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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE - FURG


ESCOLA DE QUMICA E ALIMENTOS
DISCIPLINA DE BIOQUMICA INDUSTRIAL
PROF. CARLOS ANDR VEIGA BURKERT





PREPARAO DE MEIOS DE CULTURA





Alunos:
CARLA HELENA QUAINI - 48061
GABRIELA OSTJEN - 48075
THAIN LEITE GARCIA - 42769







RIO GRANDE
2014
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SUMRIO
1. INTRODUO ........................................................................................................ 3
2. OBJETIVOS ............................................................................................................. 4
3. REVISO BIBLIOGRFICA .................................................................................. 5
3.1 Microrganismos ................................................................................................... 5
3.2 Meios de Cultura ................................................................................................. 5
3.2.1 Classificao dos Meios de cultura: ............................................................... 7
3.3. Esterilizao em meios de cultura ....................................................................... 8
3.3.1 Agentes fsicos ............................................................................................ 10
3.3.2 Agentes qumicos: ....................................................................................... 11
4. MATERIAL E MTODOS ..................................................................................... 12
4.1. Preparo de Meios de Cultura ............................................................................ 12
4.1.1. gua Peptonada ......................................................................................... 12
4.1.2. Caldo Lauril Sulfato Triptose ..................................................................... 12
4.1.3. Agar Padro para Contagem (PCA) ............................................................ 12
4.2. Esterilizao dos Materiais ............................................................................... 13
4.2.1. Esterilizao de Pipetas .............................................................................. 13
4.2.2. Esterilizao das Placas de Petri ................................................................. 13
5. RESULTADOS E DISCUSSES ........................................................................... 14
6. CONCLUSO ........................................................................................................ 15
7. REFERNCIA BIBLIOGRFICA ......................................................................... 16
8. PERGUNTAS ......................................................................................................... 17




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1. INTRODUO

Diferentes micro-organismos podem exibir exigncias nutricionais
extremamente distintas. Assim, para obter-se sucesso no cultivo de qualquer micro-
organismo, necessrio o conhecimento de suas necessidades nutricionais, a fim de que
os nutrientes sejam fornecidos na forma e propores adequadas a um meio de cultura.
Se os meios de cultura forem preparados cuidadosamente, o cultivo laboratorial de
diferentes tipos de micro-organismo torna-se uma tarefa relativamente fcil
(MADIGAN, M. T. et al, 2010).
O meio de cultura necessrio para o crescimento in vitro de micro-organismos
interfere em seu desenvolvimento. O mesmo ocorre com outros fatores, como
temperatura (micro-organismos psicrfilos, mesfilos e termfilos) e tenso de oxignio
(micro-organismos aerbios, anaerbios, microaerfilos e anaerbios facultativos)
(BROOKS, G.F. et al, 2012).
Uma vez que um meio de cultura tenha sido preparado e tornado estril, a fim de
tornar-se desprovido de qualquer micro-organismo, ele pode ser inoculado (isto ,
acrescido de organismos) e incubado em condies que permitam o crescimento. Em
um laboratrio, normalmente a inoculao ser de uma cultura pura, uma cultura
contendo apenas um nico tipo de micro-organismos (TORTORA, G.J.; et all, 2004).
Quando inoculamos um micro-organismo em um meio de cultura que apresente
fatores ambientais favorveis, ele inicia seu desenvolvimento, passando pelas diversas
fases da cultura de crescimento: de latncia, logartmica, estacionria e de declnio ou
morte (HOFLING, J.F., et al, 2008).
Alguns agentes eliminam totalmente o crescimento microbiano por meio da
esterilizao - a morte ou remoo de todos os organismos viveis presentes em um
meio de cultura. Frequentemente, no entanto, a esterilidade no alcanvel, mas os
micro-organismos podem ser efetivamente controlados limitando-se seu crescimento,
um processo denominado inibio (MADIGAN, M. T. et al, 2010).

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2. OBJETIVOS

Proporcionar a compreenso sobre os mtodos de esterilizao e propiciar
conhecimento sobre o preparo de meios de cultura.




















