Manual Laboratorio

Universidad Andrs Bello
Facultad de Ciencias Exactas

Departamento de Ciencias Qumicas
QUIMICA ANALITICA E INSTRUMENTAL

(QUI 141)
MANUAL DE LABORATORIO
Carreras: Qumica y Farmacia

Bioqumica
Licenciatura en Qumica
UNAB
Manual de Laboratorio Qumica Analtica e Instrumental QUI141

INDICE LABORATORIOS
1. VALORACIN POTENCIOMTRICA I.......6

2. VALORACIN POTENCIOMTRICA II..........8
3. VALORACIN POTENCIOMTRICA III... 9
4. CONDUCTOMETRA.........14
5. VOLTAMETRA...........17
6. ESPECTROSCOPA UV-VISIBLE I..........19
7. ESPECTROSCOPA UV-VISIBLE II................................................24
8. ESPECTROSCOPA UV-VISIBLE III...........................26
9. ESPECTROSCOPA ABSORCIN ATMICA.......................28
10. CROMATOGRAFA CAPA FINA...30
11. CROMATOGRAFA COLUMNA....35
12. HPLC........38
13. RECUPERATIVO...42
Departamento de Ciencias Qumicas, Facultad de Ciencias Exactas
Reglamento de Laboratorio
1. El alumno deber presentarse puntualmente a la hora de inicio del laboratorio.
2. Durante el desarrollo del prctico, es obligatorio el uso del delantal y gafas de
seguridad.
3. Es obligacin del alumno realizar el total de los laboratorios programados. Slo
se podr recuperar 1 (uno) laboratorio siempre y cuando la inasistencia sea
debidamente justificada, mediante un certificado mdico a travs de la Direccin
del Departamento de Ciencias Qumicas, dentro de las 72 horas siguientes a la
ausencia del prctico.
La falta del prctico sin justificar A TIEMPO o la ausencia a ms de una prctica
significa automticamente un 1.0 en las evaluaciones de control e informe.
4. El alumno es responsable de la destruccin de cualquier material de laboratorio y
deber reponerlo.
5. Como norma de seguridad, los alumnos dejarn sus pertenencias en los taquilleros
con candado que se encuentran en el exterior del laboratorio. Por ningn motivo dentro
del laboratorio o sobre los mesones de trabajo.
6. Frente al uso de algn reactivo, el alumno debe tomar las precauciones indicadas por
el profesor y/o ayudante, como asimismo las sealadas por el fabricante. Ante cualquier
duda, ms vale preguntar.
7. Se dispondr de recipientes para los deshechos. SELOS
8. Se recomienda el uso del cuaderno de laboratorio ya que le ayudara a recopilar toda
la informacin realizada en el laboratorio para posteriormente elaborar el informe que se
entregar la semana siguiente al laboratorio, el cual ser evaluado.
9. La no entrega oportuna del informe ser calificada con la nota mnima y significar
reprobar el correspondiente prctico.
10. Evaluaciones y ponderaciones se detallan a continuacin:
Controles Laboratorio Semanales (CLS): (60 %)
Informes de Laboratorio (I):
(40%)
Nota Presentacin:
(CLS* 0.60 + I*0.40)
Nota Presentacin igual o mayor a 5.0 significa eximicin
Examen Terico:
(30 %)
Nota Final = (Nota presentacin * 0.70) + (Nota examen * 0.30)
11. El examen terico de laboratorio consistir en una prueba de 40 preguntas de
alternativas, de temas estudiados durante el semestre.
12. El alumno que obtenga una nota inferior a 4.0 se considerar reprobado en la
asignatura.
Formato Informe Laboratorio: La letra debe ser Arial o Time New Roman 12,
interlineado simple, hoja tamao carta.
1.
Nombre del laboratorio.

Nombre de los autores y nmero de grupo de trabajo.
2. Introduccin (5 Puntos) (Media pagina como mximo).

- Breve explicacin de los principios qumicos en los que se basa el anlisis.
- Objetivos del trabajo prctico.
3. Parte Experimental (5 Puntos)
- Materiales y reactivos usados.
- Mtodos y condiciones experimentales.
- Descripcin de la tcnica.
4. Resultados (10 Puntos)
- Resumen completo de los datos de pesadas, volmenes y respuesta del
instrumento, necesarios para calcular los resultados.
- Clculos, ejemplos de clculos y tratamiento de error.
- Debe incluir las ecuaciones qumicas de las reacciones del anlisis, as como
tambin las ecuaciones algebraicas que muestren como se calcularon los
resultados.
- Presentacin de datos: tablas, figuras, grficos, etc.
5. Discusin (10 Puntos)
- Se deben colocar las reflexiones de los resultados obtenidos basados en el
trabajo prctico y en los resultados obtenidos. Estas reflexiones deben ser
apoyadas por bibliografa.
- Un resumen de las observaciones que apoyan la validez de un resultado en
particular o del anlisis total.
6. Conclusin (5 Puntos)
Escribir claramente las conclusiones, en forma detallada, que se obtienen a partir
de la experiencia realizada en base a los objetivos del trabajo prctico.
7. Bibliografa (5 Puntos) Recomendada:
1. D. Skoog, F, Holler, T. Nieman. Principios de Anlisis Instrumental; 5 Edicin,
Editorial Mc Graw-Hill.
2. D. Harvey, Qumica analtica Moderna Editorial Mc Graw-Hill.
3. K. Rubinson y J. Rubinson, Anlisis Instrumental. Editorial Prentice Hall.
4. Paginas Web, con fecha y hora de visita. Solo si tienen una editorial asociada.
Escala de puntajes:
P 1
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
N 1.2 1.3 1.5 1.6 1.8 1.9 2.1 2.2 2.4 2.5 2.7 2.8 3.0 3.1 3.3 3.4 3.6 3.7 3.9 4.0
P 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
N 4.2 4.3 4.5 4.6 4.8 4.9 5.1 5.2 5.4 5.5 5.7 5.8 6.0 6.1 6.3 6.4 6.6 6.7 6.9 7.0

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de un ACCIDENTE, en
virtud de las sustancias y elementos que se utilizan, y la posibilidad de cometer algn
error al realizar un experimento.
SUSTANCIA PELIGROSA + ERROR HUMANO = ACCIDENTE
Por eso, cuando se trabaja en el laboratorio, deben tenerse presente una serie de reglas o
consejos que disminuyen y en algunos casos logran evitar los accidentes.
Como primera regla, para empezar a trabajar:
EL LUGAR DE TRABAJO DEBE ESTAR EN ORDEN
Es conveniente no olvidar estas REGLAS / CONSEJOS entre otros que debe
conocer de acuerdo a la prctica que vaya a realizar:
1) INDICACIONES siga todas las indicaciones que le han sido dadas
2) ESTUDIE CADA EXPERIENCIA ANTES DE CLASE Ahorrar tiempo y evitar
errores y accidentes innecesarios
3) SEGURIDAD DE SUS COMPAEROS El laboratorio es un lugar para trabajar

con seriedad.
4) COMUNICAR LOS ACCIDENTES al profesor o ayudante de laboratorio.

5) VERTIDO DE SUSTANCIAS Trabaje con precaucin. Avisar al profesor o
ayudante de laboratorio si algo se derrama.
6) PREPARACIN DE CIDOS DILUIDOS Nunca agregue agua sobre un cido.

Agregue siempre el cido concentrado, en pequeas cantidades, sobre el agua y agite
continuamente.
7) SUSTANCIAS CORROSIVAS Manipule las mismas con mximo cuidado.

8) NUNCA COMER, BEBER O FUMAR ni apoyar comida sobre la mesa del
laboratorio.
9) CABELLO LARGO Atarse el cabello para evitar accidentes con la llama del
mechero.
10) SUSTANCIAS CORROSIVAS EN CONTACTO CON PIEL y/u OJOS Lavar

inmediatamente con abundante agua.
11) LIMPIEZA DEL MATERIAL Todo el material que se utiliza debe ser limpiado al
finalizar el prctico a fin de evitar contaminaciones y/o reacciones no deseadas en
posteriores experimentos.

Laboratorio 1
Determinacin potenciomtrica de la concentracin de H3PO4
Objetivos
1. Conocer algunos conceptos tericos, procedimientos y lenguaje para la medicin de
pH.
2. Construir una curva de valoracin potenciomtrica experimental para la
determinacin de la concentracin de H3PO4, por valoracin potenciomtrica.
Introduccin
Los mtodos potenciomtricos de anlisis se basan en las medidas del potencial
de las celdas electroqumicas en ausencia de corrientes apreciables. Desde hace mucho
tiempo las tcnicas potenciomtricas se han utilizado para la deteccin de puntos finales
en mtodos volumtricos de anlisis.
El equipo requerido para los mtodos potenciomtricos incluye un electrodo de
referencia, un electrodo indicador y un dispositivo para medir el potencial.
El potencial de un electrodo indicador adecuado se puede utilizar para establecer
el punto de equivalencia de una valoracin (valoracin potenciomtrica). El punto final
potenciomtrico es ampliamente aplicable y proporciona datos ms precisos que los
mtodos que utilizan indicadores. Este tipo de valoraciones es muy til en la valoracin
de soluciones coloreadas, turbias y para detectar la presencia de especies insospechadas
en solucin.
La utilidad del pH como una medida de la acidez o basicidad de un medio
acuoso y la amplia disponibilidad de electrodos indicadores de pH (electrodos de
vidrio), han hecho que las medidas potenciomtricas sean una de las medidas ms
utilizadas en el anlisis qumico.
Parte experimental
Materiales y reactivos
Bureta de 25 mL
pH metro
Agitador magntico
Barra magntica
Pipeta aforada de 10 mL
Matraz aforado de 100 mL
Probeta de 100 mL
Pizeta con agua destilada
Vaso precipitado de 150 mL
NaOH 0.1 mol/L, estandarizada previamente
Buffer estndares (pH 4 y 7)
Muestra problema (H3PO4)
Procedimiento experimental
1. Calibre el medidor de pH con soluciones buffer estndares (pH 7 y 4). Lave y seque
el electrodo cuidadosamente cada vez que cambie de solucin.
2. Mida exactamente 10 mL de H3PO4 y virtala en un matraz de 100 mL, lleve con
agua destilada al volumen total.

