Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

MATERIAL 08
TEMA: COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS Y CLASIFICACIN DE LOS
MTODOS PTICOS
La espectroscopia puede ser de emisin, absorcin, fluorescencia, o dispersin;
segn se emita, absorba, fluoresca, o disperse la radiacin por una determinada
sustancia.
Absorcin: transicin desde el estado fundamental a uno o varios estados
excitados de un tomo o molcula, que tiene lugar con transferencia de energa
procedente de la radiacin electromagntica. En la espectroscopia de absorcin
se requieren de una fuente externa de energa radiante; el haz de luz proveniente
de la fuente y que ha pasado a travs del selector de longitud de onda atraviesa la
muestra.
Emisin: transicin desde estados excitados a estados de menor nivel de energa
con emisin de radiacin. La espectroscopia de emisin difiere de los otros tres
tipos porqu no se necesita una fuente externa de radiacin ya que la propia
muestra es la emisora. La muestra, suele ser introducida en un plasma, chispa o
una llama, lo que proporciona la suficiente energa trmica (se energetiza) y emite
una radiacin caracterstica.
Dispersin: cambio en la direccin de la luz debido a su interaccin con la
materia; puede ocurrir con o sin transferencia de energa.
En el caso de la fluorescencia y de la dispersin, la fuente de radiacin produce
en la muestra contenida en un recipiente adecuado, radiacin fluorescente o
dispersa caracterstica que se mide bajo un ngulo (por lo general 90) con
respecto al haz incidente de la fuente.

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 1

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

Histricamente, el trmino espectroscopia se refiere a una rama de la ciencia en

la que la luz, o radiacin visible, se descompona en sus longitudes de onda
componentes, originndose as los espectros, que se usaban para los estudios
tericos de la estructura de la materia o para anlisis cualitativos y cuantitativos.

Fig 2:

Descomposicin de la luz blanca

Con el paso del tiempo, el significado fue cambiando y se amplio para incluir la
utilizacin

de

no

MSc. William Sagstegui G.

solo

la

luz,

sino

todo

el

espectro

de

radiacin
Pgina 2

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

electromagntica.
El uso actual, amplia el significado de espectroscopia para incluir estudios con
otro tipos de radiacin con iones (espectroscopia de masas), electrones
(espectroscopia de electrones) y ondas de sonido (espectroscopia acstica).
La espectroscopia (o espectrografa) comprende el estudio, la produccin e
interpretacin de espectros atmicos y moleculares. Estudio, en cuanto se trata
de los espectros tericos que sustenta esta disciplina. Produccin, en cuanto se
obtienen experimentalmente los diferentes espectros de tomos y molculas.
Interpretacin, en cuanto se establecen las correlaciones entre los espectros y las
estructuras atmicas y moleculares, permitiendo la identificacin de elementos y
sustancias qumicas.
Por lo tanto, la espectroscopia ptica abarca el estudio, produccin e
interpretacin de espectros de tomos y molculas, ya sean de emisin,
absorcin, fluorescencia, o dispersin; y los mtodos e instrumentos necesarios
para obtener informacin de la composicin qumica del material en estudio, en
las tres regiones importantes del espectro EM son: Ultravioleta, Visible e
Infrarrojo.
La regin del UV de < 185 nm es llamada ultravioleta en el vacio, no es muy
accesible para los anlisis de rutina. Por lo tanto en la regin UV de > 185 nm
se verifica la espectroscopia UV.
La regin visible abarca el rango de 380 a 780 nm ( 400 800 ).
La regin IR va de 0.78 hasta 1000 m, sin embargo el sector ms utilizado se
considera que est entre 2.5 a 15 m.
1. COMPONENTES DE LA INSTRUMENTACIN PARA LOS MTODOS
PTICOS
Los componentes bsicos de los instrumentos analticos utilizados en la
espectroscopia, son muy semejantes en sus propiedades, aunque difieren en algo
en su configuracin, independientemente que estn diseados para la radiacin
ultravioleta (UV), visible o Infrarroja (IR). Por lo tanto a estos se les describe
como instrumentos pticos, aunque la sensibilidad del ojo se limita solo a la
regin visible. Estos son cinco:
1. Una fuente estable de energa radiante;
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 3

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

2. Un selector de longitudes de onda, que permite utilizar una regin limitada

del espectro de longitud de onda restringida;
3. Uno o varios recipientes transparentes para colocar la muestra;
4. Un detector de radiacin o transductor que convierte la energa radiante en
una seal utilizable, por lo general elctrica, y
5. Un dispositivo de procesamiento de la seal y de lectura, que
habitualmente consiste en un equipo electrnico y un computador en los
instrumentos ms modernos.
Procesador

Selector de
longitudes
de onda
Fuente

Detector

de seales
y de lectura

Cubeta para
muestra

Fig 3: Alineacin de los componentes de un Instrumento para medidas de absorcin. La

fuente de radiacin de longitud de onda seleccionada se enva a travs de la muestra, y la
radiacin transmitida se mide por la unidad de deteccin, procesamiento de la seal y lectura.

