Los nuclolos, cromosomas y visualizacin de la actividad gentica.

Los genes de ARN ribosomal y nucleolo

En el momento de papel clsico de Montgomery en el nuclolo en 1898 (1), ya 700 o ms artculos
eran de observaciones a este orgnulo nuclear, comenzando con un estudio realizado por Fontana
en 1781 titulado "El veneno de las vboras." El nfasis citolgico temprano en el nucleolo, sin duda,
fue debido a la alta visibilidad del orgnulo en ncleos en interfase de la mayora de tipos de
clulas; sin embargo, el hecho de que nucleolos estn directamente involucrados con la actividad
cromosmica no se demostr hasta Heitz (2) y McClintock (3) mostr que forma nucleolos durante
la telofase en regiones especficas del cromosoma llamado "organizadores nucleolares" (NOS) por
McClintock. En 1940, Caspersson y Schultz (4), usando radiacin ultravioleta (UV) espectros de
absorcin, llegaron a la conclusin de que ambas nucleolos y citoplasma de las clulas son
generalmente ricas en cido ribonucleico (ARN). Brachet (5) lleg a la misma conclusin de forma
independiente despus de descubrir que el tratamiento RNasa de ovocitos de anfibios elimina los
componentes basfilos tanto de citoplasma y nuclolo. Tras estas primeras observaciones,
Caspersson y compaeros de trabajo produjeron evidencia convincente de que existe una relacin
positiva entre el tamao y los niveles de ARN nucleolar y la sntesis de protenas en las clulas (6).
En la dcada de 1950, Estable y Sotelo (7) usaron una tcnica silverstaining en una variedad de
clulas, y sugirieron que durante la interfase, nucleolos contienen una estructura filiforme,
denominado el "nucleolonema", que se asocia con todos los cromosomas durante la mitosis y
reagrupa en el NO durante la telofase, despus de lo cual el nucleolo acta como un sitio de
recogida para acumular material adicional. Aunque la asignacin de una continuidad hereditaria a
la nucleolonema independiente de cromosomas result ser incorrecta, este concepto de
provocacin estimulado el inters por muchos investigadores con respecto a la funcin del
nucleolo en el metabolismo celular. Una revisin integral 1955 de Vincent (8) proporciona una
buena visin general de la investigacin anterior sobre nuclolos.

La evidencia de una relacin directa entre citoplasmtica y ARN nucleolar

Comenzando con "microsomas" fraccin de Claude en 1941 (9), tcnicas continuaron siendo
desarrollado que permiti la separacin y el anlisis bioqumico de las diferentes fracciones
celulares Ev (revisado en [101). Se encontraron fracciones microsomales citoplasmticos que sean
ricos en ARN y activa en la sntesis de protenas. Cuando se aislaron partculas pequeas de

ribonucleoprotena (RNP) a partir de fracciones microsomales tratados con detergentes (11), se

encontr que las partculas de RNP para contener esencialmente la totalidad de los componentes
de ARN y ser muy activo en la sntesis de protenas. Partculas RNP similares ya se haban
encontrado en bacterias, y estos fueron demostrado que contienen dos molculas de ARN
estables con constantes de sedimentacin de 16S y 23S, que se complejado con un gran nmero
de protenas. Otros estudios utilizando clulas eucariotas demostraron que las partculas
microsomales tambin contienen dos ARN estables, pero con valores algo ms altos de S 18 y 28
(12). Porter (13), y Sj6strand Hanzon (14), Palade (15), y Palade y Siekevitz (16), mediante el uso de
microscopa electrnica (EM), fueron los primeros en observar grnulos citoplasmticos en clulas
fijadas y correlacionar la morfologa y la qumica de estos grnulos.
Una similitud entre tales "grnulos Palade" con respecto al tamao y la composicin y un
componente granular del nucleolo se observ por primera vez por Porter (13) y ms tarde por Gall
(17) y Swift (18). La primera buena indicacin de que el nucleolo probablemente est implicado en
la produccin de los componentes de ARN estables de los granulares "ribosomas citoplasmticos"
(un trmino introducido por Roberts en 1958 [191) fue proporcionado por Woods y Taylor en 1959
(20). Mediante el uso de autorradiografa (ARG), estos investigadores demostraron que 3 citidina
marcado con H aparece por primera vez en el ARN nucleolar de Vicia faba puntas de las races, a
continuacin, en ribosomal citoplasmtica
RNA (rRNA), y que los impulsos de la etiqueta de ARN nucleolar se mueve desde el nucleolo al
citoplasma en presencia de medio sin marcar. La prueba ms rigurosa de esta relacin fue dada
por Perry y compaeros de trabajo (21, 22), que demostraron que la irradiacin selectiva UV
microbeam de nucleolos de clulas HeLa impidi la aparicin de alrededor de dos tercios de ARN
recientemente sintetizado en el citoplasma, en relacin con el control las clulas. Evidencia
adicional para un origen nucleolar de rRNA vino de Edstrom y colegas (23), quien utiliz ingenioso
microdiseccin y tcnicas microelectrophoretic en el anlisis de ARN de ovocitos estrellas de mar.
Ellos mostraron que la composicin de base de ARN nucleolar, pero no otro ARN nuclear, es
esencialmente la misma que la de ARN citoplsmico, la gran mayora de los cuales es rRNA.
Resultados similares se obtuvieron posteriormente por Edstr6m y Beermann, (24) utilizando
glndulas salivales Chironomus, y por Edstr6m y Gall (25), utilizando ovocitos de anfibios. Como
complemento de estos estudios en el ARN, Birnstiel y compaeros de trabajo (26) demostr por

anlisis de aminocidos que la nucleolar protenas de plntulas de guisante son muy similares a los
de los ribosomas citoplasmticos aisladas.
La evidencia de un Gran Precursor de 18S y 28S ribosomal RNA citoplsmico
Fuerte evidencia de que los 18S y 28S rRNAs se derivan de molculas ms grandes nucleolar se
proporcion por primera vez por Perry (27). l utiliz estudios ARG y sedimentacin paralelas en el
control y actinomicina-D-ratn tratado Lcells, y se encontr que el ARN nucleolar marcado rpido
contiene componentes de rpida sedimentacin heterogneos, algunos de los cuales
sedimentfaster que el rRNA citoplasmtica ms pesada. Scheereret al. (28) junto inform de que la
molcula precursora ms grande rRNA (pre-rRNA) en clulas HeLa sedimentos en 45S y se escinde
a una molcula 35S intermedio en la derivacin de RNAs Ther. Los detalles precisos de la
conversin de HeLa pre-rRNA en 18S y 28S de rRNA ms tarde fueron dados por Weinberg et al.
(29), usando fracciones nucleolares muy limpias y mtodos de electroforesis en gel de acrilamida
desarrollados por Loening para acomodar RNAmolecules tan grandes como pre-rRNA. Se encontr
que un nico moleculegivesrise pre-rRNA, a travs de dos vas de la escisin del ARN intermedios,
a una molcula cada uno de 18S y 28S rRNA. En que la existencia de los altos pesos moleculares
(peso molecular) de pre rRNA basado en constantes de sedimentacin aparentes continu a ser
interrogado, Granboulan y Scheerer (30), utilizando la tcnica de pelcula de protena de
Kleinschmidt para visualizar molculas de ARN por EM, mostraron que hay una buena correlacin
entre los molecular weightestimates por los dos mtodos, y que la conversin de 45S rRNA para
pre-rRNAs es el resultado de cambios en las longitudes en lugar de configuraciones
Evidencia para la redundancia de 18S y 28S rRNA Cistrones
La primera evidencia de que los genomas de las clulas eucariotas contienen
Altamente mltiples secuencias que codifican 18S y 28S citoplasmticos
rRNAs fue proporcionada por Chipchase y Birnstiel (31) que estimada a partir de rRNA /
hibridacin de ADN da como resultado que el 0,3% de ADN total de las plntulas de guisante
contiene secuencias homlogas a rRNA. Tambin inform fue el hecho de que el ARN nucleolar
compiti con rRNA de tales secuencias. Experimentos X-irradiacin hecho anteriormente por
McClintock (3) y ms tarde por Beermann (32), mostrando que translocaciones que afectan NOs
parcial podran funcionar igualmente NOs aswell como intactos morfolgica y por criterios de
crecimiento, haban demostrado que la redundancia funcional existedinNOs. Esta redundancia