3. Tome una alicuota de 10 mL de la solucin preparada y virtala en el vaso
precipitado de 150 mL. Aada 75 mL de agua destilada. Introduzca la barra magntica e
instale el vaso sobre el agitador magntico. Agite suavemente. Sumerja el electrodo en
la solucin.
4. Anote el pH inicial. Valore con la solucin de NaOH que se halla en la bureta
graduada adicionando 0.5 mL cada vez, anote el valor de pH despus de cada adicin.
Contine hasta pH 12. Tabule volumen de NaOH versus pH.
5. Grafique pH versus Volumen (en mL) de solucin de NaOH y determine en forma
aproximada el punto de equivalencia de la solucin.
6. Repita dos veces la valoracin, reduciendo el volumen de las alcuotas a 0.2 mL en
las cercanas del punto de equivalencia (1 o 2 mL antes y despus de la zona de
inflexin de la curva).
7. Construya una tabla que incluya: pH (o E), pH/V, 2pH/V2 y Volumen de NaOH
(mL).
8. Grafique cada conjunto de datos versus volumen de NaOH agregado.
9. Calcule el volumen final (punto final) para la muestra.
10. Determine grficamente el volumen del punto final. Grafico 2 derivada.
11. Con todos los datos obtenidos calcular la concentracin del cido problema en: g de
cido fosfrico en los 100 mL de solucin.
12. Calcule el valor de pKa1, Ka1, pKa2 y Ka2 del H3PO4.
13. Establezca los equilibrios involucrados.

Laboratorio 2
Determinacin potenciomtrica de la concentracin de HCl y H3PO4 en una mezcla
Objetivos
1. Aprender el uso, cuidado y calibracin de un electrodo medidor de pH.
2. Determinacin de la concentracin de HCl y H3PO4, en una mezcla, por valoracin
potenciomtrica.
Parte experimental
Bureta de 25 mL
pH metro
Agitador magntico
Barra magntica
Probeta de 100 mL
NaOH 0.1 mol/L, estandarizada previamente
Buffer estndares (pH 4 y 7)
Muestra problema (HCl H3PO4)
1. Calibre el medidor de pH con soluciones buffer estndares (pH 7 y 4). Lave y seque
el electrodo cuidadosamente cada vez que cambie de solucin.
2. Mida exactamente 10 mL de una mezcla de HCl-H3PO4 y virtala en un vaso de 150
mL. Aada 75 mL de agua destilada. Introduzca la barra magntica e instale el vaso
sobre el agitador magntico. Agite suavemente. Sumerja el electrodo en la solucin.
3. Anote el pH inicial. Valore con la solucin de NaOH adicionando 0.5 mL cada vez,
anote el valor de pH despus de cada adicin. Contine hasta pH 12. Tabule volumen de
NaOH versus pH.
4. Grafique pH versus Volumen (en mL) de solucin de NaOH y determine en forma
aproximada el punto de equivalencia de la solucin.
5. Repita dos veces la valoracin, reduciendo el volumen de las alcuotas a 0.2 mL en
las cercanas del punto de equivalencia (1 o 2 mL antes y despus de la zona de
inflexin de la curva).
6. Construya una tabla que incluya: pH (o E), pH/V, 2pH/V2 y Volumen de NaOH
(mL).
7. Grafique cada conjunto de datos versus volumen de NaOH agregado.
8. Calcule el volumen final (punto final) para la muestra.
9. Determine grficamente el volumen del punto final. Grafico 2 derivada
10. Calcule la molaridad y normalidad del HCl y del H3PO4 en la mezcla.
11. Establezca los equilibrios involucrados.

Laboratorio 3
Determinacin potenciomtrica del contenido de iones cloruro y de iones fluoruro
usando un electrodo selectivo de iones (ISE)
Objetivos
1. Conocer el manejo, mantenimiento y aplicaciones de electrodos selectivos de iones,
ISE.
2. Construir curvas de calibracin tpica aplicables en potenciometra directa.
3. Se analizarn muestras de enjuagatorio bucal para la determinacin de in fluoruro.
4. Construir una curva de valoracin potenciomtrica experimental para la
determinacin de la concentracin de Cl en una muestra de vino, expresada como ppm
de NaCl, en la cual se utiliza un electrodo selectivo de iones cloruro como electrodo
indicador.
Introduccin
Los Electrodos Selectivos de Iones (ISE, por sus siglas en ingls) son
dispositivos relativamente simples y econmicos que, al sumergirse en una solucin,
desarrollan un potencial elctrico cuya magnitud depende selectivamente de la
concentracin (en rigor, de la actividad) de un tipo de in en particular, an en presencia
de otros iones en la solucin.
Cuando este electrodo selectivo es utilizado conjuntamente con un electrodo de
referencia, se forma una celda electroqumica cuyo potencial permite conocer la
actividad de este in particular realizando una calibracin apropiada.
El ISE contiene en su estructura un sensor electroqumico, que consiste en una
membrana de composicin especial que permite establecer un equilibrio de intercambio
inico en forma selectiva con el in analito al cual se aplica.
En el lmite entre las fases membrana-solucin se produce una distribucin de
cargas, la cual es responsable del potencial elctrico. La magnitud de este potencial
depende de la posicin del equilibrio de intercambio inico, la cual depende, a su vez,
de la actividad de los iones seleccionados en esta zona lmite, llamada interfase del
electrodo.
Estos electrodos han encontrado una amplia gama de aplicaciones, que incluyen
reas como anlisis de laboratorio, control de procesos industriales, mediciones en el
campo de la fisiologa, monitoreo ambiental, monitoreo de aguas residuales, control de
calidad en alimentos, agricultura y pesca, diagnstico mdico, control de calidad en
industrias farmacuticas y de cosmticos.
Adems, en titulaciones potenciomtricas, estos electrodos amplan la
aplicabilidad de esta tcnica a una gran variedad de reacciones donde participan
especies qumicas para las cuales no existen electrodos apropiados basados en
transferencias de electrones.
El electrodo selectivo de Fluoruro quizs sea el electrodo de estado slido ms
comn, est basado en la utilizacin de un cristal de fluoruro de lantano impurificado
con europio (II). En este caso, la impurificacin (o dopaje) consiste en aadir pequeas
cantidades de Eu(II) en vez de La(III). La solucin de relleno interna del electrodo
consiste en NaF y NaCl 0.1M. Su fundamento consiste en que el in fluoruro en
solucin est selectivamente absorbido en las dos caras del cristal; por lo que los iones
F pueden moverse a travs del cristal de LaF3. Al impurificar el LaF3 con EuF2 se
producen lagunas reticulares de aniones en el cristal. Esto provoca que un in F de un
sitio adyacente a un hueco pueda saltar a ste, dejando a su vez un nuevo hueco en el

sitio que ocupaba. As el fluoruro puede migrar de un lado a otro de la membrana y
establecer una diferencia de potencial entre las caras del cristal, necesaria para el
funcionamiento del electrodo.
La respuesta del electrodo de in F viene dado por la ecuacin:
Eind = K 0.059log (F)
Esta respuesta es casi Nernstiana (cumple la ecuacin de Nernst) para un
intervalo de concentracin comprendido entre aproximadamente 106 y 1 M. Es
importante que el pH sea controlado ya que a pH menores de 5 se forma HF o HF2 los
cuales no pueden ser detectados por el electrodo. Se utiliza un amortiguador de fuerza
inica (TISAB) para ajustar la fuerza inica y el pH ( 5) de las muestras y patrones a
un mismo valor.
Parte experimental
A) Materiales y reactivo. Determinacin de Fluoruro
Medidor de pH capacitado para mediciones con electrodos selectivos de iones
(Ionmetro)
Electrodo especfico de ion fluoruro
Electrodo de referencia Ag/AgCl de doble puente salino (solucin de relleno
externa: KNO3)
Agitador magntico, barrita magntica y extractor
Bureta de 25 mL
Vasitos plsticos desechables de 50 mL
Pipeta volumtrica de 25 mL
6 Matraces aforados de 50 mL
Solucin stock patrn de F de 100 ppm (preparada a partir de NaF p.a. seco)
Amortiguador de ajuste de fuerza inica (TISAB). Esta solucin se vende
comercialmente. Se puede preparar en el laboratorio mezclando 57 mL de cido
actico glacial, 58 g de NaCl, 4 g de EDTA y 500 mL de agua destilada en un
vaso de 1 L. Enfriar en un bao de hielo y agregar cuidadosamente NaOH 6 M
hasta un pH de 5.0 5.5 y diluir a 1 litro. Guardar en frasco plstico.
B) Materiales y reactivos. Determinacin de Cloruro
Bureta de 25 mL, con su soporte y pinzas de sujecin.
pH metro potencimetro
Electrodo selectivo de iones cloruro, con referencia externa incorporada
Agitador magntico
Barra magntica
2 Matraces aforados de 100 mL
Vasos precipitado de 100 y 250 mL
Probeta graduada de 50 mL
Pipeta graduada de 5 mL
Solucin estandarizada de AgNO3 0.02 mol/L
Soluciones 0.0100 0.100 0.500 mol/L de NaCl para calibracin
Solucin 1.0 mol/L de KNO3, reguladora de fuerza inica para la calibracin (ISAB)
Muestra problema de vino tinto
10

A) Procedimiento Experimental
1. Dependiendo del nivel de la concentracin esperable en la muestra, prepare una curva
de calibracin para ion fluoruro (el tramo de concentraciones puede variar).
2. Para la determinacin en un tramo diluido prepare 250 mL de una solucin patrn de
F de 10 ppm por dilucin de la solucin estndar de 100 ppm y a partir de sta prepare
un conjunto de matraces con soluciones patrn que contengan 0.4, 1.0, 2.0, 4.0 y 5.0
ppm de F. Utilice matraces aforados de 50 mL a los que se aaden 25 mL de solucin
TISAB.
3. Las muestras tambin deben contener la proporcin correspondiente de TISAB
(50%).
4. Despus de enjuagar bien introduzca los electrodos en el estndar de 5.0 ppm (vaso
plstico), agite durante 3 - 5 minutos hasta alcanzar un valor de equilibrio, registre el
potencial. Repita con los estndares restantes y con la muestra.
5. Trace un grfico de potencial versus log concentracin de los estndares. Determine
la ecuacin y el coeficiente de regresin. (Analice la ecuacin).
6. Utilice esta ecuacin para determinar la concentracin en ppm de F en la muestra
problema (esta concentracin deber ser corregida por la dilucin que ha sufrido la
muestra por efecto del TISAB).
7. Haga repeticiones para la determinacin de la muestra (soluciones diferentes).
8. Como se podra llevar a cabo una determinacin mediante adicin de estndar?
Investigue como podra efectuarse una medicin por lectura directa en el instrumento
(calibracin del instrumento para la medicin de F).
9. Escriba la ecuacin que describe la relacin entre potencial y concentracin para un
electrodo de F.
10. Por qu debemos efectuar las mediciones a una temperatura constante?
11. La sensibilidad del electrodo de fluoruro es apropiada?
12. Porqu el pH del TISAB debe mantenerse en el rango 5.0 - 5.5?
13. Cmo funciona el control de la fuerza inica?
B) Procedimiento experimental
Calibracin del potencimetro
1. Calibre el potencimetro con las soluciones de NaCl para calibracin (pCl 2.00 -1.00
y 0.301):
Vierta 50 mL de cada una de las soluciones calibradoras en los vasos de 100 mL y
adicione 2.0 mL de la solucin ISAB.
Coloque el vaso sobre el agitador magntico, provisto de su barra magntica,
introduzca el electrodo combinado ISE referencia y grade la velocidad de
agitacin de manera que no se produzcan turbulencias (remolinos).
Despus de espera unos segundos para la estabilizacin de la lectura del potencial,
registre y anote su valor en mV.
Lave y seque el electrodo cuidadosamente cada vez que cambie de solucin.
2. Confeccione la curva de calibracin correspondiente:
Grafique E de la celda medida en (mV) versus C, o bien, E de la celda medida en
(mV) versus pCl log [Cl].
3. Calcule las pendientes E / log C, en mV/dcada de C en los dos intervalos de
concentraciones (0.0100 M 0.100 M y 0.100 M 0.500 M).
11

