MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA

PRCTICA N 01
DEMOSTRACIN DE LA EXISTENCIA DE LAS MEMBRANAS
BIOLGICAS
Introduccin:
Muchas estructuras de la clula estn formadas por membranas. Las membranas
biolgicas constituyen fronteras que permiten no slo separar sino tambin poner en
comunicacin diferentes compartimientos en el interior de la clula y a la propia clula
con el exterior.
La estructura de todas las membranas biolgicas es muy parecida. Las diferencias se
establecen ms bien al nivel de la funcin particular que tienen los distintos orgnulos
formados por membranas; funcin que va a depender de la composicin que tengan sus
membranas. Este tipo de membranas se denomina, debido a esto, unidad de membrana o
membrana unitaria. A membrana plasmtica de la clula y la de los orgnulos celulares
est formada por membranas unitarias.

CARACTERSTICAS DE LAS
MEMBRANAS BIOLGICAS
Las molculas que constituyen las membranas
se encuentran libres entre s pudiendo
desplazarse en el seno de ella, girar o incluso
rotar, aunque esto ltimo ms raramente. La
membrana mantiene su estructura por uniones
muy dbiles: Fuerzas de Van der Waals e
interacciones hidrofbicas. Esto le da a la
membrana su caracterstica fluidez. Todos
estos movimientos se realizan sin consumo de
energa.
Los lpidos pueden presentar una menor o mayor movilidad en funcin de factores
internos: cantidad de colesterol o de cidos grasos insaturados, o externos: temperatura,
composicin de molculas en el exterior, etc. As, una mayor cantidad de cidos grasos
insaturados o de cadena corta hace que la membrana sea ms fluida y sus componentes
tengan una mayor movilidad; una mayor temperatura hace tambin que la membrana sea
ms fluida. Por el contrario, el colesterol endurece la membrana y le da una mayor
estabilidad y por lo tanto una menor fluidez. Otra caracterstica de las membranas
biolgicas es su asimetra, debida a la presencia de protenas distintas en ambas caras. Por
lo tanto, las dos caras de la membrana realizarn funciones diferentes. Estas diferencias
son de gran importancia a la hora de interpretar correctamente las funciones de las
estructuras constituidas por membrana.

Objetivos:
Objetivo General:
Determinar la importancia de la permeabilidad selectiva de la membrana celular,
basndonos en el espectro de absorcin del pigmento de la betarraga.
1

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
Objetivos Especficos:
Determinar el espectro de absorcin del pigmento de la betarraga y su longitud de
onda ().
Medir la liberacin del pigmento de la betarraga frente al tiempo.
Medir la difusin del pigmento de la betarraga frente a diferentes soluciones.

Marco Terico:
Funciones de la membrana plasmtica
Intercambios. La membrana es, bsicamente, una barrera selectiva (permeabilidad
selectiva). Limita a la clula e impide el paso de sustancias, no de todas, pero s de
muchas, tanto del exterior al interior como en sentido inverso. No obstante, y a pesar de
esta funcin limitante, la clula va a necesitar intercambios constantes con el medio que
la rodea. Necesita sustancias nutritivas y tiene que eliminar productos de desecho, que
sern transportados a travs de la membrana y por la propia membrana. La membrana es
un elemento activo que "escoge" lo que entrar o saldr de la clula.
Receptora. Algunas protenas de la membrana plasmtica van a tener esta funcin, por
ejemplo: receptoras de sustancias hormonales. Muchas hormonas regulan la actividad de
la clula fijndose en determinados puntos de protenas receptoras especficas. La
protena receptora va a liberar en el interior de la clula una molcula orgnica: el
mediador hormonal. Esta sustancia va a actuar regulando ciertos aspectos del
metabolismo celular, por ejemplo, activando determinadas enzimas o desencadenando la
activacin de determinados genes. Al existir diferentes protenas receptoras en la
membrana celular y al tener las clulas diferentes receptores, la actividad de cada clula
ser diferente segn sean las hormonas presentes en el medio celular.
Reconocimiento. Se debe a las glicoprotenas de la cara externa de la membrana. As,
las clulas del sistema inmunolgico, clulas que nos defienden de los agentes
patgenos, van a reconocer las clulas que son del propio organismo diferencindolas
de las extraas a l por las glicoprotenas de la membrana. Estas sustancias constituyen
un verdadero cdigo de identidad.
Difusin. Es el fenmeno por el cual las partculas de un soluto se distribuyen
uniformemente en un disolvente de tal forma que en cualquier punto de la disolucin se
alcanza la misma concentracin. As, si ponemos un grano de azcar en un recipiente que
contenga 1 litro de agua destilada y esperamos el tiempo suficiente, el azcar se disolver
y en cualquier parte de la disolucin un volumen dado de sta contendr la misma
cantidad de molculas que cualquier otro. Esto es debido a que las molculas del soluto
se comportan, en cierto modo, como las de un gas encerrado en un recipiente
desplazndose en todas las direcciones.
Caractersticas de las membranas.
Las membranas son estructuras laminares de slo dos molculas de grosor. El grosor de
la mayora de las membranas est comprendido entre 60 y 100 A.
Las membranas constan principalmente de protenas y lpidos en una proporcin de 1:4
hasta 4:1. Las membranas tambin contienen hidratos de carbono enlazados a lpidos y
protenas.
Los lpidos de membrana son molculas relativamente pequeas que tienen una parte
hidroflica y una parte hidrofbica.
2