Dispositivo de procesamiento
de seal y de lectura

Fig 4: Esquema de un espectrofotmetro

El diseo tambin depende del uso primario del instrumento; segn sea para
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 4

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

anlisis cualitativo o cuantitativo, o si se utiliza para espectroscopia molecular o

atmica.
La fuente general y los requerimientos de utilizacin de cada tipo de componente
son semejantes, independientemente de la longitud de onda, de la regin del
espectro o de su aplicacin.
1.1. FUENTES DE RADIACIN:
CARACTERSTICAS:
1 Debe producir un haz de radiacin cuya potencia sea suficiente para facilitar la
deteccin y medida.
2 La seal de salida (el voltaje de salida) de la fuente de radiacin debe ser
estable. Esto requiere un suministro de energa bien regulado que le proporcione
energa a la fuente.
Lo caracterstico es que la potencia de la energa radiante de una fuente vare
exponencialmente con la potencia elctrica proporcionada; por lo que muchas
veces debe utilizarse una fuente de poder regulada para alcanzar la estabilidad
requerida.
En otros instrumentos la seal de salida se divide en dos haces, uno de referencia
y el otro para la muestra y dos transductores apareados uno para recibir
directamente el haz de referencia y el otro para recibir el haz emergente de la
muestra. El parmetro analtico es entonces la relacin de las dos seales de
salida de los dos transductores. En esta forma se anula casi por completo el
efecto de las fluctuaciones en la salida de la fuente.
En otros instrumentos se utiliza slo un transductor que recibe en forma alternada
el haz de la muestra y el de referencia.
1.1.1. Tipos de fuentes de radiacin
En espectroscopia ptica se utilizan:
a.

Fuentes continas, que emiten una radiacin cuya intensidad vara de

manera gradual en funcin de la longitud de onda. Empleadas en los
procedimientos de absorcin molecular.

b.

Fuentes lineales, que emiten un nmero limitado de lneas espectrales, cada

una de las cuales abarca un rango de longitudes de onad muy limitado.
Empleadas en la espectroscopia de fluorescencia y absorcin atmica.

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 5

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

A1) Fuentes continas de radiacin ultravioleta, visible e infrarroja cercana:

La potencia de la radiacin no vara bruscamente entre longitudes de onda
adyacentes.
a.1. Lmpara de deuterio (llamadas tambin de Hidrgeno): se utilizan mas a
menudo para proporcionar una radiacin continua en la regin ULTRAVIOLETA
(UV). Una lmpara de deuterio consta de un tubo cilndrico que contiene
hidrgeno o deuterio a baja presin, con una ventana de cuarzo por la que sale la
radiacin. Producen tomos de deuterio o hidrgeno ms un fotn ultravioleta a
un espectro continuo desde 160 a 375 nm (hasta inicio de la regin visible).
Deben emplearse ventanas de cuarzo en los tubos, porque el vidrio absorbe
fuertemente en esta regin de longitud de onda.
a.2. Lmpara de filamento de tungsteno:
La fuente ms comn de radiacin visible e infrarroja cercana es la lmpara de
filamento de tungsteno.
Una lmpara de filamento de tungsteno es til para la regin de longitudes de
onda comprendida entre 320 y 2500 nm; y funcionan generalmente a una
temperatura de 2900 K.
a.3. Lmpara de tungsteno/halgeno:

llamadas

tambin

lmparas de

cuarzo/halgeno, contienen una pequea cantidad de yodo dentro de la cubierta

de cuarzo donde est alojado el filamento. El cuarzo permite que el filamento
funcione a una temperatura prxima a 3500 K, lo que produce mayores
intensidades y ampla el rango de la lmpara hasta parte de la regin UV (240
2500). Una Lmpara de tungsteno/halgeno tiene una vida til de ms del doble
que una lmpara de tungsteno comn, porqu la vida til de esta ltima est
limitada por la sublimacin del tungsteno del filamento.
A2). Fuentes continas de radiacin INFRARROJA (IR):
Las fuentes continuas de radiacin IR se obtienen calentando slidos inertes. Una
fuente denominada Globar consta de una varilla de carburo de silicio; la radiacin
infrarroja se emite cuando el Globar se calienta a unos 1500C mediante el paso
de electricidad. La intensidad radiante mxima a estas temperaturas se produce
en 1.7 a 2.0 m (6 000 a 5 000 cm-1). En longitudes de onda ms larga la
intensidad desciende continuamente hasta que llega a ser de 1 % del mximo de
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 6