ahora se haba dado una base molecular. Poco despus de que se obtienen los datos de
hibridacin de guisantes, McConkey y Hopkins (33) utilizaron mtodos similares para estimar que
una clula HeLa promedio contiene 400 28S rRNA cistrones y, ms importante, mostraron que las
secuencias de rRNA se enriquecen en fracciones nucleolares.
Evidencia para la localizacin de 18S rRNA y 285 cistrones a Nos
La primera evidencia altamente sugerente de que todos los cistrones 18S y 28S rRNA se localizan
en la NO sitio de un cromosoma especfico fue proporcionado por Brown y Gurdon (34), utilizando
el mendeliana, un mutante de delecin nucleolate ofXenopuslaevis primero descrito por Elsdale et
al. (35). En homocigotos renacuajos un ucleolate, la mutacin previene la formacin de nucleolos
normal. Estos investigadores mostraron que tambin hay sntesis de 18S o 28S rRNA o de
precursores de mayor peso molecular, donde como 4S ARN y ARN nuclear heterogneo marcado
rpidamente (hnRNA) se sintetizan. Estos resultados indicaron que los cistrones para 18S y 28S
rRNA se coordinan bajo control y se encuentran en un nico sitio cromosmico, el NO. Ms
evidencia definitiva de que los cistrones rRNA se localizan dentro NOs pronto fue proporcionada
por Ritossa y compaeros de trabajo (36, 37), que utiliza citogenticamente deriva poblaciones de
Drosophila Tras-ing de 1 a 4 NOs, y Birnstiel y sus colegas (38, 39), que compara (2-NO) renacuajos
normales con heterocigotos (1-NO) y homocigotos (0-NO) anucleolate mutantes de Xenopus.
Ambos grupos demostraron por rRNA / hibridacin de ADN que la nmero de cistrones rRNA
presentes en las distintas poblaciones se correlaciona precisamente con el nmero de los nmeros
presentes.
Aislamiento de ADN ribosomal y la disposicin de los cistrones 18S y 28S rRNA
Birnstiel y compaeros de trabajo (38, 39) predecirse a partir de la alta guanosina-citosina (GC)
contenido de rRNA que su complemento secuencias de ADN mentaria deben tener un mayor
contenido GC (~ 63%) que la de Xenopus ADN total (-40%), y que esta ADN debe separarse de ADN
a granel en gradientes de CsCl a causa de la diferencia en la densidad de flotacin. Estos
investigadores mostraron que aproximadamente el 0,2% del genoma Xenopus separa en
gradientes de CsCl como un satlite de alta densidad que contiene esencialmente todo deEl ADN
genmico complementario al 18S y 28S rRNA. Esto marc el primer aislamiento en forma pura de
Secuencias de ADN de funcin conocida.

La cuestin de si las secuencias de 18S y 28S rRNA son presente en el NO en bloques contiguos
homogneos de una o la otra o estn estrictamente alterna, fue luego se acerc
independientemente por Brown y Weber (40) y Birnstiel et al. (41). Sus experimentos se llevaron a
cabo por cizallamiento ADN satlite de alta densidad (ADNr) a progresivamente ms bajos pesos
moleculares, desafiando el ADN con 18S y 28S rRNA, a continuacin, la determinacin de la
densidad de flotacin de las molculas hbridas. Debido de El diferencia en el contenido de GC de
los dos rRNAs, se pudo determinar que la vinculacin entre las dos secuencias no fue interrumpido
hasta que un ADN con cerca de 1 0.5 x 10 6 daltons se alcanz. Cuando el ADN con un peso
molecular 0 0,5 x se utiliz daltons o inferior, esencialmente ninguna unin entre las dos
secuencias de rRNA estaba presente. Estos resultados obligaron a la conclusin de que los dos
cistrones estn estrictamente alterna y que sus productos se encuentran juntos en los pre-rRNA
40S molcula de anfibios.
5S rRNA

El uso de clulas HeLa, Knight y Darnell (42) mostraron que, adems de la 28S rRNA, hay una
molcula de ARN por 5S subunidad ribosmica grande. Que esta 5S rRNA se asocia con partculas
ribosomales nacientes en el nucleolo que contiene el precursor 32S a 28S rRNA fue demostrado
por Warner y Soeiro (43). Brown y Weber (44) mostrado por la hibridacin de ARN / ADN que los
genes 5S rRNA 5S (ADN) en Xenopus no estn vinculados con ADNr, y Pardue et al. (45) demostr
posteriormente por recientemente innovado en hi- situ tcnicas bridization que los cerca de
20.000 o menos genes 5S rRNA se distribuyen entre los extremos de los brazos largos de
probablemente todos de los 18 cromosomas de X. laevis. Un sitio mucho ms localizado fue
encontrado por Prensky et al. (46) para la aproximadamente 160 genes 5S rRNA de D.
melanogaster, en la que los genes pueden ser asignados a bandas 56e-f en el cromosoma 2R.
sobre Por otra parte, la vinculacin entre el ADN y 5S ADNr fue reportado por Cockburn et al. (47)
y Maizels (48) para Dictyostelium discoideum y por Maxam et al. (49) para Saccharomyces
cerevisiae. En ambos de estos primitivos eucariotas, los genes 5S estn presentes con sus propios
promotores en los espaciadores entre genes pre-rRNA. Debido ofthis arreglo, se propuso que
estos dos eucariotas primitivos pueden representar una divergencia intermedio de la organizacin
bacteriana en la que 5S cistrones promotores compartir con los dems cistrones rRNA (48).
Un sistema de doble 5S rRNA fue reportado por Wegnez et al. (50) y Ford y del Sur (51) para X.
laevis, en que las clulas somticas sintetizar un tipo de ARN 5S mientras que los ovocitos