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3. REVISO BIBLIOGRFICA

3.1 Microrganismos

Os microrganismos so organismos microscpicos, impossvel de serem
observados a olho nu, como os vrus, bactrias, e fungos microscpicos que contm
respectivamente 1nn, 1m, 100m de dimetro. Os microrganismos habitam os mais
diversos locais e esta propriedade denominada de ubiquidade. Habitam os diferentes
ecossistemas fazendo parte da microbiota normal do corpo humano, dos animais e das
plantas, aos milhes, em termos de quantidades. Entre estes organismos so
estabelecidas relaes em diferentes graus de parasitismo, mutualismo e
comensalismos. So tambm patgenos causadores de doenas e provocam deteriorao
de equipamentos e alimentos, quando no so devidamente limpos e mal armazenados
(NASCIMENTO, J. S, 2010).
Os microrganismos assim como outros organismos vivos necessitam obter os
nutrientes apropriados do seu meio ambiente. Assim, se queremos cultivar e manter
microrganismos vivos em laboratrio, necessitamos colocar em meios de cultura,
contendo os nutrientes apropriados para o seu crescimento.
Os meios de cultura so utilizados com o propsito de fornecer nutrientes para
os microrganismos sobreviver, fornecendo dessa forma condies ideais mnimas para
seu cultivo, do ponto de vista nutricional (RUIZ, R. L., 2000).

3.2 Meios de Cultura

Os meios de cultura inicialmente eram lquidos, hoje eles so classificados como
meios de enriquecimento. O cultivo na superfcie de meio slido foi introduzido por
Roberto Koch (1843-1910), que foi quem coordenou os estudos de tcnicas
laboratoriais na dcada de 1860. Algumas dessas tcnicas so utilizadas nos laboratrios
at hoje, com pequenas modificaes. Koch introduziu a rotina de visualizar clulas
coradas em lminas no microscpio e, assim, estudar melhor a sua morfologia e
verificar se a cultura era ou no pura. Partiu de observaes em batatas cozidas, nas
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quais visualizou colnias isoladas de um nico tipo microbiano, chegou a um meio de
cultura contendo gelatina como agente solidificante. A gelatina se mostrou imprpria,
pois alm de possuir um ponto de fuso muito baixo, alguns microrganismos produzem
gelatinase. Deste modo, mais tarde surgiu o uso do gar (proveniente da alga marinha
Gelidium corneum) em substituio gelatina e com isso a microbiologia sofreu
grandes progressos, pois dessa forma possvel cultivar uma srie de microrganismos
sem alterar a consistncia do meio (RUIZ, R. L., 2000).
O gar funde a 94 C e volta a solidificar a 42C e costuma ser adicionado ao meio
lquido para ento torna-lo slido. Hoje ainda utilizamos o gar como agente
solidificador de meios de cultura. O gar um composto orgnico, contendo 0,4% a
0,9% de nitrognio total; 0,03% a 0,009% de amino nitrognio, 70% a 75% de
polissacardeos, 11% a 22% de umidade e 2% a 4% de cinzas e alm disso galactose,
arabinose, xilose e uma pequena quantidade de aminocidos livres fazem parte do gar.
Em escala comercial o gar e produzido a partir de algas vermelhas de diferentes
gneros (Gracilaria, Gelidium, etc), portanto o gar utilizado na preparao de meios
slidos, semi-sldos e meios desidratados (RUIZ, R. L., 2000).
Assim, para obter-se sucesso no cultivo de qualquer microrganismo, necessrio
o conhecimento de suas necessidades nutricionais, a fim de que os nutrientes sejam
fornecidos na forma e propores adequadas a um meio de cultura. (MADIGAN, M. T.
et al, 2010)
Portanto, h uma grande variedade de meios de cultura, pois a composio de
cada meio depende diretamente da sua finalidade. Existem meios de cultura para
bactrias, fungos (que exigem maior quantidade de acar e pH reduzido), protozorios
(microrganismos mais exigentes) e algas (dependendo se so foto ou heterotrficas). Em
razo dessa grande variedade de meios de cultura possvel classific-los de diferentes
formas. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)



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3.2.1 Classificao dos Meios de cultura:

Quanto ao estado fsico:
Lquidos, utilizados para cultivo e armazenamento de culturas microbianas
puras;
Semisslidos, utilizados para identificao microbiana por meio de provas
bioqumicas especficas;
Slidos, utilizados para isolamento, identificao e visualizao de colnias
microbianas. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)
Quanto ao Emprego:
Os meios de cultura podem ser subdivididos em quatro categoriais gerais:
1) Meios no seletivos de enriquecimento
Estes foram desenvolvidos para permitir o crescimento da maioria dos
organismos que no possuem exigncias nutricionais muito complexas
(fastidiosas) de crescimento e podem ser:
Agar sangue: contm dois componentes principais, um meio base e outro
sangue, que tem por finalidade isolamento de bactrias e fungos. O meio usa
uma base rica, em que oferece timas condies de crescimento para maioria
dos microrganismos.
Agar chocolate: tem por finalidade isolamento de bactrias, incluindo o cultivo
de microrganismos exigentes. A base do meio adicionado sangue de cavalo,
carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemcias lisem,
liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos
microrganismos exigentes, que so por exemplo: Haemophilus spp., Neisseria
spp, etc.
Agar Mueller-Hinton: um meio para teste de sensibilidade bacteriana.
(MURRAY, P. R. et al; 2013)

2) Meios seletivos
So aqueles acrescidos de componentes que inibem o crescimento de
determinados microrganismos, selecionando aqueles que tero condies de
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crescer com esses componentes. Um exemplo disso, tornar um meio de cultura
seletivo pela adio de um determinado acar como nica fonte de carbono, em
que somente bactrias capazes de metaboliz-lo crescero. Um exemplo de
meios seletivos comercializados: gar Mitis salivarius para isolamento de
streptococos grupo mutans. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)

3) Meios diferenciais
So aqueles acrescidos de componentes qumicos e/ou reagentes que
possibilitam um crescimento diferenciado, permitindo que se diferenciem
espcies bacterianas distintas. Um exemplo a inoculao de diferentes
bactrias em gar sangue, em algumas bactrias so capazes de hemolisar
hemcias, e meios para testes bioqumicos de fermentao de carboidratos.
Um meio pode reunir caractersticas que permitam classific-lo como
seletivo e diferencial ao mesmo tempo, ou seja, seletivo para determinado
grupo de bactrias e permite a diferenciao de gneros e espcies dentro
daquele grupo. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)

4) Meios especializados
Permitem a deteco de organismos especficos que podem ser
fastidiosos ou tipicamente presentes em grandes misturas de organismos.
(MURRAY, P. R. et al; 2013)

Porm, alm desses existem muitos outros meios de cultura, como os, meios de
transporte, meios de identificao e meios de conservao.

3.3. Esterilizao em meios de cultura

No sentido de impedir a contaminao das culturas microbianas com que se
pretendem desenvolver os trabalhos prticos de microbiologia, deve proceder-se
desinfeco e esterilizao dos objetos necessrios e do ambiente. (SCHULLER, D., et
al, 2004)
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DESINFECO: consiste na destruio, inibio ou remoo de agentes microbianos
causadores de doenas ou de outros problemas, como por exemplo, a degradao de
alimentos. A desinfeco na maior parte das vezes conseguida pelo uso de substncias
qumicas chamadas desinfetantes, que so destinadas a destruir os germes
potencialmente patognicos, mas que so ineficientes contra a maioria dos esporulados.
Portanto, neste processo so eliminadas as clulas vegetativas, mas no se promove a
destruio de esporos. Muitos dos produtos de limpeza domstica tais como a amnia e
a lixvia, so desinfetantes. Os desinfetantes domsticos, na sua grande maioria, so
fortes agentes oxidantes. Outros agentes como os lcoois promovem a desnaturao de
protenas e a solubilizao de lipdios. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009)
Esterilizao: significa a destruio completa de toda e qualquer clula viva em
crescimento ativo, numa forma vegetativa ou em latncia, incluindo os esporos. Os
processos usados envolvem o recurso a agentes fsicos e qumicos. (SCHULLER, D., et
al, 2004)
Assepsia: conjunto de procedimentos que impedem a penetrao de microrganismos em
local que no os contenha. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009)
Antissepsia: o conjunto de meios usados para evitar a proliferao de germes,
inativando ou destruindo-os. A antissepsia obtida pela ao de substncias qumicas
chamadas antisspticos, que so substncias utilizadas nos tecidos animais, para impedir
a proliferao de bactrias, seja inativando-as (bacteriosttico) ou destruindo-as
(germicidas). (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009)
Saneamento: mantm a microbiota dentro dos valores populacionais previamente
estabelecidos por instituies de sade. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009)
Sanitizao: usada em restaurantes e indstrias de alimentos, refere-se eliminao dos
microrganismos em utenslios e equipamentos para impedir deteriorao ou transmisso
de infeces pelos produtos alimentares.