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

15 m (665 cm-1). En el lado de longitudes de onda corta la reduccin es mucho

ms rpida, y una reduccin similar en intensidad se observa en 1 m ( 10 000
cm-1).
La lmpara de Nernst (emisor incandescente de Nernst), es un cilindro de xidos
de circonio y de itrio (tierras raras) con un dimetro de 1 a 2 mm y una longitud de
20 mm, en los extremos del cilindro hay alambres de platino para el paso de la
corriente. Emiten radiacin IR cuando es calentado a alta temperatura por el
paso de una corriente elctrica.
B. Fuentes de lneas
En espectroscopia de absorcin atmica, espectroscopia Raman, refractometra y
polarimetra, se utilizan fuentes cuya radiacin es en forma de unas pocas lneas
de longitud de onda definida.
b.1. Lmparas de vapor metlico:
Las dos fuentes de lneas ms comunes son las lmparas mercurio y de sodio.
Una lmpara de vapor consiste en una envoltura transparente que contiene un
elemento gaseoso a baja presin. Cuando se aplica un potencial a travs de dos
electrodos colocados en el interior de la envoltura, se excita la lnea espectral
caracterstica del elemento correspondiente.
Existe conduccin debido a que se forman electrones y iones como consecuencia
de la ionizacin del metal.
Por lo general, se requiere un calentamiento inicial para producir suficiente vapor
metlico; una vez logrado esto, la CORRIENTE SE MANTIENE.
La lmpara de mercurio produce varias lneas cuya longitud de onda vara entre
254 y 734 nm.
En la lmpara de vapor de sodio predomina el par de lneas de 589.0 y 589.6 nm.
b.2. Lmparas de ctodo hueco:
Estas lmparas producen un espectro de lneas para un gran nmero de
elementos. Su empleo se limita a los instrumentos de absorcin atmica y de
fluorescencia atmica.
b.3. Lseres
La palabra lser es una sigla ingls que significa light amplification by stimulated
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 7

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

emission of radiation (amplificacin de luz por medio de la emisin estimulada de

radiacin).
Debido a su propiedad de amplificacin de la luz los lseres producen haces de
radiacin estrechos y sumamente intensos. El proceso de EMISION estimulada
produce un haz de radiacin altamente monocromtico (ancho de banda de 0.01
nm o menos (y notablemente coherente).
Debido a estas caractersticas los lseres se han transformado en una importante
fuente de radiacin para las regiones ultravioleta, visible e infrarroja del espectro.
1.2.

Un selector de longitudes de onda, (dispositivo que permite utilizar

una regin de longitud de onda restringida):

Los instrumentos espectroscpicos para la regiones UV y visible suelen estar
provistos de uno o varios dispositivos para que la radiacin medida quede
restringida a una estrecha banda absorbida o emitida por el analito. Estos
dispositivos refuerzan tanto la selectividad como la sensibilidad de un instrumento.
Adems en el caso de las medidas de absorcin, las bandas de radiacin
estrechas reducen en alto grado la posibilidad de desviacin de la ley de Beer
debida a la radiacin policromtica.
Los dispositivos utilizados son el monocromador o filtro y el espectrgrafo.
Monocromador:
Es un dispositivo que dispersa la radiacin policromtica en bandas que abarquen
un intervalo de valores restringido de longitud de ONDA. Permiten aislar la banda
de longitud de onda deseada. Tienen generalmente una rejilla de difraccin para
dispersar la radiacin en sus longitudes de onda. Cuando se hace girar la rejilla se
logra que diferentes longitudes de onda pasen a travs de la rendija de salida. En
los instrumentos ms antiguos se utilizaban Prismas.
El intervalo de longitudes de onda que pasan por un monocromador,
denominadas paso de banda espectral o ancho de banda efectiva, puede ser
menor que 1 nm en los instrumentos ms caros o mayor de 20 nm en los
sistemas baratos.
Los monocromadores para la radiacin ultravioleta, visible e infrarrojo, son todos
semejantes entre si en cuanto a su construccin mecnica en el sentido de que
en ellos se emplean RANURAS, LENTES, ESPEJOS, VENTANAS Y PRISMAS o
REDES DE DIFRACCIN.
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 8