sintetizan tanto el tipo somtico y varios tipos ovocitos especficos que difieren ligeramente entre
s en secuencia de nucletidos. El mecanismo por el cual se controla de tal regulacin diferencial
de la sntesis de ARN 5S oocytetype sigue siendo oscuro. La secuencia de nucletidos de los
principales ovocito 5S ADN (longitud media de repeticin, 720 pares de bases [pb]) ha sido
determinado (52-54). La unidad de repeticin consta de dos regiones: una regin rica en GC que
contiene tanto el gen 5S y un "pseudogene" secuencia homloga a la mayor parte del gen 5S, y
una regin rica en AT. La regin rica en GC es constante en tamao dentro de las familias de
repeticiones de ADN 5S, mientras que la regin rica en AT, que se compone de repetir,
estrechamente relacionada con secuencias de 15 pb, puede variar consiblemente en longitud. El
pseudogn no se transcribe, y puede haber surgido por la duplicacin de genes seguido de
inactivos mutacional tivacin de un gen (52). La unidad de repeticin de ADN 5S de D.
melanogaster, por otro lado, no contiene se- pseudogene secuencia y presenta slo una ligera
heterogeneidad en longitud de la rica en AT segmento espaciador (55, 56).
Considerando 5S ARN est presente en una proporcin 1: 1 con 28S rRNA en ribosomas,
numerosos estudios, comenzando con el de Perry y Kelley (57), han demostrado que la sntesis de
ARN 5S no se coordine con pre-rRNA de produccin (ver [58] para otras referencias).
La amplificacin de genes Nucleolar en Anfibios y Insectos
Aunque cromosmica NOs se heredan como unidades mendelianas y slo hay una a unos pocos
loci tales, dependiendo del organismo, ADNr se ha demostrado que ser preferentemente
amplificado extracromosmicamente en oocitos y oogonios de muchos animales, tanto
invertebrados y vertebrados, y en el vegetativo ncleos de algunos eucariotas primitivos (vase la
revisin de Tobler) (59). Los estudios citolgicos tempranos de este fenmeno, que, en muchos
casos, da lugar a la formacin de mltiples nucleolos muy extracromosmico, se revisaron
elegantemente por Gall (60), y slo unos pocos de los primeros trabajos pertinentes para este
captulo se mencionan.
King (61), utilizando una mezcla de safranina-violeta de genciana doble tincin procedimiento, la
conclusin de que la cromatina extracromosmico se asocia con las mltiples nucleolos de Bufo
ovocitos despus de paquiteno. Bauer (62) utiliz la tincin de Feulgen introducido recientemente
para el ADN, y demostr que "el cuerpo de Giardina" en ovocitos Dytiscus, as como cuerpos
extracromosmicos en ovocitos de varias otras especies de insectos, contiene ADN. Brachet (5)
junto utiliz este colorante especfico para mostrar la presencia de ADN en el nucleolos mltiplo

de oocitos de Rana. Su obra fue rpidamente seguido por un estudio ms amplio de los ovocitos
de Bufo por el pintor y Taylor (63), que de forma independiente confirm las observaciones de
Brachet y lleg a la conclusin de que los nucleolos extracromosmicos estn involucrados en la
produccin de ARN citoplsmico y que los grnulos de cromatina extracromosmicos
probablemente son equivalentes a la NOs de las clulas somticas. Despus de un intermedio
significativo, Kezer (64) y Miller (65, 66), en el examen de los nucleolos circulares se encuentran en
ciertos ovocitos salamandra, mostraron de forma independiente por los experimentos de
digestin enzimtica que la continuidad circular de tales nucleolos se mantiene por el ADN (Fig. 1)
. Teniendo en cuenta la evidencia y se pondr a disposicin con respecto a la clula ofsomatic
funcin NOs en la sntesis de rRNA, estos autores tambin concluyeron que nuclolos
extracromosmicos probablemente estn implicados en la sntesis de rRNA. Similares conclusiones
relativas a la funcin probable de ADN extracromosmico en ovocitos de insectos pronto siguieron
(ver discusin en Gall [60]). La prueba de que el ADN amplificado de ovocitos de anfibios es rDNA
se muestra de forma independiente por rRNA de hibridacin / ADN por Gall (67), utilizando
jvenes ovarios de Xenopus, y Brown y Dawid (68), utilizando aislados ncleos de ovocitos de
anfibios de cuatro. Macgregor (69) demostr por microespectrofotometra que la cantidad de ADN
extracromosmico por X. laevis de ovocitos es de aproximadamente 30 pg, o cinco veces el
genoma diploide total. La evidencia de ADNr amplificado en ovocitos de insectos pronto fue
presentado por los escarabajos de agua Dytiscid por Gall et al. (70) y para el grillo Acheta por
Limade-Faria et al. (71). Gall y Rochaix (72) posteriormente demostraron que mucho, si no todo,
del rDNA amplificado de escarabajos Dystiscid est presente en forma circular (Fig. 2).
El proceso de amplificacin en oocitos de Xenopus comienza antes de la meiosis y se completa con
el final de pachytene (73,74). Brown y Blackler (75) presentaron pruebas de los cruces recprocos
entre X. laevis y X. (boreal mulleri), en que slo X. laevis rDNA se amplifica en los ovocitos, que la
amplificacin del ADNr aparentemente procede por un mecanismo de copia cromosoma en lugar
de por la transmisin de la lnea germinal de episomal rDNA. Estudios posteriores por Hourcade et
al. (76) y Rochaix et al. (77) proporcionan evidencia de que, despus del evento (s) copia
cromosoma presuntiva, el proceso de amplificacin de Xenopus procede extracromosmicamente
por un mecanismo rollingcircle (Fig. 3). Hasta la fecha, sin embargo, no hay informacin definitiva
con respecto a los aspectos moleculares de los acontecimientos iniciales en la amplificacin del
ADNr se conoce, ya sea para anfibios o insectos.

Ultraestructural Visualizacin de Funcin Nucleolar en eucariotas superiores

Excluyendo vacuolas, nucleolos tpicamente consisten en dos grandes componentes
ultraestructurales, uno grueso y fibroso uno granular. Las relaciones espaciales de los dos
componentes varan considerablemente dependiendo del tipo de clula, que van desde
interspersion aparentemente al azar a la estricta compartimentacin en un ncleo fibroso central
o excntrico rodeado por una corteza granular (Fig 4;. Para otros ejemplos, vase Busch y Smetana
[78) ). En un estudio inicial de EM de cromosomas politnicos, Beermann y Bahr (79) mostr
claramente que la zona del ncleo central del nuclolo est conectado directamente con el NO del
cromosoma. Posteriormente, los estudios EM-ARG por Granboulan y Granboulan (80), usando
clulas de cultivo de tejidos, y por Karasaki (81), utilizando embriones de anfibios, demostraron
que la incorporacin inicial de ARN precursores se produce en el componente fibroso nucleolar, y
ambos concluyeron que el recin sintetizado ARN que aparece ms adelante en el componente
granular se deriva de la fibrilar. Se obtuvieron resultados similares despus por Macgregor (82)
para nucleolos ovocitos de anfibios, las regiones centrales fibrilar de la que ya se sabe que
contienen ADN.
Mediante el uso de tcnicas de propagacin recin ideados para las preparaciones EM, Miller y
Beatty (83, 84) fueron capaces de visualizar con claridad la estructura de componentes del ncleo
y la corteza dispersas de nucleolos ovocitos de anfibios. Los anlisis de EM-ARG y la digestin
enzimtica, combinada con los datos bioqumicos de otras fuentes, permite la conclusin de que
los ncleos se componen de una sola, deoxyribonucleoprotein circular (DNP) molculas de
diferentes longitudes, que contienen genes de ARNr repetitivas altamente activos, cada uno de los
cuales est separada a partir de sus genes vecinos por segmentos aparentemente inactivos
"espaciador" de longitud variable (Fig. 5). El componente nucleolar granular, que
presumiblemente contiene el ARN precursor 30S a 28S rRNA, se encontr que consistir
deHabitacin grnulos bastante ampliamente espaciados en delgado, pero fibrillas bien definidas.
La importancia de la red fibrillogranular en la biognesis de la subunidad ribosmica grande sigue
siendo desconocido.
Estudios posteriores por Miller y Bakken (85) con clulas HeLa, y Hamkalo et al. (86) en embriones
de Drosophila mostraron una organizacin bsicamente similar de -spacer-gen-espaciador-, con la
longitud de los genes de ARNr que refleja la diferente molecular los pesos de las molculas de prerRNA en los tres tipos de clulas. Tcnicas similares fueron utilizados por Franke y compaeros de

