Algoritmos y actualizaciones

en el diagnstico de las
Hepatitis en el Laboratorio
Marta Morito Aguilar.
Residente 2 ao. rea de laboratorio.

Introduccin.

- Es una enfermedad inflamatoria

que afecta al hgado.

- Causas

-Infecciosa (viral o bacteriana).

- Inmunolgica (por autoanticuerpos).
- Txica (alcohol, venenos o frmacos).
- Virus hepatotropos (A-E).

- Infeccin viral

- Virus no especficos ( VEB, CMV).

Hepatitis A: Caractersticas y epidemiologa.

- Familia Picornaviridae.
- ARN cadena lineal
sencilla y polaridad positiva.
- Hepatitis viral ms
frecuente.
- Transmisin fecal-oral o

vehiculizado.

Hepatitis A: Evolucin de la enfermedad.

- Incubacin: 14-50
das.

- Replicacin en el
intestino.

- Periodo prodrmico:
1 da- 2 semanas.

- Viremia y replicacin en
hepatocitos.

- Sntomas
gastrointestinales e
ictericia.

- Viriones se liberan con

la bilis.

- 1% cronifica.

- Infectividad entre 3-12

das antes de la aparicin
de los sntomas.

Deteccin en el laboratorio:
- Transaminasas y bilirrubina.
- Actividad protrombina.
- Deteccin 3-7 semanas.
- VHA-IgM:

- Pico tras un mes de aparicin.

- Desaparicin a los 4 meses.

- Deteccin 8-10 das tras la aparicin de los sntomas.

- VHA-IgG:

- Mximo a las pocas semanas.

-Permanecen indefinidamente. Inmunidad.

Hepatitis E: Caractersticas y epidemiologa:

- Calicivirus.
- Simetra cbica, sin
envoltura.
- ARN cadena simple,
positiva y lineal.
- Transmisin fecal- oral
o vehiculizado.
- India, URSS, China, frica
y Mxico.

Hepatitis E: Caractersticas y epidemiologa.

- Incubacin 15-60 das.

- Letalidad del 1-3%.
- Infeccin aguda leve salvo embarazadas, sobre todo
del 3 trimestre.
- No cronifica.
- Estudios recientes sugieren la existencia de un
reservorio animal en cerdos.

Deteccin en el laboratorio:

- Aparicin precoz.
- VHE-IgM

- Desaparecen a los 3 meses.

-Aparicin durante el cuadro agudo.

- VHE- IgG

- Persisten aos.

- No tiene utilidad en los laboratorios de rutina.

Hepatitis B: Caractersticas:

- Familia hepadnaviridae.
- Virus ADN de doble
cadena con porciones de
ADN de cadena simple.
- Cpside icosadrica y
envuelta lipdica.
- Lleva en su interior una
ADN polimerasa con
actividad retrotranscriptasa.

Hepatitis B: Epidemiologa:
- 400 millones de

personas padecen
infeccin crnica.
- Dcima causa de
muerte.
- Mayor endemicidad
en Asia, frica
subsahariana y
Pacfico.
- Transmisin es por
va parenteral,
exposicin de mucosas
a sangre o fluidos
infectados y
transmisin vertical.

Hepatitis B: Estructura:
HBsAg: Ag de superficie. Protena situada en la envuelta
lipdica.

HBcAg y HBeAg: Ambos situados en la nucleocpside.

Hepatitis B: Evolucin a travs de sus marcadores.

Hepatitis B: Evolucin a travs de sus marcadores.

Cronificacin.
Infeccin resuelta,
inmunizacin
HBs Ac Anti HBs,
Hbc Ac Core+
Core + aislado
Infeccin pasada, crnica?
Infeccin aguda
HBsAg+
IgM HBc Ac Core IgM+

Estudio inicial
Hbs Ag + HBc Ac

Infeccin crnica
HBsAg+ > 20 semanas
Hbe Ag peor pronstico

Estudio post vacunacin

HBs Ac Anti HBs,

Hepatitis B: Marcadores serolgicos en los distintos

estados de la infecin.

Hepatitis B: Algoritmos diagnsticos.

Hepatitis B: Deteccin en el laboratorio.

HBsAg: Inmunoensayo tipo sandwich que utiliza tecnologa
quimioluminomtrica directa . El reactivo lumnico incluye un ac de
captura monoclonal de ratn anti HBs biotilinado y un ac de monoclonal
de ratn anti-HBs marcado con ster de acridinio. La muestra se incuba
simultneamente con el reactivo lumnico y la fase slida. Falsos negativos
(menos 1%): durante el primer ms del periodo de incubacin, en la fase
de resolucin de la infeccin, en caso de mutacin del virus.
HBeAg: inmunoensayo quimioluminomtrico directo de micropartculas
de captacin de anticuerpos. El HBs Ag est unido por enlaces covalentes
a partculas magnticas de ltex en la fase slida. En el reactivo lumnico
el HBs Ag est marcado con ster de acridinio. La muestra se incuba
simultneamente con el reactivo lumnico y la fase slida.
DNA-VHB:Mtodo: PCR a tiempo real, COBAS TaqMan. Rango
dinmico: 10- 200.000.000 UI/ml. Sensibilidad: 10 UI/ml

Hepatitis B: Deteccin en el laboratorio.

