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Cursos de Bacharelado em Farmcia e Biomedicina

Disciplina de Bioqumica II
Roteiro de aula prtica: Determinao quantitativa de cido ascrbico em amostra
de suco
Docente: Prof. Rafael Borba Rosa
INTRODUO
Diferentemente da maioria dos animais, o organismo humano no possui a
capacidade de sintetizar cido ascrbico (vitamina C) a partir de glicose. Isto se
deve ao fato de no possuir a enzima gulonolactona oxidase, essencial na rota
bioqumica que permite tal converso.
Desde o sculo XVI sabia-se que frutas ctricas possuam uma substncia
que prevenia o escorbuto (doena relacionada formao anmala do colgeno),
porm somente no perodo compreendido entre 1928 e 1933 o trabalho conjunto
de Albert Szent-Gyrgyi, Glen King, Norman Haworth e Edmund Hirst, permitiu o
isolamento, a identificao e a sntese laboratorial da vitamina C.
PRTICA
1. Determinao da quantidade de vitamina C em amostra de suco
O mtodo de Tillmans baseia-se na capacidade do cido ascrbico de
reduzir o 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF). O DCFIF apresenta uma colorao
azul escuro no seu estado oxidado e, em contato com o cido ascrbico, o DCFIF
reduzido tornando-se incolor. O cido ascrbico por sua vez oxidado a cido
deidroascrbico. A reao de oxi-reduo a seguinte:

2,6 DCFIF oxidado (azul)

2,6 DCFIF reduzido (incolor)

cido ascrbico
(forma reduzida)

cido deidroascrbico
(forma oxidada)

1.1 Reagentes:
- soluo de 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF)
- cido actico 5%
- soluo padro de cido ascrbico 1 mg/mL em cido actico 5%
- suco de fruta 1:2 em cido actico 5%
1.2 Procedimento:
Padronizao da soluo de 2,6-diclorofenol indofenol (DCFIF)
1. Encher uma bureta de 25 mL com a soluo de DCFIF;
2. Transferir 5 mL de cido actico 5% para um erlenmeyer e pipetar 2 mL da
soluo padro de cido ascrbico (fazer em duplicata);
3. Titular cada uma das pores com a soluo de DCFIF at a persistncia
de uma colorao levemente rosada (excesso de DCFIF em meio cido).
OBS: o volume gasto nas duas titulaes no deve diferir entre si por mais de
0,2 mL.
Clculo:
Suponhamos que os volumes gastos nas titulaes tenham sido:
1 ..........9,2 mL
2 ..........9,0 mL
Fazemos uma mdia dos valores (9,1 mL) e calculamos:
9,1 mL de DCFIF 2 mg de cido ascrbico
1 mL de DCFIF X mg de cido ascrbico
X = 0,2197 mg
Isto significa que 1 mL da soluo de DCFIF capaz de oxidar 0,2197 mg de
cido ascrbico.
Determinao da quantidade de cido ascrbico na amostra de suco
1. Transferir 5 mL da amostra de suco para um erlenmeyer (fazer em
duplicata);
2. Titular cada uma das pores como anteriormente;
3. Calcular e expressar a concentrao de cido ascrbico em mg%.

Clculo:
Suponhamos que os volumes gastos nas titulaes da amostra de suco
tenham sido:
1 ..........12,3 mL
2 ..........12,1 mL
Fazemos uma mdia dos valores (12,2 mL) e calculamos:
1 mL de DCFIF
0,2197 mg de cido ascrbico
12,2 mL de DCFIF y mg de cido ascrbico
y mg de cido ascrbico 2,5 mL de suco de laranja
z mg de cido ascrbico 100 mL de suco de laranja
OBS: o volume de 2,5 mL leva em considerao a diluio prvia da amostra
de suco com cido actico.

Referncias bibliogrficas:
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA
CATARINA. Determinao de cido ascrbico em amostras de alimentos (Roteiros
para aulas prticas). Organizadoras: Prof a Dra Rozangela Curi Pedrosa e Profa
Tnia Gnther. 3p.
LIMA, E.S., SILVA, E.G., NETO, J.M.M. e MOITA, G.C. Reduo de vitamina C
em suco de caju (Anacardium occidentale L.) industrializado e cajuna. Quim.
Nova, Vol. 30, No. 5, 1143-1146, 2007.
FIORUCCI, A.R., SOARES, M.H.F.B. e CAVALHEIRO, E.T.G. A Importncia da
vitamina C na sociedade atravs dos tempos. Qumica Nova na Escola N 17,
2003.