trabajo que se extendan rpidamente observaciones de genes nucleolares activas para

amplificado rDNAs ofAcheta (87) y Dytiscus (88) (Fig. 2). Todo del rDNA repite dentro de un NO de
eucariotas superiores parecen tener la misma polaridad transcripcional, a excepcin de algunas
observaciones infrecuentes de convergente o divergente adyacente polaridad de genes en TADN
amplificado. Tal como era de esperar, ahora podra llegar a la conclusin de que todos los
eucariotas superiores probablemente tienen la misma disposicin morfolgica general de ADNr.
Cromatina propagacin tcnicas han proporcionado alguna informacin acerca de la regulacin de
genes de ARNr en varios tipos de clulas diferentes. McKnight y Miller (89) encontraron que el
embalaje mxima de polimerasas de ARN se produce en ambos genes de ARNr recin activado y
totalmente transcritos de embriones de Drosophila, lo que indica que en este sistema la velocidad
de transcripcin, en lugar de la frecuencia de la iniciacin de la polimerasa, regula pre-rRNA la
produccin de genes individuales. Por otra parte, la modulacin de la iniciacin de la ARN
polimerasa parece estar implicado en otros dos sistemas. Scheer et al. (90) observaron que los
genes rRNA amplificados de ovocitos jvenes de Triturus alpestris han reducido las proporciones
de embalaje de ARN polimerasa en comparacin con los de los ovocitos ms maduros, y Foe et al.
(91) demostraron que recin activados rRNA genes de embriones algodoncillo-bugs suelen tener
densidades muy bajas de la polimerasa de ARN en comparacin con las etapas posteriores.
Adems, McKnight y Miller (89) encontraron que el nmero de genes activos rRNA aumentado
como cellularization procede en embriones de Drosophila, aunque no ms de 5001o de los genes
rRNA nunca apareci para ser activado. Una observacin similar se inform anteriormente por
Meyer y Hennig (92) para los espermatocitos primarios de Drosophila hydei.
Molecular Anatomyof ADNr unidades de repeticin de eucariotas superiores
En todos los casos en los que ADNr de eucariotas superiores se ha examinado en detalle, los rRNA
genes se han encontrado en tndem unidades repetidas con cada unidad que consiste en un gen
rRNA y un segmento no transcrita espaciador (NTS). Cada gen ARNr contiene tres cistrones que
codifican para los 28S, 18S, y 5 .8S ARNr que se encuentran, respectivamente, en los ribosomas. El
5 .8S rRNA en los ribosomas se detect por primera vez en clulas HeLa por Pene et al. (93),
quienes encontraron que sea hidrgeno unido al rRNA 28S y present pruebas de que la molcula
de 5 .8S se deriva de la misma molcula de precursor intermedio como el 28S rRNA.
Posteriormente, Speirs y Birnstiel (94) llegaron a la conclusin de los estudios de hibridacin con X.
laevis satlite rDNA que la secuencia 5 .8S rDNA se encuentra entre los cistrones 18S y 28S rDNA.

La cuestin de polaridad transcripcional intra molculas de pre-rRNA fue un tema controvertido

para un nmero de aos.
Los experimentos que indican una polaridad-18S-28S-3'-5 'de terminacin de iniciacin incluyen
cintica de etiquetado rRNA en Euglena (95), sntesis de X. laevis rRNA in vitro (96), y la
sensibilidad diferencial de rRNAs a la inhibicin de la sntesis por 3'-desoxiadenosina (97) y la
irradiacin UV (98). Los resultados que indican una polaridad opuesta incluyen identificacin de
similares 5'-termini en 28S rRNA y pre-rRNA (99), la cintica de etiquetado rRNA en ncleos
aislados de Rana (100), y anlisis de la estructura secundaria de la pre-rRNA y la digestin (101) .
despus de rRNA parcial 3'-exonucleasa Ms recientemente, los resultados obtenidos por anlisis
de la estructura secundaria de la naciente pre-rRNA comparacin con rRNAs y madura pre-rRNA
(102), por nuevos experimentos 3'-exonucleasa (103), y repitiendo por endonucleasa de
restriccin rDNA anlisis de rene con nacientes pre-rRNA transcripciones adjuntos,. (104) han
aportado pruebas concluyentes de fa 5'-3'-18S28S-transcripcional polaridad en Xenopus.
La duracin media de NTSs puede ser muy diferente, depending.on siendo examinado el
organismo. Por ejemplo, en Colymbetes los espaciadores son alrededor de 15 kilobases (kb) de
longitud, mientras que los de DYFS ~ nos encontramos alrededor de 45 kb de largo (72). La
heterogeneidad en la longitud NTS se ha detectado en varios organismos, incluyendo ratn (105),
Drosophila (106),. y X, laevis, con los ltimos que tienen NTS variando congelado cerca de 11 kb a
22 kb o menos de longitud (107). Reeder et al. (108) demostraron que los patrones de
cromosmicas NTS longitudes de Xenopus se heredan de forma mendeliana. Wellauer et al. (109)
encontraron que en algunas ranas individuales repiten longitudes raramente presentes en su
cromosmica ADNr estn amplificados selectivamente, mientras que otros amplifican sus clases
de tamao ms abundantes, y que la preferencia por la amplificacin del tamao de la clase se
hereda.
Wellauer et al. (107, 109) y Botchan et al. (110) estudiaron la base molecular para la longitud de
NTS variable en Xenopus por heterodplex mapeo y anlisis con enzimas de restriccin de rDNA
clonado. Sus resultados indicaron que tales NTSs consista en dos regiones conservadas que no
tiene repetitions- interna que se alternan con dos regiones de longitud variable compuestas de
corto re ~ secuencias ctitive. Algo ms tarde, Birnstiel y colegas (111) informaron de la
secuenciacin de esencialmente un todo clonado Xenopus NTS. Sus datos mostraron que este NTS
se compone de cuatro regiones internamente repetitivos intercalados con regiones conservadas:

no repetitivas. De alta homologa de secuencia se encontr entre un segmento corto

inmediatamente aguas arriba de la pre-rRNA sitio de iniciacin de la transcripcin y segmentos
dentro de los prximos dos regiones no repetitivas de aguas arriba de la NTS. Similar alta
homologa de secuencia se demostr por Sollner Webb y Reeder (112) que utiliza un diferentes
NTS clonados. La disposicin de las secuencias de alta h loga dentro de NTSs sugiere que tales
secuencias, .have estado, duplicada y desplazadas aguas arriba en Xenopzyr, NTSs por saltacin de
repeticiones regin repetitiva durante el tiempo evolutivo reciente (111). Hasta el momento, sin
embargo, no hay evidencia definitiva con respecto a la funcin ofany porcin ofNTSs. Gradientes
de transcripcin cortas de vez en cuando estn presentes en amplificados espaciadores de ADNr
de Xenopus (113), y es posible que estos resultado, a partir de promotores reduplicadas y
desplazadas en las regiones de homologa altas que han permanecido funcional (111, 112). Es
tpico, sin embargo, que no se observa en la transcripcin NTSs, especialmente con respecto a
rDNA cromosmico. En contraste, McKnight et al. (114) han proporcionado la evidencia preliminar
de la cromatina de los diferenciales de los embriones de Drosophila que NTSs puede contener
sitios de iniciacin de la replicacin de la cromatina.
Otra base para la longitud heterogeneidad de rDNA repite se ha informado de D. melanogaster, en
la que un segmento de ADN que no est incluido en la pre-rRNA est presente en 60% de las
secuencias de genes de ARNr (106, 115, 116). Las secuencias que intervienen se presentan
principalmente en el NO del cromosoma X, y los genes que contienen inserciones parecen estar
intercalados aleatoriamente con genes sin inserciones. Las inserciones se encuentran cerca de dos
tercios del camino en el cistrn 28S, y varan en longitud desde 0 0,5-6 0,0 kb. Chooi (117) ha
informado de la aparicin de unas pocas unidades de transcripcin ms largos de lo normal en la
propagacin NOs de D. melanogaster, lo que sugiere que algunos genes que contiene insertospueden ser transcritos. De largo y Dawid (118), sin embargo, que se utiliza secuencias de insercin
clonados, y han demostrado que el nmero de molculas de ARN nucleares con secuencias de
insercin es del orden de 10-20 por ncleo y, por lo tanto, no se puede hacer ninguna contribucin
significativa a la produccin de 28S rRNA. Las secuencias homlogas a los insertos de ADNr y que
comprenden algunos 0 0,2% del genoma haploide de D. melanogaster estn presentes en la
cromatina fuera de la NOS (119).
La amplificacin del ADNr en eucariotas primitivos

Adems de la mostrada para anfibios e insectos, la amplificacin cromosmico extra de rDNA se

ha documentado durante varios eucariotas primitivos, incluyendo Tetrahymena piriformis (120122), Physarum polycephalum (123, 124), Paramecium tetraurelia (125), y varias especies de las
algas verdes (126-128). Anlisis con enzimas de restriccin y estudios de desnaturalizacin y
renaturalizacin demostraron que las molculas de ADNr libres de Tetrahymena (129, 130) y
Physarum (123, 124) son grandes palndromos en el que cada molcula tiene dos genes de ARNr.
Los genes estn separados por regiones no transcritas espaciador y localizados hacia los extremos
de las molculas, con el 17S rRNA cistrones proximal a los cistrones 26S rRNA. Grainer y Ogle (131)
mostraron que los genes de ARNr en palndromos Physarum se transcriben de manera divergente
(Fig. 6), la polaridad deEl cistrones rRNA ms pequeos y ms grandes de aceptar por lo tanto con
el encontrado previamente en otros eucariotas (ver seccin anterior). Campbell et al. (132)
encontraron que el cistrn 26S rRNA de Physarum contiene dos secuencias que intervienen, de
una manera algo anloga a Drosophila rDNA. En este caso, sin embargo, parece probable que las
secuencias intermedias transcritas son por lo general, debido a que ocurren en al menos 88% de
los genes de ARNr, y otra dataindicate que todos estos genes son probablemente activo en el
crecimiento de plasmodios.
Yao y Gall (133) han propuesto un modelo tentativo para el origen de extracromosmicos
palndromos Tetrahymena que implica la migracin rama de la nica unidad de ADNr integrado en
el genoma de la lnea germinal para formar una molcula extracromosmica, que se desarrolla en
un palndromo lineal por la replicacin semiconservativo. Este mecanismo podra explicar por qu
los dos lados del palndromo son prcticamente idnticos y por qu no hay heterogeneidad en el
ADNr de Tetrahymena en el momento de formacin de la macroncleo vegetativo.
En las algas verdes y paramecios, el ADNr se encontr que no existe como palndromos, pero en
matrices de repeticiones en tndem similar a la encontrada en eucariotas superiores. Aunque,
como se discuti anteriormente, los genes de ARNr en tales arrays tpicamente exhiben la misma
polaridad transcripcional, una disposicin tan lejos nico ha sido reportado por Berger et al. (134)
para Acetabularia exigua en el que ADNr repite muestran una polaridad estrictamente alterna.
Cromosomas y Nonnucleolar ARN Sntesis
A travs de los aos, muchos de los estudios citolgicos de la sntesis de ARN nucleolar no en los
cromosomas eucariotas se han centrado en los llamados "cromosomas gigantes", principalmente
los cromosomas lampbrush diploteno etapa de ovocitos de anfibios y los cromosomas politnicos

de moscas dpteros. La organizacin estructural bsica de estos cromosomas se describe por Gall
en este volumen, por lo que slo los aspectos morfolgicos y qumicos relacionados con la sntesis
de ARN sern considerados aqu. Tambin se discuten Visualizacin de la actividad sinttica en los
bucles de tipo lampbrush encontrados en espermatocitos primarios de Drosophila, en los
embriones, y en ciertos tipos de clulas diversos.
Lampbrush Cromosomas de ovocitos de anfibios
Aunque los cromosomas lampbrush se han observado en los oocitos de muchos animales
vertebrados e invertebrados (135) e incluso en las algas verdes (136), que alcanzan sus mayores
dimensiones en los ovocitos de anfibios. Aunque visto anteriormente, el primer estudio extenso
de tales cromosomas hecho por Rickert en 1892 (137) en los ovocitos de tiburones seccionados.
No fue hasta 1940, despus de que se introdujo la tincin de Feulgen, que la naturaleza de ADN de
los cromosomas formando el eje principal de lampbrush cromosomas de Rana se demostr (5). En
1937 (ver Duryee [138] y los artculos anteriores), Duryee hizo una importante contribucin hacia
el estudio de los cromosomas lampbrush al mostrar que las vesculas germinales de ovocitos de
anfibios pueden ser aislados y sus cromosomas lampbrush observaron en el microscopio de
contraste de fase en lo que parece ser esencialmente una condicin in vivo. Despus de los
estudios anteriores de Dodson (139), lo que indica la presencia de ARN en las asas laterales de
cromosomas lampbrush, Gall (140), en un cuidadoso estudio de los cromosomas lampbrush del
tritn, claramente demostrado la presencia de ARN en el Feulgen- bucles laterales negativos, que
se presume que los productos sintetizados o organizados por las crommeros positivos Feulgen de
los ejes principales. En este estudio, Gall introdujo una innovacin ptica muy importante
mediante el uso de un microscopio de contraste de fase invertida y se desliza holey con fondos
cubreobjetos, una disposicin que permite la observacin de cromosomas no distorsionados en la
resolucin ms alta proporcionada por microscopa de luz. Aunque haba habido varios estudios
EM anteriores, Gall (141) fue el primer investigador para demostrar que los bucles laterales
contienen grnulos libremente asociados algunos 300,400 A de dimetro. Tanto Callan y Gall (ver
referencias en [141]) haba postulado previamente a partir de estudios anteriores EM que cada
lazo lateral tiene un eje submicroscpica. Que esto es as se tambin claramente demostrado por
Gall (141), que utiliza la digestin con pepsina de las matrices de bucle despus de la
inmovilizacin de los bucles laterales en las pelculas de soporte. Poco despus, Lafontaine y Ris
(142) observaron cromosomas lampbrush de varios anfibios despus del punto crtico de secado