Anti-HBc: EIA. Positivo (nico marcador): FP, infeccin oculta VHB,

infeccin pasada.
Anti-HBc IgM: EIA.Sensibilidad del 100%. Su negatividad descarta
infeccin aguda. Puede ser positivo en crnica ( menos especificidad).
Anti-HBs: EIA. Infeccin pasada junto Ac core (no antes de cuatro
meses), vacunados.

Anti-Hbe:EIA. Indicativo de baja o nula replicacin., salvo cepas

mutantes. Utilidad en la identificacin de la cepa.

Hepatitis B: Hepatitis B oculta.

Pacientes con perfil serolgico de hepatitis B resuelta, con ausencia de

marcadores de VHB, en los que se detecta la presencia de DNA-VHB
integrado o libre en el suero o en hgado.
- Reaparicin de actividad viral en inmunodeficiencia, o transmisin de
la infeccin en caso de transplante.
Posibles explicaciones:
- Reordenamiento gentico en protena S que la hace
indetectable.
- Supresin de la replicacin y de la expresin .

La transmisin del VHB a inmunodeprimidos receptores de trasplante

heptico seguirn ocupando los intereses de los hepatlogos.

La deteccin de hepatitis B oculta requiere ensayos de las ms altas

sensibilidad y especificidad, con un lmite inferior de deteccin de menos
de 10UI/ml para ADN del VHB y <0,1 ng / mL Ag de superficie.
Esta condicin encubierta es relativamente comn en pacientes con
hepatitis C crnica que parece ejercer cierta influencia en la capacidad
replicativa y la latencia del VHB.

Virus hepatitis D. Caractersticas:

- Cpsula icosadrica y envuelta

del VHB.
- Slo puede replicarse en
presencia del virus de la hepatitis B.
- Ms patgeno e infeccioso.
Coinfeccin: Raramente cronifica.
Sobreinfeccin: Un portador
crnico se infecta posteriormente
con VHD. Alto riesgo de
evolocionar hacia hepatitis
fulminante.

Virus hepatitis D: Diagnstico de laboratorio:

-Ag delta: Elisa sobre suero.Aparece fugazmente durante primoinfeccin,

forma crnica intermitente. No utilidad clinica.
- Anti VHD IgM:Elisa. Marcador de infeccin aguda/ infeccin activa

- Anti VHD total: Suele coincidir con IgM. Contacto previo con el virus.
- ARN-VHD: Control del tratamiento.

Hepatitis C: Caractersticas

-Flavivirus.
- Simetra icosadrica,
envuelta lipdica con
espigas.
- ARN de cadena simple con
polaridad positiva.
- Trasmisin parenteral y en
escasas ocasiones
parenteral.
- Causa ms frecuente de
transplante en pases
desarrollados.

Hepatitis C: Epidemiologa.

- Prevalencia del 2% de la poblacin mundial.

- Afecta 123 millones de personas.

Hepatitis C: Evolucin de la enfermedad.

-Infeccin aguda
frecuentemente asintomtica.
- Cronifica entre 43-86% de
los casos.
-Despus de varias dcadas 5060% de los crnicos
desarrollan enfermedad
heptica.
-Fallecen 1-5% por
complicaciones hepticas.

Hepatitis C: Genotipos.

Discriminar entre sanos y enfermos. Precisin

diagnstica. Punto de corte.
SENSIBILIDAD
Probabilidad de que un
enfermo d POSITIVO
ESPECIFICIDAD
Probabilidad de que un
sano d NEGATIVO

PUNTO DE CORTE,
umbral de patologia

SANOS

ENFERMOS
S

Punto de corte : Criterios de Seleccin

Prueba muy sensible

- Enfermedad grave
curable
- Suceptible de tto.
- Un falso positivo no
supone traumatismo
psicolgico ni
econmico

Prueba muy especfica

- Enfermedad grave y
prcticamente incurable
- Implicaciones
sanitarias y psicolgicas
el conocer si se padece la
enf.
- Minimizar Falsos Pos.

Hepatitis C: Algoritmos diagnsticos.

Hepatitis C: Deteccin en el laboratorio.

Anti-HCV: Indica contacto previo con el virus. Prueba de eleccin

para el screening.
Inmunoblot: Se utiliza como test confirmatorio del cribado. Se basa en
una tira de nylon con soporte de plstico, recubierta por Ag del VHC
en forma de bandas.
Las pruebas indeterminadas deben ser repetidad sobre nueva muestra
y si persiste el resultado, realizar pruebas genticas (PCR).

PCR cuantitativa:
Ag del core: Se han desarrollado tcnicas para detectar en el mismo
ensayo Ag y Ac.

Hepatitis C: Deteccin en el laboratorio.

Genotipado: Se analizan
determinadas secuencias
del VHC, como NS5, core
o 5` UTR. Se hibridan los
productos de
amplificacin de la
regin 5` UTR con una
variedad de sondas
especficas unidas a una
membrana de
nitrocelulosa.