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
Ciertas protenas especficas son mediadoras de funciones caractersticas de las
membranas. Las protenas se utilizan como bombas, compuestos receptores, conductores
de energa y enzimas.
Las membranas constituyen asociaciones no covalentes, las molculas proteicas y
lipdicas integrantes se mantienen juntas por efecto de muchas interacciones no
covalentes de carcter cooperativo.
Las membranas son asimtricas.
Las membranas son estructuras fluidas. Las molculas difunden rpidamente en el plano
de la membrana, al igual que lo hacen las protenas, a menos que estn ancladas por
interacciones especficas.
La mayora de las membranas estn polarizadas elctricamente, con carga negativa en el
interior (normalmente -60 milivoltios). El potencial de membrana desempea un papel
clave en el transporte, en la conversin de energa y la excitabilidad.

Materiales y Mtodos

Materiales:

Gradilla
Tubos de ensayo
Pipetas
Espectrofotmetro
Balanza
Cocina elctrica

Reactivos a utilizar:

Betarraga
Sacarosa 0.24 M
Alcohol etlico 96%
Cloruro de sodio 0.85%
Cloruro de calcio 0.1 M
Tripsina 1%
Detergente 1%
Agua destilada

Procedimiento experimental
A. Espectro de absorcin del pigmento:
Medir 10 ml de agua destilada en un tubo de ensayo.
Pesar 0.5 gramos de un trozo de betarraga e introducirlo en el tubo anterior.
Agitar por 5 minutos.
Medir el espectro de absorcin de acuerdo al siguiente esquema.
3

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
PASO A
Longitud de
onda (nm)
450 480 490 500 520 530 535 538 540 545 550 560 570
Absorbancia

Anotar la longitud de onda en las que se obtiene la mxima absorbancia.

B. Liberacin del pigmento
Medir 10 ml de agua destilada en un tubo de ensayo, pesar 0.5 gramos de un trozo
de betarraga e introducirlo al tubo anterior.
Agitar durante 5 minutos y medir la absorbancia segn el siguiente esquema
(utilice la longitud de onda en la que se obtuvo la mayor absorbancia segn el
paso A):

TIEMPO(minutos) 0 5 10 15 20 30
ABSORBANCIA

C. Liberacin del pigmento frente a diferentes soluciones

Prepare el siguiente sistema


SISTEMAS
COMPONENTE I II III IV V VI VII
Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6 10 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
Sacarosa 0.24 M 1 ml
Cloruro de Sodio 0.85% 1 ml
Alcohol etlico 96% 1 ml
Cloruro de Calcio 0.1 M 1 ml
Tripsina 1% 1 ml
Detergente 1% 1 ml
Betarraga 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g

Agitar por 5 minutos.
Medir la absorbancia, segn paso a cada uno de los tubos.
Hervir por 5 minutos
Medir la absorbancia de cada sistema.
Interpretar los resultados.
4

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
DESARROLLO DEL LABORATORIO
En primer lugar medimos 10 ml de agua destilada y los agregamos a un tubo de ensayo.
Luego pesamos 0.5 g de betarraga (en un solo trocito), lo introducimos en el tubo de
ensayo con agua destilada, y a continuacin, agitamos el tubo de ensayo por un espacio
de 5 minutos, esto para que se libere la antocianina.

Luego, pasados los 5 minutos, procedemos a utilizar el espectrofotmetro para medir su
nivel de absorbancia, utilizando el cuadro del paso A, obteniendo los siguientes
resultados:

Longitud de
onda (nm)
450 480 490 500 520 530 535 538 540 545 550 560 570
Absorbancia 0.419 0.428 0.452 0.440 0.555 0.601 0.619 0.435 0.429 0.432 0.416 0.367 0.302

Podemos observar que el punto ms alto obtenido, es de 0.619, el cual se obtuvo con una
longitud de onda de 535 nm, la que anotamos, pues para los dems pasos utilizaremos
este valor.
Luego pesamos 0.5 g de betarraga y al igual que en la parte anterior del experimento, lo
agitamos por espacio de 5 minutos. La diferencia con la parte anterior, es que a este tubo
le realizaremos mediciones cada cierto periodo de tiempo, para analizar la relacin
existente entre la liberacin del pigmento y el tiempo transcurrido. De esta forma
obtenemos los siguientes resultados:

TIEMPO(minutos) 0 5 10 15 20 30
ABSORBANCIA 0.287 0.340 0.366 0.388 0.387 0.385

Cmo observamos, llegado a cierto tiempo, se alcanza el lmite de pigmento disuelto, y
los valores obtenidos ya no varan mucho, a partir de este punto.

