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ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
ESCUELA DE INGENIERA EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL
INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
NOMBRES: Gabriela Lpez Portilla
Carina Aldaz

CDIGO: 2302
2315

FECHA DE REALIZACIN: 10/11/2014


FECHA DE ENTREGA: 17/11/2014

1. TEMA
Reacciones de identificacin de carbohidratos.
2. OBJETIVOS
2.1. General
Caracterizar cualitativamente los carbohidratos empleando diferentes reacciones.
2.2. Especficos
Tomar conocimiento de la parte terica de reacciones que se utilizan para determinar
de manera cuantitativas los carbohidratos presentes en diferentes soluciones.
Verificar, en las soluciones, la presencia de azcares reductores.
Determinar si existen diferencias entre monosacridos y disacridos al producirse las
reacciones correspondientes.
Identificar cualitativamente polisacridos presentes en las soluciones.
3. MARCO TERICO

Los carbohidratos (tambin llamados hidratos de carbono) son uno de los tres tipos de
macronutrientes presentes en nuestra alimentacin (los otros dos son las grasas y las
protenas). Existen en multitud de formas y se encuentran principalmente en los alimentos tipo
almidn, como el pan, la pasta alimenticia y el arroz, as como en algunas bebidas, como los
zumos de frutas y las bebidas endulzadas con azcares. Los carbohidratos constituyen la

fuente energtica ms importante del organismo y resultan imprescindibles para una


alimentacin variada y equilibrada.
El progreso en las investigaciones cientficas ha puesto en relieve las diversas funciones que
tienen los carbohidratos en el cuerpo y su importancia para gozar de una buena salud. En la
siguiente explicacin se examinan ms a fondo dichas investigaciones, para que el lector
conozca mejor este macronutriente, siendo adems necesario sealar que gran parte de
nuestros conocimientos en torno a los carbohidratos datan ya de hace bastante tiempo.

La reaccin de Molish
es una reaccin que presenta la propiedad de teir cualquier carbohidrato presente en una
disolucin, el nombre de esta reaccin se deriva en honor del botnico austraco Hans
Molish.Forma parte de la composicin del reactivo de Molish el -naftol el mismo que se lo
utiliza al 5 % en etanol de 96 por ello a temperatura ambiente en un tubo de ensayo se debe
colocar la muestra o solucin problema ms el reactivo de Molish posteriormente se adiciona
cido sulfrico (H2SO4) e inmediatamente aparece la formacin de un anillo color violeta en la
interfase. Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glcidos en la
solucin original. La reaccin entre el cido sulfrico y el -Naftol forma un anillo de color
verde claramente visible, cuando no hay Glcidos. Cuando la concentracin de glcidos es alta,
se forma un precipitado rojo que al disolverse, colorea la solucin. La reaccin de MolischUdransky es considerada como una prueba general para identificacin de Glcidos y un
resultado negativo excluye la presencia de estos. La presencia de Glcidos se pone de
manifiesto por la formacin de un anillo de color prpura-violeta en la interfase.
Prueba del Yodo de lugol
Es una reaccin qumica usada para determinar la presencia o alteracin de almidn u
otros polisacridos. Una solucin de yodo - di yodo disuelto en una solucin acuosa de yoduro
de potasio - reacciona con almidn produciendo un color prpura profundo.
Este tipo de prueba puede realizarse con cualquier producto que contenga almidn como ser
patatas, pan o determinados frutos.
Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a partir de
la reaccin del almidn con el yodo presente en la solucin de un reactivo llamado Lugol.
La amilosa, el componente del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las
molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina1 , el componente
del almidn de cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo
son incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al romperse
o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro
desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando
ya no hay cambio de color constituyendo una evidencia experimental ampliamente utilizada.
La solucin de yodo tambin reacciona con el glucgeno, aunque el color producido es ms
castao y mucho menos intenso

PRUEBA DE BENEDICT
Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la
muestra.Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes
suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo
carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares
con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo
carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no
reductores. Existen varias reacciones qumicas que permiten determinar si se est en presencia
de un azcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la
reaccin o no de un azcar con el ion Cu2+. El reactivo 21de Benedict contiene soluciones de
carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solucin un pH
alcalino necesario para que la reaccin pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al
ion Cu2+ en solucin ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco
ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul.
Si se le agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a
ebullicin, el azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en D-gluconato
y su ene-diol, rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus
electrones expuestos, reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y dos
iones Cu+. Posteriormente el Cu+producido reacciona con los iones OH- presentes en la
solucin para formar el hidrxido de cobre: Cu + + OH - Cu(OH) (precipitado amarillo) El
hidrxido pierde agua 2Cu(OH) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O La aparicin de un
precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar reductor.
La Prueba de Barfoed
es un ensayo qumico utilizado para detectar monosacridos. Se basa en la reduccin
de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual forma un precipitado
color rojo ladrillo.
RCOH + 2Cu+2 + 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H+
Los disacridos tambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. El grupo aldehdo del
monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico
correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio, pueden interferir en la
prueba. Esta prueba fue descrita por primera vez por el qumico dans Christen Thomsen
Barfoed y se utiliza principalmente en botnica. La prueba es similar a la prueba de Fehling.
El reactivo de Barfoed se compone de una solucin de 0.33 molar de acetato de cobre neutro
en una solucin de 1% de cido actico. No es recomendable guardar el reactivo, sino
prepararlo previamente a su uso.

