Você está na página 1de 3

Cursos de Bacharelado em Farmácia e Biomedicina

Disciplina de Bioquímica II

em Farmácia e Biomedicina Disciplina de Bioquímica II Roteiro de aula prática: Determinação quantitativa de
em Farmácia e Biomedicina Disciplina de Bioquímica II Roteiro de aula prática: Determinação quantitativa de

Roteiro de aula prática: Determinação quantitativa de ácido ascórbico em amostra de suco Docente: Prof. Rafael Borba Rosa

INTRODUÇÃO

Diferentemente da maioria dos animais, o organismo humano não possui a capacidade de sintetizar ácido ascórbico (vitamina C) a partir de glicose. Isto se deve ao fato de não possuir a enzima gulonolactona oxidase, essencial na rota bioquímica que permite tal conversão. Desde o século XVI sabia-se que frutas cítricas possuíam uma substância que prevenia o escorbuto (doença relacionada à formação anômala do colágeno), porém somente no período compreendido entre 1928 e 1933 o trabalho conjunto de Albert Szent-Györgyi, Glen King, Norman Haworth e Edmund Hirst, permitiu o isolamento, a identificação e a síntese laboratorial da vitamina C.

PRÁTICA

1. Determinação da quantidade de vitamina C em amostra de suco O método de Tillmans baseia-se na capacidade do ácido ascórbico de reduzir o 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF). O DCFIF apresenta uma coloração azul escuro no seu estado oxidado e, em contato com o ácido ascórbico, o DCFIF é reduzido tornando-se incolor. O ácido ascórbico por sua vez é oxidado a ácido deidroascórbico. A reação de oxi-redução é a seguinte:

2,6 DCFIF oxidado (azul) Ácido ascórbico (forma reduzida) 2,6 DCFIF reduzido (incolor)
2,6 DCFIF oxidado (azul)
Ácido ascórbico
(forma reduzida)
2,6 DCFIF reduzido (incolor)

Ácido deidroascórbico (forma oxidada)

1.1

Reagentes:

- solução de 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF)

- ácido acético 5%

- solução padrão de ácido ascórbico 1 mg/mL em ácido acético 5%

- suco de fruta 1:2 em ácido acético 5%

1.2 Procedimento:

Padronização da solução de 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF)

1. Encher uma bureta de 25 mL com a solução de DCFIF;

2. Transferir 5 mL de ácido acético 5% para um erlenmeyer e pipetar 2 mL da solução padrão de ácido ascórbico (fazer em duplicata);

3. Titular cada uma das porções com a solução de DCFIF até a persistência

de uma coloração levemente rosada (excesso de DCFIF em meio ácido). OBS: o volume gasto nas duas titulações não deve diferir entre si por mais de 0,2 mL.

Cálculo:

Suponhamos que os volumes gastos nas titulações tenham sido:

9,2

mL

9,0

mL

Fazemos uma média dos valores (9,1 mL) e calculamos:

9,1 mL de DCFIF 2 mg de ácido ascórbico

1 mL de DCFIF X = 0,2197 mg

X mg de ácido ascórbico

Isto significa que 1 mL da solução de DCFIF é capaz de oxidar 0,2197 mg de ácido ascórbico.

Determinação da quantidade de ácido ascórbico na amostra de suco

1. Transferir 5 mL da amostra de suco para um erlenmeyer (fazer em duplicata);

2. Titular cada uma das porções como anteriormente;

3. Calcular e expressar a concentração de ácido ascórbico em mg%.

Cálculo:

Suponhamos que os volumes gastos nas titulações da amostra de suco tenham sido:

12,3

mL

12,1

mL

Fazemos uma média dos valores (12,2 mL) e calculamos:

1 mL de DCFIF

12,2 mL de DCFIF y mg de ácido ascórbico

0,2197 mg de ácido ascórbico

y mg de ácido ascórbico 2,5 mL de suco de laranja z mg de ácido ascórbico 100 mL de suco de laranja

OBS: o volume de 2,5 mL leva em consideração a diluição prévia da amostra de suco com ácido acético.

Referências bibliográficas:

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA. Determinação de ácido ascórbico em amostras de alimentos (Roteiros para aulas práticas). Organizadoras: Prof a Dr a Rozangela Curi Pedrosa e Prof a Tânia Günther. 3p. LIMA, E.S., SILVA, E.G., NETO, J.M.M. e MOITA, G.C. Redução de vitamina C em suco de caju (Anacardium occidentale L.) industrializado e cajuína. Quim. Nova, Vol. 30, No. 5, 1143-1146, 2007. FIORUCCI, A.R., SOARES, M.H.F.B. e CAVALHEIRO, E.T.G. A Importância da vitamina C na sociedade através dos tempos. Química Nova na Escola N° 17,

2003.