Preparacin para la titulacin
4. Mida exactamente 100 mL de la muestra de vino tinto (matraz aforado de 100 mL) y
virtala en un vaso de precipitados de 250 mL. Enjuague el remanente de muestra en el
matraz con agua destilada, arrastrndolo hacia el vaso de precipitados.
5. Prepare el conjunto para la valoracin potenciomtrica: bureta con su soporte y pinza
agitador magntico. Coloque el vaso con la muestra de vino sobre el agitador,
introduzca con cuidado la barra magntica y sumerja el electrodo combinado ISE
referencia en la solucin.
6. Inicie la agitacin magntica, aumentando gradualmente la velocidad, hasta alcanzar
una agitacin sin formacin de remolinos.
Titulacin gruesa
7. Valore con la solucin de AgNO3 0.02 mol/L adicionando porciones de 1.0 mL cada
vez. Espere que la lectura de potencial se estabilice (10 a 15 seg) y anote el valor
estabilizado, en mV.
8. Contine las adiciones y anotaciones hasta alcanzar el volumen de titulante que
produce el salto de potencial, y agregando posteriormente 5 6 porciones de 1.0 mL de
titulante adicionales.
9. Tabule volumen de AgNO3 versus potencial, en mV y confeccione la curva de E
versus volumen de AgNO3 de la titulacin gruesa realizada. Inspeccione el grfico
resultante, tomando nota cuidadosa del rango de volmenes en que se ubica la elevacin
pronunciada (salto) del potencial, designando el volumen de punto de equivalencia
aproximado que se obtiene.
Titulacin fina
10. Repita la titulacin, pero ahora de la siguiente manera:
Inicie adicionando porciones de 1.0 mL de solucin de AgNO3 0.02 mol/L hasta
un volumen equivalente 1.0 mL anterior al del punto de equivalencia aproximado
asignado en (7), esperando cada vez la estabilizacin y anotando la lectura de
potencial.
Enseguida, contine la titulacin, pero ahora adicionando volmenes de 0.1 (0.2)
mL cada vez, anotando las lecturas de potencial estabilizadas.
Realice estas adiciones de titulante y lecturas de potencial estabilizado hasta
alcanzar un volumen de titulante equivalente a 1.0 mL posterior al del punto de
equivalencia asignado en (7).
Finalice la titulacin agregando posteriormente 5 6 porciones de 1.0 mL titulante
adicionales, anotando los potenciales estabilizados.
Tratamiento de los datos.
11. Con los valores obtenidos en la titulacin fina construya una tabla con las
siguientes columnas:
Volumen de AgNO3 (mL) E(mV) vol E E/vol E(pCl)/vol
2
E(2pCl)/vol2.
12. Grafique E (mV); E/vol y 2E/vol2 versus volumen de AgNO3 agregado.
Determine el volumen correspondiente al punto de equivalencia en cada uno de los
grficos.
13. A partir del volumen de equivalencia obtenido del grfico de segunda derivada,
2E/vol2 versus volumen de titulante, calcule el contenido de iones cloruro en la
muestra de vino, expresndolo en ppm de NaCl.
12

Laboratorio 4
Valoracin conductomtrica de una mezcla de cido fuerte y cido dbil y
de precipitacin
Objetivos
1. Aprender el uso, cuidado y calibracin de un conductmetro.
2. Determinacin conductomtrica del punto final en la valoracin de una mezcla de un
cido fuerte y un cido dbil con NaOH.
3. Determinacin conductomtrica del punto final en la valoracin por precipitacin de
cloruro de potasio con nitrato de plata.
Introduccin
La conductividad es el recproco de la resistencia y sus unidades ms comunes
son Ohms y Siemens. Las determinaciones de la conductividad reciben el nombre de
determinacin conductomtricas.
La conductancia de una solucin vara con el nmero, tamao y carga de los
iones y con algunas caractersticas del solvente, como la viscosidad. Adems, del rea
(A) y la distancia (l) de las placas, es decir, depende del electrodo (o celda) que se est
utilizando. As, para independizar la medida, se debe determinar previamente la
constante de la celda ( = distancia/rea), la cual es especfica para cada electrodo. Si a
travs del tiempo, el rea o la distancia de las placas varan, se obtendr otro valor de
conductividad.
Para determinar la constante de la celda generalmente se utilizan soluciones de
KCl patrn de concentracin exactamente conocida, se desgasan y se termostatizan a
25C. Luego se busca en tablas la conductividad especfica (k) de estas soluciones y se
calcula:
= Conductividad especfica (k, ohms/ cm)
Conductividad medida (L, ohms)
KCl (N)
0.02
0.01
Conductividad especfica (ohms/cm) a 25C

0.002765
0.001413
Para medir la conductividad de una disolucin se debe usar corriente alterna, ya

que la corriente continua produce cambios en la superficie del electrodo y/o en la
disolucin, debido a reacciones electroqumicas. Estas reacciones pueden producir
depsitos que modifican el rea del electrodo y/o pueden generar o consumir iones que
varan la conductividad.
Los electrodos ms comunes en las medidas de conductividad son los de platino.
Para aumentar el rea efectiva conviene platinizarlos, lo que se consigue depositando
electroqumicamente una fina pelcula de platino finamente dividido sobre ellos. Otra
opcin son los electrodos de grafito.
La medida de conductividad se utiliza mucho como criterio de pureza del agua
desionizada y destilada, ya que es de alta sensibilidad.
El agua de conductividad (grado 1), presenta una conductividad especfica menor de
107 ohms/cm. El agua destilada, en equilibrio con CO2 atmosfrico, tiene una
conductividad especfica del orden de 10-6 ohms/cm. En general, una buena pureza se
13

obtiene bidestilando agua de una solucin de KMnO4 alcalina y recogiendo la porcin
intermedia, todo esto en corriente de N2.
La medida de conductividad puede ser til en la deteccin del punto final de una
valoracin, ya que la variacin de concentracin de las diferentes especies a lo largo de
la valoracin se traduce en variacin en la conductividad de la disolucin. Si en el punto
de equivalencia se producen cambios bruscos en la conductividad del medio, esto puede
ser aprovechado para detectar el punto final de la valoracin graficando: Conductividad
vs Volumen de valorante agregado.
En el caso de la valoracin de una base fuerte (ej. NaOH) con un cido fuerte
(ej. HCl) grafico N 1, la curva tiene la siguiente forma:
En el primer tramo la conductividad disminuye debido a que se est cambiando
el protn por el ion sodio, que tiene menor movilidad. En el segundo tramo la
conductividad aumenta drsticamente, ya que se estn agregando iones Na+ y OH en
exceso. En todo la valoracin lo milimoles de Cl no varan.
El grfico N 2 muestra la valoracin de una mezcla de cidos, fuerte y dbil
(HCl y HAc), con base fuerte. En el primer tramo se est reemplazando un ion H+ por
un ion Na+, de menos movilidad, por lo que se observa una disminucin drstica de la
conductividad. En el segundo tramo, la conductividad aumenta, paulatinamente, ya que
aparece en la disolucin el anin acetato, Ac, adems del catin Na+, que se est
agregando. En el tramo final, la conductividad aumenta con una pendiente mayor, lo
que se debe a la presencia, en exceso, de los iones Na+ y OH. Los milimoles de Cl no
varan.
Grafico N 1
Grafico N 2
La curva de la Figura 1 es tpica de las titulaciones por precipitacin. La

pendiente de la porcin inicial de la curva, puede ser positiva o negativa, dependiendo
de la conductancia relativa del ion que est siendo determinado y el ion de igual carga
del reactivo que lo sustituye. Una pendiente negativa producir una curva de titulacin
con forma de V que provee una definicin ms precisa del punto final. Por consiguiente,
es preferible elegir un reactivo en el cual la conductancia inica del ion no-reactivo sea
menor que la del ion que se titula.
En la figura se ilustra la titulacin de cloruro de potasio con nitrato de plata. Los
volmenes agregados iniciales de reactivo producen una sustitucin de iones cloruro por
los iones nitrato del reactivo, resultando de ello una leve disminucin de la
conductancia. Despus del punto de equivalencia, se produce un rpido aumento debido
al volumen agregado en exceso de nitrato de plata.
14
Figura 1
Los mtodos conductimtricos basados en reacciones de precipitacin o
formacin de complejos no son tan tiles como aquellos que involucran procesos de
neutralizacin. Los cambios en la conductancia durante estas titulaciones raramente son
tan grandes como los observados en las reacciones cido-base puesto que ningn otro
ion se aproxima a la conductancia del ion hidronio u hidroxilo. Factores tales como la
lentitud de la reaccin y la coprecipitacin representan otras fuentes de dificultad en las
reacciones de precipitacin. En las valoraciones conductimtricas no importan los
valores absolutos de la conductividad, ya que stos desplazan la curva en el eje Y, sin
que esto afecte el volumen del punto de equivalencia, eje X. Lo que s es indispensable
es realizar la correccin por la dilucin:
Lcorregido = Lmedido x (Volumen inicial + Volumen agregado)
Volumen inicial
Parte experimental
Bureta de 25 mL
Pipeta volumtrica de 10 mL
Conductmetro
Agitador magntico
Barra magntica
Soporte universal
Mariposa (pinza para buretas)
Pizeta
Propipeta
Solucin de NaOH 0.1 mol/L, estandarizada previamente
Muestra Problema de HCl-HAc
Solucin de AgNO3 0.01 mol/L, estandarizada previamente
Solucin problema de KCl
15

1. Mida exactamente 10 mL de solucin problema y diluya exactamente a 50 mL en un
matraz aforado. Vierta en un vaso de 100 mL y anote el volumen final.
2. Instale el vaso sobre el agitador magntico. Coloque la celda de conductividad de
modo que quede totalmente sumergida. Ajuste la velocidad de la agitacin de forma tal
que no produzca turbulencias.
3. Encienda el equipo y espere a que se estabilice. Con ayuda de su profesor seleccione
la escala apropiada.
4. Tabule volumen en mL versus Conductancia Corregida. Anote la lectura inicial.
Valore adicionando alcuotas de 0.5 mL de valorante, hasta completar 10-12 mL
agregados (o lectura inicial).
5. Retire la celda y lave los electrodos. Valore una nueva alcuota con incrementos de
0.1 mL de valorante.
6. Tabule: Volumen, Conductancia leda, Conductancia corregida.
Cond. Corregida = Cond. Leda x VolTotal
VolInicial
7. Grafique Conductancia corregida versus volumen de NaOH. Defina los puntos de
equivalencia de forma grfica.
8. Grafique Conductancia corregida versus volumen de AgNO3. Defina el punto de
equivalencia de forma grfica.
9. Calcule la concentracin de las especies en las soluciones valoradas en Molaridad.
16