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

Los materiales con los que se construyen estos componentes, se escogen de

acuerdo a los intervalos de longitudes de onda para los cuales se utilizan.
Componentes de un monocromador
1. Ranura de entrada
2. Una lente o espejo colimador para producir un haz de radiacin paralela.
3. Un prisma o red de difraccin (rejilla) como elemento dispersor.
4. Un elemento de enfoque que proyecta una serie de imgenes rectangulares de
la ranura de entrada sobre una superficie plana (EL PLANO FOCAL).

Fig 5: Monocromador de prisma

Fig 6: Monocromador de rejilla. La 1 es ms larga que la 2.

Adems la mayora de los monocromadores tienen ventanas de entrada y salida
que se colocan para proteger los componentes, del polvo y los vapores corrosivos
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 9

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

del laboratorio.
Rejillas: La mayora de monocromadores tienen rejillas de rplicas. Esta consta
de una superficie dura, pulida y pticamente plana, en la que mediante
herramienta de diamante con forma adecuada se hace un buen nmero de surcos
paralelos muy cercanos entre si. Comnmente una rejilla para la regin
ultravioleta y visible contiene entre 300 y 2000 surcos/mm, siendo entre 1 200 y 1
400 de stos el nmero ms comn.
Los instrumentos que utilizan monocromador son: Los espectrmetros,
espectrofotmetros, fotmetros, espectrgrafo (utiliza rejilla), etc.
- Espectrofotmetros: Es un espectrmetro que contiene un dispositivo
FOTOELECTRICO para cuantificar la potencia de la radiacin que sale de la
ranura.
- Espectrmetro: instrumentos que poseen una ranura de salida fija, localizada
en el plano focal, puede variar en forma continua si se gira el elemento dispersor.
- Fotmetro: Tambin utiliza un detector FOTOELECTRICO, pero no posee
monocromador, en su lugar utiliza filtros que permiten obtener bandas de
radiacin que abarcan un intervalo limitado de longitudes de onda. Con un
fotmetro no es posible obtener una banda de radiacin variable en forma
continua.
Tipos de Filtros:
1. Absorcin: Slo para la regin visible del espectro.
Estos limitan la radiacin absorbiendo ciertas porciones del espectro. El tipo ms
comn consiste en un vidrio coloreado o un colorante suspendido en gelatina y
colocado entre placas de vidrio.
Los filtros de vidrio de color tienen la ventaja de su mayor estabilidad trmica.
Los filtros de absorcin poseen anchos de banda efectivos que varan de 30 a 250
nm. Estos tienen un rendimiento significativamente inferior si se comparan con los
filtros de interferencia: ANCHOS DE BANDA MAYORES Y FRACCION
DE LUZ TRANSMITIDA MENOR.

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 10

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

Fig: Filtros de absorcin

2. Filtros de Interferencia: se utilizan con las radiaciones ultravioleta, visible e

infrarroja, con de hasta 14 m. Se basan en un fenmeno de interferencia ptica
para producir bandas relativamente estrechas de radiacin que suele tener de 5 a
20 nm de ancho.
Un filtro de interferencia consta de una capa muy delgada de material dielctrico
transparente (frecuentemente fluoruro de calcio o de magnesio) revestida por
ambas caras con una pelcula metlica semitransparente delgada para transmitir
casi la mitad de la radiacin que incide sobre ella y para reflejar la otra mitad. Este
conjunto est encerrado entre dos placas de vidrio que lo protegen de la
atmsfera. El espesor de la placa dielctrica se controla cuidadosamente, y
determina la longitud de onda de la radiacin transmitida.
Policromador: tiene varias rendijas de salida y mltiples detectores. Esto permite
la medida simultnea de muchas longitudes de onda. Se utilizan en la
espectroscopa de emisin.
1.3. Recipientes para la muestra:
A excepcin de la espectroscopia de emisin, en todas las tcnicas
espectroscpicas, se requiere recipientes para colocar la muestra, llamadas:
Celdas o cubetas. Deben ser construidas de un material que permite el pasaje
de la regin espectral que interesa.
El cuarzo o slice fundido son necesarios para la regin ultravioleta ( menores
que 350 nm); y pueden emplearse en la regin visible y hasta aproximadamente 3
m (3000 nm) en el infrarrojo.
-

Los vidrios de silicatos se emplea para la regin entre 350 y 2000 nm porqu

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 11

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

su costo es bajo comparado con el cuarzo.