4. MATERIALES
4.1. Materiales
Gradilla
para
10 tubos de ensayo
Esptula
3 pipetas de 10 ml
Pera de succin
4.2. Reactivos
Solucin de glucosa
H2SO4 concentrado
Agua destilada
Solucin de fructosa
Solucin de sacarosa
Solucin de lactosa
Solucin de almidn
5. GRFICOS
PRUEBA DE MOLISCH

tubos

PRUEBA DE LUGOL

Vaso de precipitacin de 250 ml


Reverbero
Pinzas para tubos

Reactivo de Molisch
Reactivo de Fehling
Reactivo de benedict
Reactivo de Borfoed
Reactivo de Seliwanoff
Lugol

PRUEBA DE BENEDICT

PRUEBA DE BARFOED

PRUEBA DE SELIWANOFF

6. PROCEDIMIENTO
Cada grupo que se form en laboratorio trabaj con una sustancia diferente a las que
denominamos Muestra 1 en el caso del primer grupo y as sucesivamente. Nuestro grupo
trabaj con la Muestra 6.
Cada prueba va a ser representada en un diagrama de flujo por lo extenso que es el
procedimiento.
REACCIN DE MOLICSH (- Naftol)

2.5 ml de
"Muestra 6" en
un tubo

Sin inclina el
tubo se aade
2 gotas del
reactivo de
Molish.

Aadir

1 ml de H2SO4
concentrado
por las paredes

Anotar los
resultados
Observar los
cambios

Sin agitar

Si al realizar esta prueba la solucin no cambiaba de color debamos tomar cualquiera de las
otras soluciones para realizar las pruebas posteriores. Como nuestra Muestra 6 si cambi de
color trabajamos con ella mismo.
PRUEBA DE LUGOL

En un tubo de
ensayo se colocan
"Muestra 6"

Se agregan 2 gotas
de lugol

Se observan y se
anotan los
resultados

Si al realizar esta prueba la solucin cambiaba de color debamos tomar cualquiera de las otras
soluciones que no cambiaron del color al realizar esta prueba para las posteriores. Como
nuestra Muestra 6 no cambi de color trabajamos con la misma.
PRUEBA DE BENEDICT

A 1 ml del reactivo de
Benedict

5 gotas de "Muestra 6"

Mezclar y someterlo a bao


Mara durante 5 minutos

Observar y anotar los


resultados
Si al realizar esta prueba no se formaba un precipitado debamos tomar cualquiera de las otras
soluciones, en las cuales se form el precipitado para realizar las pruebas posteriores. Como en
nuestra Muestra 6 si observamos el precipitado trabajamos con ella mismo.
PRUEBA DE BARFOED

Aadir

A 2 ml de la solucin de Barfoed
1 ml de "Muestra A"

Hervir

Aparece el precipitado rojo en 2


minutos

Si no aparece

Volver a hervir la solucin hasta que


aparezca el precipitado.

Se debe cambiar de solucin puesto que la Muestra 6 no form el precipitado durante los
dos primeros minutos.
Entonces trabajamos con una Muestra 2:
PRUEBA DE SELIWANOFF

2 ml del reactivo de Seliwanoff


Cuatro gotas de "Muestra 2"

Someter a bao Mara y observar los


resultados

7. REACCIONES Y RESULTADOS
7.1. Reacciones
PRUEBA DE MOLISHC

PRUEBA DE LUGOL
PRUEBAS DE BENEDICT Y BARFOED

PRUEBA DE SELIWANOFF

7.2. Resultados
A continuacin se presenta la tabla con los resultados obtenidos de cada prueba en laboratorio
de todos los grupos, representada como negativo si no cambi de color o no se form el
precipitado y positivo si lo hizo.
Soluciones