en el dixido de carbono. La naturaleza fibrilar similar de bucles y los cromosomas despus de tal
secado a estos investigadores sugiri la posibilidad de que el eje principal o cromonema de cada
cromosoma se compone de un haz de fibrillas que puede ser continuo a travs de los cromosomas
y bucles, pero que vara en composicin dentro de las dos estructuras . Estudio anterior de Gall, y
estudios posteriores por otros, claramente demostraron que esto no era as. Muy poco despus, la
naturaleza de los ejes submicroscpicas de bucles laterales wasnicely mostradas por Callan y
Macgregor (143), que demostr que la DNasa rompe la continuidad de ambos bucles y ejes
principales sin perturbar el material de la matriz RNP asociado con los fragmentos de bucle hasta
que el bucle ejes se han desintegrado.
El hecho de que el ARN se sintetiza activamente en bucles laterales se demostr por Gall (144) y
Gall y Callan (145) que autorradiografa cromosomas aislados despus de etiquetarlos con los
precursores de ARN tritiados. La asociacin de la protena recin sintetizada con el ARN tambin
se muestra en el segundo estudio. Anteriormente, Callan y Lloyd (146) haban introducido el
concepto de que la informacin gentica dentro de bucles de cromosomas lampbrush puede ser
en serie repite a lo largo de
el bucle de ejes. Para evitar el problema de las mutaciones al azar, se propuso que una "copia
maestra" sera corregir los cambios en la secuencia como las repeticiones a lo largo de un bucle se
sali de su Crommero que se transcribe durante diploteno temprano. Este concepto fue
reforzado por la evidencia del estudio de Gall y de Callan en la sntesis de ARN; observaron
etiquetado secuencial de un bucle morfolgicamente distintos y llegaron a la conclusin de que,
probablemente, fue continuamente se gir y de nuevo en su Crommero como ovognesis
progres. La denominada hiptesis de la "Master-Slave" fue completada por Callan en 1967 (147),
y una prueba ms para el movimiento del eje de bucle fue proporcionado por la nieve y Callan en
1969 (148). Inherente a este concepto son los supuestos de que no exista la diversidad gentica
dentro de crommeros individuales y que el ARN sintetizado en tales crommeros vendra de
secuencias repetitivas de ADN (ver Macgregor [149] para la discusin de este concepto). Aunque
esta hiptesis estimulada pensamiento y la investigacin considerable, no parece ser vlido en
vista de los resultados posteriores que indican que la mayora deEl plantilla de ARN sintetizada y
almacenada durante anfibio ovognesis se transcribe a partir de secuencias nicas o de una sola
copia (150, 151).

Ms observaciones definitivas con respecto a la naturaleza ultraestructural de las molculas de

RNP en matrices de bucle fue junto proporcionados por Miller (152) y Miller y Beatty (153), que
utiliz ovocitos tritn y tcnicas diseadas para observar gratuitas de nucleoplasma cromosomas y
para descansar las fibrillas RNP adjuntos a los ejes de bucle (Fig. 7). Sus resultados demostraron
que las fibrillas de RNP tpicos de bucles forman gradientes de fibrillas de aumento de las
longitudes del extremo de insercin delgado, con polimerasas de ARN bastante estrechamente
espaciados y molculas de ARN extremadamente largas que se sintetiza. Posteriormente, la
organizacin estructural de ARN bucle fijo bajo condiciones fisiolgicas se inform por Mott y
Callan (154), quienes encontraron que los transcritos de ARN nacientes y protena asociada estn
dispuestos en arrays lineales de partculas de 300 . Configuraciones similares se encuentran en
todos los bucles, no importa lo que su morfologa bruto, pero muchos bucles tenido esas cadenas
de partculas enrolladas sobre s mismas para formar agregados densos algunos 2.000-3.000 A o
ms de ancho. Malcolm y Sommerville (155) previamente haban aislado tales partculas y haban
mostrado la relacin de protena a RNA que ser al menos 30: 1. Scott y Sommerville (156)
demostrada por tcnicas de inmunofluorescencia que algunas de las protenas no bsicas en los
cromosomas lampbrush son comunes a todos los bucles, mientras que otros pueden ser
localizados en grupos especficos de bucles.
Scheer y compaeros de trabajo (157, 158) utilizan tcnicas de dispersin de la cromatina para
ampliar en gran medida las observaciones sobre la disposicin de los complejos transcripcionales
en oocitos de salamandra y las algas verdes Acetabularia. Adems de bucles que parecen ser las
unidades de transcripcin individuales, segn se infiere de los gradientes de fibrillas individuales
RNP, bucles con mltiples gradientes de divergente, convergente, y / o polaridades similares se
observan a veces. Las estimaciones de los tamaos de las molculas de ARN nacientes se
extienden hasta unos 82 kb, basado en longitudes de unidades transcripcionales, y tamaos
similares han sido determinados por anlisis de sedimentacin y de gel de electroforesis (157,
159).
La importancia funcional de los altos niveles de actividad transcripcional en los cromosomas
lampbrush no est claro. Davidson y compaeros de trabajo (160) estima que alrededor del 2 0.2%
de ARN lampbrush etapa en X. laevis es ARN plantilla que es synthe de tamao en
aproximadamente un 2, 7% del ADN genmico. Estudios posteriores de Sommerville y Malcolm
(159) demuestran que alrededor del 4% del ADN cromosmico de Triturus cristatus se transcribe