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3.3.1 Agentes fsicos

Os agentes fsicos mais utilizados na esterilizao e desinfeco de ambientes e
objetos so: o calor mido, o calor seco e as radiaes. Estas so, sobretudo, muito teis
para esterilizao de espaos, salas, instrumentos e materiais que no suportam as
temperaturas exigidas pelas tcnicas do calor.
Calor mido
A esterilizao por calor mido pode ser conseguida atravs da fervura,
autoclavagem ou pasteurizao. O calor mido conduz destruio rpida de
organismos por coagulao das protenas constituintes das suas clulas. O aparelho mais
utilizado na esterilizao de materiais e meios de cultura o autoclave. Geralmente os
autoclaves de laboratrio funcionam sob a presso de 1 atm e temperatura de 121C. A
durao do tempo de esterilizao est relacionada no s com a temperatura, como
tambm com a relao superfcie/volume da massa do material a esterilizar, ou seja,
com o tempo de penetrao do calor. Para a mesma temperatura, os tempos de
tratamento trmico so tanto maiores quanto maior for o volume do material
esterilizar. De uma forma geral, os materiais ficam esterilizados em 20-40 minutos. O
material a esterilizar deve ser devidamente preparado. Assim, os frascos a esterilizar
devem ser tapados com rolhas de algodo. Se apresentarem tampas com roscas, estas
devem ser pouco apertadas para que haja sada de ar quente e entrada de vapor, de modo
a evitar o seu rebentamento no autoclave. (SCHULLER, D., et al, 2004)
Calor seco
A esterilizao pelo calor seco pode ser alcanada pelos seguintes mtodos:
flamejao, incinerao ou estufa de ar quente. As estufas de ar quente atingem
temperaturas da ordem de 160-180C, que provocam a oxidao e a desnaturao das
protenas destruindo as clulas vegetativas e os esporos. Contudo deve-se ter ateno
que o uso de temperaturas muito elevadas e um tempo de exposio muito prolongado
podem interferir na estabilidade de alguns materiais (ao), ou causar a sua deteriorao,
como o caso de materiais como a borracha e os tecidos. Como o poder de penetrao
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do calor seco baixo, este mtodo s deve ser utilizado quando o contato com o vapor
inadequado, isso ocorre especialmente com materiais de vidro, outros materiais slidos
termoestveis ou alguns componentes do laboratrio. (SCHULLER, D., et al, 2004)
Radiaes
As radiaes so muito teis para a esterilizao de espaos, de salas, de
instrumentos e de materiais que no suportam as temperaturas exigidas pelas tcnicas do
calor. A esterilizao por radiao ionizante uma tcnica altamente eficiente,
econmica e segura. As radiaes de alta energia so utilizadas na esterilizao de
materiais cuja sensibilidade ao calor exige condies particulares de tratamento. A
radiao ionizante promove a quebra das cadeias moleculares e induz reaes dos
fragmentos com o oxignio atmosfrico ou com compostos oxigenados, originando a
morte das clulas.
As radiaes utilizadas incluem os raios gama, produzidos a partir de cobalto-60
ou csio-139, e de raios catdicos produzidos em geradores e aceleradores de eltrons.
Os raios gama so radiaes com poder ionizante que promovem a alterao de
compostos celulares. Estes raios tm elevado poder de penetrao sendo ideais para
aplicao em objetos volumosos. Problemas tcnicos dificultam ainda a sua aplicao
corrente em microbiologia. A irradiao com luz ultravioleta (UV) uma forma pouco
satisfatria de esterilizao devido fraca capacidade de penetrao nos materiais e
produtos a esterilizar. A energia das radiaes absorvida por molculas como o DNA,
conduzindo a alteraes da estrutura molecular que podero ser letais para os
microrganismos. Os raios UV so frequentemente utilizados na diminuio do nvel de
contaminao de espaos pequenos. Deve ter-se sempre presente que a lmpada UV s
deve estar ligada na ausncia de pessoas no laboratrio. (SCHULLER, D., et al, 2004)