Prueba
Molisch
Positivo
Positivo

de Prueba
de Prueba
de Prueba
de Prueba
de
Lugol
Benedict
Barfoed
Seliwanoff
Muestra1
Negativo
Negativo
Muestra 2
Negativo
Positivo
Positivo
positivo
(2 min)
Muestra 3
negativo
Muestra 4
Positivo
negativo
Positivo
Positivo
positivo
(2 min)
Muestra 5
Positivo
Positivo
Muestra 6
positivo
negativo
positivo
Positivo
(16 min)
Entonces la interpretacin de los resultados sera la siguiente para cada una de las soluciones:
Soluciones

Prueba
de Prueba
de
Molishc
Lugol
Carbohidrato Mono
o
disacrido
Carbohidrato Mono
o
disacrido
No
carbohidrato
Carbohidrato Mono
o
disacrido
Carbohidrato Polisacrido
Carbohidrato Mono
o
disacrido

Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6

Prueba de Prueba
de
Benedict
Barfoed
Azcar
no reductor
Azcar
Monosacridos
reductor
Azcar
reductor
Azcar
reductor

Prueba
de
Seliwanoff
Cetohexosas
-

Monosacridos Cetohexosas
Disacrido

La Muestra 6 al trabajar con:

La prueba de Molisch se demostr que es un carbohidrato.


La prueba prueba de yodo se determin que puede ser un monosacrido o disacrido.
La prueba de Benedict se demostr que es un azcar reductor.
La prueba de Barfoed se determin que es un disacrido.

La ltima prueba trabajamos con Muestra 2 y se determin que se trata de fructosa


(ismero de la glucosa).

8. OBSERVACIONES
Soluciones

Prueba

de Prueba

de Prueba

de Prueba

de Prueba

de

Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6

Molishc
Rojo- violeta

Lugol
No cambia
de color
Rojo- violeta No cambia
de color
No cambi de color
Rojo-violeta
No cambia
de color
Rojo-violeta
Negro
Rojo-violeta
No cambia
de color

Benedict
Sin
precipitado
Precipitado
rojizo
-

Barfoed
-

Seliwanoff
-

Precipitado
rojizo (2min)
-

Rojo

Precipitado
rojizo
Precipitado
rojizo

Precipitado
rojizo (2min)
Precipitado
rojizo
(16min)

Rojo

La Muestra 6 cuando se le aadi el reactivo de Molishc y cido clorhdrico cambi


su coloracin a rojo- violeta.
Cuando se le aadi el lugol a la Muestra 6 no se pudo detectar un cambio de
coloracin alguno ms que el color del lugol mismo.
Al trabajar con la prueba de Benedict, se pudo observar un precipitado de color rojo
ladrillo en la parte superficial.
Cuando trabajamos con el reactivo de Barfoed y la Muestra 6 se detect un
precipitado naranja hacia rojo pero al cabo de 16 minutos.
Finalmente, cuando trabajamos con la prueba de Seliwanoff de observ que la
solucin tomada un color rojo ladrillo.
9. CONCLUSIONES
Las biomolculas juegan un papel muy importante en nuestro organismo y en la naturaleza
en s. A nivel qumico, es muy importante saber qu azcares se consideran "reductores";
si el compuesto reduce, es un agente oxidante dentro de una reaccin qumica; mientras
que las que no reducen en la oxidacin, se llaman "no reductores".
10. CUESTIONARIO
10.1.
Cul es el fundamento de la reaccin de identificacin de azcares con el
reactivo de Molisch?
Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glcidos en la
solucin original. La reaccin entre el cido sulfrico y el -Naftol forma un anillo de color
verde claramente visible, cuando no hay Glcidos. Cuando la concentracin de glcidos es
alta, se forma un precipitado rojo que al disolverse, colorea la solucin. La reaccin de
Molisch-Udransky es considerada como una prueba general para identificacin de Glcidos
y un resultado negativo excluye la presencia de estos. La presencia de Glcidos se pone de
manifiesto por la formacin de un anillo de color prpura-violeta en la interfase..

10.2.
Indique cules reacciones sirven para identificar azcares reductores y
explique su fundamento.
Rx de Barfoed:

El cobre es disuelto en una disolucin dbilmente acida, el fundamento radica en la reduccin


del acetato cprico a oxido cuproso la velocidad de reaccin es mucho ms lenta para los
disacridos reductores que para los monosacridos. Si es positiva indica la presencia de
materiales reductores al presenciarse un precipitado amarillo o rojizo.
Rx de fehling
Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azcares reductores. El poder reductor que
pueden presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo
carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no
puede presentar este poder reductor.Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces
de reducir el in Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azcar
se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente bsico como en nuestro caso el NaOH el in
Cu2+ formara Cu (OH)2 insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.
2 Cu 2+ + R-CHO
(Azul)