-

Tambin se emplean celdas de plstico para la regin visible.

El cloruro de sodio cristalino es el material ms comn en ventanas de las

celdas para la regin del infrarrojo, que es soluble en agua y en algunos otros
disolventes.

Hay materiales que pueden ser tiles en la fabricacin de celdas para

muestras por ser transparentes en el infrarrojo.

Las mejores celdas tienen ventanas perpendiculares a la direccin del haz

(rayo), para reducir al mnimo las prdidas por reflexin.

La longitud ms comn en la trayectoria de las celda para estudios en las

regiones ultravioleta-visible, es 1 cm, tambin existen las de 0.1 cm (o menos)
hasta de 10 cm.

Las celdas para lquidos y soluciones para el infrarrojo tienen por lo general
trayectorias menores de 1 mm.

Cubetas o celdas

1.4. Detectores y medida de la energa radiante:

Un detector es un dispositivo que indica la existencia de algn fenmeno fsico.
Algunos ejemplos muy conocidos son las pelculas fotogrficas (para indicar la
presencia de radiacin electromagntica o radiactiva), el fiel de una balanza (que
indica diferencias de masa) y el nivel de mercurio en un termmetro (para indicar
la temperatura). El ojo humano tambin es un detector: convierte la radiacin
visible en una seal elctrica que es enviada al cerebro por una cadena de
neuronas localizadas en el nervio ptico y se produce la visin.
En

los

instrumentos

modernos,

la

informacin

buscada

se

codifica

invariablemente y se procesa como una seal elctrica.

El trmino transductor se emplea para indicar el tipo de detector que convierte
cantidades, tales como intensidad luminosa, pH, masa y temperatura, en seales
MSc. William Sagstegui G.

Pgina 12

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

elctricas, que despus pueden ser amplificadas finalmente en nmeros

proporcionales a la magnitud de la cantidad original.
Son transductores que convierten la energa radiante en una seal elctrica.
Propiedades de los detectores:
- Debe responder rpidamente a los niveles bajos de energa radiante en un
amplio intervalo de longitudes de onda.
- Debe ser sensible a bajos niveles de potencia radiante.
- Responder rpidamente a la radiacin.
- Debe producir una seal elctrica que pueda amplificarse fcilmente y tener un
nivel de ruido elctrico relativamente bajo (para estabilidad).
- Es esencial que la seal elctrica producida por el transductor debe ser
directamente proporcional a la potencia radiante P del haz que incide en el
detector.
Tipos de detectores (o Transductores):
1. Detectores de fotones (Respuesta a fotones)
2. Detectores trmicos (Respuesta al calor)
Todos los detectores de fotones se basan en la interaccin de radiacin con una
superficie reactiva que produce electrones (Fotoemisin) o para promover
electrones a estados energticos en los que puede conducir la electricidad
(fotoconduccin). Slo la radiacin ULTRAVIOLETA, VISIBLE o INFRARROJA
CERCANA poseen energa suficiente para hacer que se produzca una
fotoemisin; por eso los detectores de fotones estn limitados a longitudes de
onda inferiores a 2 m (2000 nm). Los fotoconductores pueden emplearse en las
regiones del IR cercano, medio y lejano del espectro.
Detectores comunes para espectroscopa de absorcin
Tipo

Rango de , nm

Detectores de Fotones
Fototubos

150 1000

Tubos fotomultiplicadores

150 1000

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 13

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioqumica

Anlisis Instrumental

Fotodiodos de silicio

350 - 1100

Clulas fotoconductoras

1000 50, 000

Detectores trmicos
Termopares

600 20, 000

Bolmetros

600 20, 000

Celdas neumticas

600 40, 000

Celdas piroelctrica

1000 20, 000

1.5. Procesadores de seal e indicadores:

Un procesador de seal es generalmente un dispositivo electrnico que amplifica
la seal elctrica procedente del detector; adems puede modificar la seal de cc
a ca (o a la inversa), cambiar la fase de la seal y filtrarla para suprimir los
componentes no deseados. El procesador de seales se puede utilizar tambin
para realizar operaciones matemticas sobre la seal, ya sea diferenciacin,
integracin o conversin a un logaritmo. En los instrumentos modernos se
encuentran diversos tipos de dispositivos indicadores. Algunos ejemplos son
medidores digitales, escalas de potencimetros, registradores, tubos de rayos
catdicos y monitores de microcomputadores.

MSc. William Sagstegui G.

Pgina 14