durante la ovognesis. Sin embargo, slo algunos 0 0,05-0 0,1% del ARN contiene secuencias de
codificacin; el resto son secuencias repetitivas no informativos. Otros estudios, por Rosbash y
colegas (150, 151), muestran que las molculas de poli (A) -ARN presentes en los ovocitos
maduros X. laevis contienen alrededor de 20.000 secuencias diferentes que se transcriben casi en
su totalidad a partir del ADN de copia nica. El perfil de sedimentacin de poli (A) -RNA a partir de
oocitos y cultivos de clulas renales de X. laevis se han encontrado para ser similar. Ya sea que la
transcripcin de bucle representa una actividad relativamente alta en loci que se transcribe a tasas
mucho ms bajas en las clulas somticas o ms bien representa la transcripcin de segmentos
grandes de ADN que se produce en las clulas somticas que queda por determinar.
Cromosoma Y lampbrush Loops en Drosophila espermatocitos
Los primeros estudios citogenticos genticos y la luz del microscopio de la funcin del
cromosoma Y en Drosophila espermatognesis se revisaron en 1968 por Hess y Meyer (161). Se
hizo hincapi en el subgrupo D.hydei, en el que se encontraron estructuras morfolgicamente
distintivas comparables a los bucles de los cromosomas lampbrush que ser determinado por un
mnimo de cinco loci Y-cromosoma. Las morfologas de bucle son especies especficas, y, como lo
demuestran los estudios de deficiencia de-duplicacin, los loci estn involucrados en la
diferenciacin de los espermatozoides postmeiotic. Despus del marcaje con [3H] uridina, ARG
demuestra que la sntesis de ARN se produce en cada uno de los loci, con algunos loci que muestra
etiquetado polarizada. Un mtodo de difusin para la dispersin de micro contenido de ncleos de
espermatocitos primarios como una pelcula superficial fue utilizado por Meyer y Hennig (162) y
Hennig et al. (163) para observar los aspectos estructurales de estos loci por EM. Se estim que las
molculas de RNP considerablemente ms largo que 10 /.m se sintetizan en algunos bucles.
Hennig (164) ha revisado ms recientemente, el estado de los conocimientos sobre los bucles del
cromosoma Y, y se ha sugerido que los puntos opcionales para iniciaciones de ARN polimerasa a lo
largo de un bucle podra ser responsable de la incorporacin polarizada que tiene lugar en algunos
de los bucles despus de pulso-etiquetado con precursores de ARN.
Politnicos Los cromosomas de las moscas dpteros
La ocurrencia, la estructura y las actividades de los cromosomas sintticos politnicos han sido
objeto de un nmero de comentarios (e .g., 165-167). La composicin y la funcin de "Puff", que
forma por lo general el despliegue de una banda cromosmica y aparecen en los cromosomas
politnicos de muchos tejidos larvarios de moscas, han recibido la mayor atencin. Esto es

especialmente cierto de los muy grandes bocanadas, o anillos de Balbiani (BRS), que se encuentran
en las glndulas salivales de las especies Chironomus. Microscopio ptico-Diptera Temprano ARG
por Pelling (168) y Rudkin y Woods (169) mostr que tales soplos son muy activos en la sntesis de
ARN. El estudio inicial de EM por Beerman y Bahr (79) demostr que las RB consisten en
numerosos filamentos de ramificacin de dimetro aparentemente unido a sus extremos. Este
estudio se ampli ms tarde por Stevens y Swift (170), que proporcion pruebas de que los
productos EM RNP de RBs se mueven en el citoplasma a travs de los poros de la gruesa A, con
grnulos -300 A envoltura nuclear.
Debido a la alta redundancia lateral de cromosomas politnicos, Swift (171) y, ms tarde, Gorovsky
y Woodward (172), fueron capaces de demostrar que no hay diferencia en la cantidad de histonas
en loci inactivo y hinchado. Que las protenas no histnicas se asocian con el ARN en bocanadas
fue demostrado por Helmsing y Berendes (173), que tambin mostr que algunas protenas
nonhistone se mover en inducida puff de incluso en ausencia de la sntesis de ARN.
Grossbach (174) present pruebas de que las reservas de biosfera de Chironomus probablemente
contienen los genes de varios polypep- secretora
mareas. Debido a esto, y el hecho de que las reservas de biosfera y sus RNAs asociados pueden ser
aislados por tcnicas de microdiseccin, las reservas de biosfera, especialmente BR2, de C. tentans
han sido objeto de intensa investigacin, y gran parte de este trabajo ha sido revisado
recientemente por el asunto y Daneholt (175). Las transcripciones primarias de ambos BR1 y BR2
tienen constantes de sedimentacin de 75S y se estima que contienen 37 kb. Las molculas de 75S
de BR2 se ha demostrado que estar presente en polisomas citoplsmicos y, por tanto,
probablemente para codificar para uno o ms de los polipptidos de secrecin salival.
Recientemente, Cordero y Daneholt (176) tuvieron xito en el empleo de tcnicas de propagacin
de la cromatina para visualizar las unidades de transcripcin del cromosoma 4 de C. tentans que
contiene las reservas de biosfera. Unidades de transcripcin altamente activas con una longitud
media de 0,7 7 ttm se observaron con mayor frecuencia, y se supone que son las unidades
formadoras de BR1 y BR2 que forman los ms conspicuos de hojaldre.
Visualizacin de Nonnucleolar Transcripcin en Otros tipos de clulas
Despus de las observaciones en los cromosomas lampbrush, la primera visualizacin clara de la
morfologa de ARN nuclear (ARNnh) la sntesis heterognea nonnucleolar o presunto se inform

por Miller y Bakken (85) para las clulas HeLa. Se encontraron molculas de RNP que se adjunta
con el genoma a intervalos irregulares y muy espaciados, que indica que la iniciacin de la
transcripcin se produce con poca frecuencia en loci activa en esta clula de cultivo de tejido
indiferenciado. Miller y colaboradores (86) al lado de la cromatina dispersa de 4 a 6 horas
Drosophila
embriones y que se encuentran pendientes de fibrillas RNP bien definidos, presumiblemente
reflejando
la actividad gentica que participan en eventos de diferenciacin que ocurren durante ese perodo
embrionario. Estudios cuantitativos ms precisos de la sntesis de hnRNA en embriones de
insectos fueron hechas por Laird y colaboradores para Drosophila
y Oncopeltus (91, 177, 178) y McKnight y Miller (89) para Drosophila. Los ltimos autores
compararon la transcripcin durante la etapa sincitial y
temprano blastodermo celular, y encontr que, mientras que slo hay un bajo nivel de actividad
de la plantilla con unos pocos, gradientes, fibrillas cortas densos RNP presentes en la etapa
sincitial, una gran nueva clase de gradientes mucho ms largos con polimerizable generalmente
intermedio borrar densidades aparece en blastodermo celular, de nuevo presumiblemente refleja
la actividad gentica involucrada en eventos de diferenciacin. En todos los estudios embrionarias,
una gran variacin en la longitud y ARN-polimerasa densidad se encontr entre las unidades de
transcripcin ARNnh. Las estimaciones del tamao promedio de las molculas de hnRNA
sintetizados en tales unidades van de 10 a 18 kb. Estudios similares se llevaron a cabo
posteriormente por Busby y Bakken (179) en embriones de erizo de mar. Estos investigadores
encontraron que una gran mayora de las unidades de transcripcin activos exhibi slo un nico
naciente de fibrillas de RNP, y concluyeron que la densidad de la polimerasa en, loci sola, versus
mltiples de fibra es causada por la frecuencia de iniciacin de la polimerasa.
En su estudio inicial de la sntesis hnRNA en Drosophila.McKnight y Miller (89) observaron que
homloga, matrices naciente, de fibra a menudo podran ser identificados en las cromtidas
hermanas despus de la replicacin de la cromatina a fines de S o fase G2 de principios
blastodermo celular. Tales matrices parecan ofrecer una oportunidad nica para comparar la
regulacin de la transcripcin en dos ejemplares de un mismo locus gentico, y se analizaron una
serie de stos en un estudio posterior (180). Los resultados mostraron que, aunque el tamao y la

densidad de la polimerasa varan considerablemente entre los diferentes loci, la frecuencia de

fibra naciente y la distribucin es esencialmente la misma para los pares homlogos, lo que indica
que las cromtidas hermanas heredan transcripcionales potenciales precisamente similares.
Adems, se observ que las diferentes unidades, pero inmediatamente adyacentes, genticos
pueden diferir en la polaridad y la frecuencia de la fibra.
La primera visualizacin presuntivo de un gen estructural especfica fue reportado por McKnight et
al. (181) para el gen de la fibrona de seda Bombyx mori (Fig. 8). Las largas gradientes, RNP de
fibrillas observados en este estudio fueron identificados como genes activos de fibrona de seda
sobre la base del tamao del gen, la presencia de tales gradientes slo en la parte posterior de la
glndula de seda donde se localiza la sntesis de fibrona, su naturaleza sola copia , y la densidad
de la polimerasa de ARN de alta, todos los cuales pueden ser correlacionados con los parmetros
bioqumicos conocidos de la actividad del gen de fibrona de seda.
En vivo e in vitro de ovocitos de X. laevis Sistemas para la transcripcin de ADN especficas
Excepto en los casos en que, predominantemente, un solo a unos pocos genes se expresan en un
tipo de clula, el anlisis de la transcripcin de un nico gen es difcil, debido a su contribucin a la
sntesis de ARN total es pequea. Los dos, recientemente desarrollado sistemas transcripcionales
se discuten a continuacin, cuando se combina con la disponibilidad capacidad de los genes
especficos purificados, ofrecen el potencial de superar tales dificultades.
En Vivo La transcripcin de ADN inyectado en Anfibios de ovocitos Ncleos
El primer informe oftranscription de ADN despus de la microinyeccin fue dada por Mertz y
Gurdon (182), que mostr que el ARN homloga a virus de simio 40, as como a varios otros ADNs
extranjeros, se sintetiza en los ncleos de ovocitos. Muy poco despus, Brown y Gurdon (183, 184)
mostraron que, despus de la microinyeccin, la transcripcin precisa tanto de genmico y
clonado Xenopus 5S ADNr se lleva a cabo, y es sensible a la concentracin de un amanitan
esperada para la inhibicin de la polimerasa-III de ARN. Por mucho que la mitad de la ARN
sintetizado por un ovocito inyectado puede ser el resultado de ADN inyectado 5S, aunque en las
entradas bajas se puede demostrar que el ADN inyectado se transcribe slo alrededor de un
quinto tan eficientemente como el ADN 5S endgeno. Despus de la inyeccin, el ADN 5S se
convierte en un complejo con una masa casi igual de protena, que puede ser importante para la
transcripcin exacta. Telford et al. (185) inyecta un segmento de ADN de Xenopus que contiene el

gen estructural para tRNA, mee y slo 22 pares de bases para el lado 5 'del gen. Ellos encontraron
que tRNA maduro, a partir del fragmento inyectado, y m` fue producido en un sugerido la
posibilidad de que la alta tasa de reconocimiento entre el ADN y el ARN polimerasa III puede ser
determinada por el gen tRNA estructural en s mismo en lugar de secuencias 5 'fuera del gen.
Grosschedl y Birnstiel (186) identificaron tres segmentos reguladores en las secuencias preludio de
un gen H2Ahistone erizo de mar por inyeccin de mutantes de delecin especficos clonados, y, en
vista de sus resultados, especulado que los promotores eucariotas pueden tener que ser visto
como tridimensional, en lugar de estructuras lineales, cromosmicas. La primera visualizacin de
transcripcin de DNAwas inyectados reportados por Trendelenburg et al. (187), que utiliza circular
amplificado Dytiscus rDNA como fuente de ADN extrao. El rDNA inyectado se convierte en un
complejo con la protena, y aparentemente normal, as como anormal, patrones de transcripcin
se observ (Fig. 9). Una alta frecuencia de las fibrillas de RNP anormalmente largos sugiere que la
terminacin adecuada de las molculas de pre-rRNA nacientes no siempre puede ocurrir.
Posteriormente, Trendelenburg y Gurdon (188) inyectaron ADNr clonado homloga y encontraron
transcripcin cura se lleva a cabo, con los genes activados exhiben tpicamente las densas
gradientes de rRNA genes endgenos. Sin embargo, ms del 90% del ADN inyectado se ensambla
en las configuraciones de la cromatina nucleosomal inactivos, lo que indica que la transcripcin no
est regulada por el suministro de la ARN polimerasa I, pero presumiblemente por algn
componente limitante que conmuta genes mximamente en.
Transcripcin in vitro de ADN en un extracto nuclear de ovocitos
Brown y colaboradores (189) demostraron recientemente que clonados 5S genes se transcriben
con precisin despus de un inicial 30 "retraso perodo cuando se mezcla con una fraccin
sobrenadante obtenido a partir de aislado manualmente, interrumpido X. laevis ncleos de
ovocitos. Aunque tambin hay transcripcin significativa de la hebra, el espaciador, y el ADN
plsmido no codificacin 5S, hasta el 40% de la ARN total transcrito se ha demostrado ser 5S ARN.
La transcripcin implica la ARN polimerasa III, porque esta es la nica polimerasa activa en este
sistema. Ms recientemente, Brown y sus colegas han demostrado mediante el uso de mutantes
de delecin que la iniciacin de la RNA polimerasa III en 5s secuencias de genes se puede
mantener, como pares de nucletidos se eliminan secuencialmente desde el extremo 3 'del gen
hasta que se alcanzan nucletidos entre 50 y 55 (190 ). Del mismo modo, la iniciacin se puede
mantener como pares de nucletidos se eliminan del extremo 5 'del gen hasta que entre los

nucletidos 80 y 83 (como se cuenta a partir del extremo 3' del gen) (191). Estos resultados
demuestran algo inesperadamente que las secuencias responsables de la correcta iniciacin de la
ARN polimerasa III estn contenidas dentro de los 33 nucletidos entre los nucletidos 50 y 83 del
gen mismo.
Observaciones finales
Ha sido posible, en una revisin a corto como este, a la lista slo algunos de los aspectos ms
destacados de los descubrimientos de los investigadores el estudio de las actividades nuclolo y
sintticas de los cromosomas. Lamentablemente, muchas observaciones de inters han tenido
que ser omitido. He tratado de comunicar algo de la excitacin Ment generado por el aumento en
nuestro conocimiento sobre la funcin del nuclolo y aspectos estructurales de la gentica la
transcripcin. Gran parte de los avances en estas reas, como en otros, ha sido un resultado de la
aplicacin de nuevas tcnicas que han demostrado ser potentes sondas en nuestra los intentos de
comprender la base molecular de la gentica actividad. Mucho queda mucho, por descubrir, pero
muchas herramientas estn disponibles y otros sern prximamente. slo el Se requiere continuar
la imaginacin y la diligencia de los jvenes cientficos para otros, los descubrimientos
emocionantes.