5

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
En la siguiente parte del laboratorio, veremos la liberacin de pigmento frente a diferentes
soluciones; para esto utilizaremos el valor de longitud de onda, con el que se alcanz el
punto mximo en la parte A. Para esto, medimos unos 0.5 g de beterraga y los
introducimos en cada uno de los sistemas indicados:

SISTEMAS
COMPONENTE I II III IV V VI VII
Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6 10 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
Sacarosa 0.24 M 1 ml
Cloruro de Sodio 0.85% 1 ml
Alcohol etlico 96% 1 ml
Cloruro de Calcio 0.1 M 1 ml
Tripsina 1% 1 ml
Detergente 1% 1 ml
Betarraga 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g

Los agitamos por un espacio de 5 minutos, y procedemos a medir su absorbancia con el
espectrofotmetro, obteniendo los siguientes resultados.


SISTEMAS
I II III IV V VI VII
0.355 0.337 0.375 0.354 0.438 0.528 0.566

6

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
A continuacin, ponemos los tubos a hervir en bao mara, por un lapso de 5 minutos, y
procedemos a realizar una nueva medicin de la absorbancia.











SISTEMAS
I II III IV V VI VII
0.355 0.337 0.375 0.354 0.438 0.528 0.566
0.848 0.825 0.870 0.873 0.867 0.844 0.806


CONCLUSIONES

a) Sabemos que todas las membranas celulares consisten de una bicapa de fosfolpidos
(tienen un hidrfilo que atrae agua, una cabeza de glicerol y dos colas hidrofbicas
que frenan el agua) de cidos grasos. Esta bicapa es la que le otorga a la clula su
fluidez. Dado que la bicapa de fosfolpidos es semi-permeable, hay protenas dentro y
alrededor de las membranas celulares que ayudan a las clulas a comunicarse entre s,
as como tambin a intercambiar nutrientes. Las protenas integrales o "trans-
membranas" estn incrustadas dentro de la bicapa de fosfolpidos.
7

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
Las membranas son sensibles a los cambios de temperatura, debido a su naturaleza
lipdica, por lo que un aumento de temperatura afectar a su fluidez. Si ocurre un
aumento en la temperatura, aumenta la fluidez por el aumento de las molculas que las
componen, as como tambin la desnaturalizacin de las protenas perifricas de la
bicapa.
Esto permite el paso de sustancias al interior de la clula, en el que se encuentran las
vacuolas, que contienen una gran cantidad de betacianina; por lo tanto, cuando ocurre
algn dao a la membrana citoplasmtica, este pigmento puede escapar de la clula.
Por lo tanto, ante la presencia de algn tensor fsico o qumico, el pigmento escapa de
la clula. Y a mayor dao a la membrana, mayor cantidad de pigmento escapar
de la clula.

b) En el caso del alcohol etlico, este es un solvente no polar, por lo que puede disolver
el componente lipdico de la membrana, causando un dao irreversible a su estructura.

c) Si bien el pH tambin afecta la integridad de la membrana debido a su naturaleza
proteica, en este laboratorio se utiliz un buffer a pH 6.6; por lo que los efectos que
producira el pH no se han de notar, centrndonos solamente en los solventes
utilizados.




8

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA
ANEXOS

BETANINAS

Las betalanas son pigmentos derivados del cido betalmico, que se extraen
generalmente tras la coccin en agua, y presenta un color rosado. Este grupo de
compuestos se puede dividir segn su estructura qumica y sus propiedades colorantes
en dos tipos de pigmentos, muy solubles en agua, relacionados qumica y
biogenticamente.

Las Betalanas (BL) son pigmentos vacuolares hidrosolubles presentes en las plantas
del orden de las Centrospermas, como el Betabel (Beta Vulgaris). Estn compuestos
por las Betacianinas (BC) de color rojo y las Betaxantina de color amarillo, ambas con
diversos epmeros.

Existen alrededor de 55 tipos de betacianinas y 25 tipos de betaxantina.

La beta vulgaris (remolacha), tiene distintos tipos de betacianina siendo la betanina,
la que se encuentra en mayor proporcin


9

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA Y NUTRICIN HUMANA

1. BIBLIOGRAFIA

Nuez J. Extraccin Y Anlisis De Pigmentos Alimentarios Naturales [Monografa en
Internet]. Riobamba. 2012 [acceso 11 de octubre de 2014]. Disponible en:
http://es.slideshare.net/jabonunez5/informe-de-extraccion-de-pigmentos-vegetales
Wikipedia.com. [Sede Web]. [Actualizado el 06 de marzo de 2014; acceso 11 de
octubre de 2014]. Betanina. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Betanina
Reyes H, Forestier D. Estructura y Funcin de Membranas. [Monografa en
Internet]. Puerto Rico. 2004. [acceso 11 de octubre de 2014]. Disponible en:
http://members.tripod.com/biol_uprponce/images/pdfs/ag04/Lab_05_3013_Memb
ranas_s.pdf
Gonzlez J , Seijas N, Seijas P. Efecto de la temperatura y luminosidad sobre la
estabilidad de las betalanas obtenidas de betarraga [Monografa en Internet].
Trujillo. 2009. [acceso 11 de octubre de 2014]. Disponible en:
http://revistas.unitru.edu.pe/index.php/SCIENDO/article/download/248/296

10