Cu2O
( Rojo)

+ R-COOH

RX DE BENEDICT
La solucin de Benedict es de color azul claro porque contiene sulfato de cobre. Cuando se
mezcla y se calienta con un azcar, como la glucosa, la cual tiene electrones disponibles para
donar, el cobre acepta estos electrones y se reduce, con lo cual se vuelve marrn anaranjado.
Durante este proceso, el ion cobre azul (II) se reduce a ion cobre rojo (I). Mientras que el cobre
se reduce, la glucosa dona un electrn y se oxida. Como la glucosa es capaz de reducir al cobre
en la solucin de Benedict, la llamamos azcar reductor
10.3.
Indique cules reacciones sirven para diferenciar los monosacridos de los
disacridos y explique su fundamento.
A pesar de que la diferenciacin de estereoismeros no ha sido el campo de aplicacin
principal de la espectrometra de masas, se ha implementado una metodologa para
diferenciar los monoscaridos -D-galactosa y -D-glucosa y los disacridos -Dgalactopiranosil-(14)--D-glucopiransido
(lactosa),
-D-glucopiranosil-(14)--Dglucopiransido (maltosa) y -D-fructofuranosil-(21)--D-glucopiransido (sacarosa) a
travs de sus aductos con amonio y litio por ESI-IT-MS/MS en infusin directa. Se emplean
diferentes energas de fragmentacin para asegurar la existencia de iones marcadores de la
estereoqumica de los analitos. Se evidencia que controlar las energas de colisiones en el
anlisis estructural de molculas provee una poderosa y moderna herramienta analtica para
los laboratorios de anlisis y se puede diferenciar con la reaccin de Barfoed
10.4.
Cul es la reaccin que nos permite distinguir entre aldosas y cetosas.
Explique su fundamento.
La reaccin que nos permite distinguir aldosas y cetosas es la rx de Seliwanoff se fundamenta
en la formacin de furfural o sus derivados en caliente, la reaccin es positiva indicando la
presencia de cetohexosas, al aparecer un color rojo.

10.5.

Explique con qu prueba podemos distinguir polisacridos.

Con la prueba de yodo-lugol , es una reaccin qumica usada para determinar la presencia o
alteracin de almidn u otros polisacridos. Una solucin de yodo - di yodo disuelto en una
solucin acuosa de yoduro de potasio - reacciona con almidn produciendo un
color prpura profundo.
Este tipo de prueba puede realizarse con cualquier producto que contenga almidn como ser
patatas, pan o determinados frutos.

11. BIBLIOGRAFA

- REACCIN DE MOLISH/ BUENAS TAREAS.


LINK:http://www.buenastareas.com/ensayos/Reaccin-De-Molisch/943181.html
2014/16/11
-Vallejo.L
/
Reaccion
de
molisch/
2014.
Recuperado
de
:https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos/reaccionde-molish
-Paulina
M
/
practica
biomoleculas
/
recuperado
:https://sites.google.com/site/equipoquimicaexperimental6/practica-18-biomoleculas
-identificacion
de
azucares
/
Recuperado
http://almez.pntic.mec.es/~mbam0000/paginas/LABORATORIOs/azucares.htm

de

de

-Prueba
de
benedict
/
Mar
Bradshaw/
(2013)
.
recuperado
http://www.ehowenespanol.com/efecto-solucion-benedict-glucosa-sobre_169281/

de

-polisacaridos / universidad nacional del callao facultad de ingenieria quimica . recuperado de :


http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf
-prueba
de
barfoed/
(2012)
:http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf

recuperado

de

GUARNIZO.A./QUIMICA ORGANICA /Ediciones Elizcom / Armenia, Colombia / pag 139-141.


http://books.google.com.ec/books?id=Otm5wsEeKYEC&pg=PA142&lpg=PA142&dq=prueba+d
e+yodo+en+carbohidratos&source=bl&ots=BQyf_XbcQr&sig=5B2JBvRLYPNHkoZOKFbPLXxMs6
8&hl=es&sa=X&ei=4_poVM6cEajGsQSkuYKACQ&ved=0CC4Q6AEwAw#v=onepage&q=prueba%
20de%20yodo%20en%20carbohidratos&f=false
CARBOHIDRATOS. DOCUMENTOS BSICOS 07/2012 . EUFIC .
RECUPERADO DE :http://www.eufic.org/article/es/expid/basics-carbohidratos/

12. ANEXOS

Las botellas que contenan las diferentes soluciones

PRUEBA DE MOLISHC

PRUEBA DE BENEDICT

PRUEBA DE BARFOED

TODAS LAS PRUEBAS REALIZADAS