3.3.2 Agentes qumicos:
Os agentes qumicos so apresentados em grupos que tenham em comum, ou as
funes qumicas, ou elementos qumicos, ou mecanismo de ao. O xido de etileno
o gs mais frequentemente usado para a esterilizao, pois ele penetra na maioria dos
materiais e mata todos os microrganismos por desnaturao das protenas. (TORTORA,
G.J, et al, 2004)
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4. MATERIAL E MTODOS
4.1. Preparo de Meios de Cultura

4.1.1. gua Peptonada
- utilizada como soluo diluente. Pode-se utilizar uma soluo salina.
- Pesa-se 0,05g de peptona e diluir em 50 mL de gua destilada;
-Ajusta-se o pH prximo a 7,0, com papel tornassol;
- Distribui 9 mL do meio em tubos de ensaio com tampa de rosca, e so esterilizados em
autoclave a 121C/15 min.
4.1.2. Caldo Lauril Sulfato Triptose
um meio utilizado no teste presuntivo de coliformes totais, termotolerantes e
Escherichia coli pela tcnica dos tubos mltiplos.
- Pesa-se 1,78 g do caldo lauril sulfato triptose comercial e diluir em 50 mL de gua
destilada;
- Distribui 10 mL do meio nos tubos de ensaio contendo tubos de Duhran invertidos;
- Tampa-se os tubos com buchas de algodo e so levados para esterilizar em autoclave
a 121C/ 15min.
4.1.3. Agar Padro para Contagem (PCA)
um meio de enriquecimento utilizado para a contagem total de
microrganismos em placas, ou para a manuteno de culturas bacterianas.
- Pesa-se 2,35g de PCA e diluir em 100 mL de gua destilada;
-Aquece em micro-ondas, parando a cada 30 s para agitar o frasco, at que o meio esteja
completamente dissolvido;
- Tampa-se o frasco com bucha de algodo e este levado para esterilizar em autoclave
a 121C/15min.

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4.2. Esterilizao dos Materiais
A esterilizao compreende a destruio de todas as clulas viveis
(incluindo esporos) que possam ser enumeradas por tcnicas apropriadas de semeadura.
Em alimentos muito comum utilizarmos o termo esterilizao comercial, indicando a
mesma finalidade. A esterilizao compreende processos fsicos (calor mido, seco e
radiao) e qumicos (agentes qumicos).

4.2.1. Esterilizao de Pipetas
- Colocar algodo no bocal da pipeta;
- Enrolar individualmente em papel pardo;
- Enrolar em pacotes separados, identificando a turma, o nmero e volume das pipetas;
- Esterilizar em autoclave a 121C/15min.

4.2.2. Esterilizao das Placas de Petri
- Passar algodo embebido em lcool 70% dentro e fora das placas;
- Enrolar as placas individualmente em papel pardo;
- Enrolar em pacotes separados, identificando a turma e o nmero de placas;
- Esterilizar em autoclave a 121C/15min.





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5. RESULTADOS E DISCUSSES

Nesta aula prtica preparamos meios de cultura tais como gua peptonada, caldo
lauril sulfato triptose e Agr padro para contagem (PCA). Alm do preparo dos meios
de cultura foi feita a esterilizao de materiais tais como pipetas e placas de petri.


















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6. CONCLUSO

Conclumos que o preparo dos meios de cultura tais como gua peptonada, caldo
lauril sulfato triptose e Agr padro para contagem (PCA), e a esterilizao de materiais
tais como pipetas e placas de petri, foram executados com eficcia.
Os objetivos da prtica foram alcanados e percebeu-se que tanto o preparo de
meios de cultura quanto a esterilizao de materiais no so simples de executar, pois
requerem muitos cuidados a fim de evitar contaminaes.
















