado; a
seguir coloca-se sobre este os soros em teste na busca de anticorpos contra o antgeno. Se
houver anticorpos no soro em teste ocorrer a formao da ligao antgeno-anticorpo, que
posteriormente detectada pela adio de um segundo anticorpo dirigido contra
imunoglobulinas da espcie onde se busca detectar os anticorpos, a qual ligada enzima.
Este anticorpo anti-IgG, ligado enzima denomina-se conjugado. Ao adicionar-se o substrato
apropriado para a enzima), podendo apresentar uma colorao (varivel dependendo do
substrato). A eficincia desse exame limitada pela reao de anticorpos de longa durao,
presente em indivduos que apresentaram a infeco e se encontram curados. (Almeida &
Lima, 2001) O ELISA duplo sanduiche e utilizado para detectar antigenos. Envolve
primeiramente o revestimento de placas de poliestireno com anticorpos de captura.
Acrescenta-se a soluo de antigenos, de Iorma que o antigeno se conjugue com o anticorpo
de captura. Isso e seguido, apos uma lavagem, pela adio de um anticorpo especiIico, uma
antiglobulina marcada com enzima e um substrato. Neste teste, a intensidade da reao de cor
se relaciona diretamente com a quantidade de antigeno conjugado (Tizard, 1998).
O mtodo ELISA competitivo mais usado para identificao de antgenos, mas
pode tambm ser empregado para a deteco de anticorpos. Neste mtodo primeiro se adsorve
o anticorpo no poo da micro placa. Aps a adsoro do anticorpo, uma soluo que
possivelmente contm o antgeno adicionada sobre os anticorpos adsorvidos. O prximo
passo adicionar o antgeno marcado com uma enzima. Os poos que no possuem o
antgeno primrio (da soluo problema) aderido ao anticorpo ficam coloridos, enquanto que
os poos que possuem antgenos aderidos aos anticorpos no mudam de cor.
A diferena do ELISA sanduiche indireto de duplo anticorpo para ensaio para o
duplo sanduiche e que o segundo anticorpo utilizado e produzido em uma especie diIerente do
anticorpo primario. Dessa Iorma, o anticorpo secundario pode ser detectado usando um
conjugado com anticorpos contra o anticorpo secundario, que no reage com o anticorpo
adsorvido a placa (primario) (Madruga et al., 2001).
A leitura do resultado pode ser realizada de, basicamente, duas maneiras: Qualitativa
(positivo ou negativo) e Quantitativa pelo Espectrofotmetro ou uma Leitora de Microplacas
por Absorbncia.

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