Laboratorio 5
Voltamperometra del ferricianuro potsico en disolucin acuosa de cloruro
potsico
Objetivos
1. Aprender el uso de un equipo Voltamtrico.
2. Estudiar el comportamiento electroqumico del ferricianuro potsico en disolucin
clorurada.
Introduccin
Las medidas voltamperomtricas son metodologas electroanliticas en las que la
informacin cualitativa y cuantitativa del analito se determina a partir de la medida de
intensidad de corriente en funcin del potencial aplicado a un electrodo de trabajo,
dependiendo del tipo de perturbacin de potencial y de otras condiciones
experimentales se pueden separar en varias tcnicas: Polarografia, Voltametra lineal y
cclica, Voltametra de pulso normal, Voltametra de onda cuadrada y Voltametra de
pulso diferencial.
En el presente prctico nos centraremos en la tcnica de voltametra cclica y
consiste en aplicar una seal de potencial triangular (un ciclo) sobre un electrodo
estacionario y sin agitacin. El ciclo suele hacerse varias veces y los potenciales en los
que se da el cambio se llaman potenciales de inversin. Estos se escogen de acuerdo a
cuando se produce la oxidacin o reduccin del analito. Esta tcnica permite estudiar la
cintica de las reacciones, detectar especies intermedias, etc.
Se estudia el comportamiento electroqumico del ferricianuro potsico en
disolucin clorurada, mediante voltamperometra cclica de barrido lineal y, tambin,
por potenciometra, con el objeto de obtener informacin cintica y termodinmica del
equilibrio:
+
[Fe(CN) ]K + 1 + K [Fe(CN) ]K (1)

6
La cintica de reduccin voltamperomtrica del ferricianuro est controlada por

difusin en las condiciones experimentales de trabajo, por lo que se puede estimar un
coeficiente de difusin voltamperomtrico, mediante la expresin:
1/2
ipc(mA) = 65190 D
cv
1/2
1/2
|Epc Ep/2|
(2)
2 1
En la que D es el coeficiente de difusin del ferricianuro (en cm .s ), c

1
(mol.L ) es la concentracin de ferricianuro, ipc, es la intensidad del pico catdico, Epc,

es el potencial de pico catdico, Ep/2, es el potencial que corresponde a la mitad de la
1
intensidad de pico catdico, y v es la velocidad de barrido (en mV.s ).

Parte experimental
Materiales y Reactivos:
1 celda electroqumica
1 agitador magntico
1 barrita magntica
1 termmetro
1 equipo de Voltametra
17

2 pipetas aforadas: de 2 mL y 10 mL
1 electrodo de referencia del tipo Ag/AgCl/KCl (3 mol/L)
1 electrodo de Pt de disco (de rea conocida)
2 electrodos de Pt de placa
KCl 1 M
[Fe(CN)6]K3 0.17 mol/L
[Fe(CN)6]K4 0.25 mol/L
NH3 10% (para la limpieza de los electrodos)
Determinacin potenciomtrica del potencial formal, E
1. Introducir 15 mL de KCl 1 mol/L y 3 mL de [Fe(CN)6]K3 0.17 mol/L en la celda
electroqumica.
2. Seguidamente se introducen, los electrodos de Pt (1 cm2), de referencia y la barrita
agitadora.
3. Hacer adiciones sucesivas de 0.5 mL de [Fe(CN)6]K4 0.25 mol/L.
4. Se realiza la primera adicin de ferrocianuro potsico, se agita con la barrita la
disolucin, y se realiza por triplicado la medida de F.E.M. pulsando el botn de mV,
tres veces (sin agitacin de la disolucin) y tomando las medidas cuando su lectura se
ha estabilizado.
5. La operacin se repite 7 veces, hasta completar un total aadido de 3.5 mL de
ferrocianuro potsico. El potencial E se determina a partir de la ley emprica de Nernst:
F.E.M. = E + (RT/nF) ln (CFeIII/CFeII) (3)
Representando los valores de F.E.M. frente a ln (CFeIII/CFeII), para lo cual es necesario
medir previamente la temperatura de la disolucin.
Determinacin voltamperomtrica del coeficiente de difusin, D
1. Se introducen 15 mL de KCl 1 mol/L y 3 mL de ferricianuro potsico [Fe(CN)6]K3
0.17 mol/L.
2. Se monta la celda electroqumica como en el caso anterior, introduciendo, adems, un
electrodo auxiliar consistente en dos de Pt (1cm2) conectados.
3. Los tres electrodos se conectan al equipo de voltametra. Se fijan en ste los
potenciales lmites: el catdico a 300 mV y, el andico, a +800 mV.
4. Seguidamente se realizan voltamperogramas cclicos, en sentido catdico, para cada
una de las velocidades de barrido siguientes: 500, 400, 300, 250, 200, 150, y 100 mV s-1
(se comienza por la menor velocidad de barrido).
5. Se registran los correspondientes voltamperogramas y, teniendo en cuenta las escalas
de intensidad y de potencial, se miden las magnitudes iP, EP, y EP/2, tanto del pico
catdico como del andico.
6. El coeficiente de difusin del ferricianuro se obtiene mediante la ecuacin (2), a partir
1/2
de la representacin de i frente a (v / |E E |) .
Pc
pc
p/2
7. La reversibilidad voltamperomtrica de este proceso se puede constatar si se

comparan entre s las magnitudes medidas directamente en ambos picos.
18

Laboratorio 6
Determinacin del contenido de fsforo por Espectrofotometra
Objetivos
1. Anlisis del contenido de fsforo en una muestra real mediante espectrofotometra
UV Visible.
2. Aplicacin de mtodos de cuantificacin haciendo uso de curvas de calibracin y de
adicin estndar.
Introduccin
La espectrofotometra, especialmente en la regin visible se utiliza a menudo
como mtodo de anlisis. Muchas sustancias pueden convertirse en derivados
coloreados y, por lo tanto, pueden ser analizados en la regin visible del espectro
electromagntico.
La radiacin electromagntica se puede considerar como una forma de energa
radiante que se propaga como onda transversal con un movimiento ondulatorio. La
distancia entre las ondas se describe en trminos de longitud de onda (). La regin
visible es una parte muy pequea del espectro electromagntico y se extiende desde el
ultravioleta cercano, 380 nm hasta aproximadamente 780 nm.
La cantidad de radiacin absorbida por una especie qumica se puede relacionar
con la concentracin de la sustancia que se analiza, mediante la Ley de Beer.
A=kbC
Donde:
A = absorbancia
C = concentracin del analito
b = el paso ptico
k = la constante de proporcionalidad.
La constante de proporcionalidad k se denomina absortividad (a) si la
concentracin de la sustancia a analizar se expresa en gramos/litro y absortividad molar
( ) si la concentracin del analito se expresa en moles/litro.
Es posible realizar clculos cuantitativos cuando dos especies absorbentes de la
solucin tienen espectros que se superponen. De acuerdo con la ley de Beer, la
absorbancia total de una mezcla a determinada longitud de onda, ser igual a la suma de
las absorbancias individuales de las especies que absorben.
En la mayora de los anlisis qumicos se mide la respuesta del procedimiento
analtico a cantidades conocidas de analito (llamadas patrones o estndares) y basndose
en ellas se puede interpretar la respuesta a una muestra de contenido desconocido. Para
este fin se prepara una curva de calibrado, que es un grfico que muestra la respuesta
de un mtodo analtico en funcin de cantidades conocidas de analito.
Las disoluciones que contienen concentraciones conocidas de analito se llaman
disoluciones patrn o estndar. Las disoluciones que contienen todos los reactivos y
disolventes usados en el anlisis, pero sin analito, se llaman disoluciones blanco o
simplemente blancos. Los blancos miden la respuesta del procedimiento analtico a las
impurezas o especies interferentes que existan en los reactivos.
19

La curva de calibrado descrita, que se construye obteniendo la respuesta del
mtodo frente a soluciones de analito exactamente conocidas y crecientes, se denomina
curva de calibracin de patrn externo. Para determinar la concentracin de analito
en una muestra problema se grafica directamente seal vs concentracin de analito.
Es deseable que la seal de la muestra problema se encuentre en la zona lineal de la
curva.
Curva de calibrado de patrn externo
Seal
Zona Lineal
Concentracin
El mtodo de adicin patrn consiste en aadir cantidades conocidas de analito
a la muestra problema, cuyo contenido en analito se quiere determinar. A partir del
aumento de seal se deduce cunto analito hay en la muestra problema. Este mtodo
requiere una respuesta lineal frente al analito.
Este mtodo es especialmente apropiado cuando la composicin de la muestra es
desconocida o compleja y afecta a la seal analtica. La matriz es todo lo que hay en la
muestra problema adems del analito. Se define como efecto de matriz el cambio que
experimenta una seal analtica por todo lo que hay en la muestra adems del analito. La
composicin de la matriz afecta la magnitud de la seal analtica. Puede ser que la
matriz contenga componentes desconocidos que, como tales es imposible incluir en las
disoluciones patrn al construir la curva de calibrado. Si se agrega un volumen pequeo
de solucin concentrada de patrn a una muestra desconocida, no vara
significativamente la concentracin de la matriz, esto debido a que la matriz ejerce el
mismo efecto sobre el mismo analito aadido que sobre el que hay en la muestra
problema.
Seal Curva de calibrado de adicin patrn
Seal
Seal de la muestra
sin patrn aadido
Volumen de patrn aadido
20

As, para determinar la concentracin del analito en la muestra problema se
puede utilizar el grfico anterior donde se grfica directamente la seal vs el volumen
aadido de disolucin estndar:
CMP = b CSt
m VMP
Donde:
b = intercepto
CSt = concentracin del estndar
m = pendiente
VMP = volumen aadido de la muestra (mL)
Parte experimental
Materiales y Reactivos:
Espectrofotmetro de doble haz UV-Vis
Cubeta de 1 cm de paso ptico
Matraces aforados de 50 mL
Bureta de 10 mL
Propipeta
Pipeta graduada de 10 mL
H2SO4 concentrado
Solucin patrn stock de fsforo de aproximadamente 100 mg/L
Solucin A: Molibdato de amonio con tartrato de antimonio y potasio en H2SO4
5N
Solucin B: Solucin A ms cido ascrbico
Parte experimental
Mtodo de curva de calibracin
1. A partir de la solucin patrn stock de fsforo, preparar la solucin patrn de 10
mg/L de fsforo de la siguiente manera:
Tomar 10 mL de la solucin patrn stock de fsforo.
Colocar la alcuota anterior en un matraz aforado de 100 mL.
Aforar con agua destilada y homogenizar.
2. Preparar una curva de calibracin de fsforo, cinco puntos, en el rango 0.2 mg/L a 1
mg/L de la siguiente manera.
Tomar 5 matraces aforados de 50 mL y colocar en ellos 1, 2, 3, 4, y 5 mL de la
solucin de fsforo de 10 mg/L.
Agregar agua destilada hasta aproximadamente la mitad de volumen total del
matraz.
Adicionar 8 mL de la solucin B y agitar por rotacin, suavemente.
Diluir y enrasar cada matraz con agua destilada.
Homogeneizar cada solucin.
21

Preparacin de la muestra problema
1. Colocar 10 mL de la solucin obtenida de la muestra problema en un matraz de 50
mL.
2. Agregar agua destilada hasta aproximadamente la mitad de volumen total del matraz.
3. Adicionar 8 mL de la solucin B y agitar por rotacin.
4. Enrasar cada matraz con agua destilada.
5. Homogeneizar cada solucin.
Preparacin de un blanco
Colocar 8 mL de la solucin B en un matraz de 50 mL y llevar a volumen con agua
destilada.
Medidas
1. Esperar 60 min para el desarrollo de color de cada una de las soluciones preparadas
anteriormente.
2. Medir la absorbancia para cada una de las soluciones preparadas en el
espectrofotmetro, a una longitud de onda de 882 nm.
3. Construir una tabla con los valores de absorbancia para cada una de las soluciones de
la curva de calibracin, del blanco y de la muestra problema.
4. Graficar y calcular la ecuacin de la recta por medio de mnimos cuadrados, as como
el coeficiente de correlacin.
5. Las medidas se deben realizar en orden creciente de concentracin empezando por el
blanco e intercalando la solucin problema.
Mtodo de adicin estndar
1. A una serie de 4 matraces aforados agregue, a cada uno de ellos, una misma alcuota
de solucin de muestra problema. Durante el prctico su profesor le dir qu volumen
de muestra problema debe agregar.
2. Aadir ahora, volmenes crecientes de la solucin estndar de fsforo (0, 1, 2 y 3
mL).
3. Agregar agua destilada hasta aproximadamente la mitad de volumen total del matraz.
4. Adicionar 8 mL de la solucin B y agitar por rotacin suavemente.
5. Diluir y enrazar cada matraz con agua destilada.
6. Homogeneizar cada solucin.
7. Preparacin de un blanco. Colocar 8 mL de la solucin B en un matraz de 50 mL y
llevar a volumen con agua destilada.
Medidas
1. Esperar 60 min para el desarrollo de color de cada una de las soluciones preparadas
anteriormente.
2. Medir la absorbancia para cada una de las soluciones en el espectrofotmetro, a una
longitud de onda de 882 nm.
3. Construir una tabla con los valores de absorbancia para cada una de las soluciones de
la curva de calibracin, del blanco y de la muestra problema.
4. Graficar y calcular la ecuacin de la recta por medio de mnimos cuadrados, as como
el coeficiente de correlacin.
5. Determinar la concentracin de fsforo (mg/L) en la muestra problema.
22

Laboratorio 7
Determinacin de cido acetilsaliclico por Espectrofotometra Ultravioleta
Objetivos
1. Establecer el espectro de absorcin del cido acetilsaliclico (AAS) en HCl 0.05
molar.
2. Determinar el rango de respuesta lineal en una curva de calibracin de AAS en HCl
0.05 molar.
3. Determinar la concentracin de cido acetilsaliclico en una muestra problema.
Introduccin
La espectrofotometra o espectroscopa ultravioleta es aplicable al anlisis de analitos
que absorban radiacin electromagntica en longitudes de onda correspondientes a la
regin ultravioleta, aproximadamente entre 180 y 350 nm. La mayora de los analitos
que presentan la propiedad de absorber en la regin ultravioleta son molculas con
dobles enlaces y reciben el nombre de cromforos.
Parte experimental
Espectrofotmetro de doble haz UV-Vis
Cubetas de cuarzo 1 cm de paso ptico
Bureta de 25 mL
HCl 0.05 mol/L
cido acetilsaliclico patrn
Muestra problema (diferentes tipos de aspirinas)
Mortero
Estufa
Vaso de precipitados de 50 mL
Pesa sales
Desecadora
Balanza analtica
Papel filtro
Embudo
Procedimiento Experimental
Muestra Problema:
Determinacin del % de Humedad
1. Moler la muestra problema en un mortero.
2. Pesar la muestra problema molida (aprox. 0.2 g) en un vaso de precipitados de 50 mL
o en un pesa sales, previamente pesado y seco, registre su masa con balanza analtica, y
lleve a estufa a 105C durante 2 horas.
3. Luego retire de la estufa y coloque el vaso de precipitados o pesa sales en el
desecador y deje enfriar. Anote el peso de la muestra.
23

Preparacin de la muestra problema
1. Pese una tableta de aspirina en balanza analtica.
2. Pulverice la tableta en el mortero y pese aprox. 175 mg de muestra y disulvalos en
HCl 0.05 molar, luego filtre el volumen total directamente en un matraz de aforo de 25
mL. Una vez preparada esta solucin, se toman 2 mL y se llevan a un matraz de aforo
de 50 mL.
Preparacin de la curva de calibracin:
1. Utilice una solucin estndar de cido acetilsaliclico (1.0 x 103 mol/L) para preparar
5 soluciones, en un rango de 7.0 x 104 a 2.0 x 105 molar, utilizando HCl 0.05 molar
como disolvente en un volumen de 25 mL.
Tabla 1.- Preparacin de soluciones de curva de calibracin
N solucin
1
2
3
4
5
Concentracin (*104)
mol/L
7.0
4.0
1.0
0.6
0.2
Volumen (mL)
2. Calibre el instrumento segn instrucciones. Use el disolvente con el que prepar las
soluciones como blanco.
3. Tome la solucin 3 y determine la longitud de onda mxima del cido acetilsaliclico
en el disolvente utilizado. Para ello mida la absorbancia de la solucin entre 350 y 250
nm con un intervalo de 1 nm.
4. Grafique Absorbancia vs Longitud de onda.
5. Determine grficamente la longitud de onda mxima del cido acetilsaliclico.
6. Determine la absorbancia de cada una de las soluciones preparadas a la longitud de
onda mxima.
7. Grafique Absorbancia vs Concentracin.
8. Determine la concentracin de la muestra problema.
9. Compare la longitud de onda mxima encontrada con la longitud de onda del cido
acetilsaliclico informada en bibliografa.
10. Exprese sus resultados en base seca con la humedad determinada
experimentalmente.
11. Exprese sus resultados en base a la muestra real (tableta, mg de cido
acetilsaliclico).
12. Compare los valores de la concentracin de su muestra problema, obtenidos desde la
curva de calibracin y el valor dado por el fabricante.
24

Laboratorio 8
Determinacin de la concentracin de Co (II) y Ni (II) por Espectrofotometra
Visible
Objetivos
1. Estudiar los principios de la espectrofotometra visible.
2. Conocer las caractersticas de operacin de un espectrofotmetro.
3. Determinar la concentracin de Co (II) y Ni (II) en una mezcla.
Introduccin
La absorbancia es una propiedad aditiva, es decir, en disoluciones que contengan
ms de una especie absorbente la absorbancia total es la suma de las absorbancias
individuales de cada especie absorbente. Suponiendo que no haya interaccin entre las
distintas especies absorbentes (es decir, que estas sean independientes entre s), la
absorbancia total para un sistema absorbente multicomponente 1, 2, 3,... n, cuyas
absorbancias individuales sean A1, A2, A3,....An viene dado por:
A TOTAL = A i = A1 + A2 + A3 +.......... + An
A i = 1bC1 + 2bC2 + 3bC3 + nbCn
Parte experimental
Bureta de 10 mL
Espectrofotmetro UV-Visible
Celdas
Pizeta
Soluciones patrn de Co(II) y Ni(II) 0.5 mol/L
Muestra Problema
Espectro de Absorcin
1. A partir de una solucin estndar y mediante dilucin apropiada prepare una solucin
de Cobalto (II) 0.075 molar y una solucin de Nquel (II) 0.100 molar en matraces
volumtricos de 50 mL.
2. Prepare una solucin mezcla de concentracin 0.100 molar en Co (II) y 0.050 molar
en Ni (II) en un volumen final de 50 mL.
3. Utilizando el equipo, seleccione el rango de barrido en (nm) que Ud. desea analizar
(370 a 550 nm, con un intervalo de 1 nm).
4. Mida la absorbancia de las soluciones de Co (II), Ni (II) y de la mezcla de ambos, que
Ud. ha preparado.
5. El equipo le entregar un grfico de absorbancia (A) vs longitud de onda para Co (II),
Ni (II) y de la solucin mezcla de ambos. Los grficos de absorbancia vs longitud de
onda se conocen como espectros de absorcin. A partir de este espectro determine los
valores de longitud de onda para cada solucin y la mezcla.
25

Curva de calibracin
1. Mediante diluciones apropiadas de la solucin estndar, prepare 5 soluciones de Co
(II) y 5 soluciones de Ni (II) de concentraciones comprendidas entre 0.15 y 0.02 molar
para un volumen final de 25 mL. Debe disponer adems, de una solucin mezcla
problema que se le proporcionar.
Tabla 1.- Preparacin de soluciones
N solucin
Concentracin
(mol/L)
1
2
3
4
5
0.15
0.10
0.08
0.04
0.02
Volumen (mL)
2. Del espectro de absorcin de cobalto y del espectro de Nquel seleccione 2 longitudes

de onda de tal forma que:
o Absorbancia mxima para Cobalto, absorbancia mnima para Nquel (Razn
ACo/ANi mxima).
o Absorbancia mxima para Nquel, absorbancia mnima para Cobalto (Razn
ANi/ACo mxima).
3. En el equipo realice las lecturas de absorbancia para cada una de las soluciones de Co
(II), Ni (II) y su muestra problema, desde la solucin ms diluida a la ms concentrada
en cada caso. Para ambas longitudes de onda seleccionadas anteriormente.
4. Grafique A vs concentracin para cada solucin a cada una de las longitudes de onda
utilizadas. En total tendr 4 grficos: dos para cobalto y dos para nquel.
5. De los grficos de la ley de Beer, calcule el valor de la pendiente y el coeficiente de
absortividad molar ().
6. Calcule la concentracin de cada componente en la solucin problema, aplicando la
Ley de Beer y la propiedad de aditividad de la absorbancia en una mezcla. Exprese sus
resultados en gramos/litro (g/L), molar (moles/litro) y ppm (mg/L).
26

Laboratorio 9
Determinacin de la concentracin de Cobre por Espectrofotometra de Absorcin
Atmica
Objetivos
1. Conocer el funcionamiento de un equipo de absorcin atmica.
2. Determinar la concentracin de Cobre en una muestra.
3. Analizar los mtodos de curva de calibracin y de adicin estndar.
Introduccin
La caracterstica especial de la Espectroscopa de Absorcin Atmica, (EAA) es
que la muestra debe atomizarse. Esto se hace normalmente con una llama, horno
calentado elctricamente o un plasma de radiofrecuencia. La sensibilidad y los efectos
de interferencia que se observan en la espectroscopia de Absorcin Atmica dependen
de los detalles del mtodo de calentamiento.
En la atomizacin de la muestra mediante una llama la combinacin ms comn
de combustible y oxidante es acetileno/aire. Cuando se requiere de mayor temperatura
puede utilizarse una combinacin de acetileno/xido nitroso. Los hornos calentados
elctricamente (hornos de grafito) presentan una mayor sensibilidad y necesitan un
menor volumen de muestra.
La medicin de Absorbancia en espectroscopia de Absorcin Atmica se rige
por la Ley de Beer. Aunque en la prctica a menudo se encuentran desviaciones de la
linealidad, esto no constituye un obstculo para trabajar con curvas de calibracin
empricas.
Cuando no es posible eliminar las interferencias de matriz se puede utilizar el
mtodo de adicin estndar, tcnica que permite trabajar en presencia de un interferente,
realizando una determinacin correcta del analito. Con esta tcnica es posible
determinar ms de 60 elementos.
Parte experimental
Materiales y Reactivos
Equipo de Absorcin Atmica
Estndar de Cu de 1000 ppm
cido ntrico al 5% v/v
Bureta de 10 mL
Matraces aforados de 50 y 100 mL
Pipetas aforadas de 10 y 25 mL
Pizeta
Propipeta
Muestra problema de Cu
Agua potable
Curva de calibracin de patrn externo
1. Averige el rango de respuesta lineal para cobre (puede utilizar el manual del
equipo).
2. A partir de la solucin estndar de 1000 ppm prepare una solucin de 100 ppm.
3. Prepare un conjunto de 5 soluciones de cobre de: 1; 2; 3; 4 y 5 ppm, utilizando cido
ntrico al 5% v/v para diluir y la solucin de 100 ppm como patrn.
27

4. Opere el equipo de acuerdo a instrucciones del operador. Lea la absorbancia de las
soluciones.
5. Grafique Absorbancia vs Concentracin y determine el rango lineal.
6. Determine el contenido de cobre en una muestra problema.
Curva de calibracin de Adicin de Estndar
Prepare las siguientes soluciones:
1. Mida exactamente 25 mL de agua potable y enrase a 50 mL con cido ntrico 5% v/v.
2. Mida exactamente 25 de agua potable y 2.5 mL de la solucin de 5 ppm de Cobre y
enrase a 50 mL con cido ntrico 5% v/v.
3. Mida exactamente 25 de agua potable y 5 mL de la solucin de 5 ppm de Cobre y
enrase a 50 mL con cido ntrico 5% v/v.
4. Mida exactamente 25 mL de agua potable y 10 mL de la solucin de 5 ppm de Cobre
y enrase a 50 mL con cido ntrico 5% v/v.
5. Determine la absorbancia de las nuevas soluciones.
6. Grafique y determine la concentracin de la cobre en agua potable de acuerdo a esta
tcnica.
7. Comente los resultados obtenidos en las soluciones analizadas. Aplique la forma
grfica y el clculo con la formula utilizada para la absorcin atmica.
As, para determinar la concentracin del analito en la muestra problema se
puede utilizar el siguiente grfico:
Seal Curva de calibrado de adicin patrn
Seal
Seal de la muestra
sin patrn aadido
Volumen de estndar aadido

Esta forma en la que se puede determinar la concentracin del analito en la
muestra problema consiste en graficar directamente la seal vs el volumen aadido de
disolucin estndar:
Donde:
CMP = b CSt
m VMP
b = intercepto
m = pendiente
28

Laboratorio 10
Separacin de Aminocidos por Cromatografa en Capa Fina
Objetivos
1. Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, sus caractersticas y factores que en
ella intervienen.
2. Calcular los valores de Rf de varias sustancias.
3. Deducir, mediante los valores de Rf, la relacin que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
4. Aplicar la tcnica de Cromatografa de Capa Fina como criterio de pureza de las
sustancias.
5. Aplicar la tcnica de Cromatografa de Capa Fina (TLC) como criterio parcial de
identificacin de sustancias.
6. Adquirir destreza de aplicacin de muestras sobre cromatofolios.
7. Utilizar mtodos fsicos y qumicos de localizacin de manchas.
8. Determinar la composicin cualitativa de una muestra problema.
Introduccin
La cromatografa en capa fina (TLC), es un mtodo analtico verstil, sensible en
alto grado y rpido para separar en forma bien definida compuestos estructuralmente
parecidos. El mecanismo de separacin predominante es el de adsorcin, pero tambin
se puede dar el mecanismo de reparto, intercambio inico, inclusin o una combinacin
de stos, dependiendo de la fase estacionaria utilizada. Es una tcnica muy usada con la
que se logra la separacin de sustancias de naturaleza hidroflicas o hidrofbicas.
La muestra aplicada en la placa es adsorbida en la superficie del material por la
accin de fuerzas electrostticas. Luego, cuando la placa es expuesta a un flujo por
accin capilar, se inicia una competencia de enlace entre los sitios activos del
adsorbente y la sustancia con el disolvente. Una vez aplicada la muestra sobre el
cromatofolio se coloca en una cmara cromatogrfica, la cual contiene la mezcla de
disolventes adecuada para el desarrollo de la cromatografa, segn se muestra en la
figura.
La tcnica de cromatografa en capa fina permite:

Determinar el grado de pureza de un compuesto.
Comparar muestras.
Realizar el seguimiento de una reaccin.
Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en una cromatografa en
columna.
Separar los componentes de una muestra, entre otros.
29

Los adsorbentes ms utilizados en la cromatografa de capa fina son:
Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
xido de aluminio o almina (cida, neutra o bsica)
Tierra silcea o Kieselguhr
Celulosa (nativa o microcristalina)
Poliamidas
Las caractersticas a tomar en cuenta para la eleccin correcta de los adsorbentes son:
Tamao de partculas
Volumen de poro
Dimetro de poro
rea superficial
Homogeneidad
Se usan como soporte del adsorbente laminas de: vidrio, plstico o metlicos
(ejemplo: aluminio).
Los tamaos de la placa para cromatografa en capa fina convencional son: 20
cm x 20 cm, 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm.
En la separacin cromatogrfica, el disolvente, el adsorbente y los compuestos
de la mezcla que se est separando, interaccionan entre si y constituyen el sistema
cromatogrfico.
En la cromatografa de adsorcin y reparto es muy importante la relacin entre la
velocidad de movimiento del soluto y la velocidad del movimiento del disolvente de
desarrollo expresado mediante el Coeficiente de Reparto, Rf, el cual se define como:
Rf = Velocidad de movimiento del soluto
Velocidad de movimiento de la fase estacionaria
Si la fase estacionaria y el soluto empiezan a moverse al mismo tiempo, la
relacin anterior se puede expresar en funcin de las distancias recorrida por cada uno
segn:
Rf = Distancia recorrida por el soluto
Distancia recorrida por el solvente
El Rf se calcula en base a la relacin de la distancia recorrida por el solvente y la
distancia recorrida por la muestra, como se muestra en la figura:
Frente de disolvente
Posicin final del
Compuesto
2.5 cm
Rf = 1.8 cm = 0.72
2.5 cm
1.8 cm
Origen
30

El valor de Rf, siempre es menor o igual a 1, depende de las condiciones
experimentales como identidad y composicin de las fases estacionarias y mviles,
temperatura, estructura qumica de los compuestos que se separan, pero es
independiente del tiempo y dimensiones de la placa. Generalmente se corren las
muestras junto con estndares sobre la misma placa en las mismas condiciones para
poder comparar los Rf.
Es posible afirmar que: sustancias que poseen diferentes valores de Rf son
distintas, siempre que se desarrollen en idnticas condiciones, pero no es posible
asegurar que dos manchas con igual Rf correspondan a la misma sustancia. Se deben
realizar otras pruebas para tener certeza de que son esas manchas.
Despus del desarrollo de la cromatografa, la placa cromatogrfica se retira de
la cmara, se marca con un lpiz el frente del disolvente y se deja al aire hasta que se
seque o se ayuda con un ventilador o secador de cabello o en un horno. Si los solutos
son coloreados se vern a simple vista su localizacin. Si los solutos son incoloros hay
que localizarlos por mtodos especiales. Dentro de los mtodos para localizar los
solutos se tienen:
1. Mtodos qumicos
2. Mtodos fsicos
3. Radiactividad
4. Mtodos biolgicos y enzimticos
Dependiendo del tipo de analito a estudiar se podrn emplear diferentes
sustancias qumicas para revelarlas. Por ejemplo: para aminocidos se puede utilizar
ninhidrina, para cidos se puede realizar un revelado selectivo mediante un indicador
cido-base, utilizando la tcnica de baado.
Parte experimental
Regla graduada
Lpiz grafito
Placa cromatogrfica (Slica gel)
Papel filtro
Secador de pelo*
Placas para cromatografa de 10x20 cm (cromatofolios)
Cmara cromatogrfica
Capilares de vidrio
Tubos de ensayo
Gradilla para tubos
Aspersor
Estufa de secado a 105C
n-Propanol
NH4OH 34 %
cido actico glacial
n-Butanol
Agua destilada
Solucin de ninhidrina (0.2% en etanol)
Solucin de Yodo
Sulfato de amonio al 20%, acidificada con H2SO4
Soluciones estndares de aminocidos (AA)
31

Muestra problema de aminocidos
Sembrado de muestras y patrones de caracterizacin.
1. Se trabajar con una muestra problema de aminocidos la cual ser entregada por el
Profesor.
2. Marcar lnea de origen con lpiz grafito y con cuidado de no levantar la slice, a una
distancia de 1 cm desde el borde inferior del cromatofolio.
3. Realizar en el cuaderno una tabla en la que se indica el orden de sembrado como se
indica a continuacin:
Siendo AAn, el estndar n de AA.
Placa
Posicin 1
Posicin 2
Posicin 3
Posicin 4
1
2
AA1
AA4
AA2
AA5
MP
MP
AA3
AA6
4. Tomar un capilar para cada estndar y otro para la muestra, identificarlos.

5. Sembrar patrones y muestras, de manera que cada punto de aplicacin diste 0.5 cm de
los bordes y 1 cm entre s.
6. Para la aplicacin de los estndares y muestras, se debe introducir un capilar en la
solucin a sembrar y esperar que el nivel del lquido llegue a la marca correspondiente.
El lquido se deposita con cuidado en la placa tocando la misma, manteniendo el capilar
en posicin perpendicular. Despus de cada toque se debe esperar que se seque la
mancha para volver a sembrar, para evitar la difusin en el origen.
Preparacin de la cmara cromatogrfica
1. Preparar la mezcla de solventes adecuada segn los componentes de la muestra a
analizar para desarrollar la cromatografa. Su profesor le ayudar en este punto.
2. Colocar en la cmara cromatogrfica la fase mvil anteriormente preparada, cuidando
que el nivel de lquido no supere los 0.8 cm de altura.
3. Colocar un papel de filtro por alrededor de la cmara cromatogrfica de forma de
ayudar a saturar la misma ms rpidamente.
Desarrollo del cromatograma
1. Colocar la placa preparada con las muestras sembradas y tapar la cmara lo ms
rpido posible.
2. Una vez que el frente del solvente se encuentra a 1 cm del borde superior de la
misma, retirar las placas, marcar el frente del solvente con un lpiz de grafito.
3. Dejar secar el solvente. Este proceso se puede acelerar secando la placa en estufa o
con un secador de cabello.
Estndares y disolventes para la cromatografa
1. Se usarn estndares de: glicina, arginina, histidina, alanina, triptofano y cido
glutmico.
2. Se utilizarn las siguientes mezclas de disolventes:
a. Fase mvil 1: n-Propanol: NH4OH 34% (7:3)
b. Fase mvil 2: n-Butanol: cido actico glacial: Agua (6:2:2)
32

Localizacin de las manchas y Revelado
Los aminocidos se revelarn asperjando la placa cromatogrfica con una
solucin de ninhidrina. Este es el revelador clsico de los aminocidos. Aparecern
manchas de color violeta, azul y amarilla, segn sea el aminocido estudiado. Una vez
desarrollada la cromatografa:
1. Se coloca la placa bajo campana.
2. Se pulveriza la placa con la solucin de ninhidrina.
3. Se deja secar al aire.
4. Trasladar las placas asperjadas con ninhidrina a una estufa a 105C, y dejar 5 minutos
la placa en la misma.
5. Al cabo de ese tiempo las manchas de aminocidos empezarn a aparecer de colores.
Importante: La ninhidrina es cancergena, por lo cual se debe tener precaucin de

asperjar las placas cromatogrficas utilizando guantes y lentes, las mismas deben ser
colocadas dentro de la campana.
La localizacin de las manchas en la placa de cromatografa depender del
problema que se tiene en estudio. En forma general si se tiene un problema desconocido
se procede en la siguiente secuencia:
1. Si se ha utilizado placas fluorescentes se observan stas a la luz UV 254 nm. En los
lugares en que en la placa aparece oscura se marca pues ah hay un componente de la
muestra.
2. Luego se introduce la placa en una cmara de yodo. Al cabo de 10-60 minutos, la
mayora de sustancias orgnicas aparecen como manchas pardas.
3. Otro revelador sera pulverizar las placas con una solucin de sulfato de amonio al
20% acidificado con cido sulfrico. Las placas se calientan a 180C y las sustancias
orgnicas se carbonizan.
4. Si se tienen informacin de los componentes de la muestra problema entonces se
pueden utilizar reveladores especficos segn el tipo de sustancias a identificar
Identificacin y conclusiones
1. Estudiar las caractersticas de las manchas, tales como: color, forma, tamao, etc.
2. Medir las distancias que separan el frente de solvente y cada mancha del origen.
3. Calcular los Rf para los patrones y los diferentes componentes contenidos en la
muestra problema.
4. Discutir y concluir sobre la composicin de la muestra.
5. Discutir sobre la resolucin obtenida de la muestra utilizando las mezclas de
solventes indicadas.
33

Laboratorio 11
Cromatografa en columna. Anlisis de tintas
Objetivos
1. Aplicacin de tcnicas sencillas de laboratorio para el anlisis de tintas presentes en
lpices.
2. Conocer la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y los factores que
en ella intervienen.
3. Separar los componentes de una muestra problema.
Introduccin
La cromatografa en columna se utiliza para la separacin de mezclas o
purificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa,
generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del solvente
es crucial para una buena separacin. Dicho solvente pasa a travs de la columna por
efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin.
La columna se prepara mezclando el soporte con el disolvente en un vaso,
formando as una pasta con la cual se rellena la columna. A la columna, se le coloca en
el fondo un poco de algodn o lana de vidrio, para lograr que la slica o la almina
queden retenidas en ella y el disolvente pase a travs de la misma hasta que la columna
quede enrasada de soporte hasta el nivel requerido y con solvente sobre su superficie,
como lo muestra la figura.
A continuacin se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se

eluye con el solvente elegido, recogindose, por lo general, en tubos de ensayo las
fracciones que eluyen de la misma.
La principal ventaja de la cromatografa de capa fina frente a la de columna, es
que permite analizar diversas muestras y estndares de manera simultnea y que,
cuando las muestras son difciles de resolver, pueden desarrollarse con dos sistemas de
solventes distintos en sentido perpendicular.
En estos laboratorios se realizarn dos tipos de cromatografa: Cromatografa en
capa fina y cromatografa en columna. Cada una de ellas posee una fase estacionaria y
una fase mvil. El concepto primordial es que los componentes de una mezcla se
debatirn entre la afinidad que tienen por la fase estacionaria, y la afinidad que tienen
por la fase mvil. Por lo tanto, cada uno de ellos interaccionar de una manera diferente
34

y viajarn a travs de estas fases con diferente rapidez, lo que provoca la separacin de
los componentes en la mezcla.
Parte experimental
Lpiz tinta Azul, Verde, Roja y Negro
Tubos de ensayos
Esptula
Gradilla
Varilla de vidrio
Vaso de precipitados de 100 y 250 mL
Probeta de 100 mL
Soporte universal
Nuez
Mariposa (pinza para buretas)
Columna para cromatografa
Pipeta Pasteur
Slica gel G para columna
Diclorometano
Hexano
cido actico glacial
Etanol
Muestra problema
1. Traspasar la solucin obtenida del lpiz tinta disuelta en diclorometano a un tubo de
ensayo cuidando de que no pasen partculas slidas.
2. Tomar una columna cromatogrfica e introducir un trozo de lana de vidrio dentro de
la columna ayudndose con la varilla de vidrio.
3. Sujetar la columna en posicin vertical en un soporte universal y aadir hexano en la
columna.
4. En un vaso de precipitados preparar una suspensin de slica gel (de 15 a 20 g) en
hexano e introducir en la columna.
5. Dejar escurrir el solvente en un vaso de precipitados o tubo de ensayos. Se observar
la formacin de una columna de slica gel a medida que escurre el solvente, dicha
columna no debe quedar NUNCA sin solvente.
6. El goteo de la columna no debe ser ni muy rpido ni muy lento.
7. La altura de la columna de slica gel debe alcanzar entre 10 y 15 cm de alto. Una vez
que alcance esta altura, se deja escurrir el solvente hasta que su nivel quede al ras de la
capa de slica gel (sin que sta se seque).
8. Tomar, con una pipeta Pasteur, aproximadamente 1 mL de la muestra problema a
analizar y sembrar en la columna.
9. Una vez que se halla incorporado la muestra, sta se hace entrar a la columna
abriendo la llave de la misma de forma, de modo que quede otra vez el nivel al ras de la
slica gel.
10. En este momento se agrega hexano, suavemente y con una pipeta Pasteur.
11. A medida que avance la cromatografa, se observar la separacin de los distintos
pigmentos contenidos en la muestra problema a lo largo de la columna, a medida que
pasa el solvente.
35

12. Cuando una banda de pigmentos se acerque al extremo inferior del tubo de vidrio,
colocar en la salida del mismo un tubo de ensayo y recoger el pigmento as separado.
13. Se colectar cada fraccin de acuerdo al color observado en diferentes tubos de
ensayo.
14. Si apareciera alguna fraccin que no eluya, se debe comenzar a formar un gradiente
en polaridad con un disolvente ms polar que el utilizado inicialmente (primero etanol y
despus una mezcla de etanol: cido actico glacial 1:1).
15. Los tubos de ensayos que contienen las fracciones colectadas se colocan en un bao
de agua a 100C en la campana de extraccin para concentrar el extracto obtenido.
16. Las fracciones concentradas obtenidas se analizan mediante cromatografa de capa
fina para determinar su pureza o composicin.
17. Preparar una cmara cromatogrfica con etanol y dejarla saturar mientras se siembra
el cromatofolio con cada una de las fracciones obtenidas y con los extractos originales.
18. Desarrollar la placa como se indic anteriormente y observar los resultados.
Identificacin y conclusiones
1. Estudiar las caractersticas de las manchas, tales como: color, forma, tamao, etc.
2. Medir las distancias que separan el frente de solvente y cada mancha del origen.
3. Calcular los Rf para los patrones y los diferentes componentes de las muestras
problemas contenidos en la misma.
4. Discutir y concluir sobre la composicin de la muestra.
5. Discutir sobre la resolucin obtenida de la muestra utilizando las mezclas de
solventes indicadas.
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Laboratorio 12
Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC). Determinacion de Teofilina en
una muestra problema
Objetivos
1. Conocer y manejar un equipo HPLC.
2. Determinar el contenido de Teofilina en una muestra problema.
Introduccin
La cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) es un tipo de cromatografa
en columna utilizada frecuentemente en Bioqumica y Qumica Analtica.
Es una tcnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basndose
en diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y la
columna cromatogrfica.
En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a
travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas partculas
redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo
de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna. La muestra a analizar es
introducida en pequeas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente
dependiendo de las interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida
que adelantan por la columna.
El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza
del compuesto, de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo
que tarda un compuesto a ser eludo de la columna se denomina tiempo de retencin y
se considera una propiedad identificativa caracterstica de un compuesto en una
determinada fase mvil y estacionaria. La utilizacin de presin en este tipo de
cromatografas incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la columna y
reduce as su difusin dentro de la columna mejorando la resolucin de la
cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo.
El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido
trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos.
Un estndar interno (IS) es una sustancia que se aade a todas las muestras en
una cantidad constante. La calibracin supone representar la razn entre la seal del
analito y la del estndar interno como una funcin de la concentracin del analito.
El estndar interno puede compensar distintos tipos de errores indeterminados y
sistemticos. Si el IS y el analito responden proporcionalmente a los errores
instrumentales y fluctuaciones del mtodo, la razn entre las seales es independiente
de las fluctuaciones.
La mayor dificultad es encontrar un IS adecuado, con seal reproducible y que
genere una seal similar a la del analito.
Parte experimental
Cromatografo HPLC
Fase mvil (30:70 = Metanol:Agua)
Patrn de Teofilina
Patrn de Teobromina (Estndar interno)
Metanol Calidad HPLC
Agua Milli-Q o Nanopure
Matraces aforados 50 mL
37

Determinacin de la concentracin de Teofilina, en una muestra problema
Trabajando con una fase mvil isocrtica (30:70 = Metanol:Agua), a un flujo de
1 mL/min y utilizando una longitud de onda de deteccin de 260 nm, se
determinar la concentracin de teofilina en una muestra problema, utilizando el
mtodo de estndar interno (10 ppm de teobromina), por interpolacin en una
curva de calibracin, previamente medida usando patrones de teofilina de 5, 10,
15, 20 y 25 ppm.
Influencia del flujo de fase mvil
Trabajando con el patrn de 10 ppm de teofilina, una fase mvil isocrtica
(30:70 = Metanol:Agua), a un flujo de 1 mL/min y utilizando una longitud de
onda de deteccin de 260 nm, trabajar a los siguientes flujos de fase mvil :
mL/min
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
1. Analice como influyen los flujos de fase mvil sobre los tiempos de retencin y la
resolucin de las seales cromatogrficas.
2. Calcular la resolucin de las seales y la selectividad en cada flujo.
3. Determine el nmero de platos tericos promedio y la altura de los platos de la
columna cromatogrfica.
4. Qu condiciones debe cumplir una fase mvil?
Material Adicional
Curva de calibracin con patrn interno
Un patrn interno es un compuesto, diferente del analito, que se agrega en cantidad
conocida y constante a la muestra y a los patrones. La seal del analito se compara con
las del patrn interno para determinar la cantidad de analito presente en la muestra.
La aplicacin satisfactoria de una calibracin con estndar externo o del mtodo de
adicin de patrn depende de la capacidad del analista para manipular de forma
reproducible las muestras y los patrones. Cuando no es posible controlar un
procedimiento para que todas las muestras y patrones reciban el mismo procedimiento
se ven afectadas la exactitud y la precisin de las medidas.
Los patrones internos son especialmente tiles cuando la cantidad de muestra analizada
o la respuesta del instrumento varan algo de experiencia a experiencia, por razones que
son difciles de controlar. Una curva de calibracin slo es vlida si se mantiene el
conjunto de condiciones como se obtuvo.
Los patrones internos son muy utilizados en cromatografa debido a que la pequea
cantidad de muestra que se introduce en el cromatgrafo no es muy reproducible en
algunos experimentos. Tambin son tiles cuando se pueden dar prdidas de muestra
durante la preparacin de la muestra antes del anlisis (etapa pre analtica). Si se
agrega una cantidad conocida de patrn interno a la muestra antes de cualquier
tratamiento, la relacin patrn interno a analito se mantiene constante, ya que se pierde
la misma fraccin de ambos en cualquier operacin.
38

Si una disolucin contiene un analito a una concentracin CA y un patrn interno a una
concentracin CPI, la seal producida por el analito, SA, y la producida por el patrn
interno, SPI, sern:
S A = k AC A
S PI = k PI C PI
Donde kA y kPI, son respectivamente, las sensibilidades del analito y del patrn interno.
El cociente entre las dos seales ser:
S A kA CA
C
=
=K A
S PI k PI C PI
C PI
De esta forma si se grafica SA/SPI en funcin de la concentracin de analito, la pendiente

estar dada por K/CPI.
Curva de calibrado de patrn interno

SA/SPI
pendiente = K/CPI
Concentracin
analito
Ejemplo: En el anlisis de un hidrocarburo C7 se aadi un compuesto afn como

estndar interno a cada uno de los patrones y a la muestra. A continuacin se muestran
los datos obtenidos:
Porcentaje de analito rea del pico rea del pico
Analito
Patrn Interno
0.05
18.8
50.0
0.10
48.1
64.1
0.15
63.4
55.1
0.20
63.2
42.7
0.25
93.6
53.8
Muestra
58.9
49.4
39

Determinar la concentracin del hidrocarburo en la muestra.
Debido a que se grafica rea del pico del analito/rea del pico del patrn interno en
funcin de la concentracin del analito, se calcula rea del pico del analito/rea del pico
del patrn interno:
AA/API Concentracin de analito (%)
0.376
0.05
0.750
0.10
1.151
0.15
1.480
0.20
1.740
0.25
1.192
Muestra
Aanalito/Apatrn interno
Son estos los grficos que se obtienen:

2
y = 6,916x + 0,062
1,5
1
0,5
0
0
0,1
0,2
0,3
[Hidrocarburo]/%
Para calcular la concentracin del hidrocarburo en la muestra se reemplaza y = 1.192

(AA/API con los datos obtenidos para la muestra)
y = mx + b
y = 6.916 x + 0.062
Cmuestra =
1.192 0.062
= 0.163 %
6.916
40

Laboratorio 13
RECUPERATIVO
Espectrofotometra de Absorcin Molecular Visible
Objetivos
1. Conocer la instrumentacin y el manejo de un espectrofotmetro.
2. Obtener, interpretar y calcular el rango de concentraciones de trabajo en un espectro.
3. Utilizar mtodos de cuantificacin por curva de calibracin y de adicin estndar.
Introduccin
En la figura se muestra la radiacin que atraviesa una solucin de una especie

absorbente de concentracin c y b cm de espesor. A causa de la interaccin entre los
fotones y las partculas absorbentes, la potencia del haz se atena de P0 a P. La
transmitancia T de la solucin es entonces la radiacin incidente transmitida por la
solucin.
P
T=
P0
Tambin se expresa a la transmitancia como un porcentaje de la siguiente forma:
%T =
P
x 100
P0
Otra magnitud comn para expresar la cantidad de luz absorbida es la absorbancia (A),
la cual esta definida por:
A = log T
A diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin aumenta cuanto mayor
sea la atenuacin de P haz.
41

Parte experimental
Equipo espectrofotmetro de doble haz UV-Visible
Cubeta de 1 cm de paso ptico
Bureta de 10 mL
Pipeta aforada de 5 y 10 mL
Propipeta
Pizeta
CuSO4.5H2O patrn
NH3
A. Espectros de absorcin de una solucin Complejo Cu-Amoniacal, Cu(NH3)42+
Se dispone en el laboratorio de las siguientes soluciones:
Solucin de CuSO4 0.079 molar = 5,0 g/L Cu2+
- Solucin de amoniaco 2.6 molar
1. Preparar una solucin de complejo amoniacal de Cu2+ de 0.5 g/L por dilucin de una
solucin de Cu2+ de 5,0 g/L y mediante la adicin de amoniaco para obtener una
concentracin final de 0.26 mol/L.
2. Realizar un barrido automtico de longitudes de onda entre 400-800 nm para el
complejo. Men barrido.
3. Observar el espectro obtenido en el espectrofotmetro de doble haz.
4. Establecer la longitud de onda de mxima absorbancia en su equipo y la A de la
solucin de 0.5 g/L.
5. Con los datos obtenidos de A para la solucin de 0.5 g/L calcular los rangos de
concentracin para preparar una curva de calibracin en la zona de menor error (20 y
70% T).
6. Disear un esquema de dilucin para preparar 5 puntos para la curva de calibracin.
B. Ley de Beer: Curva de calibracin
Se va a comprobar si las sustancias bajo estudio obedecen la Ley de Beer al graficar la
absorbancia vs concentracin, para una serie de soluciones con diferentes
concentraciones conocidas. El ancho de la cubeta (1 cm) y la longitud de onda se
mantiene constante. Prepare las soluciones previamente determinadas.
1. Ajuste el 0 de absorbancia colocando solucin blanco en el haz de medicin.
2. Medir A (%T) para cada una de las soluciones preparadas anteriormente.
3. Registrar los datos de A vs C en una tabla confeccionada en su cuaderno.
4. Graficar y calcular la ecuacin de la recta por ajuste de mnimos cuadrados.
Determinar el coeficiente de correlacin.
5. Preparar la muestra problema en forma similar a las soluciones estndares.
6. Medir la A de la muestra problema en forma inmediata, un mnimo de 4 repeticiones
e interpolar su concentracin.
7. Calcular la concentracin de la muestra recibida, considerando la dilucin efectuada.
42

C. Mtodo de adicin estndar
1. Preparar una batera de 4 matraces aforados y a cada uno de ellos agregue un
volumen igual de solucin de la muestra.
2. Al primero aforarlo directamente despus de agregarle el amoniaco.
3. A los siguientes matraces aforados, agregarles volmenes crecientes de solucin
estndar de Cu2+ (1, 2, 3 mL) y despus de agregar amoniaco enrasar con agua
destilada.
4. Medir la A de cada una de estas soluciones.
5. Con los valores de A obtenidos, calcular la ecuacin lineal de A vs mL de estndar
agregados, donde el intercepto lo denominaremos y la pendiente .
La concentracin buscada para la muestra es:
Cx =
Cst
Vx
Donde:
= intercepto
= pendiente
CLCULOS
1. Calcular la concentracin de la muestra problema
2. Realizar su muestra por triplicado, de modo de poder calcular la media, la
desviacin estndar y el coeficiente de variacin de la muestra.
3. En el caso de una muestra con concentracin conocida calcular el error relativo
para cada caso (interpolacin y adicin estndar).
4. Discutir los resultados obtenidos.
43

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Universidad Andrs Bello

Facultad de Ciencias Exactas

QUIMICA ANALITICA E INSTRUMENTAL

Carreras: Qumica y Farmacia

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1. VALORACIN POTENCIOMTRICA I.......6

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Nombre del laboratorio.

2. Introduccin (5 Puntos) (Media pagina como mximo).

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3) SEGURIDAD DE SUS COMPAEROS El laboratorio es un lugar para trabajar

4) COMUNICAR LOS ACCIDENTES al profesor o ayudante de laboratorio.

6) PREPARACIN DE CIDOS DILUIDOS Nunca agregue agua sobre un cido.

7) SUSTANCIAS CORROSIVAS Manipule las mismas con mximo cuidado.

10) SUSTANCIAS CORROSIVAS EN CONTACTO CON PIEL y/u OJOS Lavar

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Conductividad especfica (ohms/cm) a 25C

Para medir la conductividad de una disolucin se debe usar corriente alterna, ya

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La curva de la Figura 1 es tpica de las titulaciones por precipitacin. La

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[Fe(CN) ]K + 1 + K [Fe(CN) ]K (1)

La cintica de reduccin voltamperomtrica del ferricianuro est controlada por

En la que D es el coeficiente de difusin del ferricianuro (en cm .s ), c

(mol.L ) es la concentracin de ferricianuro, ipc, es la intensidad del pico catdico, Epc,

intensidad de pico catdico, y v es la velocidad de barrido (en mV.s ).

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7. La reversibilidad voltamperomtrica de este proceso se puede constatar si se

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Volumen de patrn aadido

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