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7. REFERNCIA BIBLIOGRFICA

1. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J.M.; DUNLAP, P.V.; CLARK, D.P.
Microbiologia de Brock. 12 Edio. 2010.
2. HOFLING, J.F.; GONALVES, R.B. Microscopia de luz em microbiologia:
Morfologia bacteriana e fngica. Porto Alegre: Artmed, 2008.
3. BROOKS, G.F.; CARROLL, K.C.; BUTEL, J.S.; MORSE, S.A. Microbiologia
Mdica de Jawetz, Melnick e Adelberg. 25 edio. 2012, 828 p.
4. TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia. 10 edio. So Paulo,
2004.
5. ALCNTARA,F.; CUNHA, M.A.; ALMEIDA, M.A. Microbiologia: Prticas
Laboratoriais. 2 edio. Universidade de Aveiro, Portugal.
6. PELCZAR, M.; REID, R.; CHAN, E. C. S. Microbiologia Volume 1. So Paulo:
McGraw Hill do Brasil, 1980, 566 p.
7. NASCIMENTO, J. S.; Introduo Microbiologia Unidade 1, 2010.
8. RUIZ, R. L.; Manual Prtico de Microbiologia Bsica. 1 Edio, So Paulo, 2000.
10. SPOLIDORIO, D. M. P.; DUQUE, C.; Microbiologia e Imunologia Geral e
Odontolgica Volume 1. So Paulo, 2013.
11. MURRAY, P. R.; ROSEN.THAL K. S.; PFALLER, M. A.; Microbiologia Mdica.
Traduo 6 edio, 2013.
12. SCHULLER, D.; CASAL, M.; RODRIGUES, G.; PAIS, C.; Mtodos
convencionais em microbiologia - Unidade 1, 2004.
13. MONTEIRO, C. L. B. M.; COGO, L. L.; GALARDA, I.; BORTOLOZZI, F. C.;
Microbiologia Mdica - Manual terico-prtico de procedimentos bsicos em
microbiologia mdica - 3 Edio, Curitiba, 2009.

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8. PERGUNTAS

1. Quais os procedimentos de assepsia usuais em um laboratrio de microbiologia,
a fim de evitar contaminao? Cite exemplos e situaes.

Segundo ALCNTARA,F.; CUNHA, M.A.; ALMEIDA, M.A., a preparao de
culturas microbianas envolvem uma srie de procedimentos asspticos que devero
ocorrer em condies apropriadas.
H certas precaues que devem ser tomadas durante a inoculao de uma
cultura microbiana de modo a evitar a contaminao das culturas, das pessoas ou do
ambiente:
Certificar-se de que ao dar incio s operaes, todo o material necessrio est ao
alcance imediato, de forma a realizar o trabalho o mais rapidamente possvel;
Desinfectar e arrumar convenientemente a bancada de trabalho;
Os recipientes devem estar abertos o mnimo tempo possvel e, enquanto abertos, todo
o trabalho deve ser realizado junto chama do bico de Bunsen;
Uma vez abertos os recipientes, como tubos, bales e frascos, o seu bocal deve ser
flamejado de imediato;
A fim de evitar as contaminaes durante as manipulaes que envolvam caixas de
Petri, a exposio das superfcies internas estreis deve durar o mnimo de tempo
possvel;
A extremidade das pipetas estreis que vai ser colocada em contacto com as culturas
celulares, ou com os recipientes estreis, no deve ser tocada nem entrar em contacto
com superfcies no estreis, como o caso da roupa, superfcie da rea de trabalho, o
exterior de tubos, de bales ou quaisquer outros materiais.
A utilizao das ansas, pipetas e espalhadores, assim como a manipulao de
frascos, bales e tubos de ensaio, em condies de assepsia, envolve alguns cuidados
particulares.

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Ansas: As ansas so esterilizadas pela passagem na chama do bico de Bunsen, antes e
depois de serem utilizadas. Devem ser aquecidas at ficarem ao rubro para assegurar
que todos os esporos sejam destrudos. Devem ser agarradas quase pelo topo num
ngulo praticamente vertical. O dedo mindinho deve ficar livre para segurar a tampa do
recipiente.
Espalhadores: Os espalhadores so usados para distribuir inculos sobre a superfcie
de placas j preparadas com meios de cultura. Podem ser esterilizados em estufa uma
vez empacotados, ou por flamejao com lcool.

2. O que so meios de enriquecimento? E meios de identificao? E meios de
conservao/manuteno? Cite exemplos e aplicaes.

Meios de Enriquecimento
Proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes
usualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos
exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de
determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm podem inibir o
crescimento de outros.
Exemplos: Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos),
Caldo Tioglicolato (meio de enriquecimento maioria das bactrias) para Clostridium
perfringens.

Meios de Identificao
Prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes
fisiolgicas de organismos submetidos a identificao.
Exemplos: meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semi-slido,
caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade.


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Meios de Conservao/Manuteno
Utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio, i.e. garantem a
viabilidade de microrganismos.
Exemplos: gar Sabouraud, Meios com leite, gar suco de tomate, gar sangue (meio
no seletivo, crescimento de bactrias gram + e -), gar Simples, meio semi-slido.

3. Defina os seguintes constituintes de meios de cultura: extrato de carne; peptona;
Agar-gar; Extrato de levedura. Quais suas funes no meio de cultura?
Extrato de carne
um meio adicionado de substncias altamente nutritivas. um preparado de
carne fresca especialmente selecionado para fornecer um crescimento mximo de
microorganismos exigentes adicionado ao meio de determinadas substncias para
favorecer o desenvolvimento de certas linhagens. Fonte de carbono orgnico,
nitrognio, vitaminas e sais minerais e, nesse caso de energia.

Peptona
Protena semi-digerida que serve como fonte de nitrognio. Usada na
preparao de meios nutriente, sendo altamente nutritiva, suporta bom crescimento de
ampla variedade de microorganismos. Usada em meios diagnsticos para identificao
de bactrias atravs de testes bioqumicos como produo de indol e produo de sulfito
de hidrognio. Pode ser usada em meios gerais de laboratrios e para produo
comercial de enzimas, vacinas, antibiticos, esterides e outros produtos.
gar-gar
Sulfato de cido poligalacturnico extrado de vrias espcies de algas do gnero
Gellidum e outras algas afins. O gar-gar muito empregado em microbiologia para
culturas slidas de bactrias. especialmente til por manter-se slido (na verdade com
densidade de um gel firme) em temperaturas comumente empregadas para cultura de
bactrias (37C), temperatura tima para seu desenvolvimento. Alm disso, no
metabolizado por bactrias de interesse clnico.
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Extrato de Levedura
Os extratos de levedura so excelentes substratos para muitos microrganismos.
Ele produzido a partir da plasmlise de clulas de levedura de panificao com altas
concentraes de NaCl ou mediante autlise a 50-55C. O extrato contm aminocidos,
peptdeos, protenas, vitaminas solveis em gua e carboidratos.
O glicognio e a treolose das clulas da levedura se hidrolisam com a glucose
durante a produo do extrato. Ocorre tambm uma variao de na composio devido
ao substratos que foram utilizados no crescimento da biomassa das leveduras
(PELCZAR, M.; REID, R.; CHAN, E. C. S., 1980).

4. Como pode ser verificada a esterilidade de um meio de cultura (prova de
esterilidade)?
Para realizar a prova de esterilidade usada a fita adesiva para autoclave, que
confeccionada com dorso de papel crepado base de celulose. Recebe, em uma de suas
faces, massa adesiva base de borracha natural, xido de zinco e resinas e, na outra
face, uma fina camada impermeabilizante de resina acrlica.
ideal para o fechamento de pacotes que sero esterilizados em autoclave,
funciona como indicadora de esterilizao, pois possui listras diagonais de tinta
termoreativa que, quando submetidas esterilizao, mudam sua colorao de branco
para preto. Algumas fitas adesivas para autoclave disponveis no mercado mostram a
palavra "esterilizado", em letras garrafais aps o